洋水仙Dutch Master愈伤组织的诱导、分化及植株再生
中国水仙花器官愈伤组织诱导、分化及组织学观察
的花 梗 和花 药 培 养 基 中 添 加 不 同 浓 度 ６ ． 苄 基腺 嘌 呤 （ ６ － Ｂ Ａ） 、 硫酸腺瞟呤 （ Ａ ｄ ） 、 萘 乙酸 （ Ｎ Ａ Ａ） 和 ２， ４ － 二 氯 苯 氧 乙 酸
（ ２ ， ４ 一 Ｄ） ， 筛选 出愈伤组织诱导及鳞茎芽再生 的最适 培养 基配方。结果表 明 ： 花梗 愈伤组织 诱导及鳞茎 芽分化 的最 佳 培养 基为 ＭＳ＋１ ｇ・ Ｌ —Ｎ ａ Ｈ ２ Ｐ Ｏ ４＋ ０ ． ０ ０ ３ ｇ・ ＬＩ １ ６ － Ｂ Ａ ＋０ ． ０ ０ １ ｇ・ ＬＩ １ Ｎ Ａ Ａ＋ ０ ． ２ ｇ・ ＬＩ １ Ａ ｄ＋３ ０ ｇ・ Ｌ Ｉ １ 蔗糖 ，
Ｃａ ｌ ｌ ｕ ｓ Ｉ ｎｄ ｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ，Ｄｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｈｉ ｓ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｏｂｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｎａ ｒ ｃ ｉ ｓ ｓ ｕ ｓ ｔ ａ ｚ ｅ ｔ ｔ ａ ｖ ａ ｒ ．ｃ ｈｉ ｎｅ ｎ ｓ ｉ ｓ Ｆｌ ｏ ｒ ａ ｌ Ｏｒ ｇ ａ ｎｓ
花药愈伤组织诱导及鳞茎芽分化 的最佳培养基 为 ＭＳ＋ ０ ． ０ ０ ２ ｇ・ Ｌ ６ － Ｂ Ａ＋ ０ ． ０ ０ １ ｇ・ Ｌ Ｎ Ａ Ａ＋３ ０ ｇ・ Ｌ 蔗糖 ； 花
梗 愈伤组织诱导到鳞茎芽分化的时间需要 ３ ０～ ３ ５ ｄ ， 而花药这一 过程 为 ８ ０～ ９ ０ ｄ 。对花梗 愈伤组织诱 导及鳞 茎
(2021年整理)第三章-愈伤组织诱导
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第三章愈伤组织的诱导与培养第一节愈伤组织的诱导与继代培养愈伤组织（callus）: 在培养基上，由外植体经脱分化和细胞分裂形成的一团无序生长的薄壁细胞。
大部分外植体细胞须经脱分化形成愈伤，才能再分化成完整植株，只有茎尖等少数细胞只恢复为分生状态但不分裂，直接再分化。
愈伤组织的诱导与分化是植物组培的基本环节。
一、愈伤组织的诱导及其形态特征1、愈伤组织的诱导1）起动期/诱导期（initiation/induction stage， Induction of growth）外植体细胞在外源激素作用下,经脱分化而恢复分裂状态，开始形成愈伤。
细胞外观无明显变化，代谢旺盛,合成加强,为分裂做准备.持续十几小时～几天。
2）分裂期（divition stage/phase)：外植体切口边缘膨大,外层细胞迅速分裂，体积变小，具分生细胞的特征，细胞数速增。
3）形成期(formation stage/Differentiation phase）：外植体表层细胞分裂减缓，内部细胞开始分裂，大量细胞形成瘤状/泡状或片状结构。
若不及时继代，将分化出拟分生组织瘤状物和维管组织，又称分化期。
2. 愈伤组织的形态特征质地:松脆易碎的颗粒状;紧密坚实的结块状；水渍或浆糊状。
颜色：白色或淡黄色;淡绿色或绿色；黄色至褐色。
一般,淡黄或淡绿/绿色松脆（近圆形）或致密的颗粒状愈伤再生能力较强，白色/灰白色或黄褐色、浆糊状或紧实（香蕉形）的愈伤再生能力差。
欧洲水仙鳞片组织培养与快速繁殖
Ｌ
Ｏ
Ｏ
将继代增殖的小鳞茎接种 到不 同的生根培养基
上 ，５天 后 观察统 计 生根情 况 。 ３
１ ２ ６ 不 同基 质 配 比对组 培 苗炼 苗移栽 的影 响 ． ．
将 符合 条 件 （ 根 数 达 ５条 以 上 ， 均 根 长 达 生 平 ４ ０ｃ 且鳞 茎 直 径 Ｉ８ｍｍ） 鳞 茎 经 过 室 内炼 苗 ． ｍ， ＞ 的
养 的最 适光 照 度为 １ ０ 。 ０ｌ ０ ｘ
表 ２ 光照 度对 欧洲水仙初代培养的影响
将诱导分化小鳞茎切除上部１３ ／ 鳞片后平分成 ３ 块， 接种到不同的继代培养基上 ，５天后 观察统计小 ４
鳞茎 的分 化增 殖情 况 。 １２ ５ 不 同激 素配 比对 小鳞 茎生根 的影响 ．．
２０ ｍ ／ ． ｇＬ＋Ｎ Ａ０ ２ｍ ／ Ａ ． ｇ Ｌ＋ｓｃ ｓ ０ｇ Ｌ ｔｅｏｔ ａ ｍ ｄｕ ｒ ｅｏ ｄｒ ｃｌ ｒ ｗ ｓＭＳ＋ － Ａ １５ｍ ／ ｕｒ ｅ３ ／ ， ｈ ｐｉ ｌ ｅ ｉ ｆ ｃｎ ａ ｕｔ ｅ ａ ｏ ｍ ｍｏ ｓ ｙ ｕ ６ Ｂ ． ｇ Ｌ＋
通过对初代培养光照度的研究发现， 光照度的大
小对愈伤组织的诱导影响显著 （ ２ 。光照度为 ０ 表 ） 时， 愈伤组织诱导率最低 ， 且愈伤 组织蓬松 、 不易分
化 。随着光照度的增强愈伤组织诱导率增加， 但当光 照度增加到ｌ ０ 时诱导率有所下降 ， ０Ｉ ５ ｘ 且愈伤组织 部分转绿 ， 不利于芽的分化 。因此 ， 欧洲水仙初代培
２ ３ 不 同激 素 配 比 对 欧 洲 水仙 愈 伤 组 织 诱 导 及 分 。
化 的影 响
能
