血琥珀酸检测
琥珀酸亚铁结合益中生血片治疗小儿缺铁性贫血的临床观察
Mod Diagn Treat现代诊断与治疗2020Nov31（21）小儿缺铁性贫血（IDA）是临床上较为常见的血液疾病，临床表现为头晕、神疲体倦、头发枯黄、心慌气短、食欲不振等症状，且外周血红细胞参数显著低于参考值［1］。
该疾病具有发病隐匿、病情复杂等特点，若未及时有效处理，易诱发心衰，影响患儿生长发育。
“补足贮铁、根治病因”是治疗IDA的根本原则，临床上常以口服铁剂为主要手段［2］。
琥珀酸亚铁是抗贫血药，具有补充患儿体内微量元素铁作用，属于常用口服铁剂，但单独使用，临床效果有待提高［3］。
益中生血片即中药制剂，具有益气补血、健脾和胃之效，较适用于气血两虚、脾胃虚弱诱发的贫血[4]。
为此，本研究就小儿IDA红细胞参数及铁代谢指标进行分析，旨在探究两种药物联合应用的价值。
报道如下。
1资料与方法1.1一般资料采用随机数表法将我院儿科2018年11月~2020年2月收治的小儿IDA患儿97例分为对照组48例和观察组49例。
对照组中男26例、女22例；年龄6个月~3岁，平均2.09±0.27岁；贫血程度：轻度14例、中度18例、重度16例。
治疗组中男30例、女19例；年龄7个月～4岁，平均2.25±0.31岁；贫血程度：轻度11例、中度21例、重度17例。
两组一般资料比较，无显著性差异（P>0.05），具有可比性。
1.2纳入与排除标准（1）纳入标准：均符合IDA［5］诊断标准，血红蛋白<100g/L，红细胞血压<30%，转铁蛋白饱和度<20%；医辨证为脾胃虚弱证与气血两虚证[6]者；患儿家属签订知情同意书。
（2）排除标准：合并全身血液疾病、全身免疫性疾病者；精神异常者；对本研究药物过敏体质非缺铁性贫血者；严重基础疾病，如脑、肝、肺等重要脏器存在功能性障碍。
1.3方法两组患儿均根据病因给予治疗，如饮食结构不均衡、摄入不足者，需给予补充新鲜蔬菜、富含铁等食物。
1.3.1对照组给予给予琥珀酸亚铁（生产厂家：湖南九典制药股份有限公司，批准文号：国药准字H20193239）治疗，餐后30min口服，2片/次，3次/天。
琥珀酸亚铁联合复方红衣补血口服液预防妊娠期贫血的临床研究
琥珀酸代谢是治疗缺血再灌注损伤的新靶标
琥珀酸代谢是治疗缺血再灌注损伤的新靶标摘要】缺血再灌注（IR）损伤具有高致死率，高致残率等特点。
最近研究证实mROS的生成与缺血期琥珀酸的蓄积相关。
本文综述柠檬酸循环（CAC）中间体琥珀酸在缺血期蓄积后，如何通过线粒体反向电子传递驱动线粒体复合物Ⅰ促使mROS的生成，造成氧化损伤，从而通过调控琥珀酸的蓄积和代谢，减少mROS 的生成，进而寻找治疗IR损伤的新靶标。
【关键词】IR损伤；琥珀酸蓄积；mROS；线粒体复合物Ⅰ；反向电子传递链【中图分类号】R552 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）07-0006-02Succinate metabolism: A new target for the treatment of ischemia reperfusion injuryLiu Kaili,Liu Kang(Corresponding author).China Pharmaceutical University,Nanjing,Jiangsu 211198,China【Abstract】Ischemia reperfusion (IR) injury is characterized by high mortality and disability.Recent studies have confirmed that mROS production is closely related to succinate accumulation during ischemia.This review focuses on how succinate, the intermediate of citric acid cycle (CAC),drives the formation of mROS through reverse electron transport in mitochondria,resulting in oxidative damage.Thus,by regulating the accumulation and metabolism of succinate, the generation of mROS can be reduced,so as to find new targets for the treatment of IR injury.【Key words】IR injury;Succinate accumulate;mROS;MitochondrialcomplexⅠ ;Reverse electron transport chain当组织的血液供应被阻断数分钟乃至数小时然后恢复其血液供应后，造成IR 损伤[1-2]，因此再灌注的最初几分钟是至关重要的[1，3]。
临床分析实验室检测结果的解读与报告
临床分析实验室检测结果的解读与报告实验室检测结果的解读与报告实验室检测在临床诊断中起着至关重要的作用，它可以帮助医生判断疾病的存在与严重程度，并指导治疗方案的制定。
然而，仅仅获得检测结果是不够的，正确解读和准确报告结果同样重要。
本文将探讨如何正确解读实验室检测结果并撰写准确的报告。
一、解读实验室检测结果解读实验室检测结果首先需要考虑参考范围。
每个实验室都有自己的参考范围，通常以正常人群中的95%或99%置信区间为基准。
根据检测项目的不同，参考范围可以是数字范围、阳性/阴性判定或者结果的分类。
通过将检测结果与相应的参考范围进行对比，可以判断结果是否在正常范围内。
其次，解读实验室检测结果需要考虑结果的变异性。
许多因素，如生物学变异性、方法学变异性和个体差异等，都可以导致结果的变异。
因此，在解读实验室检测结果时，需要注意考虑这些变异性，特别是与参考范围的重叠部分。
如果结果处于参考范围的边缘或超出范围，需要结合临床病史和其他检查结果进行综合分析。
此外，解读实验室检测结果还需要考虑结果的临床意义。
即使结果在正常范围内，也可能存在疾病或异常情况。
相反，即使结果超出正常范围，也不一定意味着存在严重的疾病。
因此，解读结果时必须与临床病史和其他相关信息相结合，进行综合分析和判断。
二、报告实验室检测结果报告实验室检测结果是向医生和患者提供准确和可理解的信息，帮助他们更好地理解和应对疾病。
以下是撰写准确实验室检测结果报告的几个重要步骤：1. 标题：报告应该以简明扼要的标题开始，概括检测结果的主要内容。
例如，“血脂检测报告”或“肿瘤标志物检测结果”。
2. 引言：在报告的开头，简要地介绍患者的基本信息，如姓名、性别、年龄和临床病史等。
可以提供一句话概括患者就诊目的或症状。
3. 检测项目和结果：逐项列出所有进行的检测项目，并在旁边详细记录检测结果。
根据实验室的要求和使用的软件，可以使用表格、图表或编号来呈现结果。
确保结果的准确性和易读性，并注明结果是否在正常范围内或超出范围。
血液常见疾病的实验室检查解读
血液常见疾病的实验室检查解读一、引言在现代医学中，实验室检查是诊断和治疗各种疾病的重要手段之一。
对于血液常见疾病，如贫血、白血病和血栓等，实验室检查起着至关重要的作用。
本文将对血液常见疾病的实验室检查进行解读，并提供相关参考信息。
二、贫血的实验室检查解读1. 血红蛋白测定血红蛋白测定是评估贫血程度的最主要指标之一。
正常成年人的血红蛋白范围为男性130-175g/L，女性120-150g/L。
如果血红蛋白低于正常范围，可能存在贫血。
2. 红细胞计数与平均红细胞容积(MCV)红细胞计数指标显示了单位体积内循环着的红细胞数量。
正常成人男性红细胞计数范围为4.5-5.5 × 10^12/L，女性为3.8-5.0 × 10^12/L。
平均红细胞容积(MCV)用于评估红细胞大小，正常范围为80-100 fL。
贫血时，红细胞计数和MCV可能会异常。
3. 血小板计数与出凝血时间血小板计数用于检查机体的止血功能，正常范围是150-400 × 10^9/L。
当血小板数量过低时，易导致出血倾向性增加。
出凝血时间是用来测定患者的凝血功能状态，延长的出凝血时间可能意味着凝血问题。
三、白血病的实验室检查解读1. 白细胞计数与分类白细胞计数用于评估患者体内白细胞数量的多少。
正常成人白细胞计数范围为4-11 × 10^9/L。
同时，在进行白细胞分析时也需要注意不同种类的白细胞所占比例是否符合正常范围。
2. 骨髓涂片检查骨髓涂片检查可以直接观察到骨髓中不同种类的克隆或非克隆性异常细胞，并通过形态学分析来确定白血病的类型和分期。
3. 白细胞酶学特征某些特定的酶活性测定对于指导白血病的分类和诊断具有重要作用。
例如，酸性磷酸酶（ACP）和组蛋白键酸性琥珀酸酶（NAAE）等。
四、血栓的实验室检查解读1. 凝血功能指标凝血功能指标包括凝血时间、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶原时间（PT）。
妊娠期缺铁性贫血患者口服琥珀酸亚铁治疗的临床研究
妊娠期缺铁性贫血患者口服琥珀酸亚铁治疗的临床研究发布时间：2022-12-30T09:19:48.860Z 来源：《健康世界》2022年20期作者：韩俏[导读] 目的：探究妊娠期缺铁性贫血患者口服琥珀酸亚铁的疗效韩俏吉林市中心医院 132000摘要：目的：探究妊娠期缺铁性贫血患者口服琥珀酸亚铁的疗效。
方法：将近一年本医院收治的妊娠期缺铁性贫血病例，进行系统抽样并随机分组。
其中探究组给予琥珀酸亚铁治疗，而对照组则给予硫酸亚铁治疗。
对两组的实验结果仔细观察并记录分析。
结果：两组病患入组前各项指标无显著差异，而经过两种不同模式的治疗与护理后，探究组的病患RBC（3.86±0.93）1012/L、Hb（115.82±13.33）g/L、SF（52.23±16.64）μg/L均高于对照组的（3.32±0.71）1012/L、（103.35±12.36）g/L、（43.35±13.76）μg/L；探究组病患治疗有效率（93.48%）高于对照组的82.61%；探究组共计发生4例不良反应，占比为8.70%，低于对照组的6例、13.0%；从各项实验数据的结果上能够明显观察到，探究组各项结果均优于对照组。
结论：口服琥珀酸亚铁治疗妊娠期缺铁性贫血的效果显著，能够有效提升病患的治疗效果，改善病患贫血情况，且有效控制不良反应的发生。
此法甚为有效，应值得广泛推广。
关键词：妊娠期；缺铁性贫血；琥珀酸亚铁；临床疗效我科室开展了关于口服琥珀酸亚铁治疗妊娠期缺铁性贫血的临床治疗研究，以下为本次探究的详细分析与报告： 1.资料和方法1.1资料将近两年本医院收治的妊娠期缺铁性贫血病例随机选取92例，作为本次研究的实验对象，年龄在21-36岁之间，平均为（26.52±3.34）岁；孕周分布15-33周，均值为（23.41±2.36）周；贫血程度：轻度44例，中度48例。
