地黄饮子对β淀粉样蛋白1-42致SH-SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的影响
地黄饮子对快速老化小鼠 SAMP8线粒体通路细胞凋亡的影响
ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ ． Ｎ ａ ｔ Ｒ ｅ ｖ Ｎｅ ｐ ｈ ｒ ｏ ｌ ， ２ ０ １ ０， ６（ １ １ ） ：
综 上所述 ， 真武 汤 能 够抑 制 单 侧输 尿管 梗 阻模 型 大 鼠的肾小 管损伤 ， 延缓 肾间质纤维 化 的进程 ， 真武 汤 中剂量 组 的疗 效最 佳 。
参考 文献 ：
［ １ ］ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｌ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｆ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｌ ， ｅ ｔ ａ １ ． ｐ ｒ ｅ ｖ ａ ｌ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｋ ｉ ｄ ｎ ｅ ｙ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ： ａ ｃ ｒ ｏ ｓ ｓ —ｓ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｓ ｕ ｒ ｖ ｅ ｙ ［ Ｊ ］ ． Ｌ ａ ｎ ｃ ｅ ｔ ， ２ ０ １ ２ ， ３ ７ ９ （ ９ ８ ｌ ８ ） ：
性细 胞浸 润 ， 致 使细胞 外基 质合 成与 降解平 衡失调 ， 导 致过 度沉 积 而 形 成 纤 维 化 Ｊ ， 然而 ， 近 年 来 中 医药 在 肾间质纤 维化 的 防治 中的优势 和作用 越来 越突 出 。 在本 研究 中 ， 采 用单侧 输尿 管梗 阻模 型 ， 运用 中医
ｍＲ Ｎ Ａ表 达的影 响 ， 观 察 小鼠细 胞 凋 亡情 况 。 结果 ： 地 黄饮 子 能 下调 海 马 Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ一３ ｍＲ Ｎ Ａ、 Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ一
地黄饮子对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力及衰老相关蛋白P16P21的影响
地黄饮子对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力及衰老相关蛋白
P16P21的影响
D-半乳糖衰老模型大鼠是一种常用的老年痴呆症动物模型，其在学习和记忆能力方面
具有明显的衰老特征，同时伴随着衰老相关蛋白P16P21的表达水平上升。
本研究旨在探讨地黄饮子对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力及衰老相关蛋白P16P21的影响，以期为
老年痴呆症的防治提供新的理论依据和实验数据。
一、实验方法
1. 实验动物：选取健康的SD大鼠，将其分为正常组、D-半乳糖模型组和地黄饮子干
预组。
正常组大鼠饮用蒸馏水，D-半乳糖模型组和地黄饮子干预组大鼠饮用D-半乳糖溶液。
2. 干预措施：地黄饮子干预组大鼠每日饮用地黄饮子，剂量为1ml/100g。
3. 行为学测试：采用Morris水迷宫测试法评价大鼠的学习和记忆能力。
4. 分子生物学检测：采用免疫组化法检测大鼠海马组织中P16P21的表达水平。
二、实验结果
1. Morris水迷宫测试结果显示，D-半乳糖模型组大鼠的学习和记忆能力明显低于正
常组大鼠，而地黄饮子干预组大鼠的学习和记忆能力均有所提高，且与正常组大鼠无显著
差异。
2. 免疫组化结果显示，D-半乳糖模型组大鼠海马组织中P16P21的表达水平明显上升，而地黄饮子干预组大鼠的P16P21表达水平明显下降，且与正常组大鼠无显著差异。
三、讨论与结论
地黄饮子对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力及衰老相关蛋白P16P21的影响是积
极的，具有一定的应用前景。
关于其具体的作用机制和临床应用价值还需要进一步的深入
研究和探讨。
希望本研究能够为老年痴呆症的防治提供新的思路和方法。
地黄饮子对β淀粉样蛋白所致PC12细胞损伤的保护作用
Ｖｏ． ８， ｏ ２， ０ ０ １３ Ｎ ． ２ １
中
医
药
学
报
・ｌ ・ ９
Ａｃ ａ Ｃｈｉｅ ｅ Ｍ ｅ ｉｉ ｅ ａ ｔ ｎ ｓ ｄ ｃｎ ｎｄ Ｐｈａｍ ａ ｏｌｇ ｒ ｃ ｏｙ
地 黄 饮 子对 ｐ淀 粉 样蛋 白所 致 Ｐ Ｃ １ ２细胞 损 伤 的保 护 作 用
垂 直进 针 ， 取 ２ ０ｚ 脊 液 ， 补 充 等 量 的 生 理 盐 抽 ０ｔ Ｌ脑 并
地 黄饮子 对 Ａ Ｄ模 型 细 胞 的 保 护 作 用 ， 研 制 开 发 有 为
效 治疗 Ａ Ｄ的药 物奠定 了基础 。
１ 实验材 料与 仪器 Ｐ１ Ｃ ２细胞 株 （ 购于 中 国科 学 院上 海细胞 生 物研 究
伤 引起 的 Ｐ １ Ｃ ２细 胞 形 态 的 改 变 ， 轻 细 胞 膜 的 损 伤 ， 少损 伤 所 致 的 细胞 死 亡 。 结 论 ： 黄 饮 子 对 减 减 地
Ａ２ ３ ３ １ ５— ５所 致 Ｐ １ Ｃ ２细胞 损 伤具 有较 好 的保护 作 用 。
关键 词 ： Ｂ淀粉 样蛋 白 ；Ｃ ２细 胞 ； Ｐ１ 老年性 痴 呆 ； 黄饮 子 地
２ ％ 。加培 养液 补 至等量 ，７ 孵 育 ２ 。然 后 除空 白 ０ ３℃ ｈ
组之 外 的各 组 加 入 经 老 化 处 理 的 Ａ ２ ３ １ ５—３ 终 浓 度 ５（
组成） 盐酸多奈哌齐片（ ； 商品名安理申， 国 Ｐ ＩＥ 法 ＦＺ Ｒ Ｐ Ｍ 公 司 ） 透 射 电镜 （Ｅ 一１２ 日本 电 子 公 司 ） Ｇ ； ＪＭ ２ ０， ；
人 的健 康 和生存 质 量 ， 该病 的 防 治 已成 为 国 内外 医 学 界 研究 的热 点 Ｊ 。以往 我们 对地 黄 饮子 防 治 Ａ Ｄ进行
地黄饮子对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力及衰老相关蛋白P16P21的影响
地黄饮子对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力及衰老相关蛋白P16P21的影响地黄饮子是一种传统中药材，具有滋阴补肾、益气养血的功效。
近年来，研究表明地黄饮子对D-半乳糖衰老模型大鼠的学习记忆能力和衰老相关蛋白P16P21有一定的影响。
本文将从地黄饮子的制备方法、成分和药理作用等方面进行探讨，以期为地黄饮子的开发和利用提供科学依据。
一、地黄饮子的制备方法地黄饮子是由生地黄、熟地黄、牛乳、冰糖等药材熬制而成。
首先将生地黄、熟地黄分别清洗干净，切成小块；然后将牛乳倒入锅中加热至沸腾，再加入切好的生地黄和熟地黄，煮沸后改为小火煮约30分钟，让药材充分溶解在牛乳中；最后加入适量冰糖搅拌均匀，继续煮沸至液体浓稠，即可取出冷却后饮用。
二、地黄饮子的成分地黄饮子中主要含有地黄素、地黄酚、黄芩苷、甘草素、牛乳蛋白等成分。
地黄素和地黄酚是地黄饮子的主要有效成分，具有抗氧化、抗衰老等生物活性。
三、地黄饮子的药理作用1. 提高学习记忆能力研究表明，地黄素和地黄酚具有改善记忆力和学习能力的作用。
实验发现，地黄饮子能够显著提高D-半乳糖衰老模型大鼠的学习和记忆能力，减少错误次数和延迟时间，表明地黄饮子对改善认知功能具有显著效果。
2. 影响衰老相关蛋白P16P21的表达地黄饮子中的有效成分能够影响衰老相关蛋白P16P21的表达。
实验结果表明，地黄饮子可显著降低D-半乳糖衰老模型大鼠脑组织中P16P21的表达水平，减少细胞损伤和衰老相关病变。
四、研究方法与结果1. 建立D-半乳糖衰老模型大鼠选取雄性SD大鼠，将其饲养于特制的D-半乳糖饲料中，连续饲养6个月，建立D-半乳糖衰老模型大鼠。
