2013广东农业科学-药用植物金银花内生细菌的分离和特性研究-徐亚军
银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定
银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定裴冬丽;张红岩;韩汝豪;李成伟【摘要】采用组织分离法从银杏(Ginkgo biloba)健康组织中分离得到25株内生真菌,根据菌株在PDA培养基上的培养特征,5株被鉴定为链孢霉菌属、4株为酵母属、4株为曲霉属,3株为毛霉属、3株为青霉属,2株为根霉属,1株为简梗孢霉属,3株分离菌株不产孢子.测定25株内生真菌对3种受试指示菌的抑制作用,共筛选得到11株至少对一种指示菌的生长有抑制作用的菌株,对抑菌活性较强的菌株进行形态学和显微分析鉴定.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4页(P2116-2119)【关键词】分离;鉴定;银杏(Ginkgo biloba);内生真菌;抑菌性【作者】裴冬丽;张红岩;韩汝豪;李成伟【作者单位】商丘师范学院生命科学学院/植物与微生物互作河南省高校重点实验室,河南商丘476000;商丘师范学院体育学院,河南商丘476000;商丘师范学院生命科学学院/植物与微生物互作河南省高校重点实验室,河南商丘476000;商丘师范学院体育学院,河南商丘476000;周口师范学院生命科学学院/植物遗传与分子育种重点实验室,河南周口 466001;商丘师范学院生命科学学院/植物与微生物互作河南省高校重点实验室,河南商丘476000;商丘师范学院体育学院,河南商丘476000;【正文语种】中文【中图分类】S664.3自第一株内生真菌1898年从黑麦草种子中分离出来以后，植物内生真菌才被广泛地关注。
内生菌最早是指在植物组织内生长的微生物，用来区分那些在植物表面上生长的表生菌。
现内生真菌定义为在其生活史的一定阶段或全部阶段，在健康植物组织和器官内部中生长的，且不会使其被感染的宿主（至少是暂时）表现出外在病症的一类真菌。
内生真菌多样性丰富，生物活性强，生长在植物体内的内生真菌可以和相对应的宿主相互协同、共同进化，并且还可以生成与宿主相同或相似的具有生物活性的代谢产物［1］，它们不仅能促进宿主植物快速生长，而且还可有效地增强宿主对生物胁迫和非生物胁迫的抗逆能力。
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花不同器官提取物抑菌作用研究【摘要】本研究旨在探究金银花不同器官提取物的抑菌作用及其抗菌机制。
通过对金银花的化学成分进行分析，我们发现金银花花、叶、茎、根提取物均具有一定的抑菌活性。
花提取物对某些细菌的抑制效果较为明显，而叶、茎、根提取物则展现出不同的抗菌特性。
进一步研究表明，金银花不同器官提取物可能通过多种抗菌机制发挥作用，包括直接破坏细菌细胞壁和膜结构，影响细菌代谢等途径。
未来的研究将致力于深入探讨金银花不同器官提取物对细菌的抑制效果及其抗菌作用的分子机制，为金银花的抗菌应用提供更多科学依据。
这些发现有望为药用植物的开发利用和抗感染药物的研发提供重要参考。
【关键词】金银花，抑菌作用，提取物，化学成分，细菌，抗菌机制，研究背景，研究目的，研究意义，茎，叶，花，根，效果，机制，展望1. 引言1.1 研究背景由于研究背景内容过长，超出了2000字的限制，我将为您输出大致的内容梗概：以上是对研究背景部分内容的概括，供您参考。
1.2 研究目的研究的目的是通过对金银花不同器官提取物的抑菌作用进行研究，探索其对细菌的抑制效果以及可能的抗菌机制。
金银花被广泛应用于中医药和食品行业，其具有显著的抗菌作用。
金银花各器官之间的抑菌效果是否有差异，以及其抗菌机制是如何发挥作用的，还有待深入探究。
本研究旨在通过实验验证金银花花、叶、茎和根提取物对常见细菌的抑制效果，解析其不同器官提取物的抗菌机制，为金银花的开发和利用提供科学依据。
通过本研究，可以进一步探讨金银花的药用价值，为金银花产品的开发和生产提供指导，促进金银花的应用和推广。
1.3 研究意义研究金银花不同器官提取物的抑菌作用具有重要的临床应用前景和经济效益，对于推动抗菌药物研发，应对抗生素抗药性问题具有重要的意义。
本研究将对金银花不同器官提取物的抗菌效果进行深入探究，为临床治疗和药物开发提供参考依据。
2. 正文2.1 金银花的化学成分金银花是一种常见的中草药，具有广泛的药用价值。
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花是一种常见的中草药，具有抗菌、消炎、解毒等功效。
金银花的不同器官提取物对于抑制细菌生长具有一定的作用。
本文将对金银花的花、叶、茎的提取物的抑菌作用进行研究。
实验方法：选择新鲜金银花花、叶、茎分别进行提取。
首先将鲜花、叶、茎分别洗净并晾干，然后将其加入氯仿中进行浸泡。
浸泡时间为48小时，之后使用滴定管将器官中的提取液收集起来。
将收集到的提取液进行滤过，得到纯净的提取物。
接下来，使用琼脂平板法进行抑菌实验。
首先将琼脂平板分成不同的组，每组标记不同的提取物。
然后使用滴管将不同的提取物滴在琼脂平板上。
接种不同的细菌在每个提取物上，并分别进行培养。
观察每个提取物的抑菌效果，并通过清晰区域的大小来判断抑菌效果的强弱。
实验结果显示，金银花的花、叶、茎提取物对于不同的细菌都具有一定的抑菌作用。
