何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞色素P_450_的影响_卫培峰
何首乌_制何首乌与茯苓配伍对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响
何首乌、制何首乌与茯苓配伍对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响3胡锡琴 林 飞 李娅琳 禚 君 王劲松 陕西中医学院药学院(陕西咸阳712083) 摘 要 目的:研究何首乌、制何首乌以及分别配伍不同剂量茯苓对大鼠肝脏微粒体细胞色素P450酶(CYP450)的影响。
方法:将大鼠分为7组,每日灌胃主药30g・kg-1,连续给药90d,测定大鼠CYP450的含量。
结果:给药组与对照组比较,何首乌A组、何首乌B量组对大鼠肝微粒体CYP450有显著性升高作用(P<0.05);何首乌C组对其有升高作用,但不具统计学意义。
制何首乌A、B、C各组对大鼠肝微粒体CYP450均无显著性影响。
结论:何首乌、何首乌配伍大剂量茯苓能够增加大鼠肝微粒体CYP450含量,制何首乌各给药组对其影响不显著。
主题词 何首乌 药理学 中药配伍 微粒体,肝 细胞色素P450 代谢大鼠 动物,实验 何首乌为蓼科植物何首乌po lygonum m ultifl o rum thunb.的干燥块根。
为常用补益之品。
根据《何首乌传》和《本草纲目》中:何首乌“茯苓为之使”的记载,统计了《二续名医类案》中何首乌与茯苓配伍,其配伍药对居主药配伍的第三位,为常用配伍形式。
现代药理研究何首乌和茯苓也均具有增强免疫功能,延缓衰老的作用。
为此,本文就何首乌、制何首乌并且分别配伍不同剂量茯苓对大鼠CYP450影响进行初步试验及探讨。
1 实验材料1.1 动物及饲养条件 清洁级S D大鼠170只,体重(100±10)g,由第四军医大学实验动物中心提供。
动物许可证号CXK(军)2007～007。
动物观察室的室温20-25℃,相对湿度为38%～41%,保持清洁。
1.2 药材 本实验选用陕西省安康地区野生何首乌(自采)和市售茯苓(购置咸阳国信医药市场)。
何首乌与制何首乌均按照《中国药典》2005版一部进行严格炮制,经高效液相色谱法检测二苯乙烯苷含量何首乌含量为3.25%;制何首乌含量为1.82%。
何首乌炮制的文献研究和实验设计
何首乌炮制的文献研究专业中药学班级分析一班学号0944920 姓名俞苏岚【摘要】何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根。
生首乌功能解毒（截疟）、润肠通便、消痈；制首乌功能补益精血、乌须发、强筋骨、补肝肾。
现临床多用制首乌。
本文章将对何首乌的历史沿革研究、炮制原理探讨、炮制工艺改进、饮片质量控制、发展方向分析等五个方面进行文献研究，以找出何首乌合理的炮制方案，继承发扬其精华, 除去糟粕, 确保临床用药安全有效。
【关键词】何首乌炮制文献研究实验设计【文献研究】1.历史沿革研究唐代：《仙授理伤续断秘方》载有醋煮即醋制法。
宋代：在《本草图经》中有米泔水制。
《证类本草》中有清蒸、酒浸、与酒同服。
《圣济总录》中有炒制、麸炒制、酒炒制、黑豆蒸制、炮去黑皮。
《太平惠民和剂局方》中有泔浸一宿煮过切焙的制法。
《类编朱氏集验方》中有姜、甘草制法。
金代：《儒门事亲》中有米泔水浸，黑豆、大枣蒸制。
元代：《活幼心书》中有去粗皮。
《丹溪心法》有木臼捣碎为末。
明代：《奇效良方》中有黑豆煮制。
《仁术便览》中有酒浸切大片，黑豆一层，何首乌一层，蒸晒各七遍听用。
《本草纲目》中有泔、豆蒸：九蒸九晒。
《景岳全书》中有酒浸蒸极熟焙，及泔、豆、牛膝蒸。
《寿世保元》中有豆、牛膝蒸。
《先醒斋广笔记》中有黑豆、牛膝共蒸后乳浸制。
清代：《良朋汇集》中有以乌羊肉、豆蒸制。
《成方切用》中有牛乳拌蒸制。
《本草求真》中有七次蒸至第九次，破故纸、黑芝麻炒。
近代：何首乌的炮制方法，除了继承传统的酒制、单蒸、酒蒸、黑豆蒸、黑豆酒蒸、单煮、黑豆煮外，还增加了熟地黄汁蒸、黑豆生姜煮、复制等方法。
《中国药典》1963 年版载用黑豆汁与黄酒拌匀，隔水炖。
《中国药典》1977 年版沿用此法，《中国药典》1985 年版改为黑豆拌蒸法，《中国药典》1990 年版改为黑豆汁拌炖或拌蒸、清蒸。
《中国药典》1995 年版与2000 年版载：黑豆拌蒸，清蒸[1]。
不同功效中药对细胞色素P_450_影响的研究进展
文献标识码 A
文章编号 1001- 0408（2010）07- 0656- 03
细胞色素 P45（0 Cytochrome P450，CYP450）是人体内一种重要 的代谢酶，在人体内易被联合应用的药物诱导和抑制，从而导 致药物浓度发生巨大的变化，产生增效或毒副作用。CYP450 发 现于 20 世纪 50 年代。最近几十年，随着中药在临床上广泛应 用和研究的不断深入，中药的代谢研究已成为中药研究的热 点领域之一。因此，按照中药的功效将单味中药及其化学成 分对 CYP450的影响进行归类具有重要的临床意义。同时，对今 后中药代谢方面的研究具有一定的参考价值。
△ 上 海 市 药 学 会 上 海 医 院 药 学 科 研 基 金 资 助 课 题（2008YY- 0227）
＊ 硕 士 研 究 生 。 研 究 方 向 ：中 药 药 物 代 谢 及 药 动 学 。 电 话 ： 021- 64369181- 8789。E- mail：lidandorren@
[21]
温里药
肉桂 丁香
甲醇提取物 甲醇提取物
↓3A4 ↓2D6
人肝微粒体
[22]
人肝微粒体
[9]
吴茱萸
吴茱萸次碱
↓1A2、↓2C19 、↓2E1、↓2D6、-2C9、-3A4
人肝微粒体
[23]
活血药 苏木
甲醇提取物
↓3A4
人肝微粒体
[9]
丹参 姜黄
丹参酮ⅡA 水提物
↑1A2 ↓1A2、↓2E1、-3A4
不同功效中药对细胞色素 P450影响的研究进展Δ
李 丹 1，2＊，韩永龙 ，余 1，2，3 奇 1，郭 澄 1，2＃（1. 上海市第六人民医院药剂科，上海市 200233；2. 上海中医药大 学，上海市 201203；3. 大庆油田总医院临床药学科，大庆市 163001）
何首乌不同炮制品对大鼠肝脏CYP2E1基因mRNA表达的影响_卫培峰
Ｘｉａｎｙａｎｇ ７１２０４６，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｒａｄｉｘ Ｐｏｌｙｇｏｎｉ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｉ ｐｒｅｐａｒａｔａ ｏｎ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＹＰ２Ｅ１ｇｅｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎ ｒａｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ ５０ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｓｔｅａｍｅｄ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ Ｔｈｕｎｂ （Ａ，Ｂ，Ｃ）５ｇｒｏｕｐｓ，ｅａｃｈ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ１０．Ｔｈｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｏｒａｌｌｙ １０ｇ· ｋｇ－１ ｅａｃｈ ｄａｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｓｏｖｏｌｕｍｉｃ ｓａｌｉｎｅ ｂｙ ｇａｖａｇｅ．Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＣＹＰ２Ｅ１ ｇｅｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ ｗｅｒｅ ａｓｓａｙｅｄ ｗｉｔｈ ＲＴ－ＰＣＲ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｏｒａｌｌｙ ｆｏｒ ９０ｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ Ｅａｃｈ ｏｆ ｔｈｅ ＣＹＰ２Ｅ１ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｍａｒｋｅｄ ｄｉｆｆｅｒ－ ｅｎｃｅ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｒａｄｉｘ Ｐｏｌｙｇｏｎｉ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｉ ｐｒｅｐａｒａｔａ ｃａｎ ｓｉｇ－ ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＹＰ２Ｅ１ ｍＲＮＡ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｒａｄｉｘ ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ ；ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ ２Ｅ１；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍＲＮＡ
何首乌炮制前后对大鼠肝脏的损伤比较及敏感指标筛选-精品文档
何首乌炮制前后对大鼠肝脏的损伤比较及敏感指标筛选doi：10.4268/cjcmm20150416何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum Multiflorum Thunb.的干燥块根，其中生何首乌性平，味甘、苦，归心、肝、大肠经，具有解毒、消痈、截疟、润肠通便的功效;制何首乌性微温，味甘、涩，归肝、肾经，具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨、化浊降脂等功效，是传统著名补益中药<sup>[1]</sup>，临床常用于治疗肝肾不足、精血亏虚、须发早白等，现代还用于治疗动脉硬化症、高脂血症等<sup>[2-3]</sup>。
此外，在我国很多地区（尤其是南方地区），民众有服食何首乌作为养生的习惯，我国批准含有何首乌成分的制剂和保健食品约700个左右，估计服食何首乌的人群近亿人次。
然而，近年来何首乌及其相关制剂[养血生发胶囊、首乌片、首乌丸、首乌延寿片（颗粒）等]的不良反应尤其是肝损伤报道较多<sup>[4-8]</sup>，引起国内外高度关注。
本课题组前期研究发现，何首乌导致的肝损伤与性别、年龄的关系不大，也不呈剂量依赖性，大剂量与小剂量，服用早期与晚期都有发生。
在动物实验中，何首乌需长时间大剂量才能引起肝损伤，且生化指标谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）对何首乌肝损伤不敏感<sup>[9]</sup>。
英国、加拿大、澳大利亚以及我国药品监管部门先后发布了何首乌及其成方制剂可能有引起肝损伤风险的通知<sup>[10-11]</sup>，并颁布了加强监管甚至限用的政策。
何首乌肝损伤的问题已成为当前民众和学界高度关注的热点问题。
何首乌成分_药理及毒副作用相关的研究进展_楼招欢
何首乌为蓼科植物何首乌（Polygonum multiflorum 素-8-甲醚(questin)、桔红青霉素(emodin-6，8-dime-
Thunb.）的干燥块根。《中国药典》2010 版将生、制首乌 thபைடு நூலகம்lether)、ω-羟基大黄素(citreorosein)、大黄素-8-O-
分开单列，其中生首乌具有解毒、消痈、润肠通便、降 β-D-吡喃葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucopyranoisde)、
Provincial Sci-tech Plan(2012ZA030)
通讯作者：吕圭源，E-mail:lv.gy@
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浙江中医药大学学报 2014 年 4 月第 38 卷第 4 期
楼招欢，等：何首乌成分、药理及毒副作用相关的研究进展
现有的有关何首乌成分的研究，也多以这 3 类成分 的组成分析和含量测定为主；相关成分分析及含量 测定等方法主要有 RP-HPLC 法[4]、HPLC-ELSD 法和 胶束电动毛细管色谱法 [5]、HPLC-TOF/MS、HPLC/ITMS 联用技术[6]及紫外分光光度法（UV-Vis）[7]。多样的 化学物质是何首乌发挥不同药理作用的基础，因此 在前期分离、鉴定的基础上，开展何首乌黄酮类、多 酚类等成分与药理作用间的相关性研究，有望为何 首乌找出新的治疗点，拓展它的临床应用范围。 1.2 影响何首乌主要成分含量的因素 中药中所含 成分的组成及含量的高低受产地、生长年限、采收期 及炮制工艺等因素的影响，而主要成分含量的变化 将直接影响药物的药理作用。因此在实际应用中应 对影响成分含量的因素加以关注和控制。何首乌主 产于河南、湖北、广西、广东、贵州、四川、江苏等地， 其所含二苯乙烯苷（TSG）的含量以广西产者为最高 （5.21%），贵州产最低（1.72%）[8]；TSG 和蒽醌类成分 以生长期为 3 年的何首乌中的含量为最高，而同年 生何首乌中两者含量以 11 月为最高，上述结果与 《中国药典》规定采收期相符[9]。除产地、生长年限和 采收期外，炮制方法是影响何首乌中成分含量的另 一主要因素。对于何首乌的炮制，历代多采用蒸法和 煮法，按所用辅料不同，可分为黑豆制、黑豆黄酒制、 蒸制、黑豆生姜制、甘草煮、酒制、熟地制等。因历版 《中国药典》均未明确其炮制时间等工艺参数，而炮 制工艺参数会直接影响何首乌成分的组成及含量， 因此，有不少学者对各种炮制方法及其参数对何首 乌成分及含量的影响进行了研究。结果表明，不同炮 制方法或相同方法不同炮制时间均可使 TSG 含量下 降[10]；经炮制的何首乌中总蒽醌、D-果糖、蔗糖及总 糖量的含量下降，游离蒽醌 、D-葡萄糖含 量上升 [11，12]；用常压/高压清蒸、豆制、酒制、酒豆制等不同炮 制方法炮制的何首乌中，卵磷脂的含量以豆制品中 为最高，而酒豆制品因炮制过程中酒精溶解部分磷 脂引起流失而使成品中卵磷脂含量下降[13]；炮制除改 变上述成分的含量以外，还能产生 5-HMF 等新的成 分[14]，从而使何首乌的功效发生相应的改变[15]。由上 可知，炮制过程中何首乌内部成分处于动态变化，而 成分与药效密切相关，因此在实际工作中，应严格控 制和规范何首乌炮制工艺，以保证制品质量稳定性， 保障临床药效。
制何首乌对大鼠肝损伤的实验研究
１ １ 动物 健康 ｓ ． Ｄ大 鼠 １０只， ０ 雌雄各半 ， 体质量 （０ １０±１ ） ， ０ｇ
由西 安交 通 大 学 医 学 院 动 物 实 验 中 心 提 供 ， 物 合 格 证 号 ： 动 动 医 字 第 ０ ０４号 。 ８— ０
表 １ 给 药 ２个 月大 鼠 血 液 Ａ Ｔ Ａ Ｔ指标 （ ｓ Ｌ ，Ｓ ± ）
