葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,
G6PD)是一種參與葡萄糖代謝的酵素。
它將葡萄糖-6-磷酸(G6P)氧化,產生NADPH和6-磷酮酸(6-phosphogluconate)。
G6PD的主要功能是在紅血球中提供NADPH的產生。
NADPH在紅血球中非常重要,因為它是鄰近的酶(例如谷胱甘肽還原酶)所需的還原劑,可以幫助細胞對抗氧化應激和保護紅血球免受氧化損傷。
G6PD在紅血球中的缺陷是最常見的酵素缺陷之一。
這種缺陷會導致紅血球無法產生足夠的NADPH,使紅血球容易受到氧化損傷和溶解,造成紅血球異常增多(溶血性貧血)。
這種缺陷通常以X染色體連鎖遺傳,主要影響男性。
G6PD缺陷與特定藥物(如抗瘧疾藥物)和食物(如豆類和柑橘類水果)之間存在明顯的相互作用。
某些藥物和食物可能觸發G6PD缺陷者的溶血危機,導致嚴重的溶血性貧血症狀。
G6PD酵素在診斷G6PD缺陷時可以通過血液檢查來測量其活性。
然而,由於G6PD缺陷的多樣性,一些變異體可能無法被常規的測試方法檢測到,因此在診斷和管理G6PD缺陷時需要綜合考慮家族史、症狀和測試結果。
胰腺 葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基
胰腺葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基胰腺葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)是一种重要的酶催化亚基,它在糖代谢中扮演着至关重要的角色。
该酶催化亚基是由单一的P磷酸酯酶基团组成,可以启动胰岛素分泌并调节能量代谢。
G6PC的基因位于人类染色体17q21-q22的区域,其中包含了9个外显子和8个内含子,编码成一个603个氨基酸长的蛋白质。
该酶催化亚基主要在肝脏,肾脏和小肠上皮细胞中表达,由两个共价交联的次单位组成。
在胰岛素诱导下,该酶催化亚基可以活化,并在肝脏细胞中催化葡萄糖-6-磷酸(G6P)的形成,并促进三磷酸核苷酸(ATP)的生成。
G6PC的催化亚基结构主要由两个领域组成:一个N-末端的卡戎结构域和一个C-末端的嵌段结构域。
卡戎结构域包含三个亚基P磷酸酯结合位点:P1、P2和P3。
这些结合位点允许酶催化亚基与三磷酸腺苷(ATP)和G6P之间的相互作用。
此外,这些结合位点的序列也允许酶催化亚基与ADP、AMP和其他细胞生物分子之间的交互作用。
与卡戎结构域相比,嵌段结构域的功能相对较少。
它主要负责酶催化亚基的蛋白质折叠和稳定。
此外,该领域还包含一个丝氨酸磷酸化位点,这表明酶催化亚基可以通过丝氨酸磷酸化来进行调节。
G6PC在糖代谢中的作用主要是将肝脏中的G6P转化为自由葡萄糖,然后释放到血液中以提供能量。
此外,该酶催化亚基在胰腺细胞中也可以促进胰岛素的分泌,从而导致血糖水平下降。
总的来说,G6PC的催化亚基是糖代谢中一个重要的酶催化亚基,它通过调节葡萄糖代谢来维持能量平衡和血糖水平。
对其结构和功能的深入理解将有助于我们更好地理解糖代谢异常相关疾病的发病机制。
葡萄糖试剂盒(氧化酶法)标准操作程序.
