利用HPLC法测定谷丙甘氨酸胶囊中3组分含量
HPLC法同时测定杜仲壮骨胶囊中3种皂苷的含量
HPLC法同时测定杜仲壮骨胶囊中3种皂苷的含量袁步娟;仇其原【摘要】目的建立高效液相色谱法同时测定杜仲壮骨胶囊中三七皂苷R1（C47H80O18）、人参皂苷Rg1（C42H72O14）和人参皂苷Re（C48H82O18）的含量测定方法,旨在进一步提高对杜仲壮骨胶囊的质量控制.方法采用Cap-cellPak-C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-1%磷酸（18.8∶81.2）,流速为1.5mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为203nm.结果三七皂苷R1线性范围为4.99～99.7μg·mL-1;人参皂苷Rg1线性范围为5.76～115.1μg·m L-1;人参皂苷Re线性范围为54.05～1081μg·mL-1.结论该方法简便、精确、灵敏度高且重复性好,可反映本制剂中多个药材组分的质量,可用于杜仲壮骨胶囊的质量控制.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2016(000)003【总页数】4页(P148-150,178)【关键词】杜仲壮骨胶囊三七皂苷R1 人参皂苷Rg1 人参皂苷Re 高效液相色谱【作者】袁步娟;仇其原【作者单位】盐城市药品检验所,江苏盐城224000【正文语种】中文【中图分类】R927.2杜仲壮骨胶囊由杜仲、淫羊藿、人参、川芎、三七、当归等中药组成，具有益气健脾、活血通络、养肝壮腰、祛风除湿、强健筋骨之功效，临床用于治疗风湿痹痛、筋骨无力、屈伸不利、步履艰难、腰膝疼痛、畏寒喜温等症［1］。
其主要成分有多种皂苷类成分［2］，如三七皂苷R1和人参皂苷Re、Rg1、Rb1等［3］。
本文通过试验建立高效液相色谱（HPLC）法，可同时对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行含量检测，并且该方法简便、精确、灵敏度高，重复性好，可用于杜仲壮骨胶囊的质量控制。
1.1 仪器 Waters e2695高效液相色谱仪、Waters 2489紫外检测器，Empower色谱工作站（美国Waters公司）；XS205 DU电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；B3200S-T超声仪（比能信超声有限公司）。
HPLC方法测定甘氨酸的研究方法第三组
HPLC方法测定甘氨酸的研究方法第三组
一、引言
甘氨酸属于α-氨基酸，是人体必需氨基酸之一，是高度水溶性的阴离子。
在各种微生物，藻类，动植物中都有存在，是构成蛋白质和多种细胞组分的重要原料，也是药物合成的重要中间体，近几年，由于甘氨酸的营养价值和应用和开发的发展，引起了国内外学者们的广泛关注。
为此，预先了解甘氨酸特性，确定其含量是极其重要的。
而高效液相色谱法（HPLC）是目前存在的一种常用的快速，灵敏，准确的甘氨酸测定方法。
二、实验原理
HPLC是一种分离技术，用于对物质中的多种元素进行分离和测定，是化学分析技术中应用最广泛的实验方法之一、它综合了一定的离子交换树脂柱层和高压泵实现对物质的柱分离，用光度计、多色检测对柱外分离液体中的组分进行分析测定，用特定的洗脱液或复合洗脱液对柱层污染物进行洗脱，重新建立测量条件，采用计算机控制技术，可实现自动化，分析灵敏度高，精度高，结果稳定可靠，是测定甘氨酸含量的有效方法。
三、样品处理
1.样品粉末或溶液消毒：取样品，在恒温热水浴中加热，达到极限温度，并保持30分钟；
2.将消毒的样品放入适当容器中，加入25mL洗脱液，稀释后搅拌；。
高效液相色谱法测定丙谷胺片的含量
高 效 液 相 色 谱 法测 定 丙 谷 胺 片 的 含 量
陈 恭 铭
（ 建省南平 市药检所 ， 建南平 福 福 ３ ３０ ） ５ ０ ０
［ 键词］ 关
高效 液 相 色 谱 法 ； 谷 胺 ； 量 测 定 丙 含
［ 图分 类 号 ］ Ｒ９ ７ ２ ［ 献标 识 码 ］ Ｂ ［ 章 编 号 ］ １０ —５ ３ （０ ７０ —０ ６ 一ｏ 中 ２． 文 文 ０ １ ６９２０）２ １７ ２
２ ３ 线 性 关 系 考 察 精 密 称 取 丙 谷 胺 对 照 品 １ ． ， ． ５ ８ ｍｇ 置 ５ 量 瓶 中 ， 乙醇 溶 解 并 稀 释至 刻度 ， 匀 ， 为 储 备 液 。 Ｏｍ１ 加 摇 作 精 密量 取 ２ ０ ３ ０ ５ ０ ７ ０ 、 ０ ｍ１ 别 置 ５ 量 瓶 中 ， ． 、 ． 、． 、 ． １ 分 Ｏ ｍｌ 加
统 计 学处 理 ， 得 回 归 方程 Ａ一４ ． ２ 求 ６ ６ ｃ一 １ ． Ｏ ｒ一 １ 表 明 １７ ． ，
ｌ ｔ０ ｅ ｌ ０液 相 色 谱 仪 ， ａｔｒ ｓＢ ２ １ 型 电 子 天 平 （ 量 ｎｌ Ｓ ｒ ｉ ｐ １Ｄ ｏｕ 感
０ ０ ） 德 国塞 多 利 斯 公 司 ） ． １ ｍｇ （ 。 １２ 试 药 丙 谷 胺 对 照 品 （ 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 ） 乙 ． 中 ， 腈 为色谱纯 ， 为超纯水 ， 他试药为分析纯 。 水 其 ２ 方 法 与 结 果 ２ １ 色 谱 条 件 色 谱 柱 ： ｐ ｒ ｉ ２ ０ ｍｍ × ４ ０ ｍｍ， ． Ｈｙ ｅ ｓ （ ５ ｌ ． ５ ｂ ； ｃ 流动 相 ： ｍ） 乙腈一 Ｈ７ ２的 磷 酸 盐 缓 冲液 （ ０： ０ ， 测 波 ｐ ． ３ ７）检 长 ２ ４ｎ 流 速 １ｍｌ ｍｉ－， 温 为 窒 温 ， 样 量 ２ １ ２ ｍ， ・ ｎ 柱 进 Ｏ 。理