３ ．２ 大鼠 ３个月血液生化学检 测指标 结果 显示大剂量组 、 较 大剂 量 组 Ａ Ｔ无 显 著 性 变 化 ， 剂 量 组 Ａ Ｔ显 著 升 高 （ ＜ Ｌ 大 Ｓ Ｐ ２ １ 长期毒性实验 健康 ｓ ． Ｄ大 鼠 １０只 ， ０ 按性别体质量 随机分 ００ ）。同时肝组织匀浆检测与对照组 比 ， ．５ 大剂量组 ＭＤ Ａ有显 成 ５组 ， 即小 剂 量组 、 中剂量 组 、 大 剂量 组 、 较 大剂 量 组 及 对 照 组 。 著升高 （ ＜ ．５ 。见表 ２ Ｐ ００ ） 。 每组 ２ Ｏ只 ， 雌雄 分笼饲养 。给药组 剂量 依次 为 ４ ６ ２ ，０／ ｇ ３ 大 鼠４个 月血 液 生化 学检 测指 标 结果显 示大 剂量 组 ， ，２ ４ ｇ ｋ ．３ （ 分别相 当于成人 每 日临床用量的 ２ ，０ １０ ２０倍 ）对 照组 给 Ａ Ｔ Ａ Ｊ ０ ５ ，０ ，０ ， Ｓ ，Ｉ Ｔ无显著性变化。见 表 ３ 。 予等体积蒸馏水 。灌 胃给药 １ ｄ 次／ 。每周称体质量 ｉ次， 根据体 质量调整给药容积 。前 ３个月给药 ， ４个月停药恢复。分别 第
１２ 药材 选用陕西 野生何首乌 ， 照《 ． 按 中国药典） ｏ ５版 Ｉ ２ｏ 部 制何首乌标准进行炮制 。然后 将制何首乌水 煎液浓缩至含 生药 ４ｇｍ ， ／ ｌ定容 ， 密封 后放 于 ４ 冰箱储 存 备用 。ＭＤ ＭＡ Ｇ Ｈ ℃ Ａ， Ｏ， Ｓ
何首乌毒性的研究进展
何首乌毒性的研究进展冯婧怡 1 王爱平1,2 魏金峰1,2 靳洪涛*1,21.中国医学科学药物研究所·新药安全评价研究中心,北京1000502.北京协和建昊医药技术开发有限责任公司，北京100176【摘要】何首乌具有免疫调节、降低血脂、促进毛发生长、抗衰老等多种药理作用，在中国有着广泛的应用。
近些年来，国内外有关何首乌毒性和不良反应，特别是肝损伤的报道越来越多。
本文对何首乌的化学成分、毒性作用和机制及其临床不良反应进行整理，以期为正确评价何首乌的毒性提供参考。
【关键词】何首乌；毒性；不良反应【Abstract】Polygonum multiflorum, which has been widely used in China, has pharmacological functions to regulate immune system, lower blood lipids, stimulate hair growth, anti-aging and so on. Recently，an increasing number of concerns about the toxicity and side-effects of Polygonum multiflorum have been reported, especially its liver injury. This paper will summarize the chemical ingredients, toxic effects and mechanisms, and clinic side-effects study results of Polygonum multiflorum hoping to provide useful information for its toxicity evaluation.【Key words】Polygonum multiflorum;toxicity;side effect重大新药创制基金：2012ZX09J12203 ，2013ZX09302302，2012ZX09301002-001-009通讯作者：靳洪涛，************，*****************.cn何首乌是蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根。
制何首乌对大鼠肝脏P450酶5种亚型mRNA表达的影响
制何首乌对大鼠肝脏P450酶5种亚型mRNA表达的影响考察制何首烏水提物作用后大鼠肝脏P450酶5种亚型的mRNA表达变化。
SD大鼠随机分为正常对照组、制何首乌高、低剂量组（540，108 g·kg-1），连续灌胃给药7 d。
给药结束后，检测大鼠血清生化指标，并采用实时荧光定量PCR 测定各实验组大鼠肝脏P450酶5种亚型mRNA表达。
实验结果显示AST在高、低剂量组都显著下降；ALT在低剂量组显著降低，在高剂量组显著升高。
高、低剂量组的大鼠肝组织P450酶5种亚型mRNA的表达均下调，且下调程度与给药剂量成一定的剂量性依赖。
特别是高剂量制何首乌水提物能够显著抑制大鼠的CYP1A2和CYP2E1的mRNA表达。
该研究发现大剂量制何首乌水提物具有肝毒性，且随着剂量增加其肝损伤程度增加。
其中制何首乌水提物540 g·kg-1对大鼠肝CYP1A2和CYP2E1的mRNA的表达有明显抑制作用。
标签：制何首乌水提物；肝损伤；P450酶；血清生化指标；mRNA表达Effect of processed Polygonum multiflorum on mRNAexpression level of five subtypes of CYP450 enzymes in rat liverHUANG Chunlian1，2，FAN Xuemei2*，LI Qian3，WANG Yiming2，WANG Shumei1，GONG Mengjuan1*，LUO Guoan1，2（1School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China；2 Department of Chemistry，Tsinghua University，Beijing 100084，China；3 Guangzhou Consun Pharmaceutical Co，Ltd，Guangzhou 510610，China）[Abstract]To observe the effect of processed Polygonum multiflorum on mRNA expression levels of five subtypes of CYP450 enzymes in rat liver SD rats were randomly divided into the normal control group，processed P multiflorum high dose and low dose groups （540 g·kg-1 and 108 g·kg-1）The rats in administration groups were continuously given with processed P mutiflorum for 7 days by ig administration，and the rats in normal control group were given with the same volume of distilled water After successive administration of 7 days，the serum biochemical indications were detected，and Realtime quantitative PCR technology was used to detect the mRNA expression levels of five subtypes of CYP450 enzymes in rat liver Experimental results showed that AST was decreased significantly in both low and high dose groups ALT was significantly decreased in low dose group and