葡萄糖试剂盒(氧化酶法)标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中葡萄糖的含量。
2. 适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中葡萄糖的含量。
3. 职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理;本SOP 的改动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是氧化酶法(GOD-POD)。
5. 原理葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下与水分子和氧分子反应生成葡萄糖酸和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物、4-氨基安替比林和苯酚反应生成红色化合物醌亚胺。
由于醌亚胺在波长500nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 500nm 处吸光度的变化值与样本中葡萄糖的含量成正比。
O H O H O H O O H 22222224+−−−→−+-++−−−−→−++醌亚胺苯酚氨基安替比林葡萄糖酸葡萄糖过氧化物酶葡萄糖氧化酶6. 仪器AU5811自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源:上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分:R1:磷酸盐缓冲液、过氧化物酶、苯酚、防腐剂;R2:磷酸盐缓冲液、葡萄糖氧化酶、4-氨基安替比林、防腐剂;校准品:葡萄糖、防腐剂7.3 试剂稳定性:试剂于2℃-8℃避光保存,有效期为一年。
开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定14天。
8.标准品和质量控制8.1校准程序:使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求,并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白,经校准测定,仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品:罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装,在2-8℃冰箱可稳定到失效期,使用前用5ml去离子水复溶,待质控物充分溶解(大约30分钟)后使用。
SIGMA 葡萄糖HK检测试剂盒说明书
SIGMA 葡萄糖HK 检测试剂盒说明书(Glucose (HK) Assay Kit; Product Code GAHK -20)一、产品介绍食品、生化和制药业普遍将酶作为分析工具。
酶法具有特异性高、重现性好、敏感性高以及反应快速的特点,是用于分析的理想工具。
由于酶具有高的特异性和敏感性,所以不需样品制备即可进行定量分析。
本试剂盒以酶法定量测定食品和其他材料中的葡萄糖。
原理:葡萄糖+ATP Hexokinase→ 6-磷酸葡萄糖+ADPG6P+NAD G6PDH → 6-磷酸葡萄糖酸+NADH葡萄糖在己糖激酶催化反应中被A TP 磷酸化,然后G6P 在NAD 存在下被6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化,氧化为6-磷酸葡萄糖酸;反应中,等分子量的NAD 被还原为NADH 。
随后的340nm 吸光度的增加与葡萄糖含量成正比。
二、试剂组成1、葡萄糖检测试剂用20ml 水溶解小瓶内粉剂;加水后立即盖紧瓶塞,反转混匀数次,不可震动。
加水20ml 溶解后,每瓶溶液含有1.5 mM NAD ,1.0 mM ATP ,1.0 U/ml G6PDH ;并含有防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾。
小瓶粉剂保存于2-8℃。
如果粉剂受潮结块、加水不能充分溶解、或水溶液浑浊,则应将试剂弃用。
试剂水溶液比较稳定,18-26℃保存7天、2-8度保存4周不会有微生物生长。
以水作为空白参照,新配置的溶液340nm 吸光度如果大于0.350,则溶液不适合使用。
2、葡萄糖标准溶液D -葡萄糖,1.0mg/ml 溶于0.1%苯甲酸;该标准液为即用型,符合美国国家标准技术研究所标准;2-8℃可至少保存半年。
期间如果溶液浑浊,则应弃用。
三、需自备的实验仪器1、可测定340nm 吸光度的分光光度计2、测量杯3、10μl -1ml 量程的移液器四、注意事项和免责声明本试剂仅供科研使用,不能用于药品、家庭以及其他用途。
涉及危害和使用安全性问题,参照材料安全数据表。
葡萄糖-6-磷酸检测标准
葡萄糖-6-磷酸检测标准葡萄糖-6-磷酸(G6P)是一种重要的中间代谢产物,它在细胞内参与糖代谢通路以及核苷酸合成等重要生物学过程。
因此,对G6P的检测具有重要的生物学意义。
本文将就葡萄糖-6-磷酸的检测标准进行详细介绍,包括该检测的意义、常用的检测方法以及检测标准的制定原则和应用。
一、葡萄糖-6-磷酸的生物学意义葡萄糖-6-磷酸在细胞内起着重要的作用,它是糖原合成和分解的关键中间产物,也是核苷酸的合成和脱氧核糖核苷酸合成的重要物质。
在线粒体内,葡萄糖-6-磷酸经过糖酵解途径被氧化成为三磷酸甘油,从而产生三磷酸腺苷(ATP),提供细胞能量。
此外,葡萄糖-6-磷酸还参与细胞内的抗氧化反应等。
因此,对葡萄糖-6-磷酸的检测具有非常重要的生物学意义。
二、葡萄糖-6-磷酸的检测方法1.酶联免疫吸附法(ELISA):ELISA方法是一种高灵敏度和高特异性的检测方法,适用于血清、尿液等生物样品中葡萄糖-6-磷酸的检测。
