高效液相色谱仪过滤操纵要点
高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
高效液相色谱仪操作步骤（原文摘录自网络）：
1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取se-lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；
b.基线归零；
c.进样阀的loading-inject转换；
d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均。
高效液相色谱仪操作
高效液相色谱仪操作一、简介高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分析仪器，主要用于分离、定量和检测样品中的化合物。
它具有分离效率高、分离时间短、操作方便等优点，广泛应用于制药、化妆品、食品、环境监测等领域。
本文将为您介绍高效液相色谱仪的操作步骤和注意事项。
二、操作步骤1.准备工作在使用高效液相色谱仪之前，需要确保仪器和所需材料的准备工作已完成。
包括以下几个方面： - 选用合适的色谱柱：根据样品的特性和分离要求，选择相应的色谱柱类型和规格。
- 准备好流动相：根据试验要求和分析方法，配置好正确的流动相，确保其符合实验要求。
- 检查仪器状态：检查仪器的电源是否正常，色谱柱是否安装正确，流速控制装置是否工作正常等。
2.样品准备•将待分析样品溶解或稀释到合适的浓度。
•过滤样品以去除杂质，确保样品的纯度和稳定性。
•如果需要，可以对样品进行衍生化处理，以提高分离效果。
3.仪器设置•打开操作软件，确保仪器和计算机正常连接。
•根据分析要求设置进样体积、流速、检测器参数等。
•在进样器中加入样品，设置为自动进样或手动进样。
4.开始分离•启动色谱泵，使流动相从色谱柱中流动，建立起足够的流速。
•启动检测器，选择适当的检测模式和波长。
根据样品特性选择合适的检测器类型，如紫外/可见光检测器、荧光检测器等。
•开始记录数据，在色谱软件上观察色谱图的变化，根据需要进行峰的识别和峰面积的积分计算。
5.数据分析•根据分析要求，对色谱图进行峰的分析和峰面积的计算。
•根据标准曲线或对照品，进行定量分析。
三、注意事项1.安全操作：使用高效液相色谱仪时，应注意仪器操作安全，避免发生意外事故。
如注意电源和高压电缆的连接是否牢固，避免漏电和触电危险。
2.样品准备：样品准备过程中，应避免受到外界污染和杂质的干扰，保证样品的纯度和稳定性。
3.色谱柱的选择：根据样品的性质和分离要求，选用合适的色谱柱。
高效液相色谱操作知识
高效液相色谱操作知识（一）高压恒流泵的维护注意事项泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。
应采取下列措施以延长使用寿命：绝对不允许在没有流动相的或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。
每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲的溶液或有机溶剂中。
长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。
要用HPLC级试剂输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。
要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。
压力下限应设置在0.5~1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞的干磨有柱后清洗功能的高压恒流泵还要注意保持清洗液，否则将失去柱后清洗效果。
(二)流动相使用的注意事项必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45?m薄膜过滤。
过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如02），如不脱气易产生气泡，增加基线噪声，造成灵敏度下降，甚至无法分析。
几种脱气方法比较：1、氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好但成本高。
2、加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。
3、抽真空脱气法：易抽走有机相4、超声脱气法：一种较为常见的脱气法。
流动相放在超声波容器中，用超声波震荡10~15 分钟，此法效果并不太好但操作简单。
如果管路中使用peek树脂部件，请不要使用下列流动相：浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。
此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用5：95的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。
此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
高效液相色谱仪的操作与维护指南
高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。
本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。
一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。
其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。
最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。
2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。
开机前，需要检查电源和其他外部连接。
按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。
关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。
3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。
样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。
进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。
4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。
仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。
5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。
根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。
在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。
6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。
首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。
然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。
定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。
二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪操作技巧及操作规程
高效液相色谱仪操作技巧及操作规程高效液相色谱仪操作技巧任何颗粒物进进高效液相色谱仪后都会在柱子进口端被筛板挡住，最后的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力加添并使色谱峰变形。
因此，要实行各种防备措施，包括操纵步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或削减颗粒物进进高效液相色谱仪中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并进步数据的牢靠性。
在高效液相色谱仪中，颗粒物的紧要来源有三个途径：活动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。
1、被测样品使用针筒式过滤器不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会或多或少的丢失。
丢失来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。
2、活动相无论是高效液相色谱仪HPLC级的水还是在试验室使用超纯水净化系统制备的水，最后一步也是通过0.2μm微孔滤膜。
任何一种缓冲液中加进了固体物，必定活动相过滤将。
少量杂质颗粒存在于活动相中必定成为残渣。
解决方法：2.1.活动相制备仅接受HPLC级液体时不需要过滤，反之全部活动相构成在使用前必需过滤。
2.2.在连接储液瓶和泵的输液管的末端进口接受下沉式过滤器（常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种）也是很紧要的。
这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质，所以它不能取代活动相过滤步骤，但是它能除往系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的牢靠性。
2.3.推举在HPLC系统中接受一个0.45或0.5μm的在线多孔过滤器，接在自动进样器和柱子之间，即使已使用了保护柱。
这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板，而且如接受一个玻璃砂芯滤板，既便宜，更换又便利（几分钟就可更换）。
若接受在线过滤，高效液相色谱仪检测每批样品开始前记录下压力值，当压力上升确定值，例如25%或加添500psi，应当更换玻璃砂芯滤板了，更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。
3、仪器系统部件的磨损物最后，在高效液相色谱仪HPLC系统中颗粒物的另一个紧要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。
安捷伦高效液相色谱仪操作说明
安捷伦高效液相色谱仪操纵说明之答禄夫天创作一、校枪及样品处理1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步调：打开分析天平预热，一只烧杯放到称量盘上调零，一只装入纯水。
将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL，分别吸取纯水称质量，如偏大或偏小，调节移液枪直至准确到0.001g。
（如枪使用过久或气密性欠好，可以准备一个小烧杯装入纯水，每次先轻轻沾湿枪口，甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水，再插上枪头使用。
）注意慢吸慢放，不要挂珠。
2. 样品处理：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液，取出样品后，首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）。
然后将样品稀释20倍，取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。
混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）。
准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管），取200μL待测液盖紧盖子。
按顺序放到自动进样盘中。
二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关打开。
打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序，打开色谱仪各组件电源，待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。
化学工作站自动与1200LC通讯。
流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中，打开冲洗阀，设流速为2ml/min，单击确定，再依次单击泵→控制，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，至管路无气泡为止，切换管路反复操纵至所需管路均无气泡。
在“控制”选项中选“关闭”，关闭泵，关闭冲洗阀。
单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。
每次四元泵开始前，要打开冲洗阀阀门以5ml/min的流速冲洗10分钟，使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出，以免隔夜的流动相损伤色谱柱。