血乳酸测定在临床中的应用
G6PD
F-1,6-P
3-P-甘油醛 甘油醛
丙酮酸 乳酸 CoA 柠檬酸 α-酮戊二酸 琥珀酰CoA 琥珀酰CoA
NADPH
R-5-P
乙酰CoA 乙酰CoA 草酰乙酸
琥珀酸
正常人血乳酸浓度为1.0± 正常人血乳酸浓度为1.0±0.5mmol/L 血乳酸浓度增高大于2.5mmol/L，称高乳酸血 血乳酸浓度增高大于2.5mmol/L，称高乳酸血 症；≥5mmol/L，伴代谢性酸中毒诊断乳酸酸 症；≥5mmol/L，伴代谢性酸中毒诊断乳酸酸 中毒。
乳酸代谢
2 经糖异生途径生成葡萄糖和糖元 运动时，肌乳酸大量产生并进入血液，使得血乳 酸的浓度大大升高，激活肝脏和骨骼肌细胞中的糖 异生途径，将大量的乳酸转变成葡萄糖，并且释放 入血液，以补充运动时血糖的消耗；运动结束后， 糖异生途径进一步加强，生成的葡萄糖用于糖元的 合成，用以恢复细胞中的糖元储备。 在糖异生过程中，要吸收大量的H+，因此通过该 在糖异生过程中，要吸收大量的H+，因此通过该 过程可维护人体内环境的酸碱平衡，使机体内环境 重新恢复稳态。
低血容量休克复苏指南(2007) 低血容量休克复苏指南(2007)
低血容量休克的早期诊断对预后至关重要。 然而，近年来，人们已经充分认识到传统诊 断标准的局限性。发现氧代谢与组织灌注指 标对低血容量休克早期诊断有更重要参考价 值。有研究证明血乳酸和碱缺失在低血容量 休克的监测和预后判断中具有重要意义。 推荐意见3 推荐意见3：低血容量休克的早期诊断，应该 重视血乳酸与碱缺失检测（E 重视血乳酸与碱缺失检测（E级）
巴斯德效应(Pastuer effect) 巴斯德效应
——有氧氧化抑制生醇发酵（糖酵解）的现象。 有氧氧化抑制生醇发酵（糖酵解）的现象。 有氧氧化抑制生醇发酵
琥珀酸亚铁治疗孕期缺铁性贫血的疗效
琥珀酸亚铁治疗孕期缺铁性贫血的疗效蒋琳珊【摘要】目的深入分析琥珀酸亚铁治疗孕期缺铁性贫血的效果.方法根据临床资料,筛选出92例缺铁性贫血孕中晚期患者.采取随机分组的方式,将患者分为研究组和对照组,每组各46例.其中研究组对照组饮食条件和日常活动基本相同,而研究组患者在服用正常药物后需要另外服用琥珀酸亚铁.研究人员对两组患者的体征、疗效以及血液指标等进行监测.结果利用统计学理论对研究数据进行处理,发现研究组和对照组患者血液指标在治疗前差异无统计学意义(P＞ 0.05);而两组患者在治疗后血液各项指标差异有统计学意义(P＜0.05);两组患者治疗前后的血清铁蛋白间的差异有统计学意义(P＜0.05).并且通过对两组患者临床治疗效果进行分析,发现研究组疗效(95.65％)远优于对照组(65.22％),差异有统计学意义(P＜ 0.05).结论目前治疗孕中晚期贫血最佳的药物为琥珀酸亚铁,具有较大的临床应用价值.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2018(008)016【总页数】3页(P46-48)【关键词】琥珀酸亚铁;孕中晚期;缺铁性贫血;血红蛋白【作者】蒋琳珊【作者单位】江苏省常州市中医医院产科,江苏常州213003【正文语种】中文【中图分类】R714.254通常情况下，怀孕和处于哺乳期的妇女为缺铁性贫血，因此如果没有得到有效治疗，就会对胎儿和母亲造成一定的影响。
具体表现为：早产、流产、难产以及胎盘早剥等[1-2]。
因为孕中晚期贫血患者处于孕期的用药需要进行监控，因此常通过调节患者的饮食结构，给予饮食指导进行治疗，但相关研究发现，这一方法虽有效的缓解患者的临床症状，但疗效不够理想[3-4]。
因此，本文对在饮食指导的基础上应用琥珀酸亚铁治疗的疗效进行探究，发现效果不错，且孕中晚期贫血患者可服用，现报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料结合临床资料，将我院2016年10月～2017年10月期间的92名患者作为研究对象，采取随机抽取编号的方式，将其分为对照组和研究组。
琥珀酸通过活性氧途径诱导人脐静脉内皮细胞焦亡
[收稿日期]㊀2020-08-28[修回日期]㊀2020-10-27[基金项目]㊀国家自然科学基金(31670962,81370378);湖南省卫健委临床重大专项(20200011-1003);湖南省大学生创新创业训练计划项目(S201910555137)[作者简介]㊀章舒蕾,硕士研究生,研究方向为动脉粥样硬化病因发病学与防治基础,E-mail 为1029645492@㊂通信作者危当恒,博士,教授,博士研究生导师,研究方向为动脉粥样硬化病因发病学与防治基础,E-mail 为759353094@㊂㊃实验研究㊃[文章编号]㊀1007-3949(2021)29-01-0042-06琥珀酸通过活性氧途径诱导人脐静脉内皮细胞焦亡章舒蕾,梁亚敏,罗涔方,危当恒(南华大学心血管疾病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省动脉硬化性疾病国际科技创新合作基地,湖南省衡阳市421001)[关键词]㊀琥珀酸;㊀人脐静脉内皮细胞;㊀线粒体;㊀活性氧;㊀焦亡;㊀动脉粥样硬化[摘㊀要]㊀目的㊀探讨琥珀酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC )焦亡的影响及其调控机制㊂方法㊀用琥珀酸类似物琥珀酸二乙酯(DS )处理HUVEC 24h ,比色法检测细胞内琥珀酸含量,Western blot 检测细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)㊁白细胞介素1β(IL-1β)㊁IL-18㊁NOD 样受体蛋白3(NLRP3)㊁消皮素D N 端(GSDMD-N )的含量;ATP 测定试剂盒以及活性氧(ROS )荧光探针分别检测琥珀酸对HUVEC 的ATP 以及ROS 生成的影响㊂ROS 清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC )检测ROS 在琥珀酸诱导HUVEC 焦亡中的作用㊂琥珀酸氧化抑制剂丙二酸二甲酯(DMM )检测琥珀酸氧化代谢对ROS 产生的影响㊂结果㊀DS 促HUVEC 内琥珀酸蓄积,上调焦亡相关蛋白Caspase-1㊁IL-1β㊁IL-18㊁GSDMD-N 和NLRP3的表达,抑制ATP 生成并上调ROS 产生㊂NAC 抑制琥珀酸诱导的ROS 生成,并下调上述焦亡相关蛋白的表达㊂DMM 下调琥珀酸诱导的ROS 产生以及HUVEC 的焦亡㊂结论㊀琥珀酸通过氧化代谢上调ROS 生成,进而促进HUVEC 焦亡㊂[中图分类号]㊀R54[文献标识码]㊀ASuccinate induces pyroptosis of human umbilical vein endothelial cells via reactive ox-ygen species pathwayZHANG Shulei,LIANG Yamin,LUO Cenfang,WEI Dangheng(Institute of Cardiovascular Disease &Key Laboratory for Arteriosclerology of Hunan Province &Hunan International Scientif-ic and Technological Cooperation Base of Arteriosclerotic Disease ,Hengyang Medical College ,University of South China ,Hengyang ,Hunan 421001,China )[KEY WORDS ]㊀succinate;㊀human umbilical vein endothelial cell;㊀mitochondria;㊀reactive oxygen species;㊀py-roptosis;㊀atherosclerosis[ABSTRACT ]㊀㊀Aim ㊀To investigate the effect of succinate on pyroptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC)and its regulatory mechanism.㊀㊀Methods ㊀HUVECs were treated with succinate analogue diethyl succinate (DS)for 24h,and the content of succinate was detected by colorimetry.㊀Western blot was used to detect the expressions of pyroptosis-related protein cysteinyl aspartate specific proteinase 1(Caspase-1),interleukin-1β(IL-1β),IL-18,NOD-like receptor protein 3(NLRP3),gasdermin D N termine (GSDMD-N).㊀The effects of succinate on ATP and reactive oxygen species (ROS)production of HUVEC were detected by ATP assay kit and ROS fluorescent probe.㊀ROS scavenger N-acetylcysteine (NAC)was used to observe the role of ROS in HUVEC pyroptosis induced by succinate.㊀Dimethyl mal-onate (DMM),a succinate oxidation inhibitor,was used to detect the effect of succinate oxidative metabolism on ROS pro-duction.㊀㊀Results ㊀DS promoted the accumulation of succinate in HUVEC,up-regulated the expressions of pyroptosis-related proteins Caspase-1,IL-1β,IL-18,GSDMD-N and NLRP3,inhibited ATP production and up-regulated ROS pro-duction.㊀NAC inhibited the production of ROS induced by succinate and down-regulated the expressions of above pyropto-sis-related proteins.