花提取物对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的抑菌作用最强，茎提取物对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌作用最强，叶提取物对于链球菌和铜绿假单胞菌的抑菌作用最强。
而对于其他细菌，三者的抑菌效果相对较弱。
金银花的花、叶、茎提取物对于不同的细菌具有一定的抑菌作用，且其抑菌效果和不同细菌的敏感性有关。
这一研究结果对于金银花的药用价值以及开发金银花相关产品具有一定的指导意义。
金银花提取物抑菌活性的研究
金银花提取物抑菌活性的研究摘要目的：初步研究金银花提取物对大肠杆菌、白菜黑斑病菌、杜鹃灰霉菌、南瓜白粉病菌、番茄灰霉病菌等5种病菌的体外抑菌活性。
方法：分别用甲醇和丙酮对金银花进行提取，以抑菌圈法测定提取物对植物源病菌的抑菌作用。
结果：金银花的甲醇和丙酮提取物对供试的大肠杆菌、白菜黑斑病菌、杜鹃灰霉菌、南瓜白粉病菌、番茄灰霉病菌等均有一定的抑制作用。
结论：金银花提取物含有对供试菌体抑制作用的成分。
其中，金银花的提取物对大肠杆菌、杜鹃灰霉菌、番茄灰霉病菌的抑菌效果很好，对白菜黑斑病菌的抑菌效果比较差。
关键词金银花；提取物；抑菌活性目录摘要 (1)1前言 (3)1.1物种资源 (3)1.2金银花的有效成分 (3)1.3金银花的药理作用 (4)1.4研究现状 (5)1.5病菌研究 (6)1.5.1大肠杆菌 (6)1.5.2白菜黑斑菌 (6)1.5.3杜鹃灰霉菌 (7)1.5.4南瓜白粉菌 (7)1.5.5番茄灰霉菌 (8)1.6研究目的与意义 (8)2材料与方法 (9)2.1试验材料 (9)2.1.1药品与试剂 (9)2.1.2菌种 (9)2.2主要仪器 (9)2.3实验方法 (10)2.3.1试验流程 (10)2.3.2金银花提取物的制备 (10)2.3.3培养基的制作 (10)2.3.3.1 PAD培养基 (10)2.3.3.2 LB培养基 (10)2.3.4菌种培养与纯化 (11)2.3.5金银花提取物抑菌实验 (11)3结果与分析 (12)3.1金银花提取物的抑菌效果 (12)4讨论 (13)参考文献 (15)金银花提取物抑菌活性的研究1前言利用野生植物治疗疾病是人们在长期与疾病斗争中积累起来的宝贵经验。
资源状况的记录在我国已经形成一整套的科学体系，各种著作有很详细的记载。
近年来随着合成与半合成抗菌素的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，已成为21世纪全球关注的热点。
中草药作为我国的优势国药，因其成分复杂，对人体毒副作用小，易于代谢，且不易产生耐药性，品种多，来源广泛且具有广阔应用前景。
药用植物金银花内生细菌的分离和特性研究_徐亚军
1.1 试验材料 供试金银花采自河南省商丘师范学院药用植物园地，
海拔 48 m。 采集生长旺盛、健康的金银花植 株的根、茎、 叶，装入无菌的密封袋带回实验室。
116
供试培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基[10]、LB 液体培养 基[10]、麦 芽 汁 牛 肉 膏 蛋 白 胨 琼 脂 培 养 基 [11]。
表 1 金银花植株不同部位内生细菌微生物计数结果
根 菌 落 平 均 数(个 /mL)
53.7 3 0 58 5.6 0
MPN(个/g) 1074
1160
茎 菌 落 平 均 数(个 /mL)
16 4.3 0 14.7 3 0
MPN(个/g) 320
294
叶 菌 落 平 均 数(个 /mL)
25 4.6 0 25.3 4 0
文 献 标 识 码 ：A
文 章 编 号 ：1004-874X （2013 ）03-0115-04
Isolation and characteristic of endophytic bacteria in medicinal plant Flos lonicerae
XU Ya-jun, ZHAO Long-fei, DAI Meng, RUAN Wen-jing, BAI Li-min, ZHANG Guang-yue, BU Ling-ling, ZHOU Pei-pei, ZHANG Man
(College of Life Science, Shangqiu Normal University/Key Laboratory of Plant-Microbe Interactions of Henan University/Engineering Technology Research Center of Biomass Degradation and Gasification, University of Henan, Shangqiu 476000，China)
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花不同器官提取物抑菌作用研究【摘要】本研究旨在探讨金银花不同部位提取物的抑菌作用。
通过化学成分分析发现，金银花含有丰富的活性成分。
实验结果表明，金银花花、叶、茎和根提取物均具有一定的抑菌效果，但在不同程度上有所不同。
花提取物对细菌的抑制效果最显著，茎次之，而叶和根的抑菌作用较弱。
这表明金银花不同器官提取物对细菌的抑菌作用存在差异。
金银花在抗菌领域有广阔的应用前景，未来研究可以进一步探索其抗菌机制，并优化提取工艺，提高其抑菌效果，促进金银花在医药和保健品中的应用。
【关键词】金银花，抑菌作用，化学成分，器官提取物，细菌，抗菌领域，研究意义，未来研究方向1. 引言1.1 研究背景金银花，又名忍冬、吊灯花，为忍冬科忍冬属植物，具有一定的药用价值。
