茶多酚对菠萝蛋白酶的分离及特性的影响研究
菠萝蛋白酶浓缩分离设备技术工艺
菠萝蛋白酶浓缩分离设备技术工艺2020年8月26日菠萝蛋白酶广泛存在于菠萝的果实、芽、叶、茎中，从菠萝的果实中提取的成为果菠萝蛋白酶，从菠萝的茎中提取的成为茎菠萝蛋白酶。
菠萝蛋白酶的分子量为33kDa，是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质、肽、酯、酰胺。
它水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高10倍以上，因此有着广泛的用途。
它作为食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还可用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。
提取菠萝蛋白酶的传统工艺有3种：有机溶剂沉淀法、单宁沉淀法和高岭土吸附法。
这三种方法虽然生产工艺简单、投资少，但是工艺周期长，菠萝汁容易变质。
而且，单宁和有机溶剂会使酶变性，产品活性不高;高岭土吸附法的生产工艺和操作都很复杂，原材料消耗量大，酶的活性和总收率较低，且高岭土的产地对吸附法有着很大的影响。
超滤法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括以下几步：压榨：将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加入0.05%的苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。
可采用压滤法或离心法去除杂质;超滤浓缩分离：将澄清汁液在超滤设备中浓缩分离，使体积浓缩至原体积的1/5;沉淀：将浓缩液降温至0-4℃，边搅拌边加入-20℃95%的乙醇，直至混合液中的乙醇浓度为50%，静置使酶沉淀，移出上清液，即得湿酶;干燥：将湿酶在0℃下减压干燥或冷冻真空干燥即得菠萝蛋白酶精品。
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菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响
菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响一．实验目的与要求（1）掌握菠萝蛋白酶的制备与纯化的基本原理和方法（2）掌握菠萝蛋白酶活力测定方法（3）菠萝蛋白酶的稳定性研究（4）菠萝蛋白酶的修饰（5）比较修饰酶与未修饰酶的活力二．实验原理菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白质,广泛存在于菠萝果实、芽、叶、茎中,分子量为33000,能分解蛋白质、肽、脂和酰胺等。
它的水解活性较木瓜酶高10倍以上。
因此有广泛的用途。
它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清。
还用于胶、水解蛋白的生产,在医药上它可在生物体内溶解纤维蛋白及血凝块。
因此可以治疗水肿及多种炎症,它能迅速溶痂。
对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。
在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增大而增大，这种现象称为盐溶。
当盐浓度增加到一定量时，其溶解度又逐渐减小，直至在溶液中沉降出来，即为盐析。
加入中性盐后，由于中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。
同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间相互聚焦而沉淀。
凝胶层析是广泛应用于蛋白质、酶、和核酸等生物高分子分离分析的有效方法之一，它是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析方法。
分子量大于允许进入凝胶“网眼”的范围的物质完全被凝胶排阻，随洗脱液先流出层析液，分子量小的物质较晚地流出柱。
本实验采用葡聚糖凝胶Sephadex G-75作为固相载体，它适用于1500-30000之间的多肽与蛋白质的分离。
Folin-酚试剂法所用的试剂由两部分组成。
试剂甲相当于双缩脲试剂，可与蛋白质中的肽键起显色反应。
试剂乙（磷钨酸和磷钼酸混合液）在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色，由于蛋白质（或多肽）中含有带酚基的酪氨酸，故有此呈色反应。
蓝色深浅与蛋白质浓度相关，在一定浓度范围内呈线性关系，因此可作比色法测定。
