【精品】二苯胺法测定DNA含量
dna提取的各种方法介绍
１、二苯胺试剂：使用前称取 0.8g 二苯胺（需在70% 乙醇试 剂中重结晶 2 次 ) ，溶于 180 ml 冰乙酸中，再加入 8ml 过氯酸 （60%以上），混匀待用，临用前加入0.8ml 1.6%乙醛溶液，所 配试剂应为无色。 每组需56ml 共需2800ml ２、DNA标准溶液：（须经定磷法确定其浓度）取标准DNA 以0.01N NAOH配成200微克／毫升的标准液。 每组需12ml 共需600ml ３、1.6% 乙醛：取 47% 乙醛 3.4ml，加重蒸水定容至 100ml （放于冰箱中，一周之内可以使用）。 共需70ml ４、 ( 测样品液：准确称取猪脾 DNA 或用紫外分光法中剩下 的DNA液配成10微克／毫升的溶液。 每组需4ml 共需200ml
DNA的提取方法简介
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常 需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA 分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适 当的材料提取DNA。 动植物中，小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子，植 物种子的胚中都含有丰富的DNA。 微生物中，谷氨酸菌体含7%~10%，面包酵母 含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%~10%。
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以 1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于 蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对 DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子 的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取 DNA.
1、核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则 为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有 鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于 水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离 酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中， DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
DNA的提取及含量测定
[实验内容及步骤]
一、动物肝脏中DNA的提取 1．取猪肝8g，用匀浆器磨碎，加入相当2倍肝重的0.1mol/L
NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液，研磨三次，然后倒出匀浆物， 匀浆物在4000r/min下离心10min；沉淀中再加入25ml缓冲液， 于4000r/min离心20min；取沉淀。 2．在上述沉淀中加入40ml0.1mol/L NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓 冲液、20mlCHCl3-异戊醇混合液、4mL5%SDS使其浓度为 0.41%，振摇30min，然后缓慢加固体NaCl，使其终浓度为 1mol/L。将上述混合液在3500r/min离心20min，取上清水相。 3．在上述水相溶液中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒 慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇， 即得DNA粗制品。用蒸馏水溶解并定溶至50ml，用二苯胺法测 定DNA含量。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
二、DNA的定量测定（二苯胺法）
1．标准曲线的绘制
按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴中保温45min，冷却 后，在595nm波长下，于722型分光光度计上比色测定，以吸光度 对DNA浓度作图，绘制标准曲线。
0
1
2
3
4
5
标准DNA 0.0
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
溶液/ml
蒸馏水 2.0
[实验仪器及用品]
实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。
实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