后， 置于室内散射光处 ， ３天后打 开瓶盖 ， ２～ 使鳞茎 暴露于空气 中。３— ４天后将鳞茎从 培养瓶 中取 出， 并用水冲洗根部残留的培养基 ， 移栽入经过高压灭菌 的营养土中， 保持 温度２ ２ ０— ５℃， 湿度８ ％ 一 ０ ， ５ ９％ 放置 于阴凉 处 ， ７天浇 水 １次 ，Ｏ天后 观 察 统计 植 每 ３ 株的成活率 、 苗高及植株生长状况。 以上基 本 培 养 基 除 生 根 培 养 基 为 １２ Ｓ＋ ／Ｍ ２ ／ 蔗糖 ， ０ｇＬ 其他基本培养基均为 Ｍ 蔗糖３ ／ ， Ｓ＋ ０ｇ Ｌ ｐ Ｈ值均为５ ８ 每处理 １ ．， ５个材料 ， 重复 ３ 。 次
一、请教关于水稻愈伤组织的问题
组培常见英汉对照abortion（败育）adenine（腺嘌呤）agar （琼脂）anther（花粉）apical（顶端的）aseptic(无菌的) auxin（生长素）axillary bud （腋芽）callus，calli（愈伤组织）cellular totipotency（细胞全能性）cellulase（纤维素酶）cellulose（纤维素）centrifuge（离心）chloroplast（叶绿体）chromosome doubling（染色体加倍）colony（细胞团，菌落）cybrid（cytoplasmic hybrid,胞质杂种）cytokinin（细胞分裂素）cytoplasm（细胞质）degeneration （败育）dedifferentiation （脱分化）redifferentiation（再分化）dicotyledonous（双子叶的）dihaploid（二单倍体）diploid （二倍体）dissect（剥离）dormancy（休眠）eliminate （除去）embryo（胚胎）embryoid（胚状体）embryogenesis（胚胎发生方式）epidermis（表皮，上表皮）excise（切除）explant （外植体）filter paper（滤纸）gelose（琼脂糖）genetype（基因型）germplasm（种质）global embryo （球型胚）haploid（单倍体）heterokaryon（异核体）homozygous（纯合的）hormone （激素）interspecific（种间的）intraspecific（种内的）in vitro（体外）in vivo（活体）kinetin（激动素）macerozyme（离析酶）male sterile（雄性不育）medium（培养基）membrane（膜）meristem（分生组织）meristem culture（茎尖培养）micropropagation（微繁）microspore（小孢子）monocotyledon/moncots（单子叶植物）nod culture （茎段培养）organelle（细胞器）organgenesis（器官发生方式）osmotic（渗透的）pith（髓）plantlet（小植株，苗）pollen culture （花粉培养）pollinate（授粉）protocorm（PLB）原球茎protoplast fusion（原生质体融合）rapid propagation（快繁）regeneration（再生）self-incompatibility （自交不亲和）shoot tip（茎尖）sodium hypochlorite（NaClO）somatic embryo（体细胞胚）somatic hybridization（体细胞杂交）somatic hybrid（体细胞杂种）stem（茎）stem tip culture（茎尖培养）sterilant（消毒剂）sterile distilled water（蒸馏水）sterilization（消毒）stock plant （母株）subculture (继代) sucrose（蔗糖）terminal bud（顶芽）transfer （转移）virus eradication（脱毒）常用缩略语ABA（脱落酸）CM（椰子汁）CPW（细胞-原生质体清洗液）DMSO（二甲基亚砜）IAA（吲哚乙酸）IBA（吲哚丁酸）KT（激动素）NAA（萘乙酸）PEG（聚乙二醇）LH（液氮）CH（水解酪蛋白）GA3（赤霉素）一、请教关于水稻愈伤组织的问题:我的水稻愈伤组织经过转化后，基本上不分化，听说TDZ能帮助分化，请问是用TDZ完全代替KT，还是按一定比例加入？还有就是在分化过程中还需要再加入潮霉素和羧苄吗？我用的水稻品系是台北309，以前的分化培养基为MS+0.5/l谷氨酰胺+0.5g/l脯氨酸+0.3g/l水解酪蛋白+2mg/l KT+0.5mg/l 6BA+0.2mg/l NAA+300MG/L羧苄+50MG/L潮霉素。
第三章 植物愈伤组织的诱导、继代及分化
⑶先芽后根：愈伤组织中产生多个分生细胞形成分生中心， 从中仅分化出芽，一般情况下待芽长到一定大小时，切下 移入生根培养基中，在其基部即可分化出根。
有些植物在分化芽的培养基上同时在芽器官基部分化出根， 形成完整的植株。大多数植物均属这类正常的分化途径， 这类苗移栽较易成活。
⑷先根后芽：有些植物外植体脱分化后在愈伤组织上先分 化出根，而后在靠近愈伤组织的根部上再分化出芽，有的 将根切下放入分化培养基，再于根上分化出芽器官，甚至 在根端也能分化出芽。
从单个细胞或外植体上脱分化形成典型的愈 伤组织，大致经历三个时期：
起动期：又称为诱导期,
是愈伤组织形成的起点。 外植体已分化的活细胞 在 外源激素的作用下，