2. 给予地黄饮子干预将D-半乳糖衰老模型大鼠随机分为地黄饮子组和对照组，给予地黄饮子组大鼠口服地黄饮子，对照组大鼠口服等量蒸馏水，连续干预3个月。
3. 行为学测试使用Morris水迷宫测试和Y字迷宫测试评估大鼠学习记忆能力，记录大鼠寻找平台的时间、路径和错误次数等指标。
地黄饮子对阿尔茨海默病小鼠神经炎性损伤的改善作用
地黄饮子对阿尔茨海默病小鼠神经炎性损伤的改善作用马涛;徐世军;闫妍;张文生【期刊名称】《成都中医药大学学报》【年(卷),期】2015(38)4【摘要】目的:研究地黄饮子对阿尔茨海默病(AD)转基因小鼠炎性损伤的保护作用。
方法:60只雄性APPsw/PS1ΔE9转基因小鼠,随机分为模型组,阳性药(安理申)组、地黄饮子高、中、低剂量组,每组12只。
以同背景、月龄的C57BL/6J小鼠为空白对照。
小鼠4月龄开始灌服地黄饮子水煎液150d。
Western blot检测小鼠脑组织中胶质细胞激活标记蛋白(GFAP和Iba-1)、炎性信号通路蛋白(p38、phospho-p38、NF-κB p65、NF-κB phospho-p65)、促炎性反应因子(i NOS、COX-2)的表达,ELISA法测定促炎性反应因子TNF-α和IL-1β的含量。
结果:地黄饮子各剂量组小鼠脑组织中胶质细胞激活标记蛋白(GFAP和Iba-1)、炎性信号通路蛋白(phospho-p38和NF-κB phospho-p65)、促炎性反应因子(i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β)的表达量均显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)。
结论:地黄饮子能通过抑制炎性反应信号通路p38-NF-κB的活性,降低促炎性反应因子的i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β表达,抑制胶质细胞激活,改善AD小鼠脑内炎性损伤。
【总页数】4页(P23-25)【关键词】地黄饮子;阿尔茨海默病;炎性损伤;核转录因子【作者】马涛;徐世军;闫妍;张文生【作者单位】北京师范大学中药资源保护与利用北京市重点实验室;北京中医药大学东方医院;成都中医药大学;北京师范大学教育部天然药物工程研究中心【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R284.1【相关文献】1.地黄饮子联合去铁胺对脑出血患者神经炎症损伤的改善作用 [J], 马志胜;袁艳波;2.地黄饮子联合去铁胺对脑出血患者神经炎症损伤的改善作用 [J], 马志胜;袁艳波3.桂皮醛通过阻止海马神经炎症反应改善阿尔茨海默病老年小鼠记忆障碍的作用研究 [J], 吴永康;高洁;卢志园;顾祎宁;赵晨怡;巴宗韬;王星禹;杨建梅;徐颖4.PT109改善链脲佐菌素诱导的散发性阿尔茨海默病小鼠认知功能障碍的作用及机制 [J], 陈秋荷;涂亚林;侯加卫;陈晨;鲁俊锋;皮荣标5.胡桃苷对非酒精性脂肪性肝小鼠中肝脂质代谢紊乱、肝损伤以及小肠完整性的改善作用 [J], 虞玲燕;李卫英;林佳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子及其拆方配伍对脑缺血再灌注损伤脑保护作用机理的实验研究
参考内容
急性心肌缺血再灌注损伤大鼠模 型制备方法的改进与评价
急性心肌缺血再灌注损伤（I/R）是一种常见的病理生理现象，其主要特征 是心肌细胞死亡和功能障碍。在过去的几十年中，大量的基础和临床研究已经深 入探讨了心肌I/R的病理生理机制，但是其确切的机制仍然不完全清楚。
为了更好地研究心肌I/R的机制和探索有效的治疗方法，建立一种可靠、重 复性好的动物模型至关重要。本次演示将介绍一种改进的急性心肌I/R大鼠模型 的制备方法，并对其进行评价。
，而MDA、MPO、NOS活性明显降低（P<0.05），与模型组比较有显著差异。 结论：地黄饮子对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，其机制可能与调节氧 自由基代谢、抑制炎症反应和神经细胞凋亡有关。
引言：
脑缺血再灌注损伤是指脑组织在缺血一段时间后，重新恢复血流而引起的脑 组织损伤进一步加重的现象。这种损伤主要与氧自由基大量生成、炎症反应和神 经细胞凋亡等因素有关。地黄饮子是一种传统
3、造模方法
采用改良的Longa法建立大鼠脑缺血再灌注模型。
4、分组与给药
将30只大鼠随机分为3组：模型组、地黄饮子组、阳性对照组，每组10只。 给药方式为灌胃，每日1次，连续7天。
5、Байду номын сангаас标测定
给药后，处死大鼠，取脑组织，按照试剂盒说明书的方法测定SOD、MDA、 MPO、NOS的活性。
6、统计学处理
采用SPSS 17.0软件进行统计分析，数据以均数±标准差表示，采用t检验进 行组间比较。
结果：
地黄饮子组大鼠脑组织中SOD活性明显高于模型组和阳性对照组（P<0.05）， 而MDA、MPO、NOS活性明显低于模型组和阳性对照组（P<0.05）。具体数据如表1 所示。
地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响
地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响作者：宋琳安平朴钟源谢宁姚丽芬【摘要】目的探讨地黄饮子对AD模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响。
方法模型组以D半乳糖腹腔注射合并Aβ注射海马制备AD动物模型，各治疗组分别在造模的同时灌胃地黄饮子和抗脑衰胶囊、哈伯因。
运用MORRIS水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力及采用免疫组化方法观察各组大鼠海马神经元TNFα，IL1α蛋白的变化。
结果治疗组能缩短潜伏期、增加过台次数，第四象限与其它象限游泳距离之间比较也有差异，说明地黄饮子能改善痴呆大鼠空间探索记忆能力，低剂量组已经显效，高剂量组效果更为明显。
地黄饮子治疗组IL1α，TNFα含量显著下降，且具有剂量差别。
结论地黄饮子对痴呆模型大鼠学习记忆空间探索能力有改善作用及能有效抑制海马神经元炎性反应，其作用机理可能与地黄饮子抑制海马神经元TNFα，IL1α蛋白，抑制小胶质细胞活性进而减轻海马神经元的炎症损伤有关。
【关键词】地黄饮子；老年性痴呆；β淀粉样蛋白； MORRIS 水迷宫；炎性反应Effect of Decoction of Rehmanniae on Improving Learning Memory Ability and Inflammation Reaction of Alzheimer's Disease Model RatsAbstract：ObjectiveTo investigate effects of Decoctionof Rehmanniae（DR） on improving learning memory ability and inflammation reaction of Alzheimer's disease(AD) model rats.MethodsAD model rats induced by D-galactose intraperitoneal injection and the hippocampus injected β-amyloid(Aβ) were made. Every group was fed with Hup A, Kangnaoshuai and DR. The ability of learning memory was measured by Morris water maze(MWM). The inflammatory reaction of hippocampus neurons were observed by electron lens using immunohistochemistry method.Results DR could shorten the escape latency and increase the number of passing plats and the swimming distance of the fourth