㊀DMM down-regulated succinate-induced ROS production and HUVEC pyroptosis.㊀㊀Conclusion ㊀Succinate up-regulates ROS production through oxidative metabolism,thus promoting HUVEC pyroptosis.㊀㊀动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)为慢性炎症性病理过程,血管内皮细胞炎性活化为As发生发展过程的重要环节[1]㊂近来的研究发现,三羧酸循环中间体及其衍生物通过 非能量代谢途径 调控细胞功能并参与As的发生发展进程[2]㊂琥珀酸为三羧酸循环重要的中间代谢产物,其促进炎症因子的释放以及血管内皮细胞的损伤[3]㊂琥珀酸上调小鼠骨髓来源的树突状细胞白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达[4]㊂高糖通过琥珀酸/G蛋白偶联受体91(G-protein coupled receptor 91,GPR91)信号促进血管紧张素Ⅱ释放,损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)[5]㊂Koenis等[6]发现Nur77敲除促As病变,该模型小鼠血清琥珀酸水平明显增加,并且Nur77-/-的巨噬细胞中琥珀酸大量积蓄,但琥珀酸积蓄与血管内皮细胞炎性活化间关系尚不清楚㊂血管内皮细胞焦亡(炎性㊁程序性细胞死亡)发生于As进程,并与As的稳定性密切相关[7]㊂在焦亡过程中,Nod样受体蛋白3(NOD-like receptor pro-tein3,NLRP3)炎性小体被活化,半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase1,Caspase-1)前体蛋白被激活,并介导IL-1β和IL-18的加工和成熟㊁活化及裂解消皮素D (gasdermin D,GSDMD)㊂此外,Pro-Caspase-1还能直接裂解GSDMD触发焦亡,参与血管内皮细胞的损伤以及炎性活化[8-9]㊂活性氧(reactive oxygen species,ROS)是细胞焦亡重要的诱导分子,Koenis 等[6]发现琥珀酸大量蓄积的Nur77-/-巨噬细胞伴随有大量的ROS产生㊂因此,本文采用外源性的琥珀酸类似物观察琥珀酸对血管内皮细胞ROS产生以及焦亡的影响,以探讨琥珀酸对血管内皮细胞炎性活化的影响及其机制㊂1㊀材料和方法1.1㊀细胞株与试剂HUVEC购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所,琥珀酸二乙酯(diethyl succinate, DS)㊁丙二酸二甲酯(dimethyl malonate,DMM)㊁N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)购自TCI(上海)化成工业发展有限公司,琥珀酸比色测定试剂盒购自美国Sigma-Aldrich公司,DMEM高糖培养基㊁胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自美国Gibco公司,ATP测定试剂盒购自中国南京建成生物工程研究所,ROS检测荧光探针二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)购自江苏凯基生物技术股份有限公司,BCA蛋白定量试剂盒购自中国上海康为世纪生物科技有限公司,消皮素D N端(GSDMD-N)㊁IL-1β㊁GAPDH㊁Caspase-1㊁NLRP3抗体购自美国Proteintech公司,IL-18抗体购买于美国GeneTex 公司㊂1.2㊀HUVEC培养与处理HUVEC采用含10%FBS的DMEM高糖培养基培养,加入琥珀酸类似物DS(可显著增加胞质和线粒体基质中的琥珀酸),DS的终浓度为10mmol/L;2.5mmol/L NAC预处理3h后加入DS处理24h,观察ROS对DS诱导的血管内皮细胞焦亡的影响; DMM预处理6h后加入DS处理24h,观察琥珀酸氧化代谢途径对血管内皮细胞ROS产生以及焦亡的影响,DMM的浓度10mmol/L㊂1.3㊀BCA蛋白定量法按照说明书处理样品,用酶标仪在562nm波长处测定并记录吸光度,根据标准曲线计算样品中蛋白浓度㊂1.4㊀ATP含量测定将收集好的细胞加入90~100ħ双蒸水,置于热水浴(90~100ħ)中将其匀浆破碎,后将细胞悬液于沸水浴中加热10min,取出细胞悬液用1mL移液枪混匀1min㊂然后按照说明书加试剂,最后混匀,常温静置5min㊂检测波长为636nm,光径为0.5cm,双蒸水调零,测定各管吸光度值,保存并分析结果㊂1.5㊀ROS荧光探针DHE检测从培养箱中取出处理好的细胞,用PBS洗3次㊂加入终浓度为50μmol/L的DHE液,在37ħ水浴箱避光条件下孵育45min,PBS清洗细胞3次,每次6min㊂荧光显微镜拍照,保存并分析结果㊂1.6㊀Western blot检测蛋白的表达收集细胞,使用预冷的PBS洗3次,加入裂解液后4ħ静置30min,12000r/min离心10min,取上清后采用BCA法进行蛋白定量㊂目的蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分离并转移至PVDF膜上,5%脱脂牛奶室温封闭2h,加入单克隆抗体GSDMD (1ʒ1000)㊁IL-1β(1ʒ1000)㊁IL-18(1ʒ1000)㊁Caspase-1(1ʒ1000)㊁NLRP3(1ʒ1000)㊁GAPDH (1ʒ2000)4ħ孵育过夜,TBST洗3次,每次10 min,相应二抗室温孵育2h,ECL发光试剂显色,拍照并保存结果㊂1.7㊀琥珀酸含量测定收集细胞,在冰中快速匀浆,加入100μL低温琥珀酸测定缓冲液,以10000r /min 离心10min ,收集上清液㊂采用琥珀酸比色测定试剂盒,加入各反应物,在37ħ下避光孵育30min ,450nm 波长处测定吸光度㊂1.8㊀统计学方法所有实验数据均用x ʃs 表示,运用Image ProPlus ㊁GraphPad Prism 5统计软件进行数据分析,组间比较采用方差分析及t 检验,P <0.05表示差异具有统计学意义㊂2㊀结㊀果2.1㊀琥珀酸促HUVEC 焦亡㊀㊀为了探讨琥珀酸对血管内皮细胞焦亡的影响,首先观察了琥珀酸的类似物DS 处理24h 后血管内皮细胞内琥珀酸含量,结果显示DS 明显增加血管内皮细胞内琥珀酸含量(图1A)㊂然后Western blot 检测了DS 对血管内皮细胞焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18以及IL-1β蛋白表达的影响,结果表明DS 上调NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18以及IL-1β的表达(图1B)㊂这些结果表明细胞内琥珀酸蓄积促焦亡㊂2.2㊀琥珀酸抑制HUVEC 的ATP 生成线粒体是细胞的能量工厂,ATP 是维持机体正常生理活动的重要物质㊂ATP 含量检测的结果表明DS 抑制ATP 生成(图2)㊂图1.琥珀酸促HUVEC 焦亡(n =3)A 为DS 促HUVEC 内琥珀酸蓄积;B 为DS 处理HUVEC 24h,Western blot 检测焦亡相关蛋白NLRP3㊁Caspase-1㊁GSDMD-N㊁IL-18以及IL-1β的表达㊂a 为P <0.05,b 为P <0.01,与Control 组比较㊂Figure 1.HUVEC pyroptosis promoted by succinate (n =3)图2.琥珀酸对HUVEC 线粒体ATP 生成的影响(n =3)a 为P <0.01,与Control 组比较㊂Figure 2.Effect of succinate on mitochondrial ATPproduction in HUVEC (n =3)2.3㊀琥珀酸增加HUVEC 的ROS 水平随后,我们采用荧光探针检测琥珀酸对ROS 的影响,结果表明DS 显著增加HUVEC 的ROS 水平(图3)㊂图3.琥珀酸增加HUVEC 的ROS 水平Figure 3.Succinate promoted the generation ofROS in HUVEC2.4㊀ROS 清除剂NAC 抑制琥珀酸诱导的HUVEC 焦亡为了探讨ROS 在琥珀酸诱导血管内皮细胞焦亡中的作用,我们采用ROS 清除剂NAC(2.5mmol /L)预处理血管内皮细胞3h,再DS 孵育HUVEC,结果表明NAC 预处理抑制琥珀酸诱导的ROS 积聚(图4A),并且抑制琥珀酸诱导的焦亡相关蛋白表达(图4B)㊂图4.NAC 抑制琥珀酸诱导的HUVEC 焦亡(n =3)A 为NAC 预处理3h 减少琥珀酸诱导的线粒体ROS 含量;B 为NAC 减少焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18和IL-1β的含量㊂a 为P <0.05,与Control 组比较;b 为P <0.05,与DS 组比较㊂Figure 4.NAC inhibited HUVEC pyroptosis induced by succinate (n =3)2.5㊀琥珀酸氧化抑制剂DMM 抑制琥珀酸诱导的HUVEC 焦亡为了进一步探讨琥珀酸促ROS 生成的机制,我们采用琥珀酸氧化抑制剂DMM(10mmol /L)抑制琥珀酸的氧化㊂结果表明DMM 减少血管内皮细胞中ROS 的积聚(图5A),焦亡相关蛋白NLRP3㊁GS-DMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18以及IL-1β表达水平降低(图5B),这些结果表明琥珀酸氧化促进ROS 的生成进而促HUVEC 焦亡㊂3㊀讨㊀论琥珀酸是三羧酸循环中间产物,由琥珀酰辅酶A 合成酶催化生成㊂研究发现,琥珀酸通过非能量代谢底物途径参与多种生理和病理过程㊂琥珀酸上调心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽和p-Akt /t-Akt 的水平,参与右心室肥厚的形成[10];肿瘤组织琥珀酸/GPR91信号靶向PI3K-HIF-1α轴介导肿瘤相关巨噬细胞极化和肿瘤转移[11]㊂琥珀酸通过HIF-1α/VEGF 轴诱导类风湿关节炎滑膜血管生成[12]㊂我们的研究发现琥珀酸上调血管内皮细胞焦亡标记物的表达,提示细胞内的琥珀酸蓄积促进焦亡㊂焦亡是一种新发现的促炎性㊁程序性细胞死亡方式,在经典的Caspase-1依赖性焦亡通路中,活化的NLRP3促前体Caspase-1成熟,进而剪切IL-18㊁IL-1β和GSDMD,介导细胞焦亡㊂Wu 等[13]发现尼古丁引起血管内皮细胞损伤并诱发焦亡;阿托伐他汀通过lncRNA