二苯胺法测定DNA含量
实验12 二苯胺法测定DNA 含量一、目的学习和掌握测定DNA 的定糖法（二苯胺法）的原理和操作技术。
二、原理脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在595nm 处有最大的吸收，在每毫升含DNA20~400微克范围内，光密度与DNA 的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
除DNA 外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有同样的反应。
HO CH 2C — CH 2 CHO 蓝色化合物 酸性条件 二苯胺 Oω—羟基—γ酮基戊醛三、材料、试剂和器具 （一）试剂1、DNA 标准溶液：取小牛胸腺DNA 用0.1N 氢氧化钠溶液配制成200微克/毫升的溶液。
2、DNA 样品液：（自己提取）控制其DNA 含量在50~100微克/毫升左右。
3、二苯胺试剂：称取1克结果的二苯胺试剂溶于100毫升分析纯的冰醋酸中，再加入10毫升过氯酸（A.R60%以上）或浓硫酸2.75毫升，混匀备用。
临用前加入1毫升1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱，一周内可使用）所配得的溶液应为无色。
（二）器具1、试管及试管架2、移液管（1，2，5毫升）3、恒温水浴4、可见光分光光度计四、操作步骤（一）DNA 标准曲线的制作==加毕，摇匀，于60℃恒温水浴中保温1小时，（或于沸水中煮沸15分钟，冷却测0.D 595nm 值。
）以光密度为纵坐标，DNA 含量（ug/ml ）为横坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定取2支试管，各加0.2~0.5毫升的待测液（内含DNA 应在标准曲线可测范围之内）加蒸馏水稀释至2毫升，再加4毫升二苯胺试剂，摇匀，其操作步骤与标准曲线的制作相同。
根据测得的光密度值，从标准曲线上查出相当该光密度DNA 的含量，按下式计算出样品中DNA 的百分含量。
DNA 含量/毫升待测液=标准曲线查得值×稀释倍数10010)(/(%)6⨯⨯⨯=g DNA 新鲜鲜肝总体积毫升含量产率五、注意事项1、二茉胺法测定DNA 含量灵敏度不高，待测样品中DNA 含量低于50mg/L 即难以测定。
脱氧核糖核酸定量测定--改良二苯胺法
脱氧核糖核酸定量测定——改良二苯胺法一、目的学习用定糖法测定脱氧核糖核酸(DNA)的含量。
二、原理在强酸环境下加热，可以使DNA 中嘌呤碱与脱氧核间的糖苷键断裂。
因而DNA 酸解后生成嘌呤碱基、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸。
脱氧核糖在酸性条件下脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺作用后显示蓝色，在595毫微米有最大吸收。
用二苯胺法测定DNA 含量时灵敏度不高，待测样品中DNA 含量若低于50微克/毫升就难以测定。
如用乙醛增加二苯胺法测DNA 的发色量，并用乙酸戊酯把反应中形成的蓝色产物抽提到有机溶剂相内，如此进行测定灵敏度显著提高。
按此改良二苯胺法，待测样品中DNA 含量在10~150微克/毫升范围内，光密度与DNA 量成正比关系。
样品中含少量RNA不影响测定，而蛋白质、多种糖类及其衍生物、芳香醛、羟基醛亦能与二苯胺形成各种有色物质，故干扰测定。
三、实验材料，仪器和试剂1、实验材料DNA标准溶液：于分析天平上精确称取纯的鱼精DNA，并以水配成100微克/毫升的溶液(DNA 在水内较难溶，可隔夜配制)。
待测DNA：以水配成约50微克/毫升的溶液。
2、仪器移液管、72型分光光度计、电热恒温水浴箱、温度计3.试剂4%二苯胺冰醋酸溶液：20克二苯胺(分析纯)加少量冰醋酸(分析纯)微热至全部溶解后，再以冰醋酸定容到500毫升，只限当天使用。
0.16%乙醛水溶液:取40%乙醛0.4毫升,加水至100毫升。
20%过氯酸:71.4毫升70%过氯酸(HClO₄,分析纯)加水至250毫升。
乙酸戊酯(化学纯)或乙酸异戊酯(化学纯)。
四、操作步骤1、标准曲线制作按下表在各管内分别加入不同量的100微克/毫升DNA标准溶液，然后每管加水使体积均达2毫升。
向各管加入2毫升20%过氯酸与4毫升4%二苯胺冰醋酸溶液，混匀后再加0.2毫升0.16%乙醛水溶液并充分摇匀。
56₄保温一小时后，流动水冷却，并向各管反应混合液内加2毫升乙酸戊酯，试管加塞，剧烈振摇，使反应生成蓝色物质充分地被抽提到乙酸戊酯相内。
dna浓度测定原理
dna浓度测定原理
DNA浓度测定的原理主要有两种：紫外分光光度法和脱氧核糖核酸-二苯胺法。
1. 紫外分光光度法：由于核酸分子（DNA或RNA）含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，在260nm波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的浓度成正比。
因此，通过测定不同波长的紫外线吸收值，可以计算出核酸样品的浓度。
此外，通过测定260nm和280nm的紫外线吸收值的比值