高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量
谷氨酰胺（Glutamine）是一种重要的氨基酸，它在生物体内有着广泛的生理功能。
作为一种重要的指标化合物，准确测定谷氨酰胺的含量对于生物医药领域具有重要意义。
在分析谷氨酰胺含量时，高效液相色谱法（HPLC）成为一种被广泛采用的方法，其结果准确可靠，操作简便，具有很高的敏感性和选择性。
本文将以深度和广度的方式探讨高效液相色谱法在测定谷氨酰胺含量中的应用。
一、什么是高效液相色谱法？高效液相色谱法是一种分离杂质的有效方法。
它利用液相不同成分对于固定相的相对亲和性不同，实现对混合物中各成分的分离。
高效液相色谱法在分析化学领域得到广泛应用，通过对不同成分在固定相上的吸附、分配、解吸和离子交换等过程进行控制，使得各成分被分离出来，并可以通过检测器进行检测。
二、高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的原理在测定谷氨酰胺含量时，一般采用离子对色谱法或手性色谱法。
离子对色谱法是指根据样品中阳离子、阴离子与离子对试剂形成离子对而产生的保留作用，用以分离成分的色谱方法。
而手性色谱法是利用手性色谱柱对立体异构体进行分离的方法。
通过高效液相色谱法，可以准确地测定谷氨酰胺的含量，并且对杂质的干扰具有很高的抵抗能力，确保分析结果的准确性。
三、高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的步骤1. 样品的制备：将待测样品按照规定的方法进行制备，保证样品的质量和含量。
2. 色谱条件的选择：选择适当的色谱柱、流动相和检测条件，确保样品的分离和检测。
3. 样品的进样和分离：将制备好的样品进样至色谱仪中，进行分离。
4. 谷氨酰胺含量的计算：根据峰面积和标准曲线，计算出样品中谷氨酰胺的含量。
四、高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的优势1. 准确可靠：高效液相色谱法在测定谷氨酰胺含量方面具有高准确性和可靠性，能够满足实际分析的需求。
2. 操作简便：相比其他分析方法，高效液相色谱法操作简便，不需要复杂的操作步骤和设备。
3. 敏感性和选择性高：高效液相色谱法可以在较低的浓度下进行分析，对于谷氨酰胺含量的测定具有很高的敏感性和选择性。
HPLC法对复方氨林巴比妥注射液中三组分含量的测定
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HPLC法对复方氨林巴比妥注射液中三组分含量的测定
郭倩倩
河南省三门峡市食品药話检验检测中心(472000 )
摘要目的:采用HPLC法对复方氨林巴比妥注射液中氨基比林、安替比林和巴比林巴比妥注射液中三组分含量,依据色谱条件、外标法直接测定含量。结果：复方氨林巴比妥注 射液中三组分线性范围分别为 100 ~300|jLg/mL(r= 1.000)、40 ~ 120(jLg/mL( r= 1.000)和 18 ~ 54|j,g/mL(r = 0. 9998)，平均回
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黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol. 32 No. 4 2019
样品的制备，以“2.2.2”项方法操作。 2.3线性关系
精密吸取5、8、10、12、15 pl的对照品溶液分别注入高效 液相色谱仪,记录峰面积。纵坐标选择峰面积、横坐标选择 进样量％(lig),绘制标准曲线⑵。氨基比林线性回归方程y = 2939. lx+ 68. 124(疋= 1)、安替比林线性回归方程丁 = 32. 466x+15. 959(R= 1)、巴比妥线性回归方程 y = 2472. 3x+ 67.185(ft2=0. 9996) o 2.4回收率试验
DOI：10.14035/j. cnki. hljyy. 2019.04.001
Determination of the Content of Three Components in Compound Amilinobarbital Injection by HPLC Method
Guo Qianqian Henan Sanmenxia food and drug inspection and testing center (472000)
HPLC同时测定退黄保肝胶囊中3种成分的含量
HPLC 同时测定退黄保肝胶囊中3种成分的含量毕春艳，薛剑桥，翟兆玲（淄博市食品药品检验研究院，山东 淄博 255086）摘 要：目的 建立HPLC 测定退黄保肝胶囊中绿原酸、柚皮苷及新橙皮苷含量的方法。
方法 色谱柱：InertSustain C 18 Superb （4.6 mm ×250 mm ，5 μm ）；流动相：乙腈-0.2 %磷酸溶液（15:85）；流速：1.0 ml/min ；检测波长283 nm ；柱温：35 ℃。
结果 3种成分的线性关系均良好，绿原酸回归方程为Y =2×106X -523，r =0.9999，柚皮苷回归方程为Y =2×106X +388，r =0.9999，新橙皮苷回归方程为Y =2×106X +436，r =0.9996，回收率分别99.0 %，99.3 %，100.1 %，RSD 均低于2.0 %。