NEXN-AS1/NEXN 通路抑制血管内皮细胞焦亡,以非降脂途径保护血管内皮细胞功能[14]㊂我们的结果表明,琥珀酸促血管内皮细胞焦亡,提示琥珀酸可能通过焦亡途径引起血管内皮细胞损伤以及炎症活化㊂ROS 是细胞焦亡重要的激活分子,介导氧化低图5.DMM抑制琥珀酸诱导的HUVEC焦亡(n=3)A为DMM抑制琥珀酸诱导的ROS产生;B为DMM减少琥珀酸诱导的焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18和IL-1β的含量㊂a为P<0.05,与Control组比较;b为P<0.05,与DS组比较㊂Figure5.DMM inhibited HUVEC pyroptosis induced by succinate(n=3)密度脂蛋白处理的HUVEC焦亡[15];肠道菌群代谢产物氧化三甲胺通过激活ROS-TXNIP-NLRP3炎症小体轴诱导炎症和内皮功能损伤[16]㊂我们的结果表明琥珀酸类似物DS增加了血管内皮细胞ROS含量,ROS清除剂NAC可降低细胞内ROS含量并下调琥珀酸诱导的血管内皮细胞焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-1β和IL-18的表达,表明琥珀酸通过ROS途径促血管内皮细胞焦亡㊂细胞内ROS来源于呼吸链以及底物的氧化代谢[17]㊂Li等[18]发现DMM抑制腹膜炎小鼠肿瘤坏死因子的分泌和ROS的产生㊂在本研究中我们采用琥珀酸脱氢酶抑制剂DMM观察琥珀酸氧化代谢对ROS生成的影响,结果发现DMM明显减少ROS 的产生及焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-1β和IL-18的表达,表明细胞内琥珀酸通过氧化途径增加ROS的生成和蓄积并促焦亡发生㊂多位学者研究发现琥珀酸脱氢酶抑制剂DMM通过抑制琥珀酸的氧化代谢改善缺血后再灌注时心㊁脑㊁肾组织损伤[19-21];Mills等[22]发现DMM抑制脂多糖诱导的IL-1β的产生,抑制炎症反应,提示通过抑制琥珀酸的氧化代谢可以抑制血管内皮细胞焦亡并保护血管内皮细胞功能㊂综上所述,琥珀酸通过氧化代谢途径增加ROS 的生成,促血管内皮细胞焦亡,但琥珀酸在As发生㊁发展中的作用有待于进一步的探讨和验证㊂[参考文献][1]李苗,王丽丽,常冰梅.血管内皮细胞功能损伤机制的研究进展[J].中国动脉硬化杂志,2019,27(8): 730-736.[2]Martinez-Reyes I,Chandel NS.Mitochondrial TCA cycle metabolites control physiology and disease[J].Nat Com-mun,2020,11(1):102.[3]Mills E,O N eill LA.Succinate:a metabolic signal in in-flammation[J].Trends Cell Biol,2014,24(5):313-320.[4]Tannahill GM,Curtis AM,Adamik J,et al.Succinate is an inflammatory signal that induces IL-1beta through HIF-1alpha[J].Nature,2013,496(7444):238-242.[5]Peti-Peterdi J.High glucose and renin release:the role of succinate and GPR91[J].Kidney Int,2010,78(12): 1214-1217.[6]Koenis DS,Medzikovic L,van Loenen PB,et al.Nuclear receptor Nur77limits the macrophage inflammatory response through transcriptional reprogramming of mitochondrial me-tabolism[J].Cell Rep,2018,24(8):2127-2140. [7]Xu YJ,Zheng L,Hu YW,et al.Pyroptosis and its rela-tionship to atherosclerosis[J].Clin Chim Acta,2018, 476:28-37.[8]He Y,Hara H,Nunez G.Mechanism and regulation of NLRP3inflammasome activation[J].Trends Biochem Sci, 2016,41(12):1012-1021.[9]Xi H,Zhang Y,Xu Y,et al.Caspase-1inflammasome acti-vation mediates homocysteine-induced pyrop-apoptosis in en-dothelial cells[J].Circ Res,2016,118(10):1525-1539.[10]Yang L,Yu D,Mo R,et al.The succinate receptor GPR91is involved in pressure overload-induced ventricular hypertro-phy[J].PLoS One,2016,11(1):e0147597. [11]Wu JY,Huang TW,Hsieh YT,et al.Cancer-derivedsuccinate promotes macrophage polarization and cancer metastasis via succinate receptor[J].Mol Cell,2020,77(2):213-227.[12]Li Y,Liu Y,Wang C,et al.Succinate induces synovialangiogenesis in rheumatoid arthritis through metabolic re-modeling and HIF-1alpha/VEGF axis[J].Free Radic Biol Med,2018,126:1-14.[13]Wu X,Zhang H,Qi W,et al.Nicotine promotes athero-sclerosis via ROS-NLRP3-mediated endothelial cell pyrop-tosis[J].Cell Death Dis,2018,9(2):171. [14]Wu LM,Wu SG,Chen F,et al.Atorvastatin inhibits py-roptosis through the lncRNA NEXN-AS1/NEXN pathway in human vascular endothelial cells[J].Atherosclerosis,2020,293:26-34.[15]Zeng Z,Chen J,Wu P,et al.Ox-LDL induces vascularendothelial cell pyroptosis through miR-125a-5p/TET2pathway[J].J Cell Physiol,2019,234(5):7475-7491.[16]Wu P,Chen J,Chen J,et al.Trimethylamine N-oxidepromotes ApoE-/-mice atherosclerosis by inducing vascular endothelial cell pyroptosis via the SDHB/ROS pathway [J].J Cell Physiol,2020,235(10):6582-6591. [17]Jardim-Messeder D,Caverzan A,Rauber R,et al.Succi-nate dehydrogenase(mitochondrial complex II)is a source of reactive oxygen species in plants and regulates development and stress responses[J].New Phytol,2015, 208(3):776-789.[18]Li Y,Jia A,Wang Y,et al.Immune effects of glycolysisor oxidative phosphorylation metabolic pathway in protecting against bacterial infection[J].J Cell Physiol,2019,234(11):20298-20309.[19]Beach TE,Prag HA,Pala L,et al.Targeting succinatedehydrogenase with malonate ester prodrugs decreases renal ischemia reperfusion injury[J].Redox Biol,2020, 36:101640.[20]Kula-Alwar D,Prag HA,Krieg T.Targeting succinate me-tabolism in ischemia/reperfusion injury[J].Circulation, 2019,140(24):1968-1970.[21]Zhang J,Wang YT,Miller JH,et al.Accumulation ofsuccinate in cardiac ischemia primarily occurs via canonical Krebs cycle activity[J].Cell Rep,2018,23(9): 2617-2628.[22]Mills EL,Kelly B,Logan A,et al.Succinate dehydro-genase supports metabolic repurposing of mitochondria to drive inflammatory macrophages[J].Cell,2016,167(2):457-470.(此文编辑㊀曾学清)。
琥珀酸亚铁片对妊娠合并缺铁性贫血的疗效及血红蛋白、红细胞、血清铁蛋白的影响
琥珀酸亚铁片对妊娠合并缺铁性贫血的疗效及血红蛋白、红细胞、血清铁蛋白的影响徐谟燕;柴竟竟【摘要】目的：观察琥珀酸亚铁片对妊娠合并缺铁性贫血( IDA)的治疗效果及其对血红蛋白( Hb)、红细胞( RBC)、血清铁蛋白( SF)的影响。
方法选择我院2011年1月至2012年12月的妊娠合并缺铁性贫血患者120例(均符合入选标准),其中轻度贫血107例,中度贫血13例,重度贫血0例,给患者口服琥珀酸亚铁片,1~2片/次,3次/d。