quad compared with the other quads. DR could dose-dependly reduce the expression of TNFα，IL1α protein of Hippocampus neurons. ConclusionDR can improve the ability of spatial exploratory and effectively control the inflammation reaction. The mechanism of action is possibly relevant that DR can decrease the expression of IL1α and TNFα to inhibit the activity of glia cell and inflammatory injury of hippocamus neurons.Key words：Decoction of Rehmanniae； Senile Dementia；βamyloid ； Morris water maze； Inflammation reaction 老年性痴呆（Senile dementia）,亦称阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD），是一种常见于老年人的神经退行性疾病。
地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预
地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预何秀丽;孟菲;周妍妍;谢宁【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2011(028)004【摘要】目的探讨地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤的β-淀粉样前体蛋白(APP) mRNA的表达及地黄饮子对其的干预作用.方法运用中药脑脊液药理学方法把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低,中,高剂量组6组,分别加入正常培养液,正常脑脊液及含药脑脊液,应用实时定量PCR法检测受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达(用2-△△Ct表示,Ct为阈循环值,△△Ct= △Ct各干预组-△Ct空白组,△Ct= Ct APP-Ct GAPDH).结果地黄饮子能明显降低PC12细胞受β-淀粉样蛋白刺激时APP的过度反应,降低APP mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论地黄饮子脑脊液可以抑制β-淀粉样蛋白损伤对PC12细胞的损伤.【总页数】3页(P26-28)【作者】何秀丽;孟菲;周妍妍;谢宁【作者单位】黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用 [J], 姚辛敏;周妍妍;何秀丽;谢宁2.地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞钙离子内流的影响 [J], 何秀丽;孙海龙;周妍妍;姚辛敏;孟菲;谢宁3.大鼠海马注射β-淀粉样蛋白1-40后β位淀粉样前体蛋白裂解酶1 mRNA表达及加减地黄饮子提取物的干预 [J], 牛英才;王建明;张晓杰;周丽;谢宁4.地黄饮子含药脑脊液对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤即早基因c-fos和c-jun 表达的影响 [J], 谢宁;孟菲;姚辛敏;周妍妍;何秀丽5.地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤凋亡基因bax bcl-2和caspase-3表达的影响 [J], 谢宁;姚辛敏;孟菲;周妍妍;何秀丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子对阿尔茨海默病大鼠脑组织生长抑素和热休克蛋白基因表达的影响
地黄饮子对阿尔茨海默病大鼠脑组织生长抑素和热休克蛋白基因表达的影响谢宁;何秀丽;牛英才;周妍妍【期刊名称】《中国临床保健杂志》【年(卷),期】2007(010)005【摘要】目的探讨地黄饮子对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠生长抑素(SS)和热休克蛋白(HSP)基因表达的作用机制.方法腹腔注射D-半乳糖致亚急性衰老合并海马双侧注射Aβ1-40,建立AD模型,运用免疫组化法检测SS表达以及RT-PCR法检测HSPmRNA的表达情况,并运用电镜观察AD大鼠脑组织病理超微结构变化.结果电镜观察到模型组大鼠脑组织出现变性甚至坏死;免疫组化显示模型组大鼠脑组织中SS表达降低,RT-PCR结果表明HSPmRNA表达增多,与健康对照组比较均差异有统计学意义,与模型组比较,地黄饮子组AD模型大鼠海马的病理改变明显减轻,SS 表达增高,HSP基因表达下降.结论地黄饮子能够减轻模型大鼠海马组织病理损害,其机制可能与调节脑组织SS和HSP基因表达有关.【总页数】4页(P485-488)【作者】谢宁;何秀丽;牛英才;周妍妍【作者单位】黑龙江中医药大学基础医学院,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学基础医学院,哈尔滨,150040;齐齐哈尔医学院医药科学研究所;黑龙江中医药大学基础医学院,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】R749.16【相关文献】1.加减地黄饮子预处理对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经生长因子表达的影响 [J], 段新芬;李文英;谢宁;周景华2.地黄饮子对急性脑中风大鼠脑组织SDF1和BDNF表达的影响 [J], 孙伟楠3.地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织超氧化物歧化酶、丙二醛及其空间学习记忆能力的影响 [J], 周景慧4.加减地黄饮子对Aβ1-40所致痴呆大鼠记忆能力和海马生长抑素水平的影响 [J], 牛英才;董妙先;兴桂华;林春荣;李雪岩;谢宁5.+Gz 重复暴露对大鼠脑组织热休克蛋白70 基因表达的影响(英文) [J], 蔡庆;刘红巾;陈友纯;纪桂英;陈同欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子对β淀粉样蛋白所致PC12细胞损伤的保护作用
地黄饮子对β淀粉样蛋白所致PC12细胞损伤的保护作用周妍妍;谢宁;姚辛敏;何秀丽【摘要】目的:观察地黄饮子对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:通过HE染色、尼氏染色、电镜观察地黄饮子对细胞形态的影响.结果:地黄饮子可显著改善Aβ25-35损伤引起的PC12细胞形态的改变,减轻细胞膜的损伤,减少损伤所致的细胞死亡.结论:地黄饮子对Aβ25-35所致PC12细胞损伤具有较好的保护作用.【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2010(038)002【总页数】3页(P19-21)【关键词】β淀粉样蛋白;PC12细胞;老年性痴呆;地黄饮子【作者】周妍妍;谢宁;姚辛敏;何秀丽【作者单位】黑龙江中医药大学,黑龙江,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学,黑龙江,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学,黑龙江,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学,黑龙江,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R749.1+6阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)，即老年性痴呆，目前尚无特效治疗方法［1］。