结论 本方法简单快速，适用于测定退黄保肝胶囊中的绿原酸、柚皮苷和新橙皮苷的含量。
关键词：退黄保肝胶囊；绿原酸；柚皮苷；新橙皮苷；高效液相色谱中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1672-979X （2019）02-0149-03DOI ：10.3969/j.issn.1672-979X.2019.02.016Simultaneous Determination of Three Components in Tuihuang Baogan Capsules by HPLCBI Chun-yan, XUE Jian-qiao, ZHAI Zhao-ling(Zibo Food and Drug Inspection Institute , Zibo 255086, China )Abstract: Objective To establish a method for simultaneous determination of chlorogenic acid, naringin and neohesperidin in Tuihuangbaogan Capsules by HPLC. Methods InertSustain C 18 Superb (4.6 mm ×250 mm, 5 μm) was adopted, using acetonitrile-0.2 % phosphoric acid solution (15:85) as mobile phase, with a flow rate of 1.0 ml/min. The detection wavelength was set at 283 nm; the column temperature was 35 ℃. Results The linear relationships of the three components were good. The regression equation of chlorogenic acid was Y =2×106X -523, r=0.9999; the regression equation of naringin was Y =2×106X +388, r =0.9999; and the regression equation of neohesperidin was Y =2×106X +436, r =0.9996. The recoveries were 99.0 %, 99.3 % and 100.1 %, respectively. The RSD s were lower than 2.0 %. Conclusion The method is simple and rapid, and can be used to determine the contents of chlorogenic acid, naringin and neohesperidin in the Tuihuangbaogan Capsules.Key Words: Tuihuang Baogan Capsules; chlorogenic acid; naringin; neohesperidin; HPLC收稿日期：2018-06-25作者简介：毕春艳，药师，研究方向：药品质量控制 E-mail: 287539042@退黄保肝胶囊是由赤芍、茵陈、白术、枳壳、栀子、郁金、丹参、金钱草等十五味药组成，有疏肝健脾，清利湿热，利胆退黄的作用，用于急慢性黄疸型肝炎。
测氨基酸含量的方法
测氨基酸含量的方法测氨基酸含量可不是一件简单的事儿呢。
有一种方法是茚三酮显色法。
这就像是一场神奇的化学反应魔法。
茚三酮这种东西就像一个侦探，专门和氨基酸打交道。
当它遇到氨基酸的时候，就会发生反应，然后变色。
我们可以把含有氨基酸的样品和茚三酮放在一起，在一定的条件下，比如说合适的温度、酸碱度这些，让它们充分反应。
反应完了之后，就会出现颜色变化。
然后我们可以用一个仪器，就像一个专门看颜色深浅的眼睛，去测量颜色的深浅程度。
颜色越深，就说明氨基酸的含量越高。
这就好像颜色是氨基酸含量的信号，我们通过解读这个信号来知道氨基酸有多少。
还有高效液相色谱法。
想象一下高效液相色谱仪就像一个超级复杂的赛道。
氨基酸们就像一个个小小的运动员，在这个赛道上奔跑。
我们把样品注射到这个仪器里，然后通过各种设置，比如流动相的选择、流速的控制等等，让氨基酸在赛道上按照不同的速度前进。
最后它们会一个一个地到达终点，被检测出来。
不同的氨基酸在这个过程中会有不同的表现，我们可以根据这些表现来计算出每种氨基酸的含量。
这就像一场精确的赛跑比赛，我们通过观察运动员的成绩来统计数据。
再说说氨基酸自动分析仪法。
这个仪器就像一个专门处理氨基酸的小工厂。
我们把样品送进去，它就会自动地进行一系列的操作。
它里面有各种复杂的部件，就像工厂里的机器一样。
这些部件会把氨基酸分离出来，然后进行检测。
它能非常精确地测量出氨基酸的含量，就像一个经验丰富的工人，能够把工作做得又快又好。
我记得在一个实验室里，他们要检测一种植物里的氨基酸含量。
他们先用茚三酮显色法做了一个初步的检测。
把植物样品处理好之后，和茚三酮混合在一起，然后在特定的温度下反应了一段时间。