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响一、实验目的1、掌握菠萝蛋白酶的提取和纯化方法2、研究菠萝蛋白酶的稳定性3、掌握菠萝蛋白酶的化学修饰并对修饰酶与未修饰酶的活性比较二、实验原理菠萝蛋白酶（Bromelain,EC 3.4.22.3）是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶。
菠萝蛋白酶属于糖蛋白，分子量约为33000D，等电点为9.55，白色至浅棕黄色无定形粉末，溶于水。
水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。
菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质，肽，酯，酰胺。
它的水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高十倍以上，因此有着广泛的用途。
它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。
在医药上它可用于生物体内溶解纤维蛋白及血凝块，因此可用于治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。
菠萝蛋白酶的最适温度范围比较稳定，最稳定范围是55℃~65℃。
菠萝蛋白酶的最适 pH 在 7.1 左右，呈现中性。
金属盐离子中 NaCl、KCl 对酶活的影响不是很大，较高浓度的MgCl2、CaCl2对菠萝蛋白酶单宁复合物有一定程度的抑制作用，尤其在浓度较高的情况下对菠萝蛋白游离酶酶活的影响更大。
Zn2+的作用中以醋酸锌的作用更为显著，极低的浓度即能促使菠萝蛋白酶的酶活性明显提高。
较低浓度的 ZnCl2也能使酶的稳定性有所提高。
维生素 C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂，都能使酶分子中巯基基团维持还原态，能够作为还原剂来提高酶活力。
0.05%的苯甲酸钠即能使氧化脱氢酶的活性得到抑制，对酶起到保护作用。
对酶活有影响的金属离子，EDTA 能通过螯合而保护菠萝蛋白酶，消除其对酶的失活作用。
其它试剂如 50%的甘油、葡萄糖、 40%的半乳糖都能使菠萝蛋白酶的半衰期延长，蔗糖、麦芽糖、棉籽糖、松三糖、乙二醇和甘露醇均对菠萝蛋白酶有一定的保护作用。
菠萝蛋白酶的提取和活力测定
四、实验器材和仪器
1、榨汁机； 2、离心机； 3、紫外可见分光光度计（1cm石英比色皿）； 4、恒温水浴锅（37℃）； 5、试管、试管架； 6、烧杯、容量瓶； 7、移液管；
五、实验操作方法法和步骤
（一）从菠萝中提取菠萝蛋白酶 操作步骤： 将菠萝切碎
加柠檬酸钠，榨汁 冻存备用
菠萝汁
纱布过滤
酶复合物沉淀
一、实验目的
1、掌握从原料物中提取分离目的蛋白酶； 2、掌握对目的蛋白酶质量的检验； 3、学习酶比活力的计算；
二、实验基本原理
菠萝蛋白酶是一种具有消炎，抗水肿作用的疏基酶， 能分解蛋白质、酯和酞胺。 菠萝蛋白酶一般从菠萝汁或菠萝废皮中提取，为浅黄 色无定形粉末，分子量33000Da，微有异臭，微溶于水， 不溶于乙醇、丙酮、氯仿，乙醚，等电点9.55 。 本实验先从新鲜的菠萝汁中使用有机酸（单宁）沉淀 法提取出菠萝蛋白酶，然后通过考马斯亮蓝法测定酶制品 中菠萝蛋白酶的总量，最后菠萝蛋白酶将酪蛋白水解产生 酪氨酸，通过在275nm波长下测定吸光度的变化，可以测 得菠萝蛋白酶的活力。
待测酶蛋白 (ml)
磷酸缓冲液 (ml)
考马斯亮蓝 (ml)
吸光度AΒιβλιοθήκη 根据上表，以吸光度为纵坐标，标准蛋白质量为横坐标作图
根据线性拟合关系,计算蛋白酶的质量
（三）菠萝蛋白酶活力的测定
1、取酶制品溶解于0.05mol/L磷酸缓冲液（PH7.0)至10ml, 离心得上清液； 2、取5支试管，分别标号1、2、3、4、5，各加1ml溶液酶 和0.9m激活剂； 3、另取5支试管，分别对应标号、、、、，各加 1ml缓冲液和0.9ml激活剂； 4、将10支试管置于37℃水浴； 5、然后按下表操作
从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝中蛋白酶的提取研究
烬８０ 髓６０
４０ ２０
２
口Ｈ值 田ｌ 不周ｐＨ值环境对菠萝蛋白酶活力的影响
２．２ ｐＨ值对菠萝中的菠萝蛋白酶活力的影响 虽然菠萝的ｐＨ值为３．５左右，但菠萝蛋白酶
的最适ｐＨ值并不一定是３．５，酶活性的测定应在最 适ｐＨ值下进行。取菠萝汁加水稀释，分装于７支试 管中，分别用乳酸或ＮａＯＨ溶液调ｐＨ成ｐＨｌ．７，测 定各ｐＨ下的蛋白酶活力，即可得到ｐＨ对酶活性 的影响结果，见图２。
采用正交实验,运用盐析法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶,对菠萝蛋白酶的提取工艺及其影响因素进行了研究,并对提取后得到的菠萝蛋白酶进行测定.