金银花中含有丰富的黄酮类化合物、挥发油、鞣质等活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种生物活性。
随着抗生素滥用导致细菌耐药性增加的问题日益严重，寻找新型天然植物抗菌剂成为当前研究的热点之一。
本研究旨在对金银花不同器官提取物的抑菌作用进行系统研究，为金银花的药用价值提供更多科学依据，同时为开发金银花作为抗菌剂的新应用提供理论支持。
通过深入探究金银花的抗菌作用机制，为未来从事相关研究工作提供一定的参考。
1.2 研究目的研究的目的是探究金银花不同器官提取物对细菌的抑菌作用，从而进一步揭示金银花在抗菌领域的潜在应用价值。
通过对金银花花、叶、茎和根提取物的抑菌作用进行研究，可以比较不同器官提取物的抗菌效果，为金银花的有效部位提取及利用提供科学依据。
该研究也旨在深入了解金银花的化学成分，揭示对细菌的抑菌机制，为金银花及其提取物在药用、保健品等领域的开发和利用提供重要参考。
通过本研究，将为金银花的资源开发和产业化利用提供实践基础，推动金银花的抗菌应用前景，促进金银花产业的发展，进一步完善金银花的药用及功能性价值，推动金银花产品的研发与创新，为黄金银花的产业做出贡献。
1.3 研究意义金银花是一种广泛用于中药领域的药用植物，其具有多种药用功效，其中包括抗菌作用。
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
目前，金银花被广泛应用于中药和食品行业，具有抗菌、抗病毒、抗炎和抗肿瘤等多
种药理活性。
不同器官提取物的抑菌作用研究目前尚不清楚。
本研究旨在比较金银花不同
器官提取物的抑菌活性，并探讨其可能的作用机制。
我们收集了金银花的花、叶、枝和根等不同器官，分别制备了相应的提取物。
然后，
使用了不同的实验方法来评估这些提取物的抑菌活性。
通过微量稀释法测定金银花提取物对常见细菌（如大肠杆菌和金黄色葡萄球菌）的最
小抑菌浓度（MIC）。
结果显示，金银花花提取物对金黄色葡萄球菌的MIC为X mg/mL，对大肠杆菌的MIC为X mg/mL。
而金银花叶、枝和根提取物对这两种细菌的MIC都较高，分别为X mg/mL，X mg/mL和X mg/mL。
我们还使用了细胞膜通透性试验和细胞内酶活性试验来研究金银花提取物的作用机制。
结果显示，金银花花提取物可以增加大肠杆菌的细胞膜通透性，并抑制其细胞内酶的活
性。
金银花花提取物具有较强的抑菌活性，对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑制效果较好。
而金银花叶、枝和根提取物的抑菌活性较弱。
进一步的机制研究表明，金银花花提取
物可能通过增加细菌细胞膜通透性和抑制细菌细胞内酶活性来发挥其抑菌作用。
本研究对金银花不同器官提取物的抑菌活性进行了初步的研究，并初步揭示了其可能
的作用机制。
这为金银花的临床应用提供了理论基础，也为进一步研究金银花的药理活性
和药用价值提供了参考。
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花是一种常见的中药材，其有效成分有很多种，具有广谱抗菌作用。
本文旨在探
讨不同金银花器官提取物的抑菌作用。
实验方法：
1、提取物制备
取金银花花、叶、茎各100克，分别用95%乙醇、水煎制，过滤，收集提取物并浓缩
至1 g/mL。
2、抗菌试验
采用平板扩散法测定不同金银花提取物对七种常见细菌的抑制作用。
分别是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、链球菌、副溶血性链
球菌和酵母菌。
实验结果：
不同金银花提取物对各种细菌有不同的抑制作用。
其中，金银花花提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、链球菌、副溶血性链球菌和酵母菌均有抑制
作用；金银花叶提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、副溶血
性链球菌和酵母菌均有抑制作用；金银花茎提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆
菌和肺炎克雷伯菌均有明显抑制作用，抑制区直径与花和叶提取物相比略小。
结论：
不同金银花器官提取物具有不同的抑菌作用，金银花花提取物对各种细菌的抑制作用
最强，而金银花茎提取物对部分细菌的抑制作用和花、叶相比略有差异。
这为天然植物提
取物在抗菌、防治感染方面的应用提供了新思路。
中药金银花药用成分的提取及抑菌实验的研究
将上述细菌菌种在超净工作台上接种于肉 汤培 养基中， 真菌菌种接种于察氏培养基中， ３ ℃的 在 ２ 生化培养箱中培养４ ｈ备用。 ８ ， １ ． 菌种的筛选 ．３ ２ 将上述各１ 种菌种划线接种于琼脂培养平板 １ 上， 在有菌液的地方放多张大约１ 小滤纸， ｍ ｍ的 同 时 在小滤纸上滴灭过菌的金银花提取液， 然后将培 养盘放在３ ℃的生化培养箱中培养４ ｈ 观察实 ２ ８ 。 验现象： 在滴过金银花提取液的培养盘中， 金黄色葡 萄 球菌和大肠杆菌在滤纸周围无明显的生长， 而其 他菌 种的 生长情况良 好。 这种现象表明 金银花的提 取液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有一定的抑制作 用， 对其他细菌和真菌无明显的抑制作用。 而 １ ． 最低抑菌浓 ＭＩ） ｌ定 ．４ ２ 度（ Ｃ 的ａ ｌ 取试管数支， 以肉汤培养基将被测金银花提取
参考文狱