等反应结束后，他们用分光光度计去测量颜色的变化。
通过颜色的深浅，他们大概知道了氨基酸的含量范围。
然后他们又用高效液相色谱法进行了更精确的测量。
他们仔细地准备样品，调整仪器的各种参数，让氨基酸在色谱柱里好好地“跑”一趟。
氨基酸的含量测定方法
氨基酸的含量测定方法
氨基酸的含量可以用不同的方法进行测定，以下是其中几种常用的方法：
1. 紫外吸收法（UV法）：氨基酸分子中存在芳香族环和烯烃键，可以吸收紫外光，根据吸收的强度来确定氨基酸的浓度。
2. 高效液相色谱法（HPLC法）：这是一种常用的测定氨基酸含量的方法，通过将样品中的氨基酸溶解后注入液相色谱仪中，利用氨基酸在不同条件下的保留时间和峰面积来测定其含量。
3. 伯里特法：伯里特试剂能与氨基酸发生比色反应，该方法适用于测定含有酪蛋白、皮质素等色泽较重的氨基酸的含量。
4. 显色法：该方法将氨基酸和特定试剂反应，生成显色产物，根据产物的颜色深浅来测定氨基酸含量。
常用的显色试剂有二。
建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量
１ ． ７ ｍ） 柱， 流动相 Ａ 为 ０ ．１ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的醋酸钠溶液 （ 用冰醋酸调整 ｐ Ｈ至６ ． ５ ０）一 乙 腈 （ ９ ３ ： ７）， 流动 相 Ｂ 为 乙腈 一
复方氨基酸胶 囊（ ９ － ５ ） 中 ９种 氨 基 酸 出峰 时
间 与 对 照 品 出峰 时 间 一 致 ， 其他 物 质 无干 扰 ； 仪 器精 密度 Ｒ Ｓ Ｄ 为 ０ ． ５ ％ ～１ ． ２ ％， 中 间 精 密 度 ＲＳ Ｄ为 １ ． ３ ％ ～
析 速 度 明显Βιβλιοθήκη 提 高 。 结 论含量 。
建立的 Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ 法 高效 ， 快速 ， 灵敏 ， 准确 ， 可 用 于 测 定 复 方 氨 基 酸胶 囊 （ ９ － ５ ） 中氨 基 酸 的
［ 关 键词 ］ 异硫氰 酸苯酯 ； 复 方氨基 酸胶 囊 （ ９ － ５ ） ； Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ； 氨基 酸 ； 方 法学验证
（ ２ ． １ ｍｍ × １ ０ ０ ｍｍ ， １ ． ７ ｍ）ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ． Ｔ ｈ ｅ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ Ａ ｗａ ｓ ０ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｌ ｕ ｉ ｔ ｏ ｎ（ ａ ｄ ｊ ｕ ｓ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ
Ｍｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ｅ ｓ （ ９ － ５ ） ｂ ｙ ｅ ｓ —
ｐｏ ｕｎ ｄ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｃ ａ ｐｓ ｕｌ ｅ ｓ ｂｙ ｄ ｅ ｔ ａ ｉ ｌ ｅ ｄ ｉ ｎ ｖｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｃｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐｈ ｉ ｃ ｐａ ｒ ａ ｍｅ ｔ ｅ ｒ ｓ ． Ｍ ｅ ｔ ｈｏ ｄｓ Ｎｉ ｎ ｅ ｋ ｉ ｎ ｄｓ ｏ ｆ ａ ｍ ｉ ｎｏ
HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质
ＨＰＬＣ法测定甘氨酰－Ｌ－谷氨酰胺有关物质目的：建立测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的高效液相色谱法。
方法：采用ODS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（用磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（90∶10）为流动相，流速1.0 ml/min，于225 nm波长处测定。
结果：在本色谱条件下，2种有关物质均能得到较好的分离，且在测定范围内有较好的线性及精密度。
结论：采用HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的方法简便、准确、灵敏度高，方法可靠，可用于甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的测定。