significantly increased in high dose group The mRNA expression levels of five subtypes of CYP450 enzymes in rat liver were decreased in high dose and low dosegroups in a dosedependent manner Especially the high dose processed P multiflorum could significantly inhibit CYP1A2 and CYP2E1 mRNA expression levels in rats The study showed that high dose P multiflorum water extract had hepatotoxicity，and the degree of liver damage was increased with the increase of dose It shall be noted that 540 g·kg-1 water extract of P multiflorum could significantly inhibit CYP1A2 and CYP2E1 mRNA expression levels in the liver of rats[Key words]processed Polygonum multiflorum；liver injury；CYP450；serum biochemical indicators；mRNA expression细胞色素P450酶（cytochrome P450，CYP450）是人体内重要的药物代谢氧化酶，能够催化多种药物、前毒物、强致癌物等外源性物质的氧化还原代谢[1]。
何首乌不同提取物致大鼠肝损伤的r血清生物标志物研究
何首乌不同提取物致大鼠肝损伤的r血清生物标志物研究段小芳;段思明;李贺芝;王茜【摘要】目的:通过观察反映肝损伤的传统肝功能指标以及早期血清生物标志物指标,探讨何首乌不同提取物常规剂量长期使用对大鼠的肝毒性作用,同时揭示其产生肝毒性的氧化应激机制.方法:SD大鼠雌雄各半,按照体质量随机分为7组,正常组,生、制何首乌水提组,生、制何首乌醇提组,生、制何首乌配方颗粒组.何首乌以6 g生药/kg的剂量,连续给药30 d,检测各组大鼠血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)、精氨酸酶1(ARG1)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTA1)、苹果酸脱氢酶(MDH1)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量变化,观察肝脏病理组织形态的变化.结果:与正常组比较,各给药组的血清TBIL、ARG1、MDA含量明显升高(P<0.01),制何首乌醇提组和配方颗粒组的ALT、AST活性显著升高(P<0.05,P<0.01),生何首乌醇提组MDH1水平显著升高(P<0.05),制何首乌醇提组GSTA1含量显著升高(P<0.05);何首乌水提组及醇提组大鼠血清中的SOD活性均显著升高(P<0.01).与生何首乌水提组比较,制何首乌醇提组和何首乌配方颗粒组AST活性明显升高(P<0.05),何首乌醇提组,制何首乌配方颗粒组ARG1含量明显升高(P<0.05),制何首乌配方颗粒组大鼠血清中的SOD活性显著降低(P<0.01),何首乌醇提组大鼠血清中MDA的含量显著升高(P<0.01).给药组肝细胞不同程度的水样变性、脂肪变性,偶有炎性细胞浸润.结论:何首乌以6 g生药/kg的剂量长期给药对肝脏有一定的损伤,毒性大小为醇提组>配方颗粒组>水提组,生何首乌毒性大于制何首乌.【期刊名称】《河北中医药学报》【年(卷),期】2018(033)004【总页数】5页(P44-48)【关键词】何首乌;提取物;炮制品种;生物标志物;肝毒性;肝损伤;水提;醇提;颗粒【作者】段小芳;段思明;李贺芝;王茜【作者单位】河北中医学院石家庄050200;河北中医学院石家庄050200;河北女子职业技术学院石家庄050091;河北中医学院石家庄050200【正文语种】中文【中图分类】R285.5何首乌是蓼科植物何首乌的干燥块根，其临床应用首见于唐代李翱所著的《何首乌录》：“交藤(何首乌)味甘温无毒，主五痔，腰腹中宿疾冷气，长筋益精，令人多子，能食，益气力，长肤，延年”。
何首乌、三七提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织PPARα、PGC–1α水平的影响
何首乌、三七提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织PPAR α、PGC–1α水平的影响作者：余轶群李军祥姬爱冬【摘要】目的：探讨何首乌、三七提取物预防大鼠非酒精性脂肪性肝炎及其肝组织PPAR α、PGC–1 α表达的影响。
方法：32 只雄性SD 大鼠，随机分为4 组，每组8 只。
除正常对照组外，高脂饲料喂养10 周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型。
于造模即日起，正常对照组、模型组每天分别给予10 mL/kg 饮用水，中药组给予何首乌、三七提取物，易善复组给予易善复灌胃。
给药10 周后，处死所有大鼠，检测血清LDL、HDL、TG，ALT、AST、GGT；肝组织TG 和PPARα、PGC–1α mRNA 水平。
结果：中药组血清LDL 含量较模型组下降（P ＜0.05）；中药组血清HDL、TG，ALT、AST、GGT 和肝组织TG 含量较模型组显著下降（P ＜ 0.01），肝组织PPAR α、PGC–1 α mRNA 水平较模型组显著增高（P ＜ 0.01）。
结论：何首乌、三七提取物可降低NASH 大鼠血清、肝脏脂质合成与聚积，减少炎症反应，从而有效防治NASH，具有良好的临床应用前景。
【关键词】首乌；三七；提取物；非酒精性脂肪性肝病；PPAR α、PGC–1 α〔Abstract〕 Objective To investigate the effect of the extracts of Heshouwu and Sanqi (Polygonum multiflorumThunb.and Panax no toginseng)on the expression of peroxisome proliferators–activated receptor α (PPAR α) andPPAR gammacoactivator–1( PGC–1α) in non–alcoholic steatohepatitis (NASH) in rats. Methods The 32 maleSD rats were randomized into 4 groups with 8 in each. Rat model of non-alcoholic steatohepatitis was establishedwith fatty diet of 10 weeks except the normal control group. At the same time, the black group and model groupwere treated with the drinking water (10 mL/kg,daily) . The herbal group and Yishanfu group were treated with theextractive of Heshouwu and Sanqi, and Yishanfu