通过使用特异性抗体和酶反应产物的发色反应来测定样品中的葡萄糖-6-磷酸浓度。
2.高效液相色谱法:高效液相色谱法是一种常用的生化分析方法,可以对生物样品中的葡萄糖-6-磷酸进行准确的分离和定量分析。
该方法具有灵敏度高、分辨率好、分析时间短等优点。
3.薄层色谱法:薄层色谱法是一种简便、快速的检测方法,适用于对葡萄糖-6-磷酸浓度进行初步的筛查和分析。
4.毛细管电泳法:毛细管电泳是一种高效分离技术,可以对葡萄糖-6-磷酸进行高效的分离和检测,是一种灵敏度高、分辨率好的检测方法。
三、葡萄糖-6-磷酸检测标准的制定原则1.灵敏度和特异性:检测方法需要具有足够的灵敏度和特异性,能够准确地检测出样品中的葡萄糖-6-磷酸,且不受其他物质的干扰。
2.稳定性和重复性:检测方法需要具有良好的稳定性和重复性,能够保证检测结果的准确性和可靠性。
3.操作简便和快速:检测方法需要操作简便、快速,适用于大规模的样品检测。
4.经济性:检测方法需要具有一定的经济性,能够降低检测成本,提高检测效率。
葡糖-6-磷酸
葡糖-6-磷酸
葡糖-6-磷酸
糖类是生命的基础,是细胞产生能量和存储信息的重要组分。
在人体内,加入磷酸基团后得到的葡糖-6-磷酸(G6P)是一种十分重要的分子。
它在糖代谢途径中扮演多种角色,并参与到各种生物过程中,如维护DNA稳定性等。
在细胞内,G6P能够被进一步代谢为其他糖类,如葡萄糖、果糖等。
同时,它也是糖异生途径的重要中间产物。
在此途径中,肝脏和肌肉中的葡糖-6-磷酸酶(G6Pase)能够将G6P转化为葡萄糖,同时,它可以在胰岛素调控下抑制G6Pase酶的功能,从而维持体内的糖平衡。
G6P在保持糖类代谢平衡方面也发挥着至关重要的作用,特别是对于糖尿病患者。
在胰岛素信号通路受到损害时,高浓度的葡糖会引发多种病理反应,如葡糖毒性、炎症反应等。
而G6P酶能够调节G6P的水平,从而保持体内葡糖水平的稳定。
除此之外,G6P还与细胞生物学中的多种过程相关。
研究表明,G6P 可能与DNA损伤修复途径中的多种蛋白相互作用,促进DNA的稳定性和修复能力。
同时,它也作为增殖和分化信号分子,参与了多种发育和细胞分化过程中的调控。
不仅如此,在医学上,G6P作为肝胆器官成像的重要探针,也在临床
诊断和医学研究中具有潜在的应用前景。
相信随着研究的深入,G6P 在各个领域中的应用前景,将会越来越广阔。
总之,虽然G6P这个小小的分子在人体的各个组织和细胞中发挥着种种不同的作用,但它的重要性却是毋庸置疑的。
它不仅用作能量的来源和主要物质的合成,更在诸多细微的细胞过程中发挥了重要的调节和作用,展示了自然选择和演化的优雅与智慧。
小鼠葡萄糖 6磷酸脱氢酶 (G6PD) 酶联免疫分析试剂盒 使用说明书
小鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号:E0716m10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11. 覆膜:5张12. 使用说明书:1份自备物品1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)2. 微量加液器及吸头,EP管3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸标本的采集及保存1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。
实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液50μl,余孔分别加标准品或待测样品50μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 立即在每个孔中加入检测溶液A工作液50μl(在使用前半小时内配制),轻轻晃动混匀,酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 弃去液体,甩干,洗板3次。
每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)简介:葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ,G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。
Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯,后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同时NAPD 被还原成NADPH ,其反应公式如下:G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。
在上述偶联反应中,NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比,通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度上升速率(ΔA /min),上升速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比,比色杯光径1.0cm ,直接计算酶的活性单位。
100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本,该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、生理盐水2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、预备溶血液:取新奇抗凝血,离心取上清及白细胞层,用4℃预冷的生理盐水洗涤,每次取上清时,务必去除剩余的白细胞层,再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液,4℃保存备用。