[Abstract] Objective: To establish a HPLC method for determination of two related substances in glycyl-L-glutamine. Methods: The separation was performed with a C18 ODS column (4.6 mm×250 mm, 5μm) ; the mobile phase consisted of 0.05 mol/L sodium dihydrogen phosphate (adjust pH value to 3.0 with phosphoric acid)-methanol(90∶10); the flow rate was 1.0 ml/min; the detection wavelength was set at 225 nm.Results: In this chromatography system, two related substances had a good separation and a good linear relationship over the determination concentrations. Conclusion: This method is simple,accurate,sensitive and applicable for related substances determination of glycyl-L-glutamine.[Key words] Glycyl-L-glutamine; Related substances; HPLC甘氨酰-L-谷氨酰胺为二肽类氨基酸类，是复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中的主要成分之一。
HPLC方法测定甘氨酸的研究方法第三组
HPLC方法测定甘氨酸的研究方法第三组甘氨酸是一种重要的氨基酸，在生物化学和医学研究中有广泛的应用。
为了准确快速地测定甘氨酸的含量，高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析方法。
以下是一种可用于测定甘氨酸含量的HPLC方法的详细步骤。
材料和设备：1.HPLC系统（包括色谱仪、流动相槽、注射器和检测器）2.反相色谱柱（C18柱）3.甘氨酸标准品4.甘氨酸样品5.溶剂：多甲醇、乙腈6.pH2.5磷酸溶液步骤：1.准备样品：将甘氨酸样品溶解在pH2.5的磷酸溶液中，摇匀并过滤以去除杂质。
2.准备标准曲线：取不同浓度的甘氨酸标准品（例如10、20、40、60、80和100μg/mL），分别进行HPLC分析，并绘制标准曲线。
3.准备流动相：将多甲醇和乙腈按照一定比例混合，作为流动相。
4.设置HPLC参数：将色谱柱安装到HPLC系统中，并设置流动相槽的流速和梯度淋洗方案。
典型的梯度方案是以多甲醇和乙腈为流动相，初始时使用多甲醇，然后在一定时间内逐渐增加乙腈的浓度。
5.注射样品：将甘氨酸样品注入HPLC系统的注射器中，设定合适的体积。
6.分析样品：将样品通过色谱柱进行分离和检测，通过检测器测量甘氨酸的峰高度或面积。
7.计算结果：使用标准曲线来计算甘氨酸样品中的含量。
通过峰高度或面积与标准曲线上的相应浓度进行比较，可以计算出甘氨酸的含量。
优化HPLC方法的关键点：1.选择适当的柱：根据需要选择适当的色谱柱，C18柱是常用的反相柱，较好地保留和分离甘氨酸。
2.流动相的选择：根据甘氨酸的性质和溶解度，选择合适的流动相组成。
3.优化分析条件：包括流速、梯度方案和检测器灵敏度等，以获得最佳的分离和检测效果。
4.样品预处理：样品的预处理步骤（如pH调节和过滤）对于获得准确结果至关重要。
总结：HPLC是一种快速、准确、灵敏的方法，可用于测定甘氨酸含量。
根据上述步骤和关键点指导，可以成功地开展甘氨酸的HPLC分析。
同时，建议在进行实验前，对所使用的方法进行验证，以确保方法的准确性和重复性。
高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量
高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，可以用于测定谷氨酰胺的含量。
下面是一种可能的测定方法：
步骤1：制备样品
将待测样品溶解在合适的溶剂中，并进行提取或者过滤处理，以去除杂质。
步骤2：准备标准曲线
准备一系列不同浓度的谷氨酰胺标准溶液，并使用HPLC仪器进行测定。
根据浓度与峰面积的关系绘制标准曲线。
步骤3：样品处理
选取经过处理的样品，如果需要可以进一步稀释。
然后将样品注入HPLC仪器进行测定。
步骤4：HPLC测定
将样品注入HPLC仪器的进样装置中，利用适当的流动相进行梯度洗脱或等温洗脱。
使用适当的检测器检测到谷氨酰胺的峰，记录峰面积。
步骤5：计算样品中谷氨酰胺的含量
根据标准曲线，将样品的峰面积与标准曲线上对应浓度的峰面积进行比对，从而计算出样品中谷氨酰胺的含量。
需要注意的是，具体的测定条件和仪器设置可能因实验室和仪器型号的不同而有所不同，以上只是一种常见的方法。
在实验
中应严格按照仪器使用手册和实验室规程进行操作，并确保仪器的良好维护和校准，以获得准确可靠的结果。
HPLC法测定丙氨酰谷氨酰胺注射液含量分析方法的验证
120
2021 年 6 月
安徽化工 ANHUI CHEMICAL INDUSTRY
Vol.47，No.3 Jun.2021
HPLC 法测定丙氨酰谷氨酰胺注射液含量分析方法的验证
张杰 （蚌埠丰原医药科技发展有限公司，安徽 蚌埠 233000）
摘要：目的：利用 HPLC 法测定丙氨酰谷氨酰胺注射液的含量，并验证该方法的适用性。方法：采用高效液相色谱法测定丙氨酰谷氨酰胺
本文参考 2020 版《中国药典》（二部）[2]中丙氨酰谷 氨酰胺注射液分析方法，并对此方法进行了系统的方法 学验证，符合 2020 版《中国药典》的要求[3]。此方法操作 简单方便，利用对照品外标法对主成分含量进行定量检 测，准确度高，专属性强。