respectively. All the rats were executed after the therapy of 10weeks. The LDL, HDL, TG, ALT, AST and GGT in the blood serum, TG, PPAR αand PGC–1αmRNA in the liverwere detected. Results Compared to the model group, the LDL in the blood serum in the herbal group decreased(P > 0.05).HDL,TG, ALT, AST and GGT in the blood serum , TG in the liver in the herbal group showed significantdifference (P > 0.01), while significantly increased (P < 0.01) in the PPARαand PGC–1α mRNA in the liver.Conclusion The extractive of Heshouwu and Sanqi can degrade lipid synthesis and accumulation in blood serumand liver of NASH rats, and decrease inflammatory reaction at the same time. The extractive of Heshouwu and Sanqican prevent and cure NASH, and could be used in clinic medicine in the future.〔Key Words〕 Panax notoginseng; Polygonum multiflorumThunb; Extracts; Non-alcoholic Steatohepatitis;PPAR α; PGC –1α（北京中医药大学东方医院，北京 100078）非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）包括单纯性非酒精性脂肪肝（NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和肝硬化。
生何首乌、制何首乌对大鼠肝微粒体CYP450的影响
生何首乌、制何首乌对大鼠肝微粒体CYP450的影响王文静;李娅琳【期刊名称】《现代中医药》【年(卷),期】2014(0)2【摘要】目的研究肝微粒体细胞色素P450(CYP450)以及血液生化酶在生何首乌、制何首乌致SD大鼠肝损伤中的作用。
方法将SD大鼠分为3组,每日灌胃给药30 g/kg,连续给药90 d,末次给药后处死,称取脏器指数,测定肝脏CYP450、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)等含量。
结果生何首乌组肝微粒体蛋白显著性下降,CYP450含量显著增高(P<0.01),制何首乌组无明显变化;血液生化酶中生何首乌组的血清ALT、AST显著性降低,制何首乌血清ALP显著性升高;生何首乌和制何首乌的血清TP、TG均显著性降低;血清BUN中二者均呈下降趋势,但生何首乌具有显著性;CREA二者均呈显著性下降趋势。
结论生何首乌致肝损伤并有CYP450的明显升高。
制何首乌对CYP450无影响。
生何首乌和制何首乌能够影响血液生化酶,生何首乌减低ALT、AST,制何首乌升高ALP,二者同时降低TG、BUN和CREA,这意味生着何首乌、制何首乌致大鼠肝物质代谢途径的作用机制有所不同。
【总页数】4页(P76-79)【关键词】生何首乌;制何首乌;肝损伤;CYP450;血液生化酶【作者】王文静;李娅琳【作者单位】陕西中医学院药学院;平顶山市中医医院药剂科【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.何首乌、制何首乌与茯苓配伍对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响 [J], 胡锡琴;林飞;李娅琳;禚君;王劲松2.大鼠肝微粒体CYP450酶对芦荟大黄素体外代谢的影响 [J], 冯素香;常伟强;周悌强;王蒙蒙;白燕;李晓玉;吴兆宇3.大黄苷元对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的影响 [J], 冯素香;周悌强;李晓玉;白燕;徐艳华;徐鹏4.柴胡皂苷-白芍总苷对大鼠肝微粒体CYP450酶活性及肝功能的影响 [J], 李清; 甄亚钦; 曹文利; 高乐; 王迎春; 张雪静; 牛丽颖5.刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响 [J], 曾超;刘艳;刘高峰;李想因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
何首乌与肝损伤关系的研究进展
何首乌与肝损伤关系的研究进展何岳珍【摘要】中药何首乌补益精血、解毒、截疟、润肠通便,临床应用广泛且疗效满意,为古今医家、饮食家所推崇的滋补延年佳品.历代本草著作及中国药典多版均谓其“无毒”.然而近年来,何首乌单独或复方使用导致肝损害的报道明显增多,何首乌的使用安全性已成为关注的焦点.该文对何首乌与肝损伤关系的最新研究进展进行综述.%Radix polygonum multiflorum is widely used in the clinical field and has a favorable result,which should attribute to its bloodtonic,detoxification,anti-malaria and laxative functions.And it is advocated by ancient and modem medical and diet experts in prolonging life.The ancient herbal writings and multiversion Chinese Pharmacopoeia all claim it "non-toxic".However recently,more and more reports have been released that polygonum multiflorum could cause liver injury used alone or with others,and the safety of polygonum multiflorum has become the focus,so it is necessary to summarize the latest research of the relationship between polygonum multiflorum and liver injury.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2013(019)012【总页数】3页(P2206-2208)【关键词】何首乌;成分;肝损伤【作者】何岳珍【作者单位】兰州大学第一医院中医科,兰州730000【正文语种】中文【中图分类】R932;R575何首乌为蓼科多年生缠绕草本何首乌的干燥块根。
何首乌肝损伤的研究进展