临用前,以样本稀释液稀释,即为溶血液。
4℃保存10h ,编号名称TE0085 100TStorage试剂(A): 样本稀释液100ml -20℃ 避光试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支-20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液10mlRT 使用说明书1份-20℃保存48h。
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 产品说明书
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法)产品编号 产品名称包装 S0201S 葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 200次 S0201M葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法)1000次产品简介:葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) (Glucose Assay Kit with O-toluidine)是一种基于葡萄糖与邻甲苯胺的显色反应,通过比色法超高灵敏度、超宽线性范围检测血清、血浆、尿液、细胞或组织裂解液、饮料等溶液中葡萄糖含量的试剂盒。
本试剂盒灵敏度高、线性范围极宽、使用便捷。
本试剂盒对于在5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)范围的葡萄糖内有良好线性,并且具有操作便捷、显色稳定、无需煮沸、成本低、适合高通量检测等优点。
本试剂盒检测下限可以达到5mg/dl (20µl 样品),相当于50ng/ml 或278µM ;检测上限可以达到2000mg/dl (5µl 样品)或10,000mg/dl (1µl 样品),相当于20mg/ml (约111mM)或100mg/ml (约555mM)。
本试剂盒既可以轻松检测正常血样中的葡萄糖浓度,也可以检测高血糖血样品。
市售常见血糖仪的葡萄糖浓度检测范围约为1-30mM ,相当于约20-600mg/dl ,在检测一些过高血糖或过低血糖样品时会存在困难,而本试剂盒提供了5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)极宽的葡萄糖浓度检测范围。
本试剂盒所需样品体积小。
本试剂盒推荐的样品用量为5-20µl ,也可以使用如1-2µl 或更小体积的样品。
本试剂盒特异性好。
与常用的葡萄糖氧化酶-过氧化酶偶联(GOD-POD)法相比,由于邻甲苯胺试剂只与醛糖显色,且不受其它还原性物质的影响,本试剂盒非常适合血清、尿液等溶液中葡萄糖浓度的检测。
葡萄糖(glucose),也被称为dextrose 或grape sugar ,被认为是自然界中分布最广且最为重要的一种单糖。
葡萄糖含量试剂盒说明书(测组织、细菌或细胞)
葡萄糖含量试剂盒说明书(测组织、细菌或细胞)货号:QS2601 规格:50管/48样葡萄糖含量试剂盒说明书(测组织、细菌或细胞)可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较⼤的样本做预测定测定意义:葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,⽽且其代谢中间产物是⽣物合成的重要底物。
植物可通过光合作⽤产⽣葡萄糖。
就哺乳动物⽽⾔,葡萄糖不仅是⼤脑神经系统、肌⾁、脂肪组织等的唯⼀能源,⽽且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
测定原理:葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产⽣过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替⽐林偶联酚,⽣成有⾊化合物,在505 nm有特征吸收峰。
⾃备实验⽤品及仪器:可见分光光度计、⽔浴锅、可调式移液器、1mL玻璃⽐⾊⽫、研钵和蒸馏⽔试剂的组成和配制:试剂⼀:0.5µmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;试剂⼆:液体25ml×1瓶,4℃保存;试剂三:液体25ml×1瓶,4℃避光保存;葡萄糖提取:1、组织的处理:按照组织质量(g):蒸馏⽔体积(mL)为1:5~10的⽐例(建议称取约0.1g组织,加⼊1mL蒸馏⽔),研磨成匀浆,95℃⽔浴10分钟(盖紧,防⽌⽔分散失),冷却后,8000g,25℃离⼼10min,取上清液备⽤。
2、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离⼼管内,离⼼后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏⽔体积(mL)为500~1000:1的⽐例(建议500万细菌或细胞加⼊1mL蒸馏⽔),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),95℃⽔浴10分钟(盖紧,防⽌⽔分散失),冷却后,8000g,25℃离⼼10min,取上清液备⽤。
测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长⾄505nm,蒸馏⽔调零。
2、混合试剂的配制:使⽤前将试剂⼆和试剂三1:1等体积混合,⽤多少配多少。
葡萄糖-6-磷酸检测标准
葡萄糖-6-磷酸检测标准
1. 试验原理:葡萄糖-6-磷酸酶催化葡萄糖-6-磷酸在存在
NADP+的条件下转化成6-磷酸葡萄糖和NADPH。