研究表明，AD的发病率随着年龄的增长，呈指数上升，严重威胁着老年人的健康和生存质量，该病的防治已成为国内外医学界研究的热点［2］。
以往我们对地黄饮子防治AD进行了系列的临床和动物实验研究，显示了其良好效果。
本实验采用脑脊液药理学方法，通过建立β淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的AD 细胞模型，进一步探索了地黄饮子对AD模型细胞的保护作用，为研制开发有效治疗AD的药物奠定了基础。
1 实验材料与仪器PC12细胞株(购于中国科学院上海细胞生物研究所);大耳白家兔(由黑龙江中医药大学实验动物中心提供);地黄饮子(由熟地、山萸肉、肉苁蓉、巴戟天等组成);盐酸多奈哌齐片(商品名安理申，法国PFIZER PGM公司);透射电镜(JEM－1220，日本电子公司);紫外－可见分光光度计(UV－2550，日本岛津产品)等。
地黄饮子含药脑脊液对Aβ2535诱导PC12细胞损伤即早基因cfos和cjun表达的影响
地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤即早基因c-fos和c-jun表达的影响作者：谢宁孟菲姚辛敏周妍妍何秀丽【摘要】目的探讨古方地黄饮子对β淀粉酶Aβ25～35所致PC12细胞损伤时即早基因c-fos和c-jun表达的调控作用。
方法把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为空白组、模型组、VitE 脑脊液对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组，待24 h细胞贴壁后吸去培养液,6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量，加培养液补至等量，37℃孵育2 h。
然后除正常组加入等量培养液外，其他各组加入经老化处理的Aβ25～35（终浓度为10 μmol/L），继续孵育24 h，然后离心收集细胞，提取总RNA。
应用RT-PCR二步法和琼脂糖凝胶电泳方法测定c-fos和c-jun基因的表达。
结果地黄饮子能下调c-fos和c-jun基因的表达，并呈一定的剂量依赖性。
结论地黄饮子脑脊液能明显降低PC12细胞受Aβ25～35刺激时即早基因c-fos和c-jun的过度反应，说明地黄饮子能提高PC12细胞对外界不良刺激的应激性。
【关键词】地黄饮子脑脊液 PC12细胞即早基因Abstract:ObjectiveTo investigate the regulativeeffects on the expression of IEG c-jun and c-fos of Decoction of rehmanniae on PC12 injury induced by b-amyloid25～35 protein(Aβ25～35).MethodsCultured cells of PC12 were divided into 6 groups:normal group,model group,vitamin E group,low dose of TCM group,moderate dose of TCM group and high dose of TCM group.Six groups were respectively added to normal cultured fluid;nomal cerebrospinal fluid,vitE cerebrospinal fluid,low dose of TCM cerebraspinal fluid, moderate and high dose of TCM cerebrospinal fluid in log growth phase,then added cultured fluid to equal,37℃ hatched 2 hours.The normal group was added to the same dose of cultured fluid and other groups were added to Aβ25～35 dealed with aging (the final concentration is 10 μmol/L),and then six groups were hatched 24 hours together.At last they were centrifuged to extract the total RNA. The expression of c-jun and c-fos measured by the methods of RT-PCR and agarose gel electrophoresis.ResultsThe group of Decoction of Rehmanniae cerebrospinal fluid reduced the expression of c-jun and c-fos gene, and showed some dose-dependence.ConclusionDecoction of Rehmanniae cerebrospinal fluid can effectively reduce the high response of c-jun and c-fos gene in PC12 cells injured by Aβ25～35.It shows that Decoction of Rehmanniae cerebrospinal fluid can increase PC12 cells' irritability for external ill innervation.Key words:Decoction of Rehmanniae; Cerebroapinal; Pheochromocytomaderived cell line(PC12 cells); Immediate Early gene属于神经嵴源细胞之一的PC12 细胞与原代培养的细胞相比，同源性较好且较易获取，细胞生存时间长,易于观察。
地黄饮子对阿尔茨海默病模型鼠脑神经元细胞凋亡及超微结构的影响
地黄饮子对阿尔茨海默病模型鼠脑神经元细胞凋亡及超微结构的影响谢宁;宋琳;姚丽芬;牛英才;关慧波;刘姝【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(009)037【摘要】目的:探讨地黄饮子对阿尔茨海默病动物模型凋亡基因及超微结构的影响.方法:实验于2003-08/2004-08在黑龙江中医药大学基础理论实验室完成.选择120只Wistar大鼠,随机分成6组:假损伤组,模型组,抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组,地黄饮子5.4g/(kg·d)和地黄饮子2.7g/(kg·d)组,每组20只.模型组以D-半乳糖腹腔注射合并淀粉样β蛋白注射海马制备阿尔茨海默病动物模型,假损伤组腹腔注射生理盐水,其余各组分别在造模的同时,地黄饮子治疗组分别给予地黄饮子灌胃[相当含生药5.4g/(kg·d)和2.7g/(kg·d)],抗脑衰对照组、石杉碱甲对照组分别给予抗脑衰胶囊、石杉碱甲溶液灌胃[含生药分别为2.403g/(kg·d),0.018 mr/(kg·d)],1次/d,共5周.运用反转录-聚合酶链反应测定各组海马凋亡基因的表达,及采用透射电镜观察各组海马神经元超微结构的变化.结果:120只动物中,因造模死亡共20只,模型组5只、石杉碱甲对照组6只,抗脑衰对照组3只,地黄饮子5.4g/(kg·d)组3只,地黄饮子2.7g/(kg·d)组3只,进入结果分析100只.