何首乌肝损伤的研究进展闫二磊;梁生旺【摘要】Accumulating reports recently show that oral administration of Polygonum multiflorum Thunb. increases the risk of liver injury. This paper will review its processing technology,translational research and the possibility of toxic components.%近年国内外关于口服何首乌及其成方制剂导致的肝损伤问题报道日益增多，本文主要对何首乌炮制工艺、可能性毒性成分及其肝损伤的转化研究方面进行综述，并对何首乌相关性肝损伤的进一步研究提出建议。
【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】4页(P784-787)【关键词】何首乌;肝损伤;综述【作者】闫二磊;梁生旺【作者单位】广东药学院中药学院，广东广州510006;广东药学院中药学院，广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R282.71何首乌为蓼科植物何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)的干燥块根。
性微温，味苦、甘、涩，具有解毒、消痈、润肠通便之功效。
清蒸或用黑豆煮汁拌蒸后晒干入药为制何首乌，具有补肝肾、益精血、乌须发等功效[1]。
口服何首乌及其成方制剂，均会引起不同程度的肝损伤，多数发生在1～4周,与用药剂量呈一定负相关性。
并伴随有家族性发病倾向，与患者性别及年龄无明显相关性。
临床主要表现为黄疸、肝功能异常，并伴随恶心、呕吐、乏力、虚弱、腹痛、尿黄、食欲减退等症状。
何首乌引起的肝损伤多数为可逆性，轻者停药后可自愈，重者给予保肝治疗2～8周内也可恢复。
具有再激发现象[2-8]。
近年，有关何首乌炮制工艺、化学成分及其肝损伤的转化研究等方面有较大进展，本文主要从以下几个方面进行总结和评述。
何首乌致肝损伤发生的原因及机制分析
何首乌致肝损伤发生的原因及机制分析王虹;高峰;焦晨莉;欧莉;余金花;卫培峰【摘要】通过对近年来有关何首乌对肝损伤研究的国内外文献进行收集、整理与归纳,总结分析何首乌导致肝损伤的可能原因及作用机制,为何首乌临床的安全使用提供参考.目前研究认为,何首乌肝损伤的发生与其误服伪品、炮制不当、药不对证及药物服用过量有关,而其发生机制可能为遗传易感性、干扰肝细胞摄取血中胆汁分泌的功能或结构及毒性成分对肝脏的直接损伤.【期刊名称】《河北中医》【年(卷),期】2018(040)002【总页数】5页(P305-309)【关键词】何首乌;药物性肝损伤【作者】王虹;高峰;焦晨莉;欧莉;余金花;卫培峰【作者单位】陕西中医药大学药学院,陕西咸阳712046;陕西中医药大学药学院中药学教研室,陕西咸阳712046;陕西中医药大学药学院中药学教研室,陕西咸阳712046;陕西中医药大学药学院中药学教研室,陕西咸阳712046;陕西中医药大学药学院,陕西咸阳712046;陕西中医药大学药学院中药学教研室,陕西咸阳712046【正文语种】中文【中图分类】R282.717何首乌为蓼科植物何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)的干燥块根。
《本草纲目》记载何首乌“气温，味苦涩，能固精益肾、健筋骨、养血益肝、乌须发，为滋补良药”[1]。
据不完全统计，近十几年来服用何首乌引发肝损伤的报道有30余篇，累计病例125例[2]。
2006年7月，国家药品不良反应监测中心报道了在英国出现了7份怀疑与何首乌相关的药物性肝损伤病例，并通过黄卡系统报送到了英国药品与健康产品管理局(MHRA)，为此英国MHRA已提出慎用何首乌，并重新审视中药使用的安全性。
2012年10月，国家食品药品监督管理局药品评价中心针对何首乌导致的药物性肝损伤问题召开了专家讨论会，探讨何首乌的安全使用问题。
针对何首乌在临床上使用较为广泛，且常作为补益药长期使用，兹采用文献分析的方法对何首乌引起肝损伤的可能原因及机制进行归纳和总结，以期为今后何首乌肝损伤的研究和临床安全使用提供依据。
何首乌对大鼠肝脏毒性及作用机制的研究的开题报告
何首乌对大鼠肝脏毒性及作用机制的研究的开题报告
题目：何首乌对大鼠肝脏毒性及作用机制的研究
研究背景：
何首乌是一种常用的中药，具有多种药理活性，如抗氧化、抗炎、免疫调节等。
然而，长期且过量使用何首乌可能会导致肝脏损伤。
目前对何首乌对肝脏毒性的研究较少，
需要进一步探究其作用机制。
研究目的：
本研究旨在探究何首乌对大鼠肝脏毒性及作用机制，为临床使用何首乌提供参考依据。
研究内容和方法：
1. 研究设计：将大鼠随机分成高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组，分别灌服不
同剂量的何首乌提取物，观察其肝脏形态学和生化指标的变化，并进行比较分析。
2. 病理学检查：采用光学显微镜对各组大鼠的肝脏进行观察，评估何首乌对肝脏形态
学的影响。
3. 生化指标检测：采集大鼠血液样本，检测肝脏功能指标（ALT、AST等）以及肝脏
氧化应激标志物（MDA、SOD等），评估何首乌对肝脏生化指标的影响。
4. Western blot：检测各组大鼠肝脏组织中相关蛋白表达情况，如Nrf2、HO-1、NF-κ
B等，评估何首乌对肝脏抗氧化和炎症反应的影响。
研究意义：
本研究将为何首乌的合理使用提供科学依据，增加人们对何首乌的认识，为何首乌的
临床应用提供参考。
研究预期结果：
本研究预计将发现何首乌对大鼠肝脏的毒性影响，以及其作用机制，有助于推动何首
乌的临床应用，并为中药临床使用提供科学支持。
何首乌对肝脏影响的研究概况
何首乌对肝脏影响的研究概况
石鹏岩
【期刊名称】《江西中医药》
【年(卷),期】2007(38)11
【摘要】何首乌又称首乌、赤首乌，为蓼科植物何首乌P0bgonummu ltif lorum Thunb的干燥块根。
主产于我国四川、湖南、贵州、河南等地区，生于灌
木丛中、山脚阴处或石隙中。
具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效，是滋补肝肾的常用中药。
近年来用于肝炎、高血压、高血脂症、冠心病、斑秃、脱发等，疗效满意。
但何首乌的不良反应尤其是肝损害引起人们重视，亦多有报道。
现就何首乌对肝脏的影啊．综述如下。
【总页数】2页(P66-67)
【作者】石鹏岩
【作者单位】南京中医药大学,南京,210029
【正文语种】中文
【中图分类】R282.7
【相关文献】
1.何首乌高压蒸制法蒸制时间对何首乌抗衰老活性影响的研究
2.斑马鱼模型评价何首乌中18种成分的肝脏毒性
3.何首乌不同萃取部位对斑马鱼幼鱼的肝脏毒性观察
4.何首乌配伍黑豆对大鼠肝脏的影响
5.何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞色素
P_(450)的影响
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何首乌多糖对衰老模型大鼠肝mtDNA损伤及复合体ⅣCOⅠ、ATPase 6 mRNA表达的影响
何首乌多糖对衰老模型大鼠肝mtDNA损伤及复合体ⅣCOⅠ、ATPase 6 mRNA表达的影响
纪庆丽;魏晓东;欧芹
【期刊名称】《黑龙江医药科学》
【年(卷),期】2009(32)6
【摘要】@@ 何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根,具有抗衰老、保肝、促进血细胞的新生和发育、抗动脉粥样硬化等方面的作用[1].另有报道,何首乌多糖可提高衰
老小鼠的免疫功能,也可促进衰老小鼠神经细胞的发育[2].但关于何首乌对衰老模型
大鼠肝脏线粒体呼吸链酶复合体mRNA表达的研究,国内外尚未见报道.本实验旨
在探讨何首乌多糖抗衰老的分子生物学机制.