分别测定治疗前后孕妇的Hb、RBC和SF,观察并记录实验过程中出现的不良反应,评价药物的安全性。
结果120例妊娠合并缺铁性贫血患者39例痊愈,57例显效,22例有效,2例无效,总有效率为98．3%。
治疗后Hb、RBC和SF 与治疗前比较差异有统计学意义(P<0．01)。
治疗过程中部分患者出现轻微的不良反应,均未影响治疗效果。
结论琥珀酸亚铁片对妊娠合并缺铁性贫血有显著的治疗效果,能明显提高妊娠合并缺铁性贫血患者的Hb、RBC和SF。
%Objective To study the therapeutic effect of ferrous succinate tablets on iron deficiency anemia ( IDA) during pregnancy and impact on hemoglobin ( Hb) ,red blood cell ( RBC) ,serum ferritin ( SF) . Methods 120 IDA patients during pregnancy from January 2011 to December 2012 in our hospital were selected,there were 107 cases of mild anemia,13 cases of moderate anemia,no severe anemia. All patients were given oral ferrous succinate tablets 1~2 tables once,3 times a day. Hb,RBC and SF levels before and after treatment were measured. The adverse reactions during the experiment were observed and recorded,and the drug safety was evaluated. Results There were 39 cases cured,57 cases markedlyeffective,22 cases effective in the 120 cases of pregnant women with IDA after taking ferrous succinate tablets,only two cases invalid. The total effective rate was 98. 3%. HB,RBC,SF were significantly increased after treatment than before treatment (P<0. 01). In addition,patients during the treatment although had some mild side effects,but it did not affect the treatment effect. Conclusion Ferrous succinate tablets has a significant therapeutic effect on iron deficiency anemia during pregnancy,and it can improve pregnancy IDA with HB,RBC,SF levels signifi-cantly.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】3页(P634-635,636)【关键词】琥珀酸亚铁片;妊娠;缺铁性贫血【作者】徐谟燕;柴竟竟【作者单位】浙江省常山县妇幼保健院妇产科，浙江324200;浙江省常山县妇幼保健院妇产科，浙江324200【正文语种】中文1 资料与方法1.1 一般资料选择我院2011年1月至2012年12月妊娠合并缺铁性贫血(Iron deficiency anemia,IDA)的患者120例，其中轻度贫血107例，中度贫血13例，重度贫血0例，给患者口服琥珀酸亚铁片，饭后立即服用，可减轻胃肠道局部刺激[1]。
HPLC法测定琥珀酸美托洛尔的有关物质
㊃388 ㊃J o u r n a l o f H e n a n U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e )2020,39(6)文章编号:1672-7606(2020)06-0388-03H P L C 法测定琥珀酸美托洛尔的有关物质许笑笑1,孙 琳21.邓州市中心医院药械科,河南邓州474150;2.郑州大学第三附属医院,郑州450000摘 要: 目的 建立琥珀酸美托洛尔有关物质的H P L C 测定方法㊂ 方法 色谱柱为C 18(150mmˑ4.6mm ,5μm );流动相:醋酸铵3.9g ,用810m L 水溶解,加三乙胺2m L ㊁冰醋酸10m L ㊁磷酸3m L 和乙腈146m L ,混合均匀;流速:1.0m L ㊃m i n -1;柱温:25ħ;检测波长:280n m ;进样量:20μL ㊂结果 琥珀酸美托洛尔主峰与杂质A 分离度大于8,与其他杂质分离度符合规定;精密度试验结果R S D 为1.35%;最低检出浓度为0.2μg㊃m L -1(供试品溶液浓度的0.01%);供试品溶液在24h 内稳定㊂结论 该方法简便㊁准确㊁可靠,能满足琥珀酸美托洛尔有关物质的限度检测要求㊂关键词:琥珀酸美托洛尔;有关物质;H P L C中图分类号:R 927.2 文献标志码:A收稿日期:2020-06-11作者简介:许笑笑(1989-),女,硕士,主治医师㊂研究方向:天然活性成分研究及药物开发㊂D e t e r m i n a t i o n o f t h e r e l a t e d s u b s t a n c e s o f M e t o p r o l o l S u c c i n a t e b y HP L C X U X i a o x i a o 1 S U N L i n21 D e n g z h o u C e n t r a l H o s p i t a l D e n g z h o u 474150 C h i n a2 T h e T h i r d A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f Z h e n g z h o u U n i v e r s i t y Z h e n gz h o u 45000 C h i n a A b s t r a c t O b je c t i v e T o e s t a b l i s h H P L C m e t h o d t o d e t e r m i n e t h e r e l a t e d s u b s t a n c e s of M e t o p r o l o l S u c c i n a t e M e t h o d s C 18c o l u m n 150mmˑ4 6mm 5μma mm o n i u m a c e t a t eb u f f e r s o l u t i o n 3 9g ac e t i c a mm o n i ad i s s o l ve d i n 810m L w a t e r w i t h a n a d d i t i o n of 2 0m L t r i e t h y l a m i n e 10 0m L a c e t i c a c i d 3 0m L p h o s ph o r i c a c i d a d d e d 146m L a c e t o n i t r i l e a s m o b i l e p h a s e T h e f l o w r a t e w a s 1 0m L m i n -1T h e c o l u m n t e m p e r a t u r e w a s k e pt a t 25ħa n d t h e d e t e c t i o n w a v e l e n g t h w a s 280n m T h e s a m p l e s i z e w a s 20μL R e s u l t s T h e d e g r e e o f s e p a r a t i o n o f M e t o p r o l o l S u c c i n a t e a n d i m p u r i t y A p e a k s w a s g r e a t e r t h a n 8 t h e d e g r e e o f s e p a r a t i o n o f M e t o p r o l o l S u c c i n a t e a n d o t h e r i m p u r i t yp e a k s m e t t h e r e q u i r e m e n t s T h e p r e c i s i o n r e s u l t s R S D w a s 1 35% T h e d e t e c t i o n l i m i t w a s 0 2μgm L -1T h e s o l u t i o n w a s s t a b l e i n 24h C o n c l u s i o n T h e m e t h o d i s s i m pl e a c c u r a t e a n d r e l i a b l e f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f r e l a t e d s u b s t a n c e s o f M e t o pr o l o l S u c c i n a t e K e y wo r d s m e t o p r o l o l s u c c i n a t e r e l a t e d s u b s t a n c e s H P L C 琥珀酸美托洛尔为选择性β1受体阻滞剂,用于治疗高血压㊁冠心病㊁慢性心力衰竭和心律失常[1]㊂琥珀酸美托洛尔及其制剂在美国药典(U S P 34)和英国药典(E P 2011)[2-3]均有收载,我国药典暂未收载㊂我们参照英国药典(E P 2011)琥珀酸美托洛尔有关物质H P L C项下的方法,建立琥珀酸美托洛尔有关物质的H P L C 检测方法,并参照中国药典‘药品标准分析方法验证指导原则“[4]对本方法进行了验证㊂1 仪器与试剂A gi l e n t 1260高效液相色谱仪,A L 