通过脱分化起动而进入 分裂状态，并开始形成 愈伤组织。
起动期
分裂期
分裂期：外植体切口边缘开
始膨大，外层细胞通过一分 为二的方式进行分裂，从而 形成一团具有分生组织状态 细胞的过程。
二、从愈伤组织建立悬浮培养体系
多数悬浮培养物（suspension cultures）是将生长快、质地 疏松的愈伤 小块转移到与愈伤诱导含同样成分的液体培养 基里进行振荡培养而获得。
接种时必须有足够多的细胞块，以保证有较合适的细胞密 度。振荡速度一 般为 30-150rpm。
第一次继代时，应去掉开始时接入的大块细胞团——过滤。
第三节 愈伤组织分化与植株再生
体细胞胚胎发生：指从体细胞进行的类胚结构的生产。 体细胞胚是一个二极结构，不物理地附着于原组织，每一 个体细胞胚称为胚状体，它可以同 合子胚一样发育成植株。 器官发生：指从愈伤组织形成芽及根的过程，芽是一个单 极性结构，物理地同母体组织联结着。
细胞分化
无论是在离体还是在活体条件下，植物细胞分化 研究的重点是维管组织的分化，特别是木质部成 分的分化。
愈伤组织的诱导
先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起 来形成一株小植株，只有芽和根的微管束是相通的，才能得到成 活的植株。
花枝、果枝、和树干
香果树简介
香 果 树 (Emmenopterys henryi) 又名庙瓜树、水萝卜， 为茜草科香果树属的单种，属落叶大乔木 ，为我国特产 单种属的古老珍稀濒危树种，属国家二级保护植物。
香果树是细木工艺、雕刻、装饰、建筑和家具的优良用 材 ， 其枝皮纤维细， 是供制蜡纸及人造棉的好原料。 它的花大， 树姿雄伟， 也是庭园观赏树种。
香果树简介
主要分布在西南地区和长江流域。香果树的分布虽然较广 泛，但多零星分散，种群数量不多，自然条件下种子萌发 率低，又由于长期以来人为的滥砍滥伐、过度放牧，使其 种群分布范围逐年缩小，种群数量日益降低，处于濒危甚 至灭绝的状态。
香果树生根
香果树移栽
当苗长到3～5cm高时，洗净根上的培养基， 将苗移入装有富含有机质、易排水、透气性好的椰 绒花盆里。然后置入人工气候箱中培养，温度25℃ 左右，湿度80%左右，在人工气候箱中生长一个月 后移到室外，成活率95%以上。
移栽成活的香果树的苗
【小结】
植物组织培养过程
离体的植物 脱分化
2.外植体来源及其生理状态
理论上讲，植物体细胞均具有全能性，但在一些 植物中，胚状体产生和器官分化与离体培养的器官或 组织密切相关。如油菜的花器官比叶、根易于分化成 苗，水稻和小麦幼穗的苗分化频率也比其他器官为高。 甜菜花芽和花茎愈伤组织能分化成芽，而根切断愈伤 则不能形成芽器官。
2.外植体来源及其生理状态
一.愈伤组织形成条件
白羊草茎段愈伤组织诱导和植株再生
白羊草茎段愈伤组织诱导和植株再生于娜;董宽虎【摘要】首次采用白羊草拔节期茎段为外植体,通过对其组织培养中愈伤组织诱导和植株再生情况进行研究,从而筛选出其在组织培养过程中较合适的激素组合.结果表明,茎段作为外植体时,愈伤诱导在仅附加2,4-D 2.0 mg/L诱导培养基中的诱导率高于2,4-D和6-BA的激素组合；诱导出的愈伤组织转入MSB+6-BA 0.07 mg/L+ NAA 0.05 mg/L分化培养基中,分化率显著高于其他激素组合.%Stem segment of Bothriochloa ischaemum as explant, callus induction and planets regeneration was conducted to screen a suitable hormone combination. Results showed thai the inductivity of Bothriochloa ischaemum stem segment was higher in MSB medium added only 2.0mg/L 2,4-D than in hormone combination of 2,4-D and 6-BA. The embryo calluses obtained from induction medium could be succeeded on medium MSB + 6-BA 0.07 mg/L + NAA 0.05 mg/L, they had remarkable high differentiation frequency than in other hormone combinations.【期刊名称】《山西农业科学》【年(卷),期】2012(040)006【总页数】4页(P575-578)【关键词】白羊草;茎段;愈伤诱导;植株再生【作者】于娜;董宽虎【作者单位】山西省林业职业技术学院园林系,山西太原030009;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S543+9白羊草（Bothriochloa ischaemum）是禾本科孔颖草属多年生草本植物，是优良的牧草和水土保持植物，具有固土保水，生活力强，高产耐牧、耐践踏，适口性强等优点，是饲用价值较高的放牧型禾草之一，广泛分布于我国暖温带落叶阔叶林地带，是控制水土流失和维持丘陵山地的原生态平衡的重要草种[1-2]。
《愈伤组织培养》复习题及参考答案