杆菌其ＭＣ ２５ ／ ｌ Ｉ为１． ｍ ｍ。说明金银花对金黄色 ｇ 葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑菌作用。
表 １ 金银花提取液对金黄色窗萄球菌和大肠杆菌的 ＭＩ Ｃ的测定
Ｔ ｂ １ ｈ ＭＩ ｏ ｅｔ ｃｏ ｆ ｍ ｌ Ｌ ｎ ｅ 昭ａ ａｌ Ｔ ｅ Ｃ ｘｒ ｔｎ Ｆｏ ｏｉｒ ｅ ｆ ａ ｉ ｒ ｏ ｓ ｃ ｕ ｎｔ ｓ ｐｙ ｏｃｓ ｅ ｃｌｏ ｎ ｏｆｒ ｔ ｈｌ ｃ ａｒ ａｄ ｉｒ ａ ｏ ｕ ｕ ｎ ｃ
主。 本实验结果表明金银花提取物浓度在 ６２ ．５ ｍ ／】 ｇｍ 时对金黄色葡萄球菌可达到抑制作用。而 金银花提 取物的浓度在 １． ｍ ／ ｌ ２５ ｍ 对大肠杆菌可 ｇ
达到较强的 抑制作用。为确定金银花的提取液对上 述两种菌种的 抗菌作用是抑菌还是杀菌， 我们同时 做 最低杀菌浓度（ Ｂ ） Ｍ Ｃ 的测定， 其结果为 Ｍ Ｃ Ｉ＝ Ｃ Ｂ Ｎ 占 所试菌 株的 １％一３９。 ５ ５６ 在提高药物浓度
金银花不同器官提取物抑菌作用研究
金银花不同器官提取物抑菌作用研究金银花是一种常见的中药材，具有清热解毒、抗菌抗病毒等药理作用。
本文旨在研究金银花不同器官提取物的抑菌作用。
金银花的主要成分包括黄酮类化合物、挥发油、多糖等。
这些活性成分在不同的提取物中的含量和组成可能存在差异，因此本研究选择了金银花的根、茎、叶和花四个部位进行提取物的制备。
将金银花根、茎、叶和花分别晾干，然后研磨成粉末状。
接着，采用不同的溶剂（如乙醇、水、乙酸乙酯等）对金银花粉末进行浸泡提取。
提取温度、提取时间和提取溶剂浓度等因素也会对提取物的抑菌效果产生影响，因此需要进行优化实验确定最佳提取条件。
抗菌活性的评价方法包括纸片扩散法、微量稀释法、落地法等。
纸片扩散法是最常用的方法之一，它通过将不同浓度的提取物滴在含有细菌的琼脂平板上，观察形成的抑菌圈直径来评估抑菌效果。
微量稀释法则是在不同浓度的提取物与细菌培养基一起孵育，观察最小抑菌浓度。
落地法则是将不同浓度的提取物滴在培养基平板上，观察菌落的生长情况来判断抑菌效果。
通过以上实验方法，可以评估金银花不同器官提取物的抑菌作用。
结果显示，金银花的花提取物对多种细菌具有抑制作用，抑菌效果较好。
而根、茎和叶的提取物对细菌的抑制作用则较弱。
进一步的研究可以分析金银花提取物的主要活性成分，并将其与抑菌效果进行关联，以揭示金银花抑菌作用的机制。
还可以考虑金银花提取物的抗菌机制，如对细菌的膜损伤、抗氧化作用等的研究。
金银花不同器官提取物具有一定的抑菌作用，尤其是花提取物。
对金银花抑菌作用的研究有助于发掘其药用价值，为开发金银花相关的抗菌药物提供科学依据。
金银花内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究
金银花内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究李瑾;张慧茹;刘诺阳;柳旭光;李磊【摘要】目的从药用植物金银花中筛选出对指示菌有抑制作用的内生真菌,并对其抑菌特性进行研究.方法采用组织块法对金银花内生菌进行分离;用形态学方法对内生真菌进行鉴定;以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,对内生真菌发酵产物进行抑菌试验,并对活性物质的热稳定性进行了研究.结果分离获得38株内生真菌,鉴定为5目、5科、8个属;其中2株有抑菌活性,且发酵液具有良好的热稳定性.结论金银花组织中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2010(035)003【总页数】3页(P236-237,240)【关键词】金银花;内生真菌;分离鉴定;抑菌活性【作者】李瑾;张慧茹;刘诺阳;柳旭光;李磊【作者单位】河南工业大学生物工程学院,郑州,450001;河南工业大学生物工程学院,郑州,450001;河南工业大学生物工程学院,郑州,450001;河南工业大学生物工程学院,郑州,450001;河南工业大学生物工程学院,郑州,450001【正文语种】中文【中图分类】R379.9植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的次生代谢产物，是新化合物、新药物的潜在资源，在医药、工业、农业等领域具有重要的应用前景[1]。
金银花(Flos Lonicerae)为忍冬科多年生落叶或半常绿藤本植物，具有清热解毒、散风消肿等功能，为常用、大宗中药材，对多种细菌有抑制作用，国内有报道分离金银花的内生细菌方面的研究[2]，金银花内生真菌的研究尚未见报道。
本实验主要对金银花的内生真菌进行分离，并对其代谢产物的抑菌活性进行初步研究，旨在筛选出能产生抑菌活性物质的内生真菌，为进一步发掘金银花内生真菌抑菌活性物质及金银花的综合开发利用奠定基础。
1 材料1.1 材料1.1.1 植物材料新鲜植株金银花采自河南新密县牛店镇小寨村和重庆忠县。
金银花叶中绿原酸的提取、纯化及抑菌性质研究(3)
第二章金银花叶中绿原酸的提取工艺研究金银花叶的主要有效成分是绿原酸，有文献报道同一时期的金银花叶中绿原酸类有效成分约为花的６０％到７０％，并且８、９月的金银花叶含量最高。
绿原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抑制突变和抗肿瘤等多种生物活性效用；此外，绿原酸还是一种活性很强的抗氧化剂，抗氧化能力与常用的丁基羟基茴香醚和维生素Ｅ相当‘４７１。
绿原酸除医用外，还广泛用作食品保鲜剂和化妆品的抗衰老剂。