[1]大鼠海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、核转录因子κB、hsp 70基因mRNA的表达:反转录-聚合酶链反应结果示,淀粉样β蛋白可诱发大鼠海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA表达增加,与模型组比较,抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组,地黄饮子5.4g/(kg·d),2.7g/(kg·d)组均可不同程度降低大鼠海马区域的表达(P＜0.05).地黄饮子5.4g/(kg·d)组下调幅度最大.与假损伤组比较,模型组鼠脑海马核转录因子κBmRNA、hsp 70 mRNA水平显著降低;与模型组比较,抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组,地黄饮子5.4g/(kg·d),2.7g/(kg·d)组均有明显的上调作用(P＜0.05).地黄饮子5.4g/(kg·d)组对hsp 70 mRNA水平的上调作用优于抗脑衰对照组,石杉碱甲对照组.hsp 70 mRNA电泳强度比较显示:假损伤组＞地黄饮子5.4g/(kg·d)组＞地黄饮子2.7g/(kg·d)组＞抗脑衰对照组＞石杉碱甲对照组＞模型组.[2]海马神经元超微结构的观察:模型组海马神经元显现凋亡早期的形态特点,各治疗组和对照组对凋亡皆有抑制作用.结论:地黄饮子对痴呆鼠海马神经元细胞凋亡有抑制作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能与地黄饮子上调核转录因子κB、hsp 70的表达,抑制线粒体释放细胞色素C,控制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活有关.【总页数】3页(P93-95)【作者】谢宁;宋琳;姚丽芬;牛英才;关慧波;刘姝【作者单位】黑龙江中医药大学研究生部,黑龙江省,哈尔滨市,150040;黑龙江中医药大学,黑龙江省,哈尔滨市,150040;黑龙江省医院神经内科,黑龙江省,哈尔滨市,150036;黑龙江中医药大学,黑龙江省,哈尔滨市,150040;黑龙江中医药大学,黑龙江省,哈尔滨市,150040;黑龙江中医药大学,黑龙江省,哈尔滨市,150040【正文语种】中文【中图分类】R749.1【相关文献】1.葛根素对Aβ25-35所致阿尔茨海默病模型大鼠脑内神经元凋亡的影响 [J], 鲁国;闫福岭2.苦参碱注射液对老年痴呆模型大鼠脑组织白细胞介素1β含量及海马神经元超微结构的影响 [J], 倪晶晶;吴仲敏;凌树才;朱晞;陆佩蓓3.左归丸对老年性痴呆模型鼠脑神经元HSP70及超微结构的影响 [J], 朴钟源;江新梅;罗守滨;白春燕;凌丽;殷飞;叶玉琴4.氦氖激光穴位照射对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织五羟色胺能神经元的影响 [J], 李宛青;陈雪梅;任秀花;刘华5.β-淀粉样蛋白对阿尔茨海默病大鼠脑局部神经元超微结构的影响 [J], 苗建亭;李柱一;林宏;雷革胜;荀文兴;宿长军;游国雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子对Aβ致PC12细胞损伤影响的实验研究的开题报告
地黄饮子对Aβ致PC12细胞损伤影响的实验研究的开题报告题目：地黄饮子对Aβ致PC12细胞损伤影响的实验研究摘要：阿尔茨海默病(AD)是一种常见的神经退行性疾病，其病理特征为淀粉样β蛋白(Aβ)在脑中沉积。
在本研究中，我们将使用PC12细胞模型，通过添加Aβ蛋白诱导细胞损伤，并测试地黄饮子对于Aβ诱导的细胞损伤的影响。
我们将对地黄饮子进行不同浓度的处理，使用MTT法评估地黄饮子对PC12细胞存活率的影响。
同时，我们将使用Western blot分析细胞存活相关蛋白的表达水平，以探究地黄饮子的保护作用机制。
该研究旨在为阿尔茨海默病的中药治疗提供实验基础。
关键词：阿尔茨海默病，Aβ蛋白，PC12细胞，地黄饮子，MTT法，Western blot背景介绍：阿尔茨海默病(AD)是一种神经退行性疾病，其病理特征是淀粉样β蛋白(A β)在大脑中的沉积，导致神经元死亡和认知功能丧失。
目前AD的治疗仍然缺乏有效的药物，中药的疗效也受到争议，因此需要进行更多的研究以寻找新的治疗方法。
地黄是一种常用的中药，其具有明显的抗氧化和神经保护作用。
一些研究已经表明，地黄饮子能够减少Aβ在大脑中的沉积，并降低AD动物模型中的认知损伤。
同时，地黄饮子还能够增加神经元的生存率和抑制神经元凋亡。
然而，地黄饮子对Aβ诱导的PC12细胞损伤的影响仍然不清楚。
研究方法：1. 材料和试剂PC12细胞、Aβ蛋白、地黄饮子、MTT试剂盒、RIPA缓冲液、SDS-PAGE 凝胶、PVDF膜、一抗、二抗、ECL亚硫酸盐。
2. 细胞培养和处理PC12细胞在RPMI 1640培养基中培养，并分为以下组别进行处理：对照组、Aβ组、地黄饮子低浓度组、中浓度组和高浓度组。
细胞在各组处理后24小时后进行MTT检测和Western blot分析。
3. MTT法检测细胞存活率MTT法是一种测量细胞代谢活力的方法，利用MTT试剂的还原作用可将细胞内代谢产物还原成紫色沉淀。
地黄饮子对AD模型大鼠的学习记忆及胆碱能损害的影响
地黄饮子对AD模型大鼠的学习记忆及胆碱能损害的影响宋琳;谢宁;朴钟源;关慧波【期刊名称】《中华中医药学刊》【年(卷),期】2007(25)7【摘要】目的:探讨地黄饮子对AD鼠学习记忆及胆碱能损害的影响。
方法:模型组以D-半乳糖(D-gal)腹腔注射合并β淀粉样蛋白(Aβ)注射海马制备AD动物模型,各治疗组分别在造模的同时灌胃地黄饮子和抗脑衰胶囊、哈伯因。
运用穿梭箱检测各组大鼠的学习记忆能力,采用生化法检测各组大鼠脑匀浆AchE,免疫组化方法观察SYN蛋白的变化。
结果:中药治疗组均可使各组大鼠潜伏期降低、主动回避反应阳性率明显升高,被动逃避时间显著降低,表明主动、被动反应水平均有所回升,有显著性差异。
灌服中药后各治疗组脑组织AchE活性降低,大鼠海马、皮层神经元SYN蛋白表达增加。
结论:地黄饮子对痴呆鼠学习记忆能力的提高及改善神经元损伤的作用,可能与地黄饮子改善鼠脑神经元胆碱能损害,来上调海马和皮层神经元SYN蛋白的表达有关。
【总页数】3页(P1370-1372)【关键词】地黄饮子;老年性痴呆;β淀粉样蛋白;乙酰胆碱酯酶;突触素【作者】宋琳;谢宁;朴钟源;关慧波【作者单位】黑龙江中医药大学;吉林大学附属一院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.加减地黄饮子对Aβ1-40所致AD大鼠学习记忆及抗氧化作用的影响 [J], 谢宁;宋琳;牛英才;邹纯朴2.醒脑益智方拆方对AD模型大鼠学习记忆及胆碱能系统的影响 [J], 孔明望;王平;陈刚;田代志;邱幸凡3.地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响 [J], 宋琳;安平;朴钟源;谢宁;姚丽芬4.加减地黄饮子对Aβ_(1-40)所致AD大鼠学习记忆及抗氧化作用的影响 [J], 谢宁;宋琳;牛英才;邹纯朴5.智脑胶囊对实验性AD模型大鼠学习记忆及大脑皮层和海马结构区胆碱能神经递质的影响 [J], 杨文明;韩明向;李泽庚;张国梁;鲍远程;邵正斌;胡兵;刘爱平;丁锦东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子对肾虚血瘀证帕金森病α-synuclein表达的影响
地黄饮子对肾虚血瘀证帕金森病α-synuclein表达的影响赵嘉琳;窦志芳(指导);赵琼【期刊名称】《光明中医》【年(卷),期】2022(37)7【摘要】目的探讨地黄饮子加减方对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)肾虚血瘀证大鼠黑质纹状体中α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)的影响。
方法80只大鼠根据Rand函数分为正常组(PDZC组)、疾病组(PDJB组)、肾虚血瘀组(SXXY 组)、地黄饮子加减方组(DHYZ组)各20只。
造模成功后DHYZ组灌胃地黄饮子加减方,余下各组灌胃等量生理盐水。
每周记录观测各组大鼠体质量值,用药3周后,分别观察各组大鼠给药前后外观形态变化,行悬挂实验。
行为学实验结束后各组大鼠断头处死,剖脑取黑质纹状体。