（A260/A280），还可以估计核酸的纯度。
纯的DNA制品的比值为，RNA的比值为。
若比值高于，则可能有RNA污染，低于则有蛋白质污染。
对于很稀的核酸溶液，可用荧光光度法进行测定。
在荧光染料溴化乙锭(EB)插入DNA的碱基对平面之间并与之结合后，DNA样品能在紫外光的激发下产生桔红色荧光。
荧光强度与被结合的EB的量成正比，而被结合的EB 的量又与核酸分子长度和含量成正比。
2. 脱氧核糖核酸-二苯胺法：在酸性环境中，脱氧核糖与二苯胺试剂一起加热会产生蓝色化合物。
生成的蓝色化合物在595nm处有最大吸收值。
此方法测定的是样品中的总磷量，若样品中含有无机磷杂质，需通过对照组扣除无机磷含量。
该方法灵敏度相对较高，但易受蛋白质和核苷酸影响。
这两种方法各有特点，可以根据具体情况选择适合的方法进行DNA浓度测定。
DNA的定量测定
二苯胺法的原理
强酸、加热条件下，可以使DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间 的糖苷键断裂，而产生嘌呤碱基，脱氧核糖与嘧啶核苷酸。 其中2ˊ脱氧核糖在酸性环境中成为ω―羟基―γ―酮基戊醛， 此物与二苯胺反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。 DNA在40-400μg范围内光密度与DNA浓度成正比。
六、思考题
1、 DNA含量测定的方法有哪些？ 各有何优缺点？
2、简述二苯胺法测DNA的基本原 理。
分光光度计
开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波 长调至测试用波长。仪器预热20分钟。 预热后，打开试样室盖（光门自动关闭），调 节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上试样 室盖，将盛有参比溶液的比色皿架置与校正位 置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮， 使数字显示为“100.0”。连续几次调整“0”和 “100%”，仪器即可进行测定工作。 将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮， 使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入 光路，显示值即为被测样品的吸光度值。
DNA含量＝
待测样品中测得的DNA的mg数 待测样品液中样品的g数
X 100
注意事项
糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应 尽可能除去。 取样准确 选定一台分光光度计后，所有测定工作都在同一台上完成，以避 免不同仪器间的系统误差 二苯胺不容于水，取用和盛放二苯胺溶液的器皿应干燥，和DNA溶 液反应时迅速混合
DNA +
NH
100℃
冰醋酸，少量硫酸
蓝色复合物
试剂和器材
试剂
1mg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂
器材
可见分光光度计、恒温水浴锅、分析 天平
实验过程
标准曲线的制作
二苯胺试剂鉴定DNA
材料：活鸡或鲜血鸡血。
仪器:离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL,ｌ个),烧杯（10０mL，l个,50 mL、5０0mL各２个)，试管（２0 mL,2个）,漏斗,试管夹,纱布.
试剂:酒精得体积分数为95%得溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h),蒸馏水,柠檬酸钠得质量浓度为0。1g/mＬ得溶液,氯化钠得物质得量浓度分别为2 mol/L与0．015mol/L得溶液，二苯胺试剂。
DNA不溶于９5％得酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得DNA。
DNA中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此,二苯胺可以作为鉴定DNA得试剂。
目得要求
1、学会DNA得粗提取与鉴定得方法。
２、观察提取出来得DNA物质得颜色与形状。
７．提取含杂质较少得DNＡ
在上述滤过得溶液中，加入冷却得、酒精得体积分数为９５％得溶液50ｍＬ(使用冷却得酒精，对DNA得凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是DNA。注意观察丝状物就是什么颜色得.
8.ＤNA得鉴定
5.将ＤＮA得粘稠物再溶解
取１个5０mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠得物质得量浓度为2 mol／L得溶液２0ｍL。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。
６。过滤含有DNA得氯化钠溶液
取１个１00 mL烧杯，用放有两层纱布得漏斗过滤步骤5中得溶液。取其滤液,DＮＡ溶于滤液中。
结论
步骤８得2支试管中溶液颜色得变化说明了什么？将得出得结论填写在《实验报告册》上.