因此，从金银花叶中提取分离绿原酸具有重要的意义。
国内外已有不少文献报道了金银花中绿原酸的提取和分析方法，主要的提取方法有酶解法、超滤法、超声提取法、索氏提取法等【４８】。
不同方法各有优缺点，例如酶解法有利于细胞内物质（绿原酸等）的溶出且反应条件温和但是大大增加生产成本【４９】；超滤法能有效保留有效成分、无污染且绿原酸得率较高但是对提取液预处理较高，产量易受超滤条件的影响且膜的清洗麻烦［４９】。
超声波提取法因其独具的物理特性能促使植物细胞组织破壁或变形，使有效成分提取更充分，所以提取率比传统工艺显著。
此外，超声波提取法还具有提取温度低、适应性广、提取工艺运行成本低，综合经济效益显著、操作简单易行，设备维护、保养方便等优点【４９】。
虽然研究者报道了绿原酸的各种提取工艺，但是没有对不同方法提取的绿原酸得率进行比较。
实验确定提取工艺最优条件所用方法一般采用的是正交实验法，但正交实验也有其局限性，它只宜用于水平数不多的实验中，而均匀设计实验法较正交试验法有单因素试验的次数明显减少、考虑因素间交互作用变得简单等优点。
均匀设计和正交设计相似，也是通过一套精心设计的表来进行设计的即均匀设计表。
每一个均匀设计表是一个方阵，设方阵有ｎ行ｍ列，每一行是｛１，２，…，ｎ）的一个置换（即１，２，…，ｎ的重新排列），表的第一行是｛１，２，…，ｎ）的一个子集，但不一定是真子集。
５０３。
本章对超声波提取工艺与索氏提取工艺进行研究，并采用均匀设计实验优化了两种提取工艺的条件，在此基础上对两种工艺在绿原酸提取率、提取条件等方面进行了综合的比较。
金银花提取
金银花中总黄酮化合物的提取及其抑菌活性的初步研究材料化学专业张雪峰指导教师于曙光摘要:为了获得具有抑菌活性的黄酮类化合物，本文以金银花为实验材料，以乙醇为溶剂分别采用索氏提取、微波、超声波三种方法在不同的条件下从金银花中提取总黄酮得到一系列的粗提物，通过紫外可见分光光度法对其吸光度进行测定,计算出其中总黄酮的含量和产率，通过比较得出如下结论：乙醇浓度70%，在700W的功率下用微波提取法提取5min，此条件下提取得到的黄酮含量最高。
另外，本实验利用滤纸片法对提取得到的黄酮进行了抑菌活性的初步研究，结果表明，在浓度为0.381mg/ml时，金银花中黄酮对大肠杆菌具有较强的抑制作用（平均抑菌圈直径为9mm），当浓度降低时，抑菌效果明显减弱。
当浓度为0.00381mg/ml 时，基本看不到抑菌效果。
另外对黄酮粗提液进行定性检测发现：提取液中还含有少量的酚类、多糖类、蛋白质、生物碱等物质。
关键词：金银花；微波法；抑菌活性；黄酮提取物；The Research on Extraction of Flavonoids from Flos Loniceraeand it’s Antibacterial activityStudent majoring in Marearial Chemistry Li XiaoyunTutor Yu ShuguangAbstract:In order to extract flavonoids which have antibacterial activity, the flos lonicerae were used as material and ethanol as solvent, with Soxhlet, micro-wave and ultrasonic methods to extract flavonoids. According to the absorbance of extracts measured by the Ultraviolet-Visible Spectrophotometer, the results showed that the methods with the 70% ethnol as solvent, the microwave at 700w and 5 minutes is of the best efficiency. In addition , in the research on antibacterial activity ,the results showed that when the concentration of extracts is 0.381mg/ml , we can observe visible inhibition effects on Escherichia coli ( the average dm of the antibacterial cirle is 9mm ), with the concentration decreasing ,its antibacterial activity decreased. When the concentration is 0.00381mg/ml , it hardly had no antibacterial activity .With the qualitative analysis, We found that extracts of different Solvent have different contents including Phenol, polysaccharides, proteins, alkaloids and flavonoids.Key words: Flos Lonicerae ; micro-wave technique; antibacterial activity ; extract of flavonoids1 引言金银花，又名二花，为忍冬科忍冬属植物忍冬的干燥花蕾或初开的花，在我国大部分地区均有生产，是我国传统中药材，味甘、性寒、清热解毒、凉散风热。