运用免疫组织化学法检测大鼠黑质纹状体内α-syn 阳性表达结果。
结果SXXY组大鼠比PDZC组体质量明显降低(P<0.05),DHYZ组相较SXXY组大鼠体质量明显改善,差异具有统计学意义(P<0.01)。
SXXY组大鼠出现皮毛变黄,弓背姿态,对刺激反应不明显且拘捕反应明显降低,比PDZC组行为学测试得分高(P<0.05),DHYZ组皮毛稍黄,弓背姿态有所改善且拘捕反应明显,相比较SXXY组行为评分降低(P<0.01)。
悬挂实验结果:SXXY组大鼠与PDZC组相比得分降低(P<0.05),DHYZ组与SXXY组相比评分明显提升(P<0.01)。
免疫组化检测结果表明SXXY组大鼠黑质纹状体内α-syn平均光密度值明显增高(P<0.05);DHYZ 组大鼠黑质纹状体内值明显降低(P<0.01)。
结论地黄饮子加减方可有效降低肾虚血瘀证PD大鼠黑质纹状体内α-syn的含量。
【总页数】5页(P1195-1199)【作者】赵嘉琳;窦志芳(指导);赵琼【作者单位】山西中医药大学;山西中医药大学基础医学院;不详【正文语种】中文【中图分类】R74【相关文献】1.宫腔镜手术联合中药对中重度宫腔粘连肾虚血瘀证疗效及对VEGF、整合素αvβ3、MMP-9表达的影响2.地黄饮子加减联合颈椎牵引治疗神经根型颈椎病肾虚血瘀证的临床研究3.地黄饮子对帕金森病肾虚证模型大鼠的干预作用及机制研究4.镇肝熄风汤对帕金森病小鼠模型α-synuclein表达的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子脑脊液药物化学研究
地黄饮子脑脊液药物化学研究
郭司群
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2016(000)002
【摘要】目的：阐明经方地黄饮子在脑脊液中的化学成分分布情况。
方法：利用UPLC-ESI-MS和GC-MS技术分析地黄饮子的体外样品及灌胃给予地黄饮子复方或单味药后的家兔脑脊液样品，对比分析各样品结果，确认灌胃给予地黄饮子后的家兔脑脊液中移行成分、代谢产物及其生药来源。
结果：灌胃给予地黄饮子后家兔脑脊液中发现5个移行成分，其中1个为地黄饮子所含的原型成分，4个为新产
生的代谢产物。
结论：对地黄饮子的脑脊液中移行成分及代谢产物进行了确认，对其进行深入研究，有助于阐明地黄饮子治疗中枢退行性病变的有效成分及作用机理。
【总页数】3页(P132-134)
【作者】郭司群
【作者单位】呼伦贝尔市食品药品检验所呼伦贝尔 021008
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.地黄饮子含药脑脊液对 AD 细胞模型影响的差异蛋白质组学研究 [J], 姚辛敏;王琪;谢宁;周妍妍;袁晓霞
2.地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预
[J], 何秀丽;孟菲;周妍妍;谢宁
3.地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞钙离子内流的影响 [J], 何秀丽;孙海龙;周妍妍;姚辛敏;孟菲;谢宁
4.地黄饮子脑脊液对M146L细胞活力及细胞凋亡的影响 [J], 姚辛敏;关慧波;于淼;王琪;周妍妍
5.含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响 [J], 谢宁;于淼;姚辛敏;关慧波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子对脑缺血再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子和基质细胞衍生因子表达的影响
地黄饮子对脑缺血再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子和基质细胞衍生因子表达的影响姚姝娱【期刊名称】《海军医学杂志》【年(卷),期】2017(038)003【摘要】Objective To explore the expression of brain derived neurotrophic factor (BDNF) and stromal cell derived factor 1 (SDF1) in the hippocampus of rats following cerebral ischemia reperfusion,and the mechanism involved in the repair of neurons.Methods Seventy-five SD rats were randomly divided into the normal group,the treatment group and the ischemia group,each consisting of 25 animals.Chloral hydrate at a concentration of 10％ was used to induce anesthesia.Bilateral common carotid artery was exposed and clipped for 40 minutes to develop an acute cerebral ischemia model.Following development of the model,the treatment group was given rehmannia Yinzi liquid by gavage at a dosage of 36 g/kg,while the ischemia group received physiological saline also by gavage once a day.The normal group was given normal feed.Three weeks later,the areas of cerebral infarction were detected,and the expression levels of BDNF and SDF1 were respectively detected in CA1 of the hippocampus.Results The levels of BDNF (99.25 ± 9.48) and SDF1 [(3.68 ± 0.96) mg/L] in CA1 in the animals of the normal group were all significantly higher than those of the treatment group [(79.98 ± 10.68) and (2.59 ± 0.76)mg/L] and the ischemia group [(59.59 ± 13.73) and (0.93 ± 1.24) mg/L],and statistical significance could be seen,when comparisons were made between them (P ＜0.05).The levels of BDNF and SDF1 in the rehmanniae Yinzi treatment group were also obviously higher than those of the ischemic group,also with statistical significance (P ＜O.05).The area of cerebral infarction of the treatment group was significantly smaller than that of the ischemia group,also with statistical significance (P ＜0.05).Conclusion Rehmannia Yinzi liquid could increase the levels of BDNF and SDF1,improve the endogenous protective effect,enhance the proliferation and migration of stem cells,and had the function to protect neurons.