第2章《愈伤组织培养》复习题参考答案一、填空：1、绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段。
2、愈伤组织形成大致经历诱导期、分裂期和分化期三个时期。
3、使用植物生长调节物质时要注意：种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值。
4、愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式。
二、名词解释：1、愈伤组织培养(callus culture):是指将母体植株上的外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。
2、继代培养(subculture)：愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。
这个过程叫做继代培养3、形态建成（organogenesis）：外植体在适宜的培养条件下经脱分化、再分化形成不定根（adventitious roots）、不定芽（adventitious shoots）或直接发育成形态完整的植物体的过程。
4、体细胞胚（somatic embryo）又称胚状体（embryoid）：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成的具有双极性的胚状结构。
三、问答题1、愈伤组织细胞的分化一般分几个时期？各有何特点？（1）诱导期：①气体交换增加，如氧气的吸收增加②RNA含量增加（增加到300%）③蛋白质量增加（每个细胞的总增加量为200%）d酶活性增强（2）分裂期：①细胞的数目迅速增加②每个细胞平均鲜重下降③细胞体积小，内无液泡d细胞的核和核仁增大到最大e细胞中RNA含量减少，而DNA含量保持不变f随着细胞不断分裂和生长，细胞的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成极快。
（3）分化期：①细胞分裂部位和方向发生改变②形成瘤状或片状的分生组织结节和维管组织结节③细胞的体积相对稳定，不再减少d出现了各种类型的细胞e生长旺盛的愈伤组织呈乳白色、白色或浅绿色，老化的多转化为黄色或褐色2、分裂期愈伤组织的共同特征是什么？细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，维持其不分化的状态，颜色浅而透明。
杜仲成熟干胚乳愈伤组织的诱导和植株再生_朱登云
农业生物技术学报 J o urnal of Ag ricultural Biotechnolog y1998,6(4)杜仲成熟干胚乳愈伤组织的诱导和植株再生*朱登云 田慧琴 蒋金火 谷文英 汪 矛 朱 湄 米景九 李浚明(中国农业大学生物学院,北京 100094)摘 要: 杜仲成熟干种子经GA3溶液浸泡后,去掉种胚,切取胚根端胚乳接种在愈伤组织诱导培养基上,5～7d后多数胚乳顶端局部膨大。
将膨大部分切下转入成分相同的新鲜培养基上,40～50d后形成白色柔软的初生愈伤组织。
初生愈伤组织经改造后变为绿色致密具分化能力的愈伤组织,转入分化培养基后出现器官分化,唯正常茎芽分化频率很低,且十分细弱,只有经壮苗培养后才能诱导生根。
目前已获得胚乳试管苗20余株。
其无性系中部分植株已在温室内移栽成活。
关键词: 杜仲;胚乳培养;植株再生杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)不仅是一种名贵的药用植物,而且是最有开发前景的温带胶源植物。
据报道,在杜仲的叶片、树皮、根皮和果皮中都含有杜仲胶[1,2]。
杜仲胶是杜仲含胶细胞产生的一种次生代谢物质,具有重要的经济价值和诱人的开发前景[3]。
杜仲为二倍体(2n=2x=34)落叶乔木,雌雄异株,异花授粉,以收获树叶和树皮等营养体为主要栽培目的,虽以种子繁殖为主,但也可进行营养繁殖。
杜仲具备的所有这些特点,表明这个树种适于通过三倍化进行遗传改良[4],以利用细胞体积增大的特点提高单株产叶量或细胞含胶量。
制造三倍体有几种不同方法。
在本研究中我们采用了胚乳培养和植株再生的方法。
本文报道杜仲成熟干种子胚乳愈伤组织诱导和植株再生的实验结果。
1 材料和方法1.1 材料 供试材料为采收后晾干的杜仲成熟翅果,大部分购自北京种子市场,一部分由湖北郧西黑山杜仲林场柯昌华先生惠赠。
1.2 接种方法 由褐色翅果中剥出的成熟干种子用常规方法灭菌后,先用500～1000mg/L的无菌赤霉素(GA3)溶液浸泡24h,然后在超净台上将种子沿背腹线切成两半,剔除其中种胚,再将每扇胚乳的子叶端(合点端)3/4淘汰,将占种子全长1/4的胚根端(珠孔端)胚乳种皮朝下接种在愈伤组织诱导培养基上。
第三章_愈伤组织诱导及分化调控
1. 外植体的选择 需考虑以下因素:
(1) 外植体的基因型 (2) 同一植物不同部位外植体，其细胞的分化能
力有相当大的差别 (3) 植物胚与幼龄组织器官比老化组织、器官更
容易去分化
一个细胞向分生状态回复过程所能进行的程度， 取决于它在原来所处的自然部位上已经达到的细 胞分化程度和生理状态
再生植株：器官发生(organogenesis)和体细胞 胚胎发生(somatic embryogenesis)