金银花的活性成分及药理作用研究进展
金银花的活性成分及药理作用研究进展摘要：金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花，自古被誉为清热解毒良药。
金银花中含有丰富的挥发油、黄酮类、有机酸等成分，具有抗菌、抗病毒、消炎、免疫增强及抗氧化等作用。
论文对金银花的活性成分及其药理作用进行综述，以期为金银花在兽医临床的进一步应用奠定基础。
关键词：金银花；活性成分；药理作用Research Progress of Active Ingredients and PharmacologicalAction of Lonicera japonicaAbstract:Lonicera japonica, the dry flower bud or with open flower of honeysuckle in caprifoliaceae, has been touted as a cure-all for heat-clearing and detoxifying effect. Lonicera japonica contains abundant components such as volatile oil, flavone and organic acid playing the role of antibiosis, antiviral, antiphlogosis, immunopotentiation and antioxidation. The research about the active ingredients and pharmacological action of Lonicera japonica are reviewed, which may help deep application for veterinary usage in clinic.Key words:Lonicera japonica; Active ingredients; Pharmacological action金银花为中兽医常用药物，应用历史悠久，《中华人民共和国兽药典》2000年版中金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山银花Lonicera confusa DC.、或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花；2005及2010年版兽药典对金银花的来源进行了修订，将忍冬科植物忍冬作为金银花药材的唯一来源，其余品种包括新增的灰毡毛忍冬均并入山银花项下。
金银花主要活性成分及内生菌研究进展
金银花主要活性成分及内生菌研究进展
姜茗轩;张红兵;李冉;贾振华
【期刊名称】《河北省科学院学报》
【年(卷),期】2022(39)5
【摘要】金银花是我国传统的药用植物,其主要活性成分是绿原酸和木犀草苷,均具有抗炎症、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等重要活性。
金银花因其丰富的活性成分被广泛应用于食品、药品及农产品中。
本文通过查阅文献,总结了绿原酸和木犀草苷相关活性机理;并对金银花内生菌资源进行整合分析,对金银花内生菌在生物防治、生物催化合成及促进植物生长等方面的应用进行综述;以期为金银花资源的合理开发利用及其内生菌应用提供参考。
【总页数】7页(P7-13)
【作者】姜茗轩;张红兵;李冉;贾振华
【作者单位】河北经贸大学;河北省科学院生物研究所;巨鹿县应用技术研究院【正文语种】中文
【中图分类】S188
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叶，装人无菌的密封袋带回实验室。
万方数据
１１６
供试培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基【ｌｑ、ＬＢ液体培养 基【Ｉｑ、麦芽汁牛肉膏蛋白胨琼脂培养基【ｌｌｌ。 试验仪器包括细菌生化微量鉴定管（由杭州天和微生 物试剂有限公司研制）、双人操作超净工作台、电子天平、 电热恒温恒湿培养箱、低温冰箱、智能水浴恒温振荡器、移 液枪、全自动高压蒸汽灭菌锅、ＳｏｎｙＤＳＣ—ＴＳ型数码相机、 ＯＬＹＭＰＵＳ Ｕ—ＣＭＡＤ３ ＢＸ５１系统相差显微镜、ＯＬＹＭＰＵＳ 微荧光装置、ＯＬＹＭＰＵＳ ＢＸ５１倒置显微镜、常规玻璃仪
Ｉ．ｔ，ｍ，多数细胞呈杆状，芽孢椭圆形，周
生鞭毛．生殖方式主要为二分裂。 ２．３分离内生菌的生理生化特征 在１６种培养基内分别接种１、２类型内生菌，经７２
ｄｙｅ ｆｅａｔｕｒｅｓ．ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｃｕｈｉｖｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｅｔｅｒｉａｌ
ｆｉｒｓｔ ｔｙｐｅ ｗａｓ
ａｃｃｏｒｄｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ，ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄ ｔｙｐｅ ｗａｓ ａｃｃｏｒｄｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｇｅｎｕｓ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ．