每次进样检测前，要用流动相冲洗色谱柱30分钟，达到柱温前20min流速设为0.2ml/min，达柱温后再改为0.6ml/min。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。
为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。
b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。
c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。
2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。
b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。
3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。
b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。
4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。
b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。
5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。
b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。
6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。
b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。
7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。
b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。
8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。
b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。
总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。
遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。
高效液相色谱仪操作步骤(精)
本文由北京SEO整理发布高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
液相色谱法简介【我要发表论文】--------------------------------------------------------------------------------作者：dujinx正文气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种对样品进行分离、检测的仪器。
对于化学、生物等领域的研究者来说，熟练掌握HPLC 的操作规程非常重要。
本文将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。
设备准备在操作HPLC仪器之前，需要先对设备进行准备。
首先，需要检查仪器周围的环境是否清洁整洁。
注意检查废液罐、洗涤液罐的液位，以免在后续的使用中发生意外。
其次，需要准备好各种试剂和标准品，确保它们的适用性和相应的浓度范围。
需要使用高纯度的溶剂，在使用之前应先过滤，去除其中的杂质，保证后续操作的准确性和稳定性。
最后，对仪器进行预热操作。
通常情况下，需要对色谱柱和检测器进行预热，保证它们的温度稳定。
样品的制备样品的制备是至关重要的一步。
通常情况下，为了提高样品的净化程度和浓度，需要使用不同的制备方法，如提取、稀释、过滤等。
在进行样品制备时，需要注意以下几点：1.确认样品是否熔点低于所用的溶剂的沸点；2.确认样品是否需要进行提取或加强洗涤效果；3.对于样品的稀释和过滤操作，需要注意其可能带来的影响。
色谱柱的选择选择合适的色谱柱对于操作效果的影响很大，需要充分考虑实验的目的和测试要求进行选择。
选择色谱柱时，应注意以下几点：1.选择合适的材料和孔径；2.确认所选柱是否能够满足测量要求；3.确认所选柱的分离效应是否满足实验要求。
操作流程1.开机操作：根据仪器所得操作指南进行开机操作。
2.准备工作：将所需样品移至自动进样器，调整电量，并确认流速和溶剂比例是否正确。
3.洗涤操作：洗涤色谱柱，将废液排出废液罐中。
4.样品进样：按照操作指南将样品注入样品进样器中。
5.柱温控制：调节色谱柱的温度以控制柱的温度稳定。
6.流速控制：根据样品要求调节流速。
7.数据收集操作：实时收集并记录数据，如果需要，可以修改柱温、流速等操作参数。
8.数据处理：对数据进行处理和分析。
使用高效液相色谱仪的注意事项
使用高效液相色谱仪的注意事项
使用高效液相色谱仪的注意事项包括：
1.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
2.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
3.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子
一小时，然后用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
5.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
6.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→
单向阀检查并清洗，清洗方法：①以异丙醇作溶剂冲洗；②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。
7.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免
产生气泡。
8.试管的洁净问题：高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法，
如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。
例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。
总之，高效液相色谱仪使用时需要注意以上问题，以保证仪器的正常运转和实验结果的准确性。