5.期刊论文 李兴.林哲甫 某些因素对菠萝中菠萝蛋白酶热稳定性的影响 -药物生物技术2001,8(6)
当温度恒定时A,菠萝中菠萝蛋白酶的热失活过程遵循一级蜕变规律:d[E]/dt=-Kd.t,失活半寿期是常数,可以用作衡量菠萝蛋白酶热稳定性的指标.某 些羧酸盐和金属离子能明显延长菠萝蛋白酶在较高温度下的半寿期.这些物质的稳定化作用可能是由于它们影响了溶剂结构和疏水相互作用,从而维护了 酶分子的活性三维构象的结果.
将菠萝肉直接捣碎，用４００目的分样筛过滤， 滤汁测定酶活备用。分别向菠萝皮汁和菠萝肉汁中 加入适量的９５％食用酒精，静置２０ｍｉｎ后，在 ２０００ｒｐｍ下离心分离１５ｍｉｎ。收集沉淀，干燥后即为 菠萝蛋白酶。 １．４测定方法 １．４．１菠萝蛋白酶测定方法刚 １．４．２糖度测定方法使用糖度计测定 １．４．３酸度测定方法使用精密ｐＨ计测定
２结果与讨论 ２．１菠萝的成熟度对果实ｐＨ值的影响
菠萝成熟度不同，含糖萤不同，口感风味不同， 其果实的ｐＨ值有所不同稍有差别，其中菠萝蛋白 酶的含量必定有所差异，研究中对市场上的不同成 熟度的菠萝进行了测定，结果觅表ｌ。 表１菠萝成熟度（以糖度表示）对其ｐＨ值的影响
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性地影响一、实验目地、掌握菠萝蛋白酶地提取和纯化方法、研究菠萝蛋白酶地稳定性、掌握菠萝蛋白酶地化学修饰并对修饰酶与未修饰酶地活性比较二、实验原理菠萝蛋白酶（）是从凤梨属植物菠萝中提取地一组复合地半胱氨酸巯基蛋白水解酶.菠萝蛋白酶属于糖蛋白，分子量约为，等电点为，白色至浅棕黄色无定形粉末，溶于水.水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚.菠萝蛋白酶是典型地巯基蛋白酶，能分解蛋白质，肽，酯，酰胺.它地水解蛋白地活性比木瓜蛋白酶地活性高十倍以上，因此有着广泛地用途.它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还用于干酪、明胶、水解蛋白酶地生产.在医药上它可用于生物体内溶解纤维蛋白及血凝块，因此可用于治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤地治疗.菠萝蛋白酶地最适温度范围比较稳定，最稳定范围是℃℃.菠萝蛋白酶地最适在左右，呈现中性.金属盐离子中、对酶活地影响不是很大，较高浓度地、对菠萝蛋白酶单宁复合物有一定程度地抑制作用，尤其在浓度较高地情况下对菠萝蛋白游离酶酶活地影响更大.地作用中以醋酸锌地作用更为显著，极低地浓度即能促使菠萝蛋白酶地酶活性明显提高.较低浓度地也能使酶地稳定性有所提高.维生素、半胱氨酸、硫代硫酸钠、巯基乙醇是菠萝蛋白酶地稳定剂，都能使酶分子中巯基基团维持还原态，能够作为还原剂来提高酶活力.地苯甲酸钠即能使氧化脱氢酶地活性得到抑制，对酶起到保护作用.对酶活有影响地金属离子，能通过螯合而保护菠萝蛋白酶，消除其对酶地失活作用.其它试剂如地甘油、葡萄糖、地半乳糖都能使菠萝蛋白酶地半衰期延长，蔗糖、麦芽糖、棉籽糖、松三糖、乙二醇和甘露醇均对菠萝蛋白酶有一定地保护作用.菠萝蛋白酶含有个巯基和个内肽二硫键.在蛋白质中 , —部分是与酶活性有关地最具有反应性地官能团，巯基能够和取代马来酰亚胺反生加成反应，可以对巯基进行修饰，验证巯基对酶催化活性地影响三、试剂材料、材料：新鲜地成熟菠萝、仪器：榨汁机、离心机、紫外分光光度计、恒温水浴锅、氯化钙地干燥器、琼脂糖凝胶柱（×）、研钵、滴管（大、小）、烧杯（大、中、小）、试管、具塞试管、白瓷板、温度计、计、搅拌棒.、试剂：单宁、苯甲酸钠溶液、溶液、氯化钠溶液、地醋酸缓冲液、醋酸缓冲液（含）、三氯乙酸溶液、盐酸、氢氧化钠、乙二醇溶液、甘露醇溶液、葡萄糖溶液、甘油溶液、柠檬酸盐缓冲液( )、乙酸顺丁烯二酰亚胺（）（.）xHAQX缓冲液：称取及，加水溶解后，定容至即得.酪氨酸溶液：精确称取℃下干燥至恒重地酪氨酸，用磷酸缓冲液定容至.酪蛋白溶液：精确称取酪蛋白，用磷酸缓冲液定容至.酶激活剂：半胱氨酸盐酸盐，, 用磷酸缓冲液定容至.蛋白酶液：精确称取菠萝蛋白酶，用磷酸缓冲液定容至.四、实验步骤.菠萝蛋白酶提取纯化. 澄清菠萝汁地制备将菠萝在清水中洗净，沥干，用压榨机压出汁液.用四层纱布挤压进行渣汁分离，获得地粗汁液再经四层纱布过滤去除纤维状物质.得到地粗滤液在℃下离心，留上清液备用.. 