二苯胺法测定DNA含量
实验12 二苯胺法测定DNA 含量一、目的学习和掌握测定DNA 的定糖法（二苯胺法）的原理和操作技术。
二、原理脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在595nm 处有最大的吸收，在每毫升含DNA20~400微克范围内，光密度与DNA 的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
除DNA 外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有同样的反应。
HO CH 2C — CH 2 CHO 蓝色化合物 酸性条件 二苯胺 Oω—羟基—γ酮基戊醛三、材料、试剂和器具 （一）试剂1、DNA 标准溶液：取小牛胸腺DNA 用0.1N 氢氧化钠溶液配制成200微克/毫升的溶液。
2、DNA 样品液：（自己提取）控制其DNA 含量在50~100微克/毫升左右。
3、二苯胺试剂：称取1克结果的二苯胺试剂溶于100毫升分析纯的冰醋酸中，再加入10毫升过氯酸（A.R60%以上）或浓硫酸2.75毫升，混匀备用。
临用前加入1毫升1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱，一周内可使用）所配得的溶液应为无色。
（二）器具1、试管及试管架2、移液管（1，2，5毫升）3、恒温水浴4、可见光分光光度计四、操作步骤（一）DNA 标准曲线的制作==加毕，摇匀，于60℃恒温水浴中保温1小时，（或于沸水中煮沸15分钟，冷却测0.D 595nm 值。
）以光密度为纵坐标，DNA 含量（ug/ml ）为横坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定取2支试管，各加0.2~0.5毫升的待测液（内含DNA 应在标准曲线可测范围之内）加蒸馏水稀释至2毫升，再加4毫升二苯胺试剂，摇匀，其操作步骤与标准曲线的制作相同。
根据测得的光密度值，从标准曲线上查出相当该光密度DNA 的含量，按下式计算出样品中DNA 的百分含量。
DNA 含量/毫升待测液=标准曲线查得值×稀释倍数10010)(/(%)6⨯⨯⨯=g DNA 新鲜鲜肝总体积毫升含量产率五、注意事项1、二茉胺法测定DNA 含量灵敏度不高，待测样品中DNA 含量低于50mg/L 即难以测定。
二苯胺试剂鉴定DNA
二苯胺试剂：鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中，再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化，再使用。
B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制:将0。
1 mL B液加入到10 mL A液中，现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1。
DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0。
14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2。
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺(沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1。
步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入.2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1 g／mL 的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个，50 mL，500 mL，各2个），漏斗，试管(20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒(100 mL，1个），纱布，镊子,滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1。
析出溶解在NaC1溶液中的DNA.2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3。
DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色.方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2．溶解DNA:3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢.3 min6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。
二苯胺试剂鉴定DNA
二苯胺试剂：鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中，再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化，再使用。
B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制:将0。
1 mL B液加入到10 mL A液中，现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1。
DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0。
14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2。
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺(沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1。
步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入.2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1 g／mL 的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个，50 mL，500 mL，各2个），漏斗，试管(20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒(100 mL，1个），纱布，镊子,滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1。
析出溶解在NaC1溶液中的DNA.2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3。
DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色.方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2．溶解DNA:3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢.3 min6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。
dna用二苯胺染色原理
dna用二苯胺染色原理
二苯胺试剂鉴定DNA的原理：DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成w—羟基—r酮基戊醛，它再和二苯胺作用而显现蓝色（溶液呈浅蓝色）。
常温条件下，蛋白质与双缩脲试剂发生作用呈现紫色。
实验原理
1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
几种常见的DNA、RNA含量测定方法
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
实验仪器
分光光度计
二、RNA含量的测定方法 2.苔黑酚法
实验方法
(1)标准曲线绘制：取试管6支，按下表编号并加入试剂：
管号 试剂 1 2 3 4 5 6
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
3.二苯胺法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸 收，在40～400mg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。
100℃
NH
DNA
+
冰醋酸，少量硫酸
蓝色物质
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验仪器
分光光度计
一、DNA含量的测定方法 1.光密度测定法
实验方法
(1)取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到1ml (2)用1ml水做空白
(3)把样品杯放在分光光度计比色槽上，测定A260
(4)每ml中DNA浓度(mg)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm处OD 值为0.2，则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ml （注：若样品不能达到绝对纯度也可以通过绘制标准曲线来计算样品DNA浓度）