在一定温
度下,葡萄糖-6-磷酸浓度与生成的NADPH的光密度成正比。
2. 试剂准备:葡萄糖-6-磷酸酶混合物、缓冲液、NADP+、葡
萄糖-6-磷酸标准品。
3. 方法步骤:
(1)将标准品加入每个反应管中,加入缓冲液至总体积1ml。
(2)加入葡萄糖-6-磷酸酶混合物,混匀。
(3)在37℃恒温水浴中孵育10min,停止反应。
(4)加入1ml NADP+,混匀。
(5)在340nm波长下测定产生的NADPH的吸光度,作为光
密度读数。
(6)使用标准品测出样品中葡萄糖-6-磷酸的含量,并计算出
样品中葡萄糖-6-磷酸浓度。
4. 检测范围和灵敏度:检测范围为0.001-10mg/L,在最佳实验条件下,灵敏度为0.001mg/L。
5. 质量控制:在每次检测前,应首先测定内部标准,如标准品
和阳性对照,以确保试剂和设备的正常运行。
同时,每次检测均应伴有负对照(即不含葡萄糖-6-磷酸的样品)的检测结果以防止假阳性的发生。
磷酸化试剂盒使用方法
磷酸化试剂盒使用方法
1. 组织总蛋白的提取:
- 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF混匀,放置在冰上备用;
- 称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程需注意冰上操作;
- 将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中,4 ℃ 12000g 离心30min;
- 吸取上清至新的管中;
- 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
2. 细胞总蛋白的提取:
- 裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml;
- 贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS 洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min;
- 悬浮细胞:4℃ 400g 离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次;
- 裂解完毕之后,将细胞裂解液4℃ 12000g离心30min;
- 将上清移入新的EP管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
请注意,在使用磷酸化试剂盒时,务必仔细阅读相关说明书和安全注意事项,严格按照操作步骤进行,以确保实验结果的准确性和安全性。
如果你还有关于磷酸化试剂盒使用的其他问题,请咨询专业人士。
葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒说明书
Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒说明书微量法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0695规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体3 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体1 mL×1支-20℃保存溶液的配制:1、工作液的配制:取15 mL试剂一和3 mL试剂二混匀(现配现用);2、试剂三:融化后可分装-20℃保存。
产品说明:GOD(EC 1.1.3.4)广泛存在于动物和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生H2O2,是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
GOD催化葡萄糖产生H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)(1)组织处理:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
(2)细菌、细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎(功率200w,超声3s,间隔10s,重复30次)。
8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
g6p 6-磷酸葡萄糖
g6p 6-磷酸葡萄糖
G6P是葡萄糖6-磷酸的缩写,是一种重要的代谢产物,参与了生物体内糖代谢途径中的多个关键步骤。
磷酸葡萄糖是糖代谢的关键中间产物之一,它在糖原合成、糖异生途径和糖酵解中都扮演着重要的角色。
首先,让我们从生物体内糖代谢的角度来看待G6P。
在糖异生途径中,葡萄糖6-磷酸是糖原合成的重要前体,它可以进一步转化为葡萄糖-1-磷酸,从而参与糖原的合成。
此外,在糖酵解途径中,葡萄糖6-磷酸也是糖代谢的重要中间产物,它可以通过糖酵解途径产生能量或进入其他代谢途径。
其次,从生物化学角度来看,葡萄糖6-磷酸还参与了许多其他生物化学过程。
比如,它可以通过糖醇磷酸途径转化为核糖糖醇磷酸,从而参与核酸合成;在糖酵解途径中,它也是糖代谢的重要中间产物,参与了ATP的产生等。
此外,从临床角度来看,葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症是一种遗传性疾病,患者会出现溶血性贫血等症状,这也凸显了葡萄糖6-磷酸在人体生理病理过程中的重要性。
综上所述,葡萄糖6-磷酸在生物体内起着非常重要的作用,参与了糖代谢途径中的多个关键步骤,对于维持生物体的正常代谢和功能具有重要意义。
6-磷酸葡萄糖酸酯酶