高效液相色谱仪使用与操作规程
4.更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样
品
5.进样器损坏
5.更换进样器转子
五、鬼峰
1.进样阀残余峰
2.样品中未知物 3.柱未平衡 1.每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品 的清洗 2.处理样品 3.重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其 是离子对色谱)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 4.每天新配,用抗氧化剂 5.通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC 5.水污染(反相) 级的水
剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。 3 、关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流 动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等。
第四步、注意事项
一、流动相
1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水 或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过 滤后使用，过滤时注意区分水系膜 和油系膜的使用范围； 2、水相流动相需经常更换（一般不超 过2天），防止长菌变质；
7.等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度
7.保留时间过长 洗脱
8.将连接管径和连接管长度降至最小
8.柱外体积过大 9.进小浓度小体积样品 9.样品过载
第二步、开 机
接通电源，依次开启不间断电源、 真空脱气机、四元泵、检测器，待泵和
检测器自检结束后，打开电脑显示器、
主机，最后打开色谱工作站。
一）参数设定
1、 波长设定： 2 、流速设定：
3 、流动相比例设定：
4、 梯度设定：
二）更换流动相并排气泡
1： 将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液
瓶中； 2 ：顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液 阀； 3 ：运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min （可设定）后泵流速设为0ml/min； 4 ：将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液 阀。 5 ：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至 气泡排尽。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3. 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4. 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9. 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10. 登记。
一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？答:关于漂移问题：1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程
一、所需流动相经过滤、脱气处理后待用。
安装好色谱柱。
二、检查供电电源是否稳定，各部件连接是否牢固。
三、开启仪器检测器和泵电源，待检测器电源指示灯由黄灯变成绿灯后，开启
仪器工作站，即双击桌面上图标LCwin1.0。
四、点击工作站中控制采集，点击开启，待仪器自检通过后，进入仪器控制采
集界面。
五、依次用甲醇、甲醇：水=2：8、流动相进行冲洗色谱系统，每次更换更换溶
液时，均需拧开放空阀，选择菜单泵下的快速冲洗模式，选定合适的时间进行冲洗，赶走泵内气泡。
确定泵内无气泡后，停止冲洗模式，关闭放空阀。
六、更换换上流动相后，按样品分析条件设置选择合适的流速、波长。
待色谱
设备达到平衡状态（柱压稳定，工作站基线稳定，一般需30-40min）后，即可进样分析。
七、分析完毕后，流动相中存在缓冲盐等溶剂，需先用甲醇：水=2:8，进行冲洗
至少30min，再用甲醇冲洗，待柱压降至正常值（依色谱柱而定，即柱压稳定后），停泵。
柱压降为零后关闭检测器和泵的电源。
八、样品分析应做好原始纪录，内容包括分析样品名称、送样时间、分析时间、
样品编号、检测数据、报告结果、报告时间、送样单位、分析员以便统计和查阅。
九、仪器如出现故障，应及时报告专业维修单位或专职维修人员，未经专业维
修培训或未取得维修资格证书的不能进行维修工作。
十、仪器室内严禁吸烟或进行任何无关明火操作。
仪器室内应配备二氧化碳灭
火器，分析人员应能正确操作使用。
高效液相色谱仪操作三要点 液相色谱如何操作
高效液相色谱仪操作三要点液相色谱如何操作高效液相色谱仪操作三要点高效液相色谱仪（HPLC）现已成为有机化学分析的紧要手段之一、同样，在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC也已成为不可或缺的分析仪器。
和其它分析仪器一样，你若想让HPLC 很好地为你工作、得到牢靠的数据，首先你要保养好它，使它处于一个良好的待机状态，这样你操作它进行分析时就可以比较顺当地获得理想的结果。
而且良好规范的操作习惯可以延长仪器使用寿命。
大家在学校或接受仪器公司培训的时候，老师或工程师会提出很多的操作注意事项。
但要是总结归纳一下，较为紧要的有三点：脱气、过滤和冲洗。
本文围绕这三点进行讨论，给新从事HPLC分析的工一点操作建议，希望能对正确的操作仪器有一点帮忙。
更欢迎有阅历的专家介绍使用阅历，提出好建议。
一、脱气流动相脱气对于避开HPLC系统出问题，顺当得到一个理想的数据是一个很有效的措施。
HPLC系统内是不希望有气泡存在的。
HPLC泵在输送液体时要产生很大的气力，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将察看到瞬间的流速降低和系统压力下降。
假如这个气泡充分大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且假如压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。