【总页数】2页(P45-46)
【作者】纪庆丽;魏晓东;欧芹
【作者单位】佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007
【正文语种】中文
【中图分类】Q522;Q523
【相关文献】
1.紫山药多糖对D-半乳糖衰老模型大鼠肝、脑的影响 [J], 张丽梅;程永强;宋曙辉
2.黄芪多糖对缺血脑损伤大鼠海马神经递质及c-fos mRNA表达的影响 [J], 颜玲;
黄德斌
3.何首乌醇提物对脂多糖诱导大鼠肝TLR4/TRIF/IRF-3信号通路的影响 [J], 毛宏梅;谢丽华;樊星;吴纯启;王茜莎;王全军
4.宣白承气汤对急性肺损伤大鼠肺组织脂多糖结合蛋白和Toll样受体4mRNA表达的影响 [J], 苏中昊;杨爱东;王利霞;郭永洁;吴中华
5.局部深低温对脊髓损伤大鼠神经再生和硫酸软骨素蛋白多糖mRNA表达的影响[J], 许晓宇;成惠林
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不同炮制品种的何首乌致肝损害的对比研究
不同炮制品种的何首乌致肝损害的对比研究发表时间：2012-04-06T10:54:39.980Z 来源：《中外健康文摘》2012年第5期供稿作者：李卫先张琦王国仁林雪兰彭玉婷[导读] 何首乌是一位传统中药，其药化、药理和临床应用已取得许多进展，但仍有许多问题需要进一步的研究和阐明。
李卫先张琦王国仁林雪兰彭玉婷 (湖南中医药高等专科学校 412012) 【中图分类号】R285【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2012）5-0396-02 【摘要】目的观察何首乌不同炮制品对大鼠肝脏的长期毒性作用。
方法用何首乌不同炮制品水煎浓缩液，每天灌服大鼠一次，连续12周。
结果何首乌七蒸七晒炮制品水煎浓缩液给大鼠灌胃12周后，未见明显的毒副反应。
结论如果使用炮制适当的何首乌炮制品水煎浓缩液给大鼠长期灌胃可以减少甚至消除对肝脏的损害，何首乌炮制不当对大鼠肝脏有一定的毒副作用，但属可逆性损伤。
【关键词】何首乌不同炮制方法大鼠肝损害何首乌,为蓼科植物何首乌的干燥块根[1]。
制首乌味甘、涩、微温,具有补益精血、固肾乌须之功效;生首乌味甘、苦、性平,具有解毒、截疟、润肠之功效。
临床多以制首乌入药。
本品自古以来即为常用补药,治疗肝肾不足、精血亏虚诸证,更是治疗须发早白的良药。
由于历代将其作为延年益寿之品,人们往往长年服用,以增强健康,防止早衰。
但药理研究有保肝作用,亦有治疗肝炎的报道，随着需求量的增加,近年来临床上屡见服用生首乌片、制首乌片或其它剂型引起肝脏损害的报道[1]，为什么同一种中药会有相反的疗效呢？何首乌对肝脏的损害作用是不是由于何首乌炮制方法不当或是由于炮制工作人员偷工减料，导致炮制时间不够而造成的呢?这正是本文要研究的内容。
但是何首乌损害肝脏的毒理学研究不太多见，特别是对何首乌用不同方法炮制的炮制品损害肝脏的毒理学研究更是少见。
为了何首乌临床应用更安全、有效,防止发生类似“关木通事件”。
本文拟通过对照何首乌生品，何首乌不同炮制方法的成品的质量、药理作用来探讨何首乌致肝损害的毒副作用是否与炮制方法及炮制时间有关。
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陕 西 中 医 学 院 学 报2009年07月第32卷第4期·68 ·J o u r n a l o f S h a a n x i C o l l e g e o f T r a d i t i o n a l C h i n e s eM e d i c i n e J u l y.2009 V o l.32 N o.4何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞色素P450的影响＊卫培峰＊＊ 吴燕燕 焦晨莉 卫建融(陕西中医学院,陕西咸阳712046)摘 要:目的研究何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞色素P450的影响。
方法将何首乌中不同成分提取物大黄素、大黄酸、大黄酚,以及制首乌分别按不同剂量给予大鼠每天灌胃一次,连续3个月,检测大鼠肝脏细胞色素P450,应用差速离心法获取大鼠肝微粒体,用分光光度法检测细胞色素P450含量。
结果大鼠肝脏色素P450含量给药组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
结论制首乌及其主要成分对大鼠肝脏细胞色素P450并无明显影响。
关键词:何首乌;肝脏;细胞色素P450中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1672-0571(2009)04-0068-02E f f e c t o f d i f f e r e n t c o m p o n e n t s o f H e s h o u w u o nR a t L i v e r C y t o c h r o m e P450 We i P e i f e n g WuY a n y a n J i a o C h e n l i We i J i a n r o n g(S h a a n x i C o l l e g e o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,X i a n y a n g,S h a a n x i,712000)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o s t u d y e f f e c t o f d i f f e r e n t c o m p o n e n t s o f H e s h o u w uo n r a t l i v e r c y t o c h r o m e P450.Me t h o d s D i f-f e r e n t c o m p o n e n t e x t r a c t o f H e s h o u w u s u c ha s e m o d i n,r h e i n,r h e i c a c i d,a n d p r e p a r e d H e s h o u w u w e r e g i v e n t o r a t s o n c ea d a y,t h r e e m o n t h s.R a t l i v e r c y t o c h r o m e P450w a s t e s t e d w i t hs p e c t r o p h o t o g r a p h y.R e s u l t s T h e r e w a s n o s t a t i s t i c s i g n i f i-c a n c e o f P450c o n t e n t b e t w e e n t r e a t m e n t g r o u p a n dc o n t r o l l ed g r o u p(P>0.05).C o n c l u s i o nT he r e w a s n o o b v i o u s ef f e c to f p r e p a r e dH e s h o u w ua n di t s m a i n c o m p o m e n t s o nr a t l i v e r c y t o c h r o m e P450.K e yw o r d s:H e s h o u w u,l i v e r,c y t o c h r o m e P450. 目前,何首乌引起肝损害的相关研究在国内外时有文献报道[1],其药理和毒理作用有待进一步探讨,尤其是对肝脏毒性的分析评价具有重要意义。