204电子分析天平㊂琥珀酸美托洛尔原料(自制),琥珀酸美托洛尔2020,39(6)河南大学学报(医学版)㊃389㊃杂质A(008E15)㊂乙腈㊁三乙胺为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯㊂2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:Z O R B O X-C18,150mmˑ4.6mm,5μm;流动相:醋酸铵3.9g,用810m L水溶解,加三乙胺2m L㊁冰醋酸10m L㊁磷酸3m L和乙腈146m L,混合均匀;流速:1.0m L㊃m i n-1;柱温:25ħ;检测波长:280n m;进样量:20μL㊂2.2溶液的制备2.2.1供试品溶液的制备取琥珀酸美托洛尔20m g,置10m L量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂2.2.2对照溶液a的制备取琥珀酸美托洛尔5m g㊁琥珀酸美托洛尔杂质A3m g,置100m L量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂2.2.3对照溶液b的制备精密量取供试品溶液1.0m L,置100m L量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀;精密量取1.0m L,置10m L量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂2.2.4对照溶液c的制备取琥珀酸美托洛尔10m g,置10m L量瓶中,用0.1m o l㊃L-1盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀;将该溶液放置254n m波长的紫外灯下照射6h;精密量取1.0m L,置50m L量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂如果供试品溶液中出现一个峰面积较对照溶液b峰面积大的且出峰时间为对照溶液b主峰0.3倍保留时间的峰,进样对照溶液c,该溶液仅用于鉴定杂质C的峰㊂2.2.5计算公式杂质C=供试品溶液中杂质C峰面积ˑ0.1对照溶液主峰面积ˑ1000ˑ100%,其他单杂=供试品溶液中单个杂质峰面积对照溶液主峰面积ˑ1000ˑ100%,总杂=供试品溶液中所有杂质含量的总和㊂2.3方法学考察2.3.1系统适用性按2.1项下色谱条件,量取对照溶液a20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂杂质A与主峰分离度为8.85㊂2.3.2专属性1)空白试验㊂取流动相20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂2)杂质C定位㊂量取对照溶液c20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂3)降解试验㊂采用强酸(加6m o l㊃L-1盐酸0.5m L,60ħ水浴加热2h)㊁强碱(加6m o l㊃L-1氢氧化钠0.5m L,60ħ水浴加热2h)㊁强氧化(加体积分数为30%过氧化氢1.0m L,60ħ水浴加热1h)㊁高温(100ħ条件下加热1h)㊁强光(4500ʃ500)l x条件下照射24h方法对琥珀酸美托洛尔进行破坏,使其产生降解产物,同时制备空白降解溶液,按上述方法进行测定㊂本品在氧化降解杂质数量和杂质含量上增加明显,主峰与相邻杂质分离度分别为4.11和1.51㊂其他降解试验的降解产物较少,琥珀酸美托洛尔与相邻杂质的分离度均大于3㊂2.4最低检测限取对照溶液b20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍,量取琥珀酸美托洛尔峰高和基线噪音,计算琥珀酸美托洛尔的信噪比(S/N)为31.5㊂取琥珀酸美托洛尔对照溶液b用流动相稀释10倍,进样检测,记录色谱图,琥珀酸美托洛尔峰的信噪比为3.5,即最低检出浓度为0.2μg㊃m L-1(供试品溶液浓度的0.01%)㊂2.5精密度试验取琥珀酸美托洛尔对照溶液b20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂连续进样6次,主峰峰面积的R S D为1.35%㊂2.6溶液稳定性取供试品溶液和对照品溶液b,室温条件下,分别于0㊁4㊁8㊁12㊁24h测定,杂质C㊁最大单杂和总杂含量的绝对偏差均不大于0.003%,说明琥珀酸美托洛尔供试品溶液在24h内稳定㊂2.7样品有关物质测定取琥珀酸美托洛尔样品3批,按前述方法检测,计算有关物质,结果见表1㊂㊃390㊃J o u r n a l o f H e n a n U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e)2020,39(6)表1样品含量测定结果批号最大单杂/%总杂/% 1205010.090.14 1205020.060.09 1205030.040.063讨论3.1方法的确定琥珀酸美托洛尔在美国药典(U S P34)中列出有琥珀酸美托洛尔杂质A㊁B㊁C㊁D四种杂质,英国药典(B P2011)中则列出有12种已知杂质;U S P采用分别用杂质对照品测定琥珀酸美托洛尔中杂质A㊁B㊁C㊁D的含量,对4种已知杂质测定结果准确,而其他杂质仍需用自身对照法测定㊂E P采用自身对照法结合杂质A和杂质C定位,加校正因子方法计算杂质C,不加校正因子计算杂质A和其他杂质,对杂质对照品要求相对较低㊂我们参照E P,经方法学验证,该方法简便㊁准确㊁可靠,能满足琥珀酸美托洛尔有关物质的限度检测要求㊂3.2耐用性将柱温分别设定为20㊁25㊁30ħ,其他按照前述色谱条件进行测定,琥珀酸美托洛尔和杂质A的分离度无显著差异,单杂和总杂的含量测定结果无显著变化㊂将流动相流速分别设定为0.9㊁1.0㊁1.1m L㊃m i n-1,其他按照前述色谱条件进行测定㊂琥珀酸美托洛尔和杂质A的分离度均大于8,单杂和总杂的含量测定结果无显著变化㊂配制流动相比例分别814ʒ156㊁824ʒ146㊁834ʒ136,其他按前述色谱条件进行测定,琥珀酸美托洛尔和杂质A的分离度分别为7.9㊁8.8㊁9.1,单杂和总杂的含量测定结果无显著变化㊂说明该方法耐用,色谱条件的轻微改变不影响该分析方法的测定结果㊂参考文献:[1]中华医学会心血管病学分会,中华心血管病杂志编辑委员会.β肾上腺素能受体阻滞剂在心血管疾病应用的专家共识[J].中华心血管病杂志,2009,37:195-209.[2]美国药典[S].2011:3508-3509.[3]英国药典[S].2011:1452-1454.[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:四部[S].中国医药科技出版社,2015:105-109[责任编辑段金卯](上接第387页)参考文献:[1]唐哲,西娜.我院辅助用药合理管控的探索与实践[J].中国药房,2016,27(31):4396.[2]茹爱忠,刘静,蔡瑞君,等.建立辅助用药预警监控干预体系对合理用药及新医改控费的作用[J].中国药事, 2018,32(1):97-103.[3]韩爽,钟敏涛,李锦,等.我国辅助用药应用现状及管理对策初探[J].中国药学杂志,2016,51(8):678-682.[4]路丹,卢成华.我院2013-2015年辅助用药应用分析[J].中国药房,2017,28(8):1030-1033.[5]王笑妍,付秀娟,黄玉鑫,等.我院重点监控药品的药事管理模式探索[J].中国药房,2018,29(7):882-885.[6]王丽,蔡德芳,陈勇,等.辅助用药分类方法探索[J].中国药师杂志,2015,18(12):2156-2159.[7]马洁,王南,张四喜,等.以P D C A循环理论为基础的临床药师工作模式探讨[J].中国医院药学杂志,2018,38 (5):555-557.[8]徐婷,张妍,李莉,等.基于信息化手段探索建立医院辅助用药廉政风险防控预警体系[J].江苏卫生事业管理,2019,30(5):655-658.[9]徐敢,王冲.药占比在医院管理评价工作中的管制价值和社会效果分析[J].中国药房,2015,26(34):4762-4765.[责任编辑段金卯]。
琥珀酸脱氢酶活性的测定
COOH
CH2
+ MB
CH2
COOH 琥珀酸
COOH HC CH + MB·2H HOOC 反丁烯二酸
在无氧环境下 ，琥珀酸脱氢酶的活性与甲烯兰脱 色的速度成正比，使定量甲烯兰脱色所需时间的倒数， 可以用来表示酶的活性。本实验用液态石蜡制造无氧环 境，这样可以不用真空设备或氮气。
二、实验用品
1、材料 新鲜肌肉糜
四、实验结果
37℃水浴中保温随时观察并记录甲烯兰脱色过程和时 间，酶活力=1/时间
五、思考题
1.琥珀酸脱氢酶活性的测定的原理是什么? 2.实验过程中要注意哪些问题? 3.酶活性测定的方法有哪些?
实验十五 琥珀酸脱氢酶活性的测定
Exp.15 Activity Determinatase
一、实验原理
以脱氢方式使物质氧化的酶，称脱氢酶。琥珀酸脱 氢酶(succinate dehydrogenase)是三羧酸循环中的一个 酶，能促使琥珀酸脱氢成为反丁烯二酸，并将脱下的氢 传递给受氢体。用甲烯兰作受氢体，结果甲烯兰被氢还 原生成无色的甲烯白。
2、试剂 （1）0.01%甲烯兰溶液； （2）0.02M琥珀酸溶液 （3）液态石蜡；
3、仪器设备 试管及试管架、恒温水浴锅、1毫升及2毫升的吸量
管、烧杯。
三、方法和步骤
取2支试管，各加0.02M琥珀酸溶液0.5毫升，0.01% 甲烯兰溶液1毫升和液态石蜡溶液2毫升。再分别加入 0.5克肌肉糜和煮过的肌肉糜分别混匀后，将试管放入 37℃水浴中保温，随时观察并记录甲烯兰脱色过程和时 间，酶活力=1/时间。
串联质谱-气相色谱质谱结果解读【参考仅供】
39
串联质谱检测的部分疾病需要气相质谱验证 及鉴别
MMA PA
OTCD CPS MCC HMG MGA Tyr-I
串联质谱检测 丙酰肉碱升高 瓜氨酸降低
3-羟基异戊酰肉碱增高 酪氨酸增高
气相质谱检测 甲基丙二酸，甲基枸橼酸 甲基枸橼酸，3-羟基丙酸 乳清酸，尿嘧啶 正常 3-甲基巴豆酰甘酸 3-羟-3-甲基戊二酸 3-甲基戊烯二酸 琥珀酰丙酮增高
• 游离肉碱及酰基肉碱降低 ►多为继发于营养不良（游离肉碱除外）
医学参考A
24
有机酸血症相关酰基肉碱 （短链酰基肉碱）
• C3：丙酰肉碱 • C3DC：丙二酰肉碱 • C4：丁酰肉碱 • C4OH：3-羟基丁酰肉碱 • C5：异戊酰肉碱 • C5OH：3-羟基异戊酰肉碱 • C5DC：戊二酰肉碱 • C5:1:异戊烯酰肉碱
血串联质谱及尿气相色谱质谱 检测结果解读
医学参考A
1
主要内容
遗传代谢病简介 串联质谱技术简介 血串联质谱检测结果解读 气相质谱技术简介 尿气相质谱检测结果解读
医学参考A
2
遗传代谢病简介
基因突变导致维持机体正常代谢所必需的某些酶 、受体或载体等缺乏发生的疾病
多为单基因遗传病