有些泵设计可以很好地排出气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。
当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。
但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会显现不规律的毛刺。
为解决这个问题，有些仪器公司设计一个反压掌控器，这样可以在检测器出口供应充分的压力保持气泡始终溶解在流动相中直到它们流出检测器。
当然，这个压力不能超过流通池所能承受的压力极限，否则可能损坏检测器。
紫外/可见光（UV/VIS）检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流通池的征兆。
有些检测器对空气的存在也特别敏感，但表现出的征兆与UV/VIS不同，例如有报导说，当使用荧光（FL）检测器时，流动相中溶解氧的存在可能会使一些化合物失去荧光性。
浅析高效液相色谱仪的使用要点 液相色谱操作规程
浅析高效液相色谱仪的使用要点液相色谱操作规程高效液相色谱仪广发应用于各种科研、生产领域中。
下面我们来简单介绍下它的使用要点。
1.高效液相色谱仪色谱柱它包括空柱和填料。
空柱是内壁抛光的不锈钢管，内径为4～5mm，长100～250mm。
按气相高效液相色谱仪广发应用于各种科研、生产领域中。
下面我们来简单介绍下它的使用要点。
1.高效液相色谱仪色谱柱它包括空柱和填料。
空柱是内壁抛光的不锈钢管，内径为4～5mm，长100～250mm。
按气相色谱法中洗涤空柱的方法洗净，用匀浆法填充固定相。
将此柱装入仪器的管路中，用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。
等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液，用正己烷（含 0.05%甲醇）或甲醇：水（83：17）为流动相测定柱效及分别度塔板数在2～3万/ml以上及分别度在1.5以上者，柱效好。
为防止柱污染，常用1个 50mm长，4～5mm内径，装有硅胶（40—50mm）或立柱相同填料的保护柱（预柱）接在主柱之前，以延长色谱柱的寿命。
反相键合相柱用毕。
必需用水充分流经，以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚，再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。
2. 高效液相色谱仪流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中，经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱，最后自检测器流出或收集或作废液回收。
用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法（isocratic dlution），即自洗脱开始到结束，溶剂的配比恒定。
另一类为梯度洗脱法（gradicnt clution）,即使溶剂的极性强度在色谱过程中渐渐加添。
须按确定程序不断更改流动相的浓度配比，从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分别，而整个高效液相色谱仪色谱过程缩短。
必需注意，梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相高效液相色谱法中。
3. 高效液相色谱仪检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸取，荧光发射和电化学三种。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操纵步调及注意事项之樊仲川亿创作一、操纵步调：μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果欠好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（分歧规格的色谱柱其所允许的最大流速之和分歧）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面检查分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下检查样品的分析结果并编辑。
二、使用中罕见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。
注意：操纵时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。
2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超出压力上限，致使泵停止工作。
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3.打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10?ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new?method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9．填写登记本，由负责人签字。
10．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
11．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
12．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
13．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。
2打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行控制仪器软件的程序。
打开1200 LC 各模块电源。
待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面。
3从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]，[ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。
4把流动相放入溶剂瓶中。
打开冲洗阀。
点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。
设流速：5ml/min，点击[确定]。