体细胞胚胎发生：指从体细胞进行的类胚结构的 生产。体细胞胚是一个二极结构，不物理地附着 于原组织，每一个体细胞胚称为胚状体，它可以 同合子胚一样发育成植株。
器官发生：是指培养条件下的组织或细胞团（愈 伤组织）分化形成不定根（adventitious roots）、不定芽（adventitious shoots）等器 官的过程 。
从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具 有全能性。
差异：（1） 受精卵的全能性最高 （2） 受 精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖 细胞的低。
全能性实现的两个必须满足的条件： 把具有较强全能性的细胞从植物组织抑制性影
响下解脱出来 要给予植物细胞一定的刺激
二、几个重要的概念
外植体（explant): 植物组织培养中用来进行无菌培养的离体材料，
（2）物理因素 光：
很多光照条件下，一些植物均能进行器官发生， 说明光周期并不是非常重要的因子
有的植物在光、暗交替条件下才能形成芽，而 在连续光照下则不能
尽管如此，多数植物需要一个稳定的光周期， 多数培养条件是14-16h光照，8-10h黑暗
温度：不同植物不一样，需要摸索，如烟草和棉 花就不一样
B
月季‘萨蔓莎’愈伤组织的诱导及植株再生
月季‘萨蔓莎’愈伤组织的诱导及植株再生高莉萍;包满珠【期刊名称】《园艺学报》【年(卷),期】2005(32)3【摘要】以试管苗的小叶为外植体,探讨了月季品种‘萨蔓莎’愈伤组织诱导及植株再生的方法。
结果表明:高浓度的生长素能诱导小叶产生愈伤组织,经24D7.0～10.0mg/L光下诱导愈伤15d的小叶外植体,在含TDZ1.5mg/L的MS培养基上光下培养约20d后有白色假珠芽形成,此芽暗培养在含NAA、ZT和GA3的培养基上产生新的假珠芽和新的愈伤组织,通过持续选择继代生活力高的组织,约1年后获得可长期继代的愈伤组织,到目前为止已保存了16个月。
此愈伤组织在TDZ1.0mg/L、NAA0.01mg/L和GA30.1mg/L的诱导下30d内分化出不定芽,在含BA2.0mg/L和NAA0.01mg/L的培养基上不定芽伸长形成正常植株。
【总页数】3页(P534-536)【关键词】月季;愈伤组织;植株再生;组织培养【作者】高莉萍;包满珠【作者单位】园艺植物生物学教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S685.12【相关文献】1.月季“月月红”(Rosa chinensis‘Slater's crimson China’)愈伤组织诱导及植株再生初报 [J], 晏慧君;张颢;蹇洪英;王其刚;邱显钦;张婷;唐开学2.月季萨蔓莎不定芽的直接诱导和植株再生的研究 [J], 高莉萍;包满珠3.微型月季愈伤组织诱导及植株再生 [J], 冯欢;易姝利;谢佳恒;雷梦琦;黄萱4.月季愈伤组织的诱导及植株再生 [J], 陈雪;张金柱;潘兵兵;桑成瑾;马雪;杨涛;车代弟5.从种子愈伤组织培养选育耐盐水稻突变体1.愈伤组织诱导、植株再生及表观的植株性状变异 [J], 李朝灿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
红掌叶不同部位愈伤组织的诱导及植株再生
诱 导 、增殖 和生根 培养 基均 附 加 ２ ５ 食 用 白 ． 糖 、 ０ ７ 琼 脂 ， ｐ ． 。 光 照 强 度 １０ ～ ． Ｈ６ ０ ８０
２ ０ ｘ ０ ０ｌ ，光 照 时 间 １ ／ ，培 养 温 度 ２ － ２ ℃ 。 ６ｈ ｄ ３ ５
２ 结 果 与分 析
２ １ 叶 的不同部 位 对红 掌 愈 伤 组织 诱 导及 分 化 的 ．
影 响
１ 材 料 与 方 法
１ １ 试 验 材 料 ．
外 植 体 接 种 于 改 良 ＭＳ （ ＭＳ 培 养 基 中 的
ＫＮＯ。 、ＮＨ ＮＯ 、ＫＨ２ Ｏ 。 Ｐ 分 别 改 为 ９ ０ｍｇ Ｉ ５ ／ 、
Ｍ ａ ．２ ０７ ｒ ０
红 掌 叶不 同部位 愈 伤 组 织 的诱 导 及 植株 再 生
关 丽 霞 ，谢 永 刚 ，彭世 勇 ，张 晶 ，李 洪 忠
（ 宁农 业 职 业 技 术 学 院 ，辽 宁 营 口 １５ ０ ） 辽 １０ ９
摘 要 ：本文采用红掌叶的叶柄 、叶柄 与叶片连接处 、带主脉叶片及不带主脉叶片作为外植体 ，对 红掌叶不同
（ ｔｕａＡｒｚ ｎ ） 为接种 材料 ，系统地 研究 了红 Ａｎｈ ｒ ｉｏ ａ 掌 幼 叶不同部 位对愈 伤组织 诱导 与分 化的影 响 ，以 及 植株再 生途径 ，以期为红 掌组 培苗工 厂生 产提供 理 论依据 和技 术支撑 。
１ ２ ２ 愈 伤组 织 的诱 导及 分 化 经灭 菌 的外 植 体 ．． 分别 接 种 于 不 同诱 导 培 养 基 （ １ 表 、表 ２ 、表 ３ ） 上 ，初期 置于无 菌纸壳 箱 内黑 暗培 养 ，产 生愈 伤组
Ｎ ０２ ＡＡ ． ；最 佳 生根 培养 基 为 １ ２改 良 ＭＳ Ｉ Ａ０ ３ ／ ＋ Ｂ ． ＋ＮＡＡ ． 。 ０ ２
植物组织培养植株再生途径有哪些
植物组织培养植株再生途径有哪些植物组织培养植株再生途径有：1、器官间接发生途径在本途径中，所培养的外植体在培养基中的植物生长物质等因素的诱导下，其细胞呈没有分化的状态，重新恢复了细胞的分裂能力。