1 验证内容
笔者对此法开展了系统的方法学验证，包括系统适 用性、线性和范围、准确度、精密度、溶液稳定性和耐用 性，验证结果见表 1。
表 1 含量测定方法验证结果
项目
可接受标准
验证结果
系统适用性
主 峰 峰 面 积 的 RSD 不 大 于 2.0% ，保 留 时 RSD不大于1.0%。主峰理论板数不低于3 主峰与杂质Ⅴ分离度不得小于1.5
间的 000，
主峰理论塔板数均大于3 000，主峰峰面积的RSD为0.19%，保留 时间的RSD为0.05%，分离度大于1.5，表明系统适用性良好
线性与范围 Leabharlann 归线的相关系数（r）不得小于0.998
在0.025~0.075 mg/mL（样品浓度50%~150%）范围内线性关系良 好，相关系数r为0.999 97>0.998
准确度
各浓度的平均回收率为98.0%~101.0%，9个回 各浓度的样品回收率为99.27%~100.34%，在要求范围内（98.0%~
HPLC同时测定陇中损伤胶囊中3种皂苷含量
HPLC同时测定陇中损伤胶囊中3种皂苷含量目的建立同时测定陇中损伤胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的高效液相色谱梯度洗脱方法。
方法采用C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相为乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B）；梯度洗脱0～32 min（A 23%～23%），32～42 min（A 23%～30%），42～67 min（A 30%～46%）；检测波长203 nm；流速1.0 mL/min。
结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进样量分别在1.02～8.50 ?g（r=0.999 5）、0.90～7.50 ?g（r=0.999 0）、1.17～9.75 ?g （r=0.999 6）范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为100.98%（RSD=2.71%）、97.73%（RSD=1.98%）、99.57%（RSD=1.62%）。
结论所用方法简单易行、准确可靠，可作为陇中损伤胶囊的质量控制方法。
标签：陇中损伤胶囊；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；含量测定陇中损伤胶囊是甘肃省中医院骨伤科中药注册制剂，主要由三七、乳香、没药等组成，具有活血化瘀、消肿止痛、续筋接骨的作用，临床用于骨折、激素性股骨头坏死、骨质疏松等病症。
三七为方中君药，本研究采用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法同时测定该胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，以建立该制剂的质量控制方法。
1 仪器与试药Waters2695型高效液相色谱仪。
人参皂苷Rg1对照品（批号为110703-200424）、人参皂苷Rb1对照品（批号为110704- 200420）和三七皂苷R1对照品（批号为110745-200617）均购自中国药品生物制品鉴定所；陇中损伤胶囊（甘肃省中医药研究院中药研究所制备，批号20110801、20111201、20110201、20101001）；乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
HPLC法测定谷丙甘氨酸胶囊中3组分含量
HPLC法测定谷丙甘氨酸胶囊中3组分含量
刘悦;房玉兰
【期刊名称】《黑龙江科技信息》
【年(卷),期】2007(000)06S
【摘要】目的：测定谷丙甘氧酸胶囊中谷氧酸、丙氨酸、甘氧酸含量。
方法：采用SS EXSIL ODS（250%＊4．6mm，5μm）色谱柱，0．05mol／L的醋酸钠溶液（pH6．4）：乙腈：水（70：15：5）为流动相的高效液相色谱法。
结果：谷氧酸、丙氨酸、甘氨酸分别在132—308μg，48-112μg，24—56μg范围内线形良好（r=0．9998，0．9997，0．9996）；平均回收率分别为99．8％，99．8％，99．7；RSD分别为0．54％，0．62％，0．72％。
结论：该方法简便快速，适用于谷丙甘氨酸胶囊中3组分含量的测定。
’
【总页数】1页(P163)
【作者】刘悦;房玉兰
【作者单位】哈药集团制药总厂,黑龙江哈尔滨150000
【正文语种】中文
【中图分类】TQ226.36
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HPLC方法测定甘氨酸的研究方法。第三组
结果分析
• 进行为原料所得色谱图较为理想 • 乙腈：磷酸溶液=15:85.弄较好的分离出各
组分，分离效果佳
5
• 配制4％的磷酸溶液并用水系膜进行真空抽 滤；并用超声波清洗仪透气30min
• 样品制备 将适量蓝莓液稀释10倍。100 倍，分别去原液1/10倍液，1/100倍液2ml， 用0.45um有机系滤头过滤，并透气20min
• 仪器准备
3
• ①打开各开关电源及软件 • ②泵排气，排气阀逆时针旋转 180°；按Purge键进行排
气，排气结束后，排气阀顺时针旋转至拧紧为主