6-磷酸葡萄糖酸酯酶1.引言1.1 概述概述6-磷酸葡萄糖酸酯酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,简称G6PD)是一种重要的酶类分子,在生物体内具有广泛的分布和关键的生物学功能。
它参与到细胞内氧化应激反应和葡萄糖代谢等重要生理过程中,对于维持细胞代谢平衡和抵抗氧化伤害至关重要。
G6PD的主要功能是催化糖代谢途径中的6-磷酸葡萄糖(glucose-6-phosphate,简称G6P)氧化反应。
通过在G6P分子上移除一对高能电子,G6PD将其转化为6-磷酮酸葡萄糖(6-phosphoglucono-δ-lactone),并生成还原型辅酶NADPH。
这个反应是维持细胞内NADPH/NADP+比值平衡的关键步骤,同时也为脂质、核酸和蛋白质等生物分子的合成提供必需的还原能量。
G6PD在人体中的生理作用十分重要。
首先,它参与调节巴氏循环(pentose phosphate pathway)的代谢,巴氏循环是细胞内葡萄糖储备和还原能量供应的重要途径。
其次,G6PD通过产生NADPH来维持细胞内还原状态,对抗由活性氧物质引起的氧化伤害。
此外,G6PD还与维生素C、谷胱甘肽等天然抗氧化物质协同作用,在细胞抗氧化防御中发挥重要作用。
值得一提的是,G6PD在不同物种中的表达差异和变异现象十分突出。
不同G6PD基因型的个体可能在酶的表达水平、催化效率以及对抗氧化应激能力上存在差异,这对人类的健康和疾病发展可能产生重要影响。
近年来,一些研究还发现G6PD可能参与某些肿瘤的发生和发展,其与细胞生长、凋亡和血管新生等相关通路的调控关系备受关注。
综上所述,6-磷酸葡萄糖酸酯酶作为一种重要的酶类分子,在生物体内具有至关重要的功能。
深入理解G6PD的定义、功能、生理作用以及与相关疾病的关系,对于探索细胞代谢调控、氧化应激防御以及疾病发生机制等方面具有重要意义。
未来的研究方向将致力于进一步揭示G6PD在细胞和生理过程中的具体作用机制,以及其在疾病预防和治疗中的潜在应用价值。
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性检测试剂盒说明书 微量法
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0265规格:100T/96S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存(切忌放-20℃);试剂二:粉剂×1支,4℃保存;用时每支加250μL双蒸水充分溶解备用;试剂三:粉剂×1支,4℃保存;用时每支加250μL双蒸水充分溶解备用。
产品说明:G6PDH(EC 1.1.1.49)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键酶,催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯,同时将NADP+还原为NADPH,供生物合成及维持细胞内的还原状态用。
因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH催化NADP+还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH增加速率。
需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本的处理1、细菌、细胞或组织样品的制备:细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次)。
8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
二、测定步骤1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。
3.工作液配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三以15:0.2:0.2比例混合。
4.加样表:试剂名称(μL)测定管(μL)空白管(μL)工作液190190样本10-蒸馏水-10于340nm处测定5min内吸光值变化,第0s吸光值记为A1,第300s吸光值记为A2。
葡萄糖-6-磷酸酶检测
迪信泰检测平台
葡萄糖-6-磷酸酶检测
葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase, G6Pase),又称葡糖-6-磷酸酶,是一种水解磷酸化合物的磷酸酶,广泛存在于动物、植物、微生物及细胞中。
在肝组织中通过水解葡糖-6-磷酸释放葡萄糖入血,因此饥饿时肝糖原能够补充血糖,维持血糖平衡。
由此可见葡萄糖-6-磷酸酶是糖异生的关键酶。
G6Pase主要定位于内质网,是内质网的标志酶,最适pH值为6.5。
迪信泰检测平台采用生化法,可高效、精准的检测葡萄糖-6-磷酸酶活性的变化。
此外,我们还提供其他糖异生类的检测服务,以满足您的不同需求。
生化法测定葡萄糖-6-磷酸酶样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期:2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)。
2. 相关参数(中英文)。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 葡萄糖-6-磷酸酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案,具体可免费咨询技术支持。
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)简介:葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又称玉米葡糖,简称葡糖,化学式C6H12O6,分子量为180.16,是自然界分布最广、最重要的一种单糖,属于多羟基醛。