然后随着培养的持续，细胞数量不断增加，形成由薄壁细胞所组成的愈伤组织。
这种结构松散的组织在适宜的植物生长物质等培养条件下会重新分化出茎叶、根系等，最终形成一个完整的植株。
利用植物细胞在组织培养过程中所形成的大量愈伤组织，可以在短时间内通过器官发生分化出大量小植株。
因此，通过愈伤组织途径，可以使被培养材料的繁殖系数迅速增加。
但是此途径有其缺陷性，因为愈伤组织的细胞在遗传上具有不稳定性。
此外，随着愈伤组织继代培养时间的延长，它们最初所表现的植株再生能力会逐渐下降，甚至完全消失。
因此在实际的操作中，应根据培养目的应慎重选择此途径。
2、器官直接发生途径在此途径中，器官可直接从外植物体上进行诱导，例如香蕉草的侧芽培养，首先会分化出小芽，然后自新芽叶腋形成芽丛；风信子的鳞茎切片进行培养，在适宜的条件下，其基部就会分化小鳞茎。
在器官直接发生途径过程中，由于细胞染色体的倍数基本保持稳定，因此发生变异的现象频率较低，这样也能保证所培养的试管苗保持母株良好的种性，因此途径是组培中常用的再生途径。
通过腋芽的方式进行器官的直接发生，在正常情况下腋芽都能发育成枝条，但是在很多情况下，腋芽通常都会在一定时间内处于休眠状态，对于顶端优势较强的花卉种类来说，只有将顶芽摘去，才能促使侧芽抽生。
研究表明，顶端优势的现象可以为细胞分裂素所抑制。
因此在组织培养过程中，当提高了培养基中的细胞分裂素水平后，所接种的茎段上往往就会长出大量腋芽。
从细胞学上来说，这些腋芽的遗传性质十分稳定，所以利用所培养出腋芽的快速增殖对于花卉品种，特别是以嵌合体状态存在的花卉品种来说具有实用价值。
不定芽也是增殖试管苗的一种重要方式。
从植物学的角度来看，不定芽是指茎尖、叶腋以外的其他器官或组织上所形成的芽。
洋水仙栽培品种——‘荷兰船长’的自然复花表现观察
窦剑局福洪图/文洋水仙栽培品种---‘荷.兰船长’ i Narcissus ‘DutchMaster ’），为喇机水仙类群中的经典品种，花色 亮黄、花朵硕大（图1)。
有资料称：‘荷兰船长’的栽 培历史至少可追溯至1938年之前，但其亲缘关系已无 从追溯。
‘荷兰船长’性状表现优良，曾获得英国皇家 园艺学会1995年度花园优胜奖之殊荣，它还是水仙 (Narcissus) —荷兰的主要种植品种之一8图1‘荷兰船长’硕大亮丽的花儿‘荷兰船长’在我国的栽培和应用广泛，南京中山植物园在历年春季举办的欧洲花卉展中多次引种栽培该品 种（图2)。
在2015年度的花展布置中，园区内两块‘荷兰船长’的种植片区被保留作为自然景观，并采取粗放式管理，我们针对它们至2017年3月间自然复花的花 量、花径大小等表现进行了观察。
图2 ‘荷兰舶长’在南京中山植物园2016年度春季花展中的应用实景‘荷兰船长’在二个不同生境下的自然复花表现生境一：水杉林生境2015年11月，南京中山植物园于水杉林下种植了一片‘荷兰船长’，水杉林周边部分区域种植有乔灌木，光照条件存在差异。
种球来源于荷 B 进口，规格为16/18,种植密度为40厘米x 40厘米。
2016年3月下甸，水杉林下的‘荷船长’进入盛花 期，花期表现为（图3): (1)几乎100%的鳞茎现花，2017.23 | 花卉 FLOWERS纽O 1栽培技艺IP E 1JI Y I 其中约80%的植株花量为2~3枝花/鱗墓，约20%的植 株花暈为4 ~5枝花/鳞茎a 经测量，花径的平均值为 11.5厘米。
（2)至末花期时，我们观察到，乔灌木遮 蔽区域内的花朵于花后迅速枯萎，而光照充足区域内的 果实发育饱满（图4)。
2016年该片水杉林下的水仙景 观繁盛优美。
2017年3月上旬，该区域内的‘荷兰船 长’首次复花并进人盛花期，花期表现为：（1)复花 植株约占植株总数的10%，多集中分布于光照良好的林 缘、林窗区域，花量为1~2枝花/鳞莲，花径的平均值 为9.0厘米，较首次开花时显著变小。
洋水仙常见的病虫害以及防治方法
洋水仙常见的病虫害以及防治方法洋水仙观赏价值是很高，可是可不好好养，因此在养殖的时候想要它开出美丽的花朵，养护的时候必须要很小心，否则是很容易病害的，虫子也是很容易趁虚而入的。
下面小编为大家介绍洋水仙常见的病虫害以及防治方法，希望对大家有帮助。
洋水仙的病害根腐病用0.1%升汞浸根半小时左右，如果是在洋水仙的生长期间则可以喷施79%百菌清可湿性粉剂700倍液。
镰刀菌病害该种真菌病害会造成洋水仙球根腐烂，起初基部受到感染，进而逐渐扩散到整个茎盘、鳞片。
预防方法如下：1、短期储藏球根需要放在适宜的温度、湿度以及良好的通风环境中;2、种植时需挑出被感染的球根;3、种植球根时温度如果在14℃以上，可实行较广的作物轮作。
灰霉病在严重的情况下，会造成洋水仙茎的发育缓慢，甚至不发育。
有时基片变褐色，呈木栓状，影响球根的生根。
具体预防方法如下：1、拿到洋水仙球根最好立即种植，或是将其储藏在通风条件好的地方;2、避免造成洋水仙球根的损伤，对可能受到感染的球根需及时进行消毒;3、种植时适宜选择黑泥炭土和沙混合作为基质，并且减压基质，将球根放于顶部，再在上面覆盖一层薄薄的粗粒河沙;4、在种植后再对球根进行冷处理。
洋水仙的虫害蚜虫和红蜘蛛是洋水仙的主要虫害，可以喷施40%氧化乐果乳油1000倍液进行有效防治。
洋水仙开花后对花朵的处理洋水仙其实还是复花比较容易的一种，它不像水仙、风信子一样，比较难操作。
水仙，就是要对花朵进行处理，然后，要进行养球。