大部分属于常染色体隐形遗传病，部分属于伴性 遗传
医学参考A
35
多种酰基肉碱增高 （C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18）
• 多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症 • 肉碱棕榈酰转移酶-II缺乏症 • 肉碱/酰基肉碱移位酶缺乏症 • 继发于肝功损伤（伴C0、C2增高）
医学参考A
36
肉豆蔻烯酰肉碱增高 （C14:1、C14:1/C8:1、C14:1/C16）
X
血珀简单鉴定方法
血珀简单鉴定方法
血珀是一种特殊的琥珀，其颜色呈现红色或者暗红棕色，内含有大量的琥珀酸血铁。
下面我将为大家介绍一种简单的血珀鉴定方法。
首先，我们需要准备以下工具和材料：血珀样品、照明设备、放大镜、硬度检测仪、密度检测仪以及紫外线灯。
1.外观检测：将血珀放在一个明亮的光源下观察，正常情况下，血珀会呈现出深红色或者棕红色。
如果颜色过于明亮或者是黄色，那么很有可能是假冒的仿制品。
2.光学检测：使用放大镜仔细观察血珀内部结构和气泡。
正宗的血珀应该具有退色性质，即当用紫外灯照射时，颜色会从深红色转化为草地绿色。
此外，在放大镜下观察血珀内部，我们可以看到血珀内含有红色小颗粒，这是血珀酸血铁的存在证据。
3.硬度测试：使用硬度检测仪来测试血珀的硬度。
正宗的血珀硬度约为2-3，所以应该轻松地被钥匙划痕。
4.密度检测：使用密度检测仪测试血珀的密度。
正宗的血珀密度大约在1.08-1.1 g/cm³之间。
5.火焰测试：用火烤一个小小的琥珀颗粒，真正的血珀会散发出松木般的香味，
而仿制品则会散发出煤炭般的焦糊气味。
需要注意的是，这些方法仅能作为初步的鉴别手段，为了更准确的判断该珍珠是否为真血珀，那么我们还需要进行更精确的检测，比如红外光谱和质谱分析等。
总结起来，血珀的鉴定可以通过外观、光学、硬度、密度和火焰等多个方面进行综合鉴别。
但是为了确保鉴定的准确性，还需借助专业的鉴定工具和技术，最好向专业鉴定机构求证，以获得更加准确的鉴定结果。
反相高效液相色谱法测定大鼠血清中的甲泼尼龙及琥珀酸甲泼尼龙的浓度
１ ． ２ 试 剂 乙 腈 、 甲醇 为 色 谱 纯 ． 水 为重 蒸 馏 水 ，
基 金 项 目： 浙 江省 医药卫 生科技 计 划项 目（ ２ ０ １ ４ Ｋ Ｙ Ａ２ １ ８ ）
批号 １ ０ ０ ８ ２ ７ — ２ ０ ０ ５ ０ １ ） ； 氢化 可 的松 对 照 品（ 中 国药 品生物 制 品检定 所 ， 批号 ： １ ０ ０ １ ５ ２ — ２ ０ ０ ２ ０ ６ ） 。
的中效 糖皮 质激 素 ， 具 有较 强 的抗 炎 、 抗 过敏 、 抗 休 克、 抗毒 等作 用 ． 临床 主要用 于 器官 移植 排 异反 应 、
３ ０ ℃ 。 结果 甲泼尼 龙 和琥 珀酸 甲泼 尼 龙在 ０ ． ５ ～ ４ ０ ￣ ｇ ／ ｍＬ范 围 内线 性 关系 良好 （ ｒ ＞ Ｏ ． ９ ９ ９ ） ， 两 者提 取 回收 率均 ＞ ８ ０ ％，
日 内 和 日问 的 相 对 标 准 差 均 ＜ ５ ％。 结论 该 方法灵 敏 、 简便、 准确 ， 可 用 于 甲 泼 尼 龙 及 琥 珀 酸 甲泼 尼 龙 的血 药 浓 度 测
Ｂ ｒ ｅ ｅ ｚ ｅ色谱工 作站 ． ２ ０ ｆ ｘ Ｌ 自动进 样 阀 ； ＷＨ一 ９ ０ Ａ微
型旋 涡混合 器 （ 上海振 荣科学 仪器有 限公 司 ） ；
Ｔ Ｄ Ｌ ８ ０ — ２型离 心沉 淀器 （ 上海 手术 器械 厂 ） 。
０ ． ４ ｍ ｇ ／ ｍＬ的 内标储 备 液 。
反相高效液相色谱法测定大鼠血清中的甲泼尼龙及 琥珀酸 甲泼尼龙 的浓度
楼 英彪 ， 陈菲 。 ， 王建 美 。 （ １ ． 浙 江金 华广 福 医院 ， 浙 江 金华 ３ ２ １ ０ ０ ０ ； ２ ． 金华 职业 技术 学 院 ， 浙江 金华 ３ ２ １ ０ ０ ７ ）
精氨酰琥珀酸裂解酶(ASAL)的检测方法及对肝炎诊断价值的研究
精氨酰琥珀酸裂解酶（ASAL）的检测方法及对肝炎诊断价值的研究【摘要】目的建立ASAL的测定方法，进一步研究探讨其在肝炎诊断中的价值。
方法建立了精氨酰琥珀酸裂解酶（ASAL）的检测方法“速率法”，制备成了试剂盒，并对120例健康体检者和120例肝炎病人、65例肝癌病人、65例肝硬化病人同时进行了检测分析。
结果肝炎病人血清中ASAL明显升高，是对照组的5.1倍，经统计学处理P<0.01。
15例HBSAg阳性，谷丙转氨酶正常或轻度升高的患者ASAL显著升高，是对照组的5.4倍，经统计学处理P<0.01。
65例肝癌病人和65例肝硬化病人血清中ASAL轻度升高。
经统计学处理与对照组无显著性差异P<0.05。
15例肝坏死病人血清中ASAL显著升高。
是对照组的11.4倍。
结论，用速率法测定ASAL方法简便、快速准确，试剂、样品用量小，可用于各型自动生化分析仪。
ASAL是诊断肝炎、进行预后判断、估计病情、观察疗效的重要指标，特别是表面抗原阳性，谷丙转氨酶不高的病人，可提高早期诊断率。
【关键词】精氨酰琥珀酸裂解酶；肝炎；肝硬化；速率法病毒性肝炎特别是2型肝炎发病率很高，如不早期发现延误治疗易转为慢性，导致肝硬化。
肝功能检查目前常规检测ALT（谷丙转氨酶）等，能够及时发现肝细胞损害，但经治疗后几周多半正常，对治疗尚未痊愈或晚期病人会延误病情。
因此提出一种新的酶，作为检测指标，可弥补肝功能常规组项的缺陷。
我们于2004年起对ASAL的检测方法速率法进行了初步的研究并制备成试剂盒。
并对120例肝炎病人、65例肝硬化病人、65例肝癌病人和120例健康人同时进行了ASAL检测分析。
并对其临床价值进行了研究。
旨在于提高肝炎的早期诊断率。
1、对象与方法1.1试剂盒的测定原理在340nm波长下测定ASAL吸光度的变化值（△A/分钟），计算其活性。
1.2测定试剂盒的主要参数及测定方法1.2.1测定方法：速率法1.2.2主要技术参数：反应温度：37℃，测定时间：90s，延时时间：60s，样品用量12.5/μL，试剂用量125/μL，反应方向正反应。
ldh试剂检测公式
ldh试剂检测公式ldh试剂检测公式是一种常用的生化检测方法，用于检测血清或组织中的乳酸脱氢酶（LDH）活性。
LDH是一种重要的酶类，存在于细胞的胞浆中，其活性水平可以反映细胞损伤程度，对于临床诊断和疾病监测具有重要意义。
LDH试剂检测公式是通过测定LDH催化的底物转化为产物的速率来间接测定LDH活性的方法，下面我们将介绍LDH试剂检测公式的具体步骤和计算方法。
一、LDH试剂检测公式的原理LDH试剂检测公式是基于LDH催化底物氧化还原反应的原理。
LDH催化的底物是乳酸，它在催化下被氧化为产物丙酮酸。
LDH试剂检测公式中，首先将待测样品和辅酶NAD+加入反应体系中，LDH催化乳酸氧化的同时，NAD+被还原为NADH。
NADH的生成量与乳酸氧化的速率成正比，而NADH的光密度与其浓度成正比。
因此，通过测定NADH的光密度变化，可以间接测定LDH活性。
二、LDH试剂检测公式的步骤1. 样品制备：将待测血清或组织样品离心去除悬浮物，取上清液作为待测样品。
2. 试剂配置：将乳酸、NAD+、琥珀酸、LDH酶等试剂按照一定比例配置成反应液。
3. 反应体系组装：将待测样品和试剂加入反应管中，混匀后放入分光光度计。
4. 反应条件设定：设置适当的温度和波长，记录初始吸光度。
5. 反应过程监测：启动分光光度计记录反应体系吸光度随时间的变化。
6. 数据处理：根据吸光度变化曲线计算LDH活性。
三、LDH试剂检测公式的计算方法1. 计算初始吸光度（A0）和最终吸光度（A1）。
2. 计算反应时间（t）。
3. 根据NADH的摩尔吸光系数ε和反应体系的光程b计算NADH的摩尔浓度C（C = ΔA / εb）。
4. 根据反应体系中NAD+的初始摩尔浓度C0和NADH生成量与NAD+消耗量之间的关系，计算LDH活性。
在实际操作中，为了提高LDH试剂检测公式的准确性和稳定性，需要严格控制各项操作条件，并采用标准曲线法进行定量分析。
此外，还需注意避免样品污染和环境干扰对实验结果的影响。
生化检测方法汇总
一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法器材：试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂：(1）0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液：①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml，4℃保存.②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml，4℃保存。
③将0。
1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0。
1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0。
1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴,4℃保存.（2）标准丙酮酸(含丙酮酸2.0μmol/mL）：取标准丙酮酸钠10mg,用上述缓冲液准确定容为50mL。
此液须当日用当日配。
（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) : 取α—酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH 7.4（因为转氨酶在pH7.3以下或7。
6以上的环境中酶活性下降)，加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
(4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α—酮戊二酸 2mmol/L）:称取α- 酮戊二酸29。
2mg和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中，加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7。
4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0。
1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度.放置冰箱内保存。
(5）2。
4—二硝基苯肼溶液:取分析纯2，4-二硝基苯肼19。
8mg，用1mol/LHCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。
（6）0.4mol/L NaOH溶液：0.1M磷酸盐缓冲液PH7。