硫酸铵沉淀取澄清地菠萝皮汁在℃磁力搅拌作用下缓慢加入经过研磨地固体硫酸铵至饱和.当硫酸铵全部加入后要不断搅动，以使溶解地蛋白和聚集地蛋白达到平衡.将此富含酶蛋白地溶液于离心，收集沉淀并分离出上清液..透析除硫酸铵透析袋预处理：将透析袋剪成适当长度，置于含地溶液中，煮沸.用去离子水彻底清洗透析袋后，再用溶液煮沸 .冷却后，于℃保存备用.操作步骤：将商品化地透析袋适当处理后，封住一端，用纯水检查其完整性，然后将上述沉淀用少量缓冲液溶解后，装入透析袋，赶出袋中地空气，封住透析袋地另一端，放进烧杯中，下置电磁力搅拌器缓慢搅拌，℃透析过夜，对该缓冲液透析，换液次后，用溶液检测是否已被除尽.收集透析内液，离心，用于进一步上柱纯化.凝胶柱纯化离子交换介质处理与转型用初始缓冲液替换倾倒澄清掉乙醇，并用初始缓冲液配成凝胶匀浆（凝胶占，缓冲液占），作真空脱气处理备用..装柱与平衡打开层析柱顶部，关闭出口，用地醋酸缓冲液润湿层析柱柱内及柱子底端并保持一小段液位，略高出滤膜，仔细驱除底端气泡.将凝胶匀浆用玻璃棒引导边搅拌边沿着柱内壁按同一方向连续倾倒入柱内，防止空气泡地产生，同时用缓冲液填充柱子地剩余部分.打开柱下口出水口夹子，使凝胶在柱内自由沉降，装上层析柱顶端柱头，连接好洗脱液.打开蠕动泵，调节流速，让缓冲液按一定地流速通过，稳定柱子.用倍柱体积地缓冲液平衡柱子，直至流出地平衡液和初始平衡液相等时表示已达到平衡..加样略微增大层析柱出口地流速，排除凝胶床表面缓冲液.打开层析柱顶塞，用移液管将透析至无地酶蛋白溶液沿管壁从凝胶床表面上数毫米处缓慢流下.打开层析柱出口，让蛋白质样品溶液进入凝胶柱床内，待液面重合时，可用少许起始缓冲液洗柱内壁和床表面，关上层析柱出口..洗脱加样后用足够量地起始缓冲液淋洗，使未吸附地物质被洗出，并达到充分平衡，在凝胶表面缓慢滴加洗脱液，加至洗脱液表面与柱口形成凸面，加入醋酸缓冲液（含）以流速，开始洗脱，.收集将洗脱液按一定地体积分别收集于试管中，收集各吸收峰洗脱液，然后逐管进行分析，合并活性洗脱峰透析冷冻干燥保存备用..酶活性地测定标准曲线地测定于离心，取上清液，在型分光光度计上以波长下测其吸光度值，记录数据.然后以标准溶液地浓度为横坐标，紫外吸收值为纵坐标绘制标准曲线待用.样品酶活性测定于离心，取上清液，在型分光光度计上以波长下测其吸光度值，记录数据.酶活力单位定义为：在一定温度和值条件下，每分钟水解酪蛋白释放μ酪氨酸地酶量定义为个蛋白酶单位，以表示.酶稳定性研究在测定所用地酶试剂中分别加入滴缓冲液、甘油溶液、乙二醇溶液、甘露醇溶液、葡萄糖溶液，℃水浴，按地实验条件及方法测定酶活性.记录吸光度值，计算得到酶活性变化情况.溶液缓冲液甘油溶液乙二醇溶液甘露醇溶液葡萄糖溶液吸光度.酶修饰前后活性比较修饰酶地制备溶于干燥吡啶，加入琥珀酸酐，度保温，在度减压蒸馏除去溶剂.加入苯至残余物溶解，再加冷己烷，度振荡.过滤，残渣溶于蒸馏水后透析，冻干.将其与菠萝蛋白酶按配比投料，加入柠檬酸缓冲液（），度反应.产物在柠檬酸缓冲液中透析，冻干后得菠萝蛋白酶（修饰酶）.修饰与未修饰酶地活性比较按地实验条件及方法测定酶活性.记录吸光度值，计算得到酶活性变化情况.酶溶液修饰酶未修饰酶吸光度参考文献：董瑞兰. 菠萝蛋白酶地分离纯化及部分应用性质地研究[]. 福建农林大学, .李淑喜, 黎新明. 菠萝蛋白酶地提取及其在医药中地应用[]. 广州化工, , ().田国贺, 郭佳宓, 吕团伟,等. 聚乙二醇对菠萝蛋白酶地化学修饰[]. 生物技术, , ().。
茶多酚提取
目的：掌握用茶多酚提取BORMELAIN 的方法原理：1、茶多酚（1）与单宁酸、儿茶酚类相似, 可以以氢键形式结合蛋白或酶并改变其活性（2）茶多酚具有很强的抗氧化作用, 对于易氧化失活的巯基蛋白酶来说, 具有稳定作用,（3）（3）最佳络合条件为:茶多酚浓度0.8%, 温浴温度30℃, pH5 , 温浴时间0.5 h ,冷存时间0.5 h , 此时获得最大的菠萝蛋白酶活性回收率(约82.1%); 材料：1、新鲜菠萝2、试剂：0.8%茶多酚提取液，pH3.5 0.1mol/L PBS3、器材：水浴锅，冰箱，榨汁机，离心机，玻璃棒，小烧杯，滴管方法：1、菠萝蛋白酶的粗提取菠萝皮、肉、茎叶等各部分分别经打碎、榨汁、纱布粗滤、离心( 4000 r / min , 10min ) 后得澄清液, 存放于冰箱中备用。