洋水仙在开过花之后，最主要的就是讲开败的残花给剪掉，不过整个植株上面的叶子要保留着。
洋水仙种植方法洋水仙的繁殖常用分球繁殖，自然繁殖率可达4～5倍。
一般在秋季进行。
繁殖时将母球两侧分生的小鳞茎掰下作种球，另行栽植即可。
为了能加速繁殖，母球种植宜浅不宜深。
过深，所发生的子球较少。
另外，用切片将充实的鳞茎自茎盘向顶部交纵切3～4刀，深度约为鳞茎的一半。
切割后将鳞茎置于清洁干沙中，使其产生愈伤组织，再放入21℃繁殖箱内培养。
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收稿日期:2017-10-30基金项目:沈阳市科技攻关课题项目(1071146-3-00)第一作者:孙晓梅(1970-),女,博士,教授,从事园林植物遗传育种研究,E-mail:xiaomei7280@水仙属(Narcissus )花卉为石蒜科多年生草本植物,其观赏价值高,常应用于盆花和切花生产,亦可作为园林地被花卉。
洋水仙(Narcissus spp.)是从欧洲引入水仙新品种的统称,又称为欧洲水仙、喇叭水仙和黄水仙,多为品种间杂交或种间杂交人工选育而来的无性系园艺品种[1]。
洋水仙在生产上一般通过主鳞茎分蘖的子球进洋水仙Dutch Master 愈伤组织的诱导、分化及植株再生孙晓梅,孙琪,费日雯,麻永磊,李雪婷,姚希诺(沈阳农业大学林学院,沈阳110161)摘要:以洋水仙品种Dutch Master 的鳞茎、叶、花葶及无菌苗叶片作为外植体,选用MS 为基本培养基,分别添加不同质量浓度的NAA (0.5,1.0,1.5mg ·L -1)、IBA (0,0.5,1.0mg ·L -1)、2,4-D (0,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0mg ·L -1)、6-BA (0.5,1.0,1.5,2.0,3.0mg ·L -1)和KT (0.1,0.3,0.5mg ·L -1),研究不同外植体和不同外源激素配比对小鳞茎的诱导,愈伤组织的诱导、继代及植株再生的影响。
结果表明:在Dutch Master 初代培养阶段,6-BA 的影响效应最大,随着6-BA 质量浓度的升高,诱导率呈上升趋势,最适宜的初代培养基配比为:MS +6-BA 3.0mg ·L -1+NAA 0.5mg ·L -1+2,4-D 0.2mg ·L -1;以带鳞茎盘的双鳞片作为外植体诱导小鳞茎效果最好,诱导率达76.7%;鳞片部位以鳞茎外层鳞片的培养效果最好,分化率达97.5%;在Dutch Master 愈伤组织诱导阶段,2,4-D 的影响效应最大,当2,4-D 浓度为1mg ·L -1时,愈伤组织诱导率的均值(K 2)为峰值,最适宜的愈伤组织诱导培养基配比为:MS+2,4-D 1mg ·L -1+6-BA 1.5mg ·L -1+KT 0.1mg ·L -1,Dutch Master 无菌苗叶片愈伤组织诱导率可以达到81.3%;在Dutch Master 愈伤组织继代培养阶段,最适宜的继代培养基配比为:MS+2,4-D 0.5mg ·L -1+6-BA 1mg ·L -1,可以增殖分化得到没有玻璃化的小植株。
关键词:洋水仙;外植体;愈伤组织;植株再生中图分类号:S682文献标识码:A文章编号:1000-1700(2018)04-0465-06Callus Induction,Differentiation and Plant Regeneration ofNarcissus pseudonarcissus cv.Dutch MasterSUN Xiao-mei,SUN Qi,FEI Ri-wen,MA Yong-lei,LI Xue-ting,YAO Xi-nuo(College of Forestry,Shenyang Agricultural University,Shenyang 110161,China)Abstract :The effects of different explants and exogenous plant growth regulators have been studied on bulblet induction,callus induction,subculture and plant regeneration.Bulbs,leaves,scapes and tube-plant leaves of Narcissus pseudonarcissus cv.Dutch Master were used as explants,and MS media was used as the basic media,supplemented with different mass concentrations of NAA (0.5,1.0,1.5mg ·L -1),IBA (0,0.5,1.0mg ·L -1),2,4-D(0,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0mg ·L -1),6-BA(0.5,1.0,1.5,2.0,3.0mg ·L -1)and KT (0.1,0.3,0.5mg·L -1)respectively.The effect of 6-BA was the greatest in the initial culture stage of