作为肝内反应酶,细胞色素P450对于药物代谢有至关重要的作用,其代谢异常也是药物性肝损伤的主要发病机制之一,本实验即研究何首乌及其不同成分对大鼠肝脏细胞色素P450的影响。
1 实验材料1.1 实验动物 S D大鼠50只,体重180～220g,雌雄各半。
由第四军医大学实验动物中心提供,动物合格证号:S C X K军0708012。
1.2 主要试剂 0.2m o l/L磷酸缓冲液(p H7.4);一氧化碳气体;连二亚硫酸钠;T M S缓冲液(p H 7.4);88m m o l/L C a C l2溶液;B r a d f o r d蛋白质定量检测试剂盒;0.15m o l/L K C l-0.1m o l/L T r i s·H C l 缓冲液(p H7.0)1.3 实验仪器 723分光光度计(上海光谱仪器有限公司)、高速冷冻离心机C T22GⅡ、J Y92-Ⅱ超声波细胞粉碎机、S C I E N T Z超声波细胞粉碎机隔音箱、电子天平。
2 实验方法2.1 分组及给药 大鼠称重后随机分为大黄素(18.9m g/k g,相当于人常规用量20倍提取量)、大黄酸(156μg/k g,相当于人常规用量20倍提取量)、大黄酚(88μg/k g,相当于人常规用量20倍提取量)、制首乌(3.33g/k g,相当于人常规用量20倍)、空白对照组五组,每组10只;各组均为灌胃给药每天一次,1m L/100g,连续给药3个月。
2.2 大鼠肝微粒体制备 大鼠颈总动脉处死,迅速取出肝脏,用预冷的T M S缓冲液(p H7.4)洗净＊＊＊基金项目:陕西省教育厅资助课题,课题编号:05J K173作者简介:卫培峰(1972-),男,医学博士,副教授,中药学硕士研究生指导老师,主要从事中药毒理学研究。
DOI:10.13424/ ki.jsctc m.2009.04.0292009年07月第32卷第4期陕 西 中 医 学 院 学 报J u l y .2009 V o l .32 N o .4J o u r n a l o f S h a a n x i C o l l e g eo f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e·69 ·血污,减去粘连的组织,用滤纸轻轻吸干表面水分,称重。
将肝脏转入小烧杯,在冰浴中剪碎肝脏,加入少量T M S 缓冲液,洗涤两次后,按3m L /g 肝脏的比例加入T M S 缓冲液。
在冰浴中用匀浆器制成肝匀浆。
上述匀浆以600g 4℃离心5m i n 后,取上清液以12500g 4℃离心15m i n 后,取上清液,按10:1的比例加入88m m o l /L C a C l 2溶液,使其终浓度为8m m o l /LC a C l 2置于冰浴中5m i n ,搅匀。
27000g 4℃离心15m i n ,沉淀部分为微粒体。
将微粒体悬浮于0.15m o l /L K C l -0.1m o l /L T r i s ·H C l 缓冲液中(p H 7.0),再以27000g 4℃离心15m i n ,沉淀部分即是清洗过的微粒体。
将微粒体重新悬浮于0.1m o l /L 磷酸缓冲液中(p H 7.4),分装后-70℃冻存。
2.3 大鼠肝微粒体蛋白测定 按B r a d f o r d 蛋白质定量检测试剂盒操作说明进行测定,先绘制蛋白标准曲线,蛋白标准品用P B S 稀释,配制系列浓度分别加入B r a d f o r d 试剂,混匀并室温放置5m i n 后,于595n m 波长处分别读取其O D 值,以浓度蛋白为横坐标,O D 值为纵坐标,进行线性回归,求得蛋白回归方程。
大鼠肝微粒体蛋白测定步骤同标准曲线测定其O D 值,计算样品中的蛋白浓度。
2.4 肝脏细胞色素P 450含量测定 将微粒体悬液用0.2m o l /L 磷酸缓冲液适当稀释成为含蛋白约10m g /m L 的悬液。
取此悬液0.3m L ,加入0.2m o l /L 磷酸缓冲液5.7m L ,混匀。
每6m L 反应液加0.04m L 0.1%连二亚硫酸钠(临用前现配),分装入两个比色杯中,用一氧化碳气体向测定比色杯轻轻吹泡1m i n ,另一比色杯不通一氧化碳作为参比,开始测定450n m 和490n m 波长处差示色谱。
计算公式:P 450含量(n m o l /m g 蛋白)=■O D (450～490)n m/C r ×100091×蛋白浓度(n m o l /L )2.5 统计方法 以(x ±s )表示,用t 检验进行组间统计学检验。
3 实验结果见表1。
表1 大鼠肝脏细胞色素P 450测定结果 (x±s )组别给药量n 细胞色素P 450含量(n m o l /m g )空白对照组100.510±0.119制首乌组6.67g /k g 100.511±0.127大黄素组18.9m g /k g 100.510±0.118大黄酸组156μg /k g 100.507±0.108大黄酚组88μg /k g 100.511±0.121 通过实验结果可见,各给药组大鼠肝脏细胞色素P 450含量与空白对照组比较均无显著差异(P >0.05)。
4 讨论细胞色素P 450(c y t o c h r o m e P 450,C Y P 450)是一类参与内源性和外源性化合物代谢的酶,主要存在于生物体的内质网内,属于混合功能氧化酶系统中的一种[2],分布于全身各组织中,但以肝脏细胞含量最丰富。
由C Y P 450酶系作用的药物生物转化是药物代谢的重要环节,同时许多药物又对C Y P 450酶系活性有抑制或诱导作用,药物经过C Y P 450酶系代谢后可产生具有肝毒性的中间产物。
研究C Y P 450的最终目的是为临床用药提供依据以达到最佳疗效并尽可能避免肝毒性等不良反应[3]。
由表中结果可看出,大鼠肝脏C Y P 450含量测定结果给药组与空白对照组比较无显著差异(P >0.05),说明制首乌及其主要成分对大鼠肝脏C Y P 450并无明显影响,临床中制首乌导致的肝脏损伤可能并不是通过对药物代谢酶的系统发生,而是通过诱导肝细胞凋亡或其他途径而发生,应进一步进行深入的系统研究。