dna钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值在230nm处为吸收低谷其吸光率以a260表示a260是核酸的重要性质对于纯的核酸溶液测定a260即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量核酸的比吸光系数是指浓度为1gml的核酸水溶液在260nm处的吸光率天然状态的双链dna的比吸光系数为0020变性dna和rna的比吸光系数为0022
二苯胺试剂鉴定DNA
二苯胺试剂鉴定DNA二苯胺试剂鉴定D N A Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】二苯胺试剂:鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为%的溶液。
配制:将 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L 和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个，50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2．溶解DNA：3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
二苯胺的使用
⼆苯胺的使⽤DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的⽅法为⼆苯胺法(配⽅见下述的“药品配制”)。
⼆苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸⽣成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和⼆苯胺作⽤⽽显现蓝⾊(溶液呈浅蓝⾊)。
鉴定时溶液蓝⾊的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
⼆苯胺试剂的配制A液： 15 g⼆苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,⽤棕⾊瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使⽤。
B液： ⼄醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制： 将0.1 mL B液加⼊到10 mL A液中,现配现⽤。
DNA粗提取与鉴定的另⼀种⽅法1.材料⽤具新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏⽃,酒精灯,⽯棉⽹,三⾓架,⽕柴,⼑⽚,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,⼆苯胺试剂,蒸馏⽔。
2.⽅法步骤(1)DNA的粗提取 ①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放⼊冰箱冷冻室,⾄少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放⼊研钵中,倒⼊10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏⽃中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤⼊烧杯中(有条件的学校可将滤液倒⼊塑料离⼼管中进⾏离⼼,⽤1000r/min的旋转频率,离⼼25 min,取上清液放⼊烧杯中)。
在4 ℃冰箱中放置⼏分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将⼀倍体积的上清液倒⼊两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并⽤玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。
沉淀35 min后,可见⽩⾊的DNA絮状物出现。
⽤玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定 ①配制⼆苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴⼊到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放⼊试管中,加⼊4 mL ⼆苯胺试剂,混匀后观察溶液颜⾊(不变蓝)。
⽤沸⽔浴(100 ℃)加热10 min 。
二苯胺试剂鉴定DNA
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载二苯胺试剂鉴定DNA地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容二苯胺试剂:鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制:将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1 g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol ／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个， 50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
DNA的提取及含量测定实验
[实验仪器及用品]
实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。 实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
DNA的提取及含量测定
[实验目的及要求]
1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA 的原理和方法； 2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理 和方法。
[实验原理]
1．DAN的提取 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存 在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。动植物的 DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液 中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不 同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中 分别抽提出来。 2 DAN的含量测定 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊 醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。在 DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比， 可用比色法测定。
二、DNA的定量测定（二苯胺法） 1．标准曲线的绘制 按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴中保温45min，冷却 后，在595nm波长下，于722型分光光度计上比色测定，以吸光度 对DNA浓度作图，绘制标准曲线。
0 标准DNA 溶液/ml 0.0
1 0.4
2 0.8
3 1.2
4 1.6
5595nm
2.0 4.0
1.6 4.0
二苯胺试剂鉴定
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为%的溶液。
配制:将 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl 溶液中的DNA析出。
不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为 g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个， 50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2．溶解DNA：3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
3 min6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。
5 min8．DNA的鉴定：沸水浴5min【实验十二】DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。
二苯胺试剂鉴定
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为%的溶液。
配制:将mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个，50 mL，500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2．溶解DNA：3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
3 min6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。
5 min8．DNA的鉴定：沸水浴5min【实验十二】DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。