液体颜色变暗，在液体表面部分有环或岛的形成，在管底 部都有少量沉淀物生成。第２类型的培养特征为培养８
ｈ
脂培养基上，根据菌落特征总体可分为两类。在固体培养 基上培养４８ ｈ后．第ｌ类型的菌落特征为：菌落呈白色、 稍带黄色，菌落较小，表面有光泽、粘稠、致密，边缘有缺 刻、不规则，茵落呈扁平状（图２）。第２类型菌落呈现稍
ｗｅｒｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ
ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ用∞Ｌｏｎｉｃｅｒａｅ
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ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｇｒａｍ ｄｙｅ ａｎｄ Ｓｐｏｒｅ ｄｙｅ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅｙ
置培养４８ ｈ观察。如果平板上有菌落生长，说明组织表面
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∞
量舅舅第１类型
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Ｏ∞ ８
消毒不彻底；如果没有菌落生成，说明与它对应的组织表
面消毒彻底。
１．２．３
［二］第２类型 ．★一总数
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∞ ．▲
内生细菌计数采用梯度稀释涂布法【ｌｏ】，３０℃恒温 内生菌株表型特征测定染色方法采用革兰氏染
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｆｌｏｓ ｌｏｎｉｃｅｒａｅ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ；ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；Ｂａｃｉｌｌｕｓ
Ｋｌｅｏｐｐｅ等…于１９９２年首次提出“植物体内生细菌”
的概念，认为植物内生菌是指能够定殖在植物细胞间隙
对金银花中的内生真菌ＪＹ２和ＪＹ９进行了ｒＤＮＡ ＩＴＳ序列
分析。但对金银花植株内生细菌的研究鲜见报道。因此，研 究金银花植株内生菌及获得具有抑制病原菌的内生菌具 有重要的科学和应用价值。 １材料与方法 １．１试验材料 供试金银花采自河南省商丘师范学院药用植物园地，
海拔４８ Ｉｎ。采集生长旺盛、健康的金银花植株的根、茎、
广东农业科学２０１３年第３期
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药用植物金银花内生细菌的分离和特性研究
徐亚军，赵龙飞，代
猛，阮文静，白莉敏，张广月，步玲玲，周佩佩，张熳
（商丘师范学院生命科学学院／河南省高校植物与微生物互作重点实验室／ 河南省高校生物质降解与气化工程技术研究中心．河南商丘４７６０００ １ 摘要：以药用植物金银花为材料，对其根部、茎部、叶片不同部位的内生细菌进行分离纯化，对细胞特征采用革兰氏染色、芽 孢染色法进行研究，结合菌落特征和生理生化特性将其内生细菌初步分为第１类型和第２类型两大类。采用稀释涂布法对金银花 不同部位分别进行可培养内生细菌计数。结果表明，内生菌的总体数量分布为根部＞叶片＞茎部．说明内生细菌在金银花组织中的 分布因部位不同而不同。基于细胞染色特征、显微观察结果和培养特性，内生菌中第１类型符合芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）的特点．第２ 类型具有类芽孢杆菌属（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）的特征。 关键词：金银花；内生细菌；生理生化特性；芽孢杆菌属
挑起的特征，在麦芽汁牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上生长
７２
ｈ后菌落直径为２—５ ｍｌｎ（图３）。在ＬＢ液体培养基中经
过４８ ｈ培养后，第ｌ类型内生菌的特征为培养液变浑浊，
万方数据
１１７
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图２第１类型菌落特征
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面的泥土冲洗干净，无菌条件下将根、茎、叶分别剪成１ ｃｍ大小的组织段，分别称取５ ｇ鲜样品，分别经９５％酒精
浸泡３０ Ｓ、３％ＮａＣｌ０溶液表面消毒５ ｒａｉｎ，无菌水冲洗６～８
次。将组织段放入无菌金属研钵中研磨至浆状，吸取一定 量的菌悬液作系列浓度梯度稀释。吸取２００ ＩｘＬ涂布在培 养基平板上，３０℃倒置培养。每个处理３次重复。４８ ｈ后将 长出的菌落转接至相应培养基上进行纯化，直至菌落单 一、经镜检菌体大小和形状一致为止。 １．２．２表面彻底消毒检验取经表面消毒的金银花根茎 叶组织段，使其在相应培养基乎板上滚动，将平板３０℃倒
Ｄ，Ｂｉｏｍａｓｓ
Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｏｆＨｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ以Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｇａｓ乒ｃａｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＨｅｎａｎ，Ｓｈａｎｇｑｉｕ ４７６０００，Ｃｈｉｎａ）
ｍａｔｅｒｉａｌ，ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ ｒｏｏｔ，ｓｔｅｍ ａｎｄ
基金项目：国家自然科学基金（Ｕ１２０４３０１）；河南省高等学校青年
骨干教师计划项目（２０１２ＧＧＪＳｌ６６）；商丘师范学院大学生创新实验计 划项目ｆ２０１１ＤＸｓ０３） 作者简介：徐亚军（１９７７一），女，硕士，讲师 通讯作者：赵龙飞（１９７８一），男，博士，副教授，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｎｚｈａｏｌｏｎｇ ｆｅｉ＠ｙａｈｏｏ．ｅｏｍ．ｅｎ
０７４、ｌ
１．２试验方法
１．２．１
１６０个／ｇ；茎部
内生细菌的分离与纯化
用无菌水将根、茎、叶表
第１类型内生细菌数量下降（３２０个屈），与第２类型内生 菌数量（２９４个／ｇ）相当；叶片内第ｌ类型内生细菌和第２ 类型内生细菌数量和茎部相比都有所增加，分别为５００、 ５０６个／ｇ，但两个类型内生菌间在数量上没有差异。由此可 见，内生细菌在金银花不同组织内的分布表现为根部最 多、茎部最少。第１类型和第２类型内生菌在根部、茎部和 叶片相当。内生细菌的总体数量上分布为根部＞叶片＞茎
ｗａｓ
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Hale Waihona Puke ｏｎｔｈｅ１ｅａｓｔ．ｊｔ ｓｕｇｇｅｓｔｔｅｄ ｔｈａｔ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ Ｅ ｔｏｎｉｃｅｒａｅ ｗａｓ
ｉｎ
ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ．Ｂａｓｅｄ
大、乳白色、圆形、不透明，边缘稍有缺刻、稍带光泽、不易
后菌液变浑浊，有絮状沉淀产生，菌液不透明，随时间增加
浊度增加。１８ ｈ后有气泡产生，液面上有膜或璞之类的悬
浮物。 经革兰氏染色、芽孢染色，在相差显微镜和倒置显微 镜下观察菌体的形状、测量其大小，结果如图３、图４所 示。从图３和图４可以看出，第１类型菌体呈紫色（Ｇ＋），菌 体大小为０．５～２．５ Ｉｘｍｘｌ．２～３．７ Ｉｘｍ．细胞的形态多数呈直 杆状，少数链状，有芽孢，呈卵圆形，生殖方式主要为裂殖。
ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ
ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ ｉｎｔｏ
ｔｙｐｅｓ（ｆｉｒｓｔ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄ ｔｙｐｅ）ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｃｌｏｎｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．Ｍｉｃｒｏｂｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｕｎｔｅｄ ｂｙ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｓｐｒｅａｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｆ ｌｏｎｉｃｅｒａｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｔｏｔａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ ｒｏｏｔ
金银花（Ｆｌｏｓ ｌｏｎｉｃｅｒａｅ）是忍冬科多年生常绿缠绕灌木 植物，为常用传统中药，在我国分布广泛阁。金银花为河南
重要的地道药材。含有绿原酸、挥发油、黄酮类、有机酸、三
或细胞内，并与寄主植物建立和谐联合关系的一类微生 物，能在植物体内定殖的致病菌和菌根菌不属于内生菌。 后来公认的植物内生菌（Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ）是指那些在其生活 史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物各种组织和器 官内部或细胞间隙，对植物不引起可见病症的真菌或细 菌【２】。Ｓｔｉｅｒｌｅ等【３Ｊ首次报道了从短叶红紫杉中分离出来的可 产生紫杉醇的内生真菌，之后植物内生菌成为国内外微 生物研究的热点。研究发现，内生菌广泛分布于植物体 根、茎、叶、花、果实和种子等器官组织的细胞或细胞间隙 中，其种类、数量、分布与植物的种类有关。内生菌不仅能 够参与植物次生成分的合成或对植物次生代谢产物进行 转化，而且还能独立产生丰富的次生代谢产物，是天然产 物的重要来源１４１。
中图分类号：Ｑ９３６
文献标识码：Ａ
文章编号：１００４—８７４Ｘ（２０１３）０３—０ｌ １５－０４
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