%目的探讨地黄饮子对脑缺血冉灌注大鼠海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和基质细胞衍生因子(stromal cell derived factor 1,SDF1)的表达及修复神经元的作用机制.方法选取清洁级SD大鼠75只,按数字表法随机分为正常组、治疗组和缺血组,每组25只.10％水合氯醛麻醉,暴露并钳夹双侧颈总动脉40 min,造模使大鼠急性脑缺血.治疗组:造模后灌服地黄饮子汤36 g/kg;缺血组:造模后每日胃灌盐水1次;正常组:正常饮食.3周后,测量大鼠脑梗死面积,分别测定3组大鼠脑海马CA1区BDNF和SDF1蛋白表达情况.结果正常组海马CA1区BDNF(99.25±9.48)和SDF1蛋白含量[(2.59±0.76) mg/L]均明显高于地黄饮子治疗组[BDNF:(79.98±10.68),SDF1蛋白含量:(3.68±0.96) mg/L]]和缺血组[BDNF:(59.59±13.73),SDFl蛋白含量:(0.93±1.24)mg/L],差异有统计学意义(P＜0.05).地黄饮子治疗组BDNF和SDF1蛋白含量明显高于缺血组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组的脑梗死面积明显低于缺血组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论地黄饮子治疗可以提高BDNF和SDF1蛋白水平,增加内源性保护机制和神经干细胞增殖、迁移,保护神经元的功能.【总页数】3页(P219-221)【作者】姚姝娱【作者单位】110032 沈阳,辽宁中医药大学附属医院【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.Aβ1-40脑内注射对大鼠海马AchE和NOS1表达的影响及加减地黄饮子的干预作用 [J], 牛英才;董妙先;兴桂华;林春荣;李雪岩;谢宁2.地黄饮子对卒中后抑郁大鼠海马5-HT1AR与5-HT2AR mRNA水平表达的影响[J], 范文涛;王倩;闫咏梅3.针刺放血法对抑郁模型大鼠行为学、海马齿状回基质细胞衍生因子-1免疫阳性细胞及其脑源性神经营养因子mRNA表达的影响 [J], 罗强;谢洪武;徐放明;陈日新4.Bcl-2过度表达对全脑缺血再灌注后大鼠海马回P53蛋白表达的影响 [J], 李伟;吴刚;薛荣亮5.中药地黄饮子对老龄大鼠海马SYP、ERK蛋白表达的影响 [J], 吴喜贵;胡荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地黄饮子对阿尔茨海默病钙离子干预的研究进展
地黄饮子对阿尔茨海默病钙离子干预的研究进展【摘要】钙稳态在阿尔茨海默病的发病机制中的作用日益受到重视，Aβ的聚集与 Tau蛋白磷酸化是阿尔茨海默病发病的关键分子机制，其生成和代谢紊乱与神经元胞内钙离子紊乱相互影响。
而地黄饮子能够抑制钙离子紊乱、拮抗tau蛋白过度磷酸化以及减轻β淀粉样蛋白沉积，本文就地黄饮子对阿尔茨海默病钙离子干预的实验研究进展进行综述。
【关键词】阿尔茨海默病；钙离子；地黄饮子【中图分类号】R277.7【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）17-218-01阿尔茨海默病(AD)是一种以进行性认知障碍和记忆功能损伤为主的中枢神经系统疾病，并伴有行为障碍和情绪异常。
其病理学特征是在大脑皮层和海马神经细胞外出现出现大量的老年斑(SP)、神经纤维缠结(NFT)和神经元凋亡等。
地黄饮子方出自刘完素《黄帝素问宣明论方》，主治喑痱、舌蹇不能言、足软不能用等症。
近年来研究地黄饮子在治疗阿尔茨海默病、血管性痴呆、中风及后遗症等神经病变有一定效果，对神经系统具有良好的保护作用，并在实验研究中取得了一定的研究进展。
1.钙离子超载与Aβ损伤老年斑由β淀粉样蛋白在神经细胞间或脑内血管壁上聚集而生成。
钙离子通过影响分泌酶的表达进而影响Aβ的产生。
β分泌酶（BACE），只有在其N端原肽被移除后才具有活性。
弗林蛋白酶是介导BACE原肽切割的主要原肽转化酶，属于钙依赖蛋白，其活性随钙离子浓度的升高而增强，因此钙离子超载促进Aβ的生成与沉积。
同时也有研究发现Aβ聚集会导致钙稳态失调，形成恶性循环。
Kuchib-hotla 表明在含有SP的老鼠中，大约有20%的树突或轴突中出现中等甚至更严重的钙超载，其严重程度与树突或轴突的完整性相关。
同时他通过对APP/PS1 转基因小鼠的研究证实，老年斑所在的微环境扰乱了神经元对钙离子的调控及钙离子生理功能[1]。
王成志等[2]研究显示，在AD患者中Aβ的异常增多和聚集可导致细胞膜上的钙离子通道及谷氨酸受体受损，促使大量钙离子内流，流入的钙离子与 Ca N 结合启动一系列病理生理反应，包括神经元细胞凋亡、tau 蛋白过度磷酸化以等。
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地黄饮子对β淀粉样蛋白1-42致SH-SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的影响马涛1,2,3,王乐2,温彬宇2,张文生1,3,王永炎41.北京师范大学中药资源保护与利用北京市重点实验室,北京 100875；2.北京中医药大学东方医院,北京 100078；3.北京师范大学教育部天然药物工程研究中心,北京 100875；4.中国中医科学院,北京 100700摘要：目的探讨地黄饮子药物血清对β淀粉样蛋白(Aβ)1-42致SH-SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的保护作用机制。
方法雄性SD大鼠以成人临床用药量20倍剂量地黄饮子灌胃给药,连续7 d,提取大鼠血清灭活后,制备药物血清。
SH-SY5Y细胞采用5 μmol/L Aβ1-42及0、1.25%、2.5%、5%、10%(V/V)等浓度药物血清共孵育。
MTT法检测细胞存活率,PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax 表达,ELISA检测caspase-3、caspase-9酶活性,JC-1法测定线粒体膜电位。
结果地黄饮子药物血清可显著提高Aβ1-42损伤SH-SY5Y细胞的存活率,减少细胞凋亡,上调抗凋亡蛋白Bcl-2和下调促凋亡蛋白Bax表达,抑制Aβ1-42诱导caspase-3和caspase-9的激活,提高线粒体膜电位。
结论地黄饮子药物血清通过保护Aβ1-42导致的线粒体损伤,抑制依赖线粒体的细胞凋亡通路激活,减少细胞凋亡,提高细胞存活率。
关键词：地黄饮子；阿尔茨海默病；线粒体；β淀粉样蛋白；细胞凋亡DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.12.015中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2015)12-0059-05Effects of Dihuang Yinzi on Amyloid β1-42 Induced Mitochondrial Dysfunction and Apoptosis in SH-SY5Y Cells MA Tao1,2,3, WANG Le2, WEN Bin-yu2, ZHANG Wen-sheng1,3, WANG Yong-yan4 (1.Beijing Key Laboratory for Protection and Utilization of Chinese Medicine Resources, Beijing Normal University, Beijing 100875, China；2.Dongfang Hospital, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100078, China；3.Engineering Research Center of Natural Medicine of Ministry of