点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵，关闭冲洗阀。
点击[泵]图标，点击[设置泵…选项]，设流速：1.0ml/min。
点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积，点击[确定]。
5从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项，如下图所示选中除[数据分析]外的三项，点击[确定]，进入下一画面。
在[方法注释]中加入方法的信息（如：测试方法）。
点击[确定]，进入下一画面。
在[流速]处输入流量,如1ml/min，在[溶剂B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入]一行[时间表] ,编辑梯度。
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高效液相色谱仪过滤操纵要点
任何颗粒物进进HPLC系统后都会在柱子进口端被筛板挡住，最后的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力增加并使色谱峰变形。
因此，要采取各种预防措施，包括操纵步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或减少颗粒物进进HPLC系统中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并进步数据的可靠性。
在HPLC系统中，颗粒物的主要来源有三个途径：活动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。
1、被测样品
液相系统中的第二个颗粒物来源是被测样品。
一些实验室在将他们的样品放置在自动进样器盘(或手动进样)以前，所有样品都先通过一个0.45μm针筒式过滤器过滤。
这是一个有效除往被测样品中颗粒物的方法。
但是这个过程也有一点需要关注：你使用了针筒式过滤器就不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会有或多或少的丢失。
丢失来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。
假如有丢失，过滤后液体中被测物的含量或浓度与原基本样液的含量或浓度还相同吗？这个题目一般需要通过实验确认。
确认这步是要增加工作量和用度的。
过滤器的使用是一种消耗，每个过滤器的价格从几元到十几元。
但在做食品中残留物分析时，由于基质大多比较复杂，所以过滤这步已成为不可或缺的一步。
在实际分析工作中，一般检测每一组样品会带一个外标、一个添加回收或是质控样品，所以，只要终极检测时得到的信噪比能满足检出限要求，可将这步视为系统误差而忽略。
2、活动相
假如活动相均由高效液相色谱级溶剂组成，活动相没有必要过滤。
这是由于高效液相色谱级的有机溶剂，例如乙腈、甲醇等，在制造的工艺过程中都已经过了0.2μm微孔滤膜过滤。
同样的，无论你是买的HPLC级的水还是在实验室使用超纯水净化系统制备的水，最后一步也是通过0.2μm微孔滤膜。
然而，假如有任何一种缓冲液中加进了固体物，例如磷酸盐，活动相过滤将是必要的一个步骤。
固然缓冲盐可能是可溶解的、高纯的，但它还是可能含有颗粒物质，例如在盖试剂瓶的塑料内盖时，塑料瓶盖子与瓶口边沿挤压就会产生塑料颗粒。
在这种情况下，添加的一种固体物可能完全溶解了，但是少量杂质颗粒存在于活动相中成为残渣。
活动相通过0.45μm微孔滤膜过滤对于从活动相中除往所有颗粒物是一个有效方法。
0.2μm微孔滤膜也可以用，但是它们就这个应用而言并不比0.45μm微孔滤膜更有效，而且它的过滤速度会更慢，特别是当实验室使用的试剂和水的质量不太好时。
建议实验室在编写制定他们活动相制备标准操纵程序(SOPs)时规定，可以鉴戒国际上同类实验室的规定，即：
活动相制备仅采用HPLC级液体时不需要过滤，反之所有活动相组成在使用前必须过滤。
在连接储液瓶和泵的输液管的末端进口采用下沉式过滤器(常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种)也是很重要的。
这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质，所以它不能取代活动相过滤步骤，但是它能除往系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的可靠性。
3、仪器系统部件的磨损物
最后，在HPLC系统中颗粒物的另一个主要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。
关于输液泵密封垫的磨损更换有两种不同建议。
第一种建议以为，在一般实验室中输液泵密封垫通常使用寿命为六个月到一年，因此建议半年或一年更换这些密封垫，实验室应基于上述观点制定定期预防性维护计划。
该观点以为：与输液泵密封垫颗粒堵塞柱子而更换新柱子的用度相比，更换密封垫的用度低些。
一些输液泵有玻璃砂芯或筛网，可在流路中滤掉从泵密封垫磨损下来的颗粒物，防止这些颗粒物随活动相流至柱头。
若有这种装置应查阅输液泵操纵手册，查看推荐的这种过滤器清洗或更换的间隔。
另一种建议则以为，原装密封垫的密封效果最好，更换以后轻易引起活动相渗漏。
所以，只要不漏液就不要轻易更换密封垫。
两种说法都有其道理，具体如何操纵，建议与仪器公司工程师沟通，各公司的仪器还是有些不同的。
自动进样器旋转轴的密封随着使用时间也会磨损，但是在我的经验中，即便是高负荷的运转旋转轴密封垫也可以使用几年。
假如你的自动进样器系统有计数进样阀转动次数的功能，你可以设定一个警铃当预设阀转动次数已达到时提醒你。
曾有一种说法，进样器最多转动20,000次，这仅仅是进样10000个；但这似乎不是实验室涉及的常规样品分析使用寿命，它们的实际使用寿命会更长。
旋转轴密封磨损后会渗液，比较明显的特征是同一样品多次进样后，峰面积值差别比较大(RSD>?5%)。
当然，输液泵的密封垫和旋转轴的密封垫磨损将增加更多研磨物在活动相中，加速对这些部件的损伤。
此外，假如你日常运行的活动相有缓冲盐，如磷酸缓冲盐，密封垫的磨损会更快。
无论颗粒物源于何物，实验时都要将其除往。
推荐在HPLC系统中采用一个0.45或0.5μm的在线多孔过滤器，接在自动进样器和柱子之间，即使已使用了保护柱。
这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板，而且如采用一个玻璃砂芯滤板，既便宜，更换又方便(几分钟就可更换)。
若采用在线过滤，HPLC系统检测每批样品开始前记录下压力值，当压力上升一定值，例如25%或增加500psi，应该更换玻璃砂芯滤板了，更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。