Dutch Master.With the increase of 6-BA concentration,the induction rates increased.The optimizing medium for initial culture was MS +6-BA 3.0mg ·L -1+NAA 0.5mg ·L -1+2,4-D 0.2mg ·L -1.The results showed that twin-scale with basal plate was more suitable explant,the induction rate was 76.7%,and the cultivation effect of external layer scale was better,with differentiation rate of 97.5%.The effect of 2,4-D was the greatest in the callus induction stage of Dutch Master.When the concentration of 2,4-D was 1mg ·L -1,the mean value of callus induction rate (K2)was the peak.The callus induction rate of tube-plant leaves reached 81.3%on the media of MS +2,4-D 1mg ·L -1+6-BA 1.5mg ·L -1+KT 0.1mg ·L -1.The callus grew further and regenerated no vitrifiedplantlets on the media of MS +2,4-D 0.5mg ·L -1+6-BA 1mg ·L -1.Key words :Narcissus pseudonarcissus ;scale;initial culture孙晓梅,孙琪,费日雯,等.洋水仙Dutch Master 愈伤组织的诱导、分化及植株再生[J].沈阳农业大学学报,2018,49(4):465-470.沈阳农业大学学报,2018,49穴4雪:465-470Journal of Shenyang Agricultural Universityhttp ://DOI:10.3969/j.issn.1000-1700.2018.04.012466沈阳农业大学学报第49卷--行繁殖,但存在繁殖系数低、速度慢的特点,并且由于多代重复采用营养体繁殖栽培导致品种出现生长衰弱、品质下降等问题[2]。
利用组织培养技术繁殖洋水仙,不仅能保持原有品种的优良特性,而且还可以在短时间内获得大量的再生植株,对洋水仙种苗商品化生产具有一定的实际意义。
20世纪80年代初,国内学者通过水仙鳞茎盘切片离体培养,大大提高了中国水仙良种株系的繁殖系数[3]。
目前,国内已有利用洋水仙鳞片以及鳞片间腋芽做为外植体的组培快繁的报道[4-5],国外学者利用洋水仙双鳞片作为外植体进行离体培养研究,结果显示有90%以上的鳞茎移栽成功,并具有在第一个生长季开花的能力[6],但探究洋水仙其他部位诱导愈伤组织的生长情况却鲜有报道。
本研究以Dutch Master的叶、花葶、鳞茎作为外植体,探讨了不同外植体对芽诱导的影响,并以无菌苗叶片作为外植体,对愈伤组织诱导及转化的影响因子进行了研究,以期为推动洋水仙种球的工厂化生产奠定基础。
1材料与方法1.1材料2007年9月自北京碧溪花卉有限公司购买洋水仙(Narcissus pseudonarcissus cv.Dutch Master)种球(周径18~19cm),种植于沈阳农业大学温室内。
供试MS培养基中含蔗糖30g·L-1,琼脂7g·L-1,pH值5.8。
供试α-萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)购自北京索莱宝科技有限公司,6-苄基腺嘌呤(6-BA)购自上海线磊生物科技有限公司,激动素(KT)购自合肥博美生物科技有限责任公司。
1.2方法选用无病虫害、健壮的洋水仙种球,在无菌环境下先去除鳞茎中外层干皱鳞叶及基部枯根,再切除鳞茎顶部1/2,将剩余部分纵向切割成4份,用流水冲洗6h后置于75%乙醇消毒30s,再用0.1%HgCl2消毒8min,最后用无菌水冲洗4~6次,所用内、中、外层鳞片(去掉外层干瘪有菌斑的鳞片,从外至内1~3层为外部鳞片,4~6层为中部鳞片,其余为内部鳞片)均切成8mm×8mm的小块备用。
选用洋水仙健康部位的幼叶及花葶,用流水冲洗6h后,再用0.1%HgCl2消毒5min,最后用无菌水冲洗4~6次,所用幼叶及花葶均切成长约8mm的小段备用。
培养条件为:温度(25±1)℃,每天光照12h,光照强度1500lx。
1.2.1不同外源激素配比对初代诱导的影响选取Dutch Master带鳞茎盘的双鳞片作为外植体,接种到以MS 为基本培养基,分别加入不同质量浓度NAA(0.5,1.0,1.5mg·L-1)、IBA(0,1,2,3mg·L-1)、2,4-D(0,0.1,0.2mg·L-1)和6-BA(1,2,3mg·L-1)的培养基中培养,采用L9(34)正交试验设计,考察不同浓度的4种外源激素配比对诱导率的影响。
每个处理重复3次,每个重复接种30瓶。