• 用软件操作调波长为520nm，并用甲醇：纯净水=20:30， 流速为1.0ml/min，平衡柱子至纯稳定
• 极限稳定后换流动相为乙腈、磷酸溶液，换时注意清洗排 气一次，并将流动相调整为乙腈：磷酸溶液=15:85
• 待机先稳定后，即可进行分析
• 快照：带组分全部流去，分析结束后，将图谱采集并进行 校正面积归一法测定各组分含量
HPLC方法测定蓝莓色素的研究 方法
1
实验参数
• 流动相:磷酸(4％）：乙腈=85:15 流速： 1.0ml/mol
• 检测器：uv=520nm • 柱温：40℃ • 进料量：10ul后调整为20ul • HPLC结束时间：20min
2
Hale Waihona Puke 实验步骤• 400ml乙腈用0.45um有机膜进行真空抽滤； 并用超声波清洗仪透气30min
高效液相色谱法测定氨基酸
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
HPLC测定发酵液中氨基酸的含量
HPLC测定发酵液中氨基酸的含量一、主要试剂及配置方法衍生试剂溶液：0.5％2,4－二硝基氟苯（DNFB）乙醇溶液衍生缓冲溶液的配制：称取衍生缓冲溶液固体组分（NaHCO3）4.2g加入至100mL 容量瓶中，定容并摇匀后备用。
定容缓冲溶液的配制：称取定容缓冲溶液固体组分（磷酸二氢钾）3.4g，加入至500mL容量瓶中，加入0.1mol/LNaOH145.5mL定容。
流动相A的配制：乙腈－水（1：1）：相同体积的乙腈与水混合，超声波脱气10-15min。
流动相B的配制：流动相B固体成分（NaAc）8.2g加水至2000mL，超声波脱气10-15min。
氨基酸标样：每种色谱纯氨基酸标品秤取0.5g，用水溶解后，定容至100mL，配成5g/L的氨基酸标准溶液。
发酵液预处理：用可调微量移液器吸取1.0mL发酵液于1.5mL小离心管中，高速离心（10000r/min，2min）沉淀菌体等固形物。
二、衍生方法准确量取发酵液原液2微升，加入装有0.2mL衍生缓冲溶液的5mL塑料离心管中，然后加入0.1mL衍生试剂溶液，摇匀，注意不要漏液，将塑料离心管置于60℃水浴中暗处恒温加热60min后取出，注意不要让水进入离心管，放置待溶液冷至室温后，加入定容缓冲液0.7mL并摇匀，放置15min后可以开始进行色谱分离。
三、色谱分离条件色谱柱为依利特公司氨基酸分析专用ODS柱或C18柱；检测系统为：紫外检测器，柱温：33℃；采用二元梯度分析，梯度程序如表所示；波长360nm检测；流动相总流量为1mL/min。
流动相梯度时间表序号流量/mL/min 时间/min流动相A/%流动相B/%线性设定备注1 1 0 16 84 Line 初始状态2 1 0.3 16 84 Line3 14 30 70 Line4 1 7 34 66 Line6 1 22 55 45 Line7 1 25 55 45 Line8 1 34 98 2 Line9 10 11384016168484Line 系统开始重新平衡，恢复到初始状态四、计算方法定性和定量方法(1)根据保留时间和紫外吸收谱进行定性分析。
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利用HPLC法测定谷丙甘氨酸胶囊中3组
分含量
作者：苏蕊
来源：《中国科技博览》2015年第31期
[摘要]这里所说的谷丙甘氨酸胶囊，是一种应用于男性前列腺增生疾病中药物，在治疗男性尿频，以及排尿不畅方面疗效显著，这种胶囊属于复方制剂，其成分有三种，分别为：谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸。
文章主要阐述的就是利用HPLC检测法来对这种药物的三种成分含量进行测定。
目的就是为了确定谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸在谷丙甘氨酸胶囊中的具体含量值，实验顺利测得了以上三种成分的具体含量，并证明HPLC检测法是一种操作简便快捷，测量结果准确的测量法，适用于谷丙甘氨酸胶囊中3组分含量的测定。
[关键词]HPLC法；谷丙甘氨酸胶囊；含量
中图分类号：P22 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）31-0375-01
引言
男性前列腺疾病比较常见，并给患者的日常生活带来了诸多不便，谷丙甘氨酸胶囊是治疗那行排尿方便的药物，效果比较明显，而HPLC检测法是利用色谱理论对谷丙甘氨酸胶囊进行成分测定的一种方法，文章首先将这种方法进行了简单的分析，进而对HPLC法测定谷丙甘氨酸胶囊中3组分含量的具体步骤进行了分析和研究。
一、HPLC检测法
色谱理论：色谱法的分离原理是溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相之间的相互作用的大小、强弱不同，样品各组分在固定相与流动相中的溶解各不相同，从而经过固定相时的滞留时间不同，先后从固定相中流出时间各不相同。
高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法
二、仪器与方法
1.仪器：试验所采用的是高效液相色谱仪，它的产地为日本，然后还有电子天平（METTLERAE-240），用来选取药物，确定药物剂量。
2.方法：使用高效液相色谱仪进行测量的方法，叫做高效液相色谱法，通常人们也叫它为高压液相色谱、高速液相色谱以及、近代柱色谱等。