Education of China, Beijing Normal University, Beijing 100875, China；4.China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)Abstract：Objective To investigate the protective effects of Dihuang Yinzi on Aβ1-42 induced mitochondrial dysfunction and apoptosis in SH-SY5Y cells. Methods Male SD rats were orally administrated with Dihuang Yinzi in dosage of 20 × human adults for 7 days. Rat serum was collected and inactivated to obtain drug-containing serum. SH-SY5Y cells were cultivated with 5 μmol/L Aβ1-42 and 0, 1.25%, 2.5%, 5%, 10% (V/V) Dihuang Yinzi-medicated serum. Cell viability was assayed by MTT；apoptotic rates were analyzed with PI/Annexin V flow cytometry；expressions of Bax and Bcl-2 were detected with Western blot；enzymatic activities of caspase-3 and caspase-9 were measured by ELISA；mitochondrial membrane potential (MMP) was determined with JC-1. Results Dihuang Yinzi-medicated serum could improve cell viability and attenuated Aβ1-42 induced apoptotic death of SH-SY5Y in dose dependent manner. Dihuang Yinzi-medicated serum could also inhibit the activation of caspase-3 and caspase-9, and elevate the ratio of Bcl-2/Bax and MMP in SH-SY5Y cells. Conclusion Dihuang Yinzi-medicated serum could decrease cell apoptosis and improve cell viability through protecting Aβ1-42 induced mitochondria damage and inhibiting activation of apoptotic pathway.Key words：Dihuang Yinzi；Alzheimer’s disease；mitochondria；Aβ；cell apoptosis基金项目：国家科技重大专项-重大新药创制(2012ZX09103-201)通讯作者：张文生,E-mail：zws@阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以起病隐匿、持续性智能衰退和恶化为特征的神经变性疾病,临床表现为渐进性记忆障碍、认知功能损伤、人格变性等,严重影响工作、社交能力及生活质量[1]。
AD发病过程复杂,其中β淀粉样蛋白(Aβ)过量累积导致神经损伤受到广泛关注。
Aβ蛋白具有多种毒性,可引起线粒体损伤、氧化应激、钙应激及炎症损伤等,导致神经细胞凋亡及突触脱失,记忆能力下降[2]。
研究表明,线粒体损伤产生于AD症状出现之前的病程极早期,是AD早期防治的重要靶标[3]。
目前上市的抗AD药物多以乙酰胆碱酯酶抑制剂和N-甲酰-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂为主,疗效不能持久且不良反应明显[4]。
中医在防治AD中表现出独特优势。
地黄饮子方出自《黄帝素问宣明论方》,主治下元虚衰、痰浊上泛之喑痱证,具有滋肾阴、补肾阳、开窍化痰之功。
研究表明,地黄饮子可有效改善AD患者认知能力[5-6]；可改善AD转基因小鼠脑内能量代谢,表现出线粒体保护作用[7-8]。
本研究以Aβ1-42致神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y损伤为模型,探索地黄饮子药物血清对线粒体功能的保护作用及线粒体相关细胞凋亡通路的影响,以揭示地黄饮子抗AD的分子机制。
1 材料与方法1.1 动物SPF级SD雄性大鼠,体质量200～250 g,2月龄,北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号SCXK(京)2011-0011。
SPF级环境饲养,温度(21±3)℃,相对湿度40%±5%,大鼠维持饲料自由饮食,12 h明暗交替。
1.2 主要试剂与仪器人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y(ATCC),胎牛血清、DMEM/F12、青霉素-链霉素双抗、胰酶(Invitrogen 公司),Aβ1-42(Sigma-Aldrich公司),MTT(Amresco公司),Bax、Bcl-2、β-actin抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠、山羊抗兔抗体(Santa Cruz公司),caspase-3、caspase-9酶活性检测试剂盒(碧云天生物技术研究所),JC-1线粒体膜电位检测试剂盒(Cell Technology公司),细胞裂解液、BCA蛋白检测试剂盒、SDS-PAGE配胶试剂盒(北京普利莱技术有限公司),蛋白酶抑制剂(Roche公司),PVDF膜购自Millipore公司；Pierce ECL发光液(Thermo公司), Annenxin V-FITC凋亡检测试剂盒(北京宝赛生物技术有限公司),其他试剂均为国产分析纯。
Synergy H1酶标仪(Biotex公司),EPIGC ALTRA Ⅱ流式细胞仪(Beckman公司),5810R台式多功能高速冷冻离心机(Eppendorf公司),Mini-Protean小型垂直电泳系统(Bio-Rad公司),GeneGenome ECL成像仪(SynGene公司),BBD6220 CO2培养箱(Thermo公司)。
1.3 药物地黄饮子由熟地黄15 g、山萸肉15 g、肉苁蓉15 g、巴戟天15 g、制附片15 g、肉桂15 g、五味子15 g、麦冬15 g、石斛15 g、茯苓15 g、石菖蒲15 g、远志15 g、薄荷15 g、生姜10 g、大枣5 g组成,饮片购自北京同仁堂药店。
常规水煎液制成浸膏。
1.4 药物血清制备大鼠按临床成人用药量20倍每日灌胃地黄饮子水煎液,连续7 d。
第7日重复给药2次,间隔时间2 h,于末次给药1 h后,无菌操作,眼眶静脉取血,静置1 h,待血凝固后,1500 r/min离心10 min,分离血清,置于56 ℃水浴箱中水浴30 min灭活处理,-20 ℃保存。
1.5 细胞培养SH-SY5Y细胞用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 mg/L链霉素的DMEM/F12完全培养基在37 ℃、5%CO2、相对湿度90%条件下培养。
48 h传代1次,取对数生长期细胞进行实验。
1.6 细胞造模及药物处理SH-SY5Y细胞以1×104细胞/mL接种于96孔板,或1×105细胞/mL接种于6孔板,37 ℃培养至细胞融合率为80%,将细胞培养液换为含10%普通大鼠血清或分别含1.25%、2.5%、5%、10%含药大鼠血清(以普通大鼠血清补足至终浓度为10%)和DMEM/F12培养液,加入5 μmol/L Aβ1-42继续培养48 h。