用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法,最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。
上述酶学法特点是:1、灵敏度、准确度、精密度均高;2、使用温和的反应条件;3、操作简便;4、适用于自动分析仪。
Leagene葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)又称葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法等,其检测原理是在葡萄糖氧化酶的催化下,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸,同时消耗溶液中的氧,产生过氧化氢,过氧化氢与氧化色原物质反应生成有色化合物,初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比,分光光度计进行比色测定。
本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定,但不宜直接检测尿液中的葡萄糖含量,其中Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl。
本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、生理盐水或PBS2、离心管、小试管或96孔板3、水浴锅或恒温箱4、分光光度计或酶标仪5、全自动或半自动生化分析仪操作步骤(仅供参考):编号名称TC0713100TTC0713200TStorage试剂(A): 酚试剂50ml2×50ml RT 避光试剂(B): 酶试剂磷酸盐缓冲液(pH7.0)50ml2×50ml -20℃避光4-氨基安替比林葡萄糖氧化酶过氧化物酶临用前,按酚试剂:酶试剂混匀,即GOD-POD工作液,4℃保存。
试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml2×1ml -20℃试剂(D): ddH2O 1ml2ml RT 使用说明书1份1、样本处理:①血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围(25mmol/L),用生理盐水稀释后检测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明
分光光度法货号:BC0930
规格:50管/48样
产品内容:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体47.5mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂四:液体×1支,-20℃保存;
产品说明:
葡萄糖-6-磷酸酶((glucose6phosphatase,G6Pase,EC3.1.3.9)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH,在340nm下测定NADH生成速率,即可反映G6P活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞
数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加
入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组
织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
二、测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
工作液的配制:临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用;用不完的试剂4℃保存一周;
2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。
3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液,立即混匀,记录340nm处
初始吸光值A1和2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
注意:在该试剂盒中,若ΔA大于0.3,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。
计算公式中乘以相应稀释倍数。
G6P活性计算:
1、血清(浆)G6P活力计算
单位定义:每毫升血清(浆)每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(U/mL))=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=1608×ΔA
2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(U/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=1608×ΔA ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(U/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.215×ΔA
V反总:反应体系总体积,1×10-3L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。