这中药剂成分测定法是建立在色谱法基础
之上的，以液体作为流动相，利用高压输液系统实现对溶剂检测的。
它在单一溶剂以及混合溶剂中均适用，并且在很多领域已经得到了应用，例如：化工、医学、法医检测等，是一项非常重要的分离、分析技术。
三、步骤与结果
1.试验材料
谷丙甘氨酸胶囊，产地为哈药集团制药总厂；谷氨酸对照品，丙氨酸对照品；甘氨酸对照品；2，4-二硝基氟苯；乙腈。
2.试验步骤
2.1色谱条件
采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（SGEODS-2250H4.6mm5μmSN：E05-081），0.05mol/L的醋酸钠缓冲液（pH6.4）：乙腈：水（70：15：5）为流动相，流速为1.0mL/min，进样20μL，检测波长362nm，按外标法以峰面积计算。
2.2溶液的配制
2.2.1对照品溶液的制备
进行精密称定药品时，我们选用的谷氨酸对照品为22mg、丙氨酸对照品8mg、甘氨酸对照品4mg，然后将其装入100mL的量瓶中，倒入0.1mol/L的盐酸对这些药品进行溶解、稀释，溶剂和稀释的过程中要定量进行，直到刻度为止，精密量取10mL置100mL量瓶中，加0.5mol/L的碳酸氢钠溶液（pH9.0）10mL，加1%，2，4-二硝基氟苯乙腈溶液3mL，摇匀，置60℃水浴中暗处加热60min后取出，放冷至室温，加磷酸盐缓冲液（pH7.0）定量稀释至刻度，摇匀。
2.2.2供试品溶液的制备
进行试品溶液制备的时候，我们首先要去药品20粒，然后取出其内部的药物进行充分的融合之后，进行精细称量，取100ml放入量瓶中，而后加入盐酸进行溶解，到达指定刻度时，再次将其摇动，混合，使均匀，精密量取续滤液10mL置100mL量瓶中，加0.5mol/L的碳酸氢钠溶液（pH9.0）10mL，加1%2，4-二硝基氟苯乙腈溶液3mL，摇匀，置60℃水浴中暗处加热60min后取出，放冷至室温，加磷酸盐缓冲液（pH7.0）定量稀释至刻度，摇匀。
2.3系统适用性实验
谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸理论板数分别为13954、10161、9828；各氨基酸洗脱顺序依次为谷氨酸、衍生剂峰、甘氨酸、丙氨酸（分离度依次为13.54、11.58、13.01）
2.4精密度试验
取对照品溶液20μL，反复进样5次，谷氨酸峰面积RSD=0.17%、丙氨酸峰面积
RSD=0.29%、甘氨酸峰面积RSD=0.36%。
2.5线形与范围
精密称定谷氨酸对照品22mg、丙氨酸对照品8mg、甘氨酸对照品4mg置100mL量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶解并定量稀释至刻度，精密量取10mL置50mL量瓶中，加0.5mol/L的碳酸氢钠溶液（pH9.0）10mL，加1%2，4-二硝基氟苯乙腈溶液3mL，摇匀，置60℃水浴中暗处加热60min后取出，放冷至室温，加磷酸盐缓冲液（pH7.0）定量稀释至刻度，摇匀，作为储备液；精密量取上述溶液3、4、5、6、7mL，分别置10mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液
（pH7.0）定量稀释至刻度，摇匀，取20μL注入液相色谱仪，以样品浓度（C）对峰面积（A）回归，谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸分别在132-308μg，48-112μg，24-56μg范围内浓度与峰面积成良好线性关系回归方程如下：
谷氨酸的回归方程：Y=6.794×10-6X+1.098×10-4
丙氨酸的回归方程：Y=3.617×10-6X+1.072×10-4
甘氨酸的回归方程：Y=3.904×10-6X+1.041×10-4
2.6回收率试验
采用加样回收法。
在已知浓度的样品中加入一定量的谷氨酸对照品、丙氨酸对照品、甘氨酸对照品，按2.2.2项中的同法操作，得回收率试验溶液，测得谷氨酸的平均回收率为
99.6%，RSD=0.23%、丙氨酸的平均回收率为99.3%，RSD=0.35%对照品、甘氨酸的平均回收率为99.1%，RSD=0.46%，
2.7批样品含量测定
我们从三批批谷丙甘氨酸胶囊中分别取出20粒，然后取其内部药物，进行均匀混合。
依据2.2.2项的配置进行试品溶液配置，取20μL注入液相色谱仪；另取谷氨酸对照品22mg、丙氨酸对照品8mg、甘氨酸对照品4mg同法测定，按外标法以峰面积计算各重氨基酸。
总之，在我国经济不断发展与进步的形势下，做好药品测定工作，不但能够最限度的满足市场需求，同时是为人民的安全用药服务，本次试验比较成功，证明了HPLC检测法的可行性与可靠性。
结束语
文章介绍了HPLC检测法，实验证明这种测定方法，操作简单，效果好，并且重现性高，在谷丙甘氨酸胶囊中3组分的含量测定中尤为适用。
进行此次试验时，工作人员对于氨基酸的衍生过程做药避光措施，同时要做到时间均匀的振荡，这样才能够是样品与衍生剂充分融合，避免因衍生不完全而导致的含量测定不准确的问题发生。
参考文献
[1]张亚茹，何玉川，张英.高效液相色谱法测定土霉素片的含量[J].实用药物与临床.2014.a
[2]何梅凤，吴伟，钟建文，郭泽莉.高效液相色谱法测定兔房水中泊沙康唑浓度[J].今日药学.2014.
[3]李秀贤，柏丹凤，田金苗，王怡君.HPLC法测定冠心丸中丹酚酸B的含量[J].辽宁中医杂志.2013.。