4 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1相当于谷丙转氨酶单位0 28 57 97 150 200相当于谷草转氨酶单位0 24 61 114 190 —每个样做3个平行,置37水浴30分钟，各管加2,4—二硝基苯肼液0。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血尿琥珀酰丙酮检测在酪氨酸血症-I型诊断中的应用（中华儿科...全网发布：2012-09-06 15:12 发表者：韩连书1175人已访问酪氨酸血症I型(tyrosinemla type I)是由于肝、肾组织中酪氨酸代谢的终末酶富马酰乙酰乙酸水解酶缺（Fumarylacetoacetase，FAH)缺陷，导致酪氨酸代障碍所致的一种遗传代谢病（酪氨酸代谢途径见图1），又称肝肾型酪氨酸血症，属于常染色体隐性遗传，本病发病率约为1/2 000至1/100 000[1]。
多数患儿为急性型，起病于新生儿或婴儿期，以肝脏受累显著。
少数为晚发型，患儿通常起病于1岁以后，以生长发育迟缓、进行性肝硬化、肾小管功能受损、低磷性佝偻病等为主要表现。
近几年随着串联质谱和气相色谱-质谱的应用，有关酪氨酸血症I型报道越来越多，但由于引起肝病的其他代谢病如Citrin蛋白缺乏症、半乳糖血症等，也可引起血酪氨酸增高及尿中酪氨酸代谢产物增高，故两者较难鉴别，常引起误诊。
酪氨酸血症I型患者血和尿琥珀酰丙酮增高[1,2]，后2种疾病血和尿琥珀酰丙酮正常。
通过总结我科于2003～2010诊断的11例酪氨酸血症I型患者临床及实验室资料，探讨血尿琥珀酰丙酮检测在酪氨酸血症-I型诊断中的价值。
对象与方法一、对象临床表现为肝肿大，血酪氨酸增高的190例患儿。
其中男103例，女87例；年龄均值8个月（3天-14岁）。
二、方法1.常规实验室检测：血、尿常规检查、肝肾功能、血气分析、血糖、血氨、血乳酸、血钙磷镁、肝脏B超及肝脏核磁共振等。
2.血氨基酸、酰基肉碱检测：采用干血滤纸片法串联质谱技术进行检测，具体方法见参考文献[3]。
3.血琥珀酰丙酮检测：采用干血滤纸片法串联质谱技术进行检测，参考文献[4]，取直径为3 mm的疑似酪氨酸血症患者的干血滤纸片于96孔过滤板内，每孔加入100 µl 80%乙腈（含琥珀酰丙酮内标及水合肼），65 ℃孵育30 min，过滤至另一96孔板，氮气吹干后每孔加入100 µl甲醇，5 min后氮气吹干，每孔加入80%乙腈100µl，取20µl进行串联质谱检测。
由美国疾病控制中心提供琥珀酰丙酮质控干血滤纸片作为质控样品。
取5个不同浓度(0、5、10、25及50 µmol/L)的琥珀酰丙酮标准品干血滤纸片进行方法准确性验证，其回收率分别为90%、95%、92%、96%及95%。
参考值上下限为1600例健康儿童血琥珀酰丙酮的第99和1百分位。
4.尿有机酸和琥珀酰丙酮检测：尿有机酸和琥珀酰丙酮采用气相色谱-质谱法进行检测，具体方法见参考文献[5]。
5. 酪氨酸血症I型诊断依据：⑴临床表现：肝肿大，伴或不伴有黄疸；⑵血酪氨酸增高；⑶血或尿琥珀酰丙酮增高，见参考文献[1]。
结果根据诊断标准，在190例血酪氨酸水平增高患儿中确诊11例酪氨酸血症-I型患儿，其中男9例，女2例，年龄2个月～6岁，小于1岁6例，均无家族史。
9例患儿已经死亡，2例存活一、患者临床及常规实验室检测结果患者临床表现及肝功能见表1，所有患儿均伴有肝肿大，7例患儿伴有皮肤黄染。
实验室检查显示，所有患儿均出现胆汁酸、碱性磷酸酶、g－谷氨酰转肽酶及甲胎蛋白显著增高，部分患儿谷氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶及胆红素增高。
肾功能、血糖及钙、磷、镁水平均正常。
1 例患儿肝核磁共振显示多发结节，病理活检结果为纤维化结节，非癌变。
表1 11例患者主要临床表现及肝功能例号临床表现肝脏肋下（cm) 甲胎蛋白碱性磷酸酶谷氨酸转氨酶天冬氨酸转氨酶g－谷氨酰转肽酶1 腹胀，肝大1年余 3.0 29.4 956.0 210.0 357.0 642.02 皮肤黄染3个月 4.0 62.4 792.0 320.0 450.0 253.03 腹胀半年 4.5 45.4 1043.0 245.0 472.0 526.04 腹胀，肝大2年余 3.0 25.4 1210.0 142.0 189.0 241.05 肝脾大10天 3.0 84.4 835.0 25.0 88.0 135.06 皮肤黄染、腹胀1年余 2.0 35.4 1023.0 231.0 354.0 112.07 腹泻1周，腹围增大33.5 11.2 782.0 12.0 34.0 546.0天8 皮肤黄染2个月 5.5 35.4 1024.0 41.0 12.0 137.09 肝大、腹胀1个月 5.0 89.4 963.0 136.0 215.0 312.010 腹泻1周，腹围增大34.5 126.0 1250.0 33.0 153.0 286.0天11 皮肤黄染5个月 5.0 56.9 694.0 69.0 466.0 426.0中位数 4.0 45.4 963.0 136.0 215.0 286.0 注：参考值及单位, 甲胎蛋白:0～0.03mg/L; 碱性磷酸酶:200～350 U/L; 谷氨酸转氨酶:0～75 U/L; 天冬氨酸转氨酶:10～42 U/L; g－谷氨酰转肽酶:16～73 U/L; 总胆红素:3.5～20 mmol/L; 直接胆红素:0～6.8mmol/L;胆汁酸: 0～10 mmol/L二、血氨基酸、酰基肉碱、琥珀酰丙酮及尿有机酸检测结果见表2。
所有患者血酪氨酸水平增高，苯丙氨酸水平正常，血琥珀酰丙酮水平均增高，但在7例做过尿气相色谱-质谱检测的患儿中仅4例尿琥珀酰丙酮增高，3例未检测出。
这7例患儿尿4-羟基苯乙酸、4-羟基苯乳酸及4-羟基苯丙酮酸均显著高于参考上限值。
表2 酪氨酸血症型-I型患者血酪氨酸、苯丙氨酸、琥珀酰丙酮、尿琥珀酰丙酮及有机酸检测结果注：①参考值分别为：酪氨酸：20～100 mmol/L；苯丙氨酸：20～120 mmol/L；酪氨酸/苯丙氨酸：0.5～2.0；血琥珀酰丙酮：0.5～5.0 mmol/L；尿琥珀酰丙酮：0；4-羟基苯乙酸：8～75；4-羟基苯乳酸：0～7.0；4-羟基苯丙酮酸：0～1.0②“-”表示未检测讨论酪氨酸症I型主要是由于富马酰乙酰乙酸水解酶活性降低或缺失，导致酪氨酸代谢途径的终端代谢发生障碍，富马酰乙酰乙酸增高，其上游代谢物酪氨酸、4-羟基苯丙酮酸增多，旁路代谢产物4-羟基苯乳酸、4-羟基苯乙酸；中间代谢产物马来酰乙酰乙酸、富马酰乙酰乙酸增高，导致其旁路代谢产物琥珀酰乙酰乙酸、琥珀酰丙酮增高。
琥珀酰乙酰乙酸、琥珀酰丙酮可与蛋白质的巯基结合，是造成肝、肾损害的主要原因。
根据发病年龄，临床将酪氨酸血症I型分为急性型(发病年龄<6个月)、亚急性型(发病年龄6个月～2岁)及慢性型(发病年龄>2岁)[6]。
急性型多在新生儿期起病，病情进展迅速，早期症状类似于新生儿肝炎，如呕吐、腹泻、嗜睡、生长迟缓、肝脾肿大、水肿、黄疸、贫血、血小板减少和出血症状等，常在3～9月龄时死于肝功能衰竭。
晚发型通常在1岁以后发病，以生长发育迟缓、进行件肝硬化和肾小管功能受损如低磷性佝偻病、糖尿、蛋白尿以及氨基酸尿等，类似Fanconi综合征表现。
此病肝肿瘤发生率较高，约30%患儿在3岁内并发肝肿瘤，主要是小细胞肝癌。
约40％患儿在病程中会有急性末梢神经受累危象发生，表现为易激惹，疼痛性感觉异常，躯干与颈部过度伸展，同时伴有自主神经异常症状，如血压增高、心动过速和肠麻痹等。
大部分未治疗患儿在l0岁以内死亡。
故早期诊断及早期治疗是本病预后好差的关键。
本组11例均表现为肝损害，1例出现肝内结节，未发现肾脏及心脏损害。
4例为急性型，4例为亚急性型，3例为慢性型。
9例已经死亡，2例存活，提示此病预后不良。
酪氨酸血症I型由于临床表现不具有特异性，确诊需要依据特殊的实验室检测，包括血氨基酸、琥珀酰丙酮及甲胎蛋白检测,尿4-羟基苯丙酮酸、4-羟基苯乙酸及4-羟基苯乳酸及琥珀酰丙酮检测,富马酰乙酰乙酸水解酶基因或酶活性检测。
由于其他疾病引起的肝脏损害如半乳糖血症、Citrin蛋白缺乏症等，也可导致血酪氨酸、甲胎蛋白增高[7]，尿4-羟基苯丙酮酸、4-羟基苯乙酸及4-羟基苯乳酸水平增高，故不能仅凭血酪氨酸或尿4-羟基苯丙酮酸、4-羟基苯乙酸及4-羟基苯乳酸水平增高诊断酪氨酸血症-I型。
已有多项研究证实血或尿琥珀酰丙酮增高是诊断酪氨酸血症-I型的重要依据，另外，Matern等[8]通过对21万余例新生儿筛查6000余例酪氨酸增高的新生儿，检测血琥珀酰丙酮，无1例增高。
确诊为酪氨酸血症-I型的56例血琥珀酰丙酮均增高，其中16例（28%）血酪氨酸水平正常[8]。
Al-Dirbashi等[9]通过利用琥珀酰丙酮检测进行新生儿酪氨酸血症-I型筛查，发现一部分患儿新生儿早期酪氨酸水平正常，提示通过酪氨酸水平检测进行新生儿筛查，可导致假阳性或假阴性，利用琥珀酰丙酮检测可降低假阳性或假阴性。
故已有多个国家将检测血琥珀酰丙酮作为新生儿筛查酪氨酸血症-I型的指标[8-11]。
本组11例血琥珀酰丙酮均增高，7例尿气相色谱-质谱检测中只有4例琥珀酰丙酮增高，提示尿气相色谱-质谱气相色谱-质谱检测琥珀酰丙酮可能出现假阴性。
Al-Dirbashi等[12]建立利用串联质谱检测尿琥珀酰丙酮的方法，对15例确诊酪为氨酸血症-I型患者尿进行检测，琥珀酰丙酮均显著增高，说明气相色谱-质谱检测尿琥珀酰丙酮可因为检测前处理方法原因导致假阴性。
国内已有4篇关于酪氨酸血症-I型的报道[13-16],只有1篇报道是由尿琥珀酰丙酮增高确诊[15]，其他3篇报道是依据血酪氨酸增高、尿4-羟基苯乙酸、4-羟基苯乳酸及4-羟基苯丙酮酸增高，结合临床及其他实验室结果进行诊断。
根据酪氨酸的代谢途径，这些病例也可能是酪氨酸血症-II型或III型、Citrin蛋白缺乏症或继发于肝功能损伤等,因为这些疾病也可以导致上述异常，能否确诊为酪氨酸血症-I型值得探讨。
故对于临床及其他检测结果提示酪氨酸血症-I型的患者，除通过气相色谱-质谱检测尿有机酸及琥珀酰丙酮外，需要同时检测血琥珀酰丙酮，以便提高酪氨酸血症-I型的确诊率，避免假阴性。
酪氨酸血症I型是一种可治性遗传代谢病，主要治疗方法是控制天然蛋白质摄入、给予不含苯丙氨酸、酪氨酸配方营养粉饮食治疗及尼替西农（nitisinone）药物治疗。
饮食治疗的目的是减少酪氨酸的摄入及产生，从而降低旁路代谢产物的水平。
天然蛋白质摄入量需控制在1～1.5g/Kg.d，不含苯丙氨酸、酪氨酸配方营养粉用量为1.5～2.0/Kg.d。
尼替西农是一种4-羟苯丙酮酸二氧化酶抑制剂，可抑制酪氨酸转变为4-羟苯丙酮酸，从而使下游代谢产物马来酰乙酰乙酸、富马酰乙酰乙酸及其旁路代谢产物琥珀酰丙酮生成减少，起到治疗作用。
此药于1992年开始应用于临床，至今多个国家的应用报道显示，对肝脏、肾脏及心脏功能损害均有显著的效果[17,18]。