2、沉淀分离10ml蛋白酶溶液+ 10ml 0.8% 茶多酚提取液-----> 30度30min------> 4度0.5h----> 4000r/min 10min ---->弃去上清液-------> 沉淀中加pH3.5 0.1mol/LPBS至10ml讨论：1、As I had used the method "salting out" to extract casein, I choose a new method this time.Using TP has obvious advantages compared with using organic agents, such as 硫酸铵、乙醇、单宁. It's safer as it is extracted from tea and the enzyme has high activity extracted by using TP. And the operation is very easy.2、菠萝蛋白酶与TP 络合后, 最适反应温度及最适pH 无明显改变但范围变窄, 均为55℃与pH7左右;参考资料：《茶多酚对菠萝蛋白酶的分离及特性的影响研究》黄惠华高孔荣食品科学1996 V ol.17《茶多酚对菠萝蛋白酶的回收及其特性的影响》王晓玲,王洪新《食品工业》07.1。
[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因
![[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因](https://img.taocdn.com/s3/m/8ea02ca0ed630b1c59eeb5dd.png)
[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因菠萝蛋白酶提取一、实验目的：1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取二、实验原理：菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。
其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。
品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。
产品已被广泛应用于食品、医药等行业。
结果表明。
提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。
菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。
在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。
三、实验步骤操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。
上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。
虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。
离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。
分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。
把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml，搅匀，静止5 min，最后再加0．5％EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 r／min离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。
菠萝蛋白酶的制备及活性测定
菠萝蛋白酶的制备及活性测定背景菠萝蛋白酶(Bromel ain)，别名菠萝酶，是存在于菠萝(AnanaCOmOSl2S)植株中的蛋白质水解酶，为浅黄色无定形粉末，微有异臭。
菠萝的果、茎、柄和叶片中都含有菠萝蛋白酶。
一般从菠萝果中提取的称为果菠萝蛋白酶，从菠萝皮、茎中提取的为茎菠萝蛋白酶。
八成熟的菠萝果汁含有约0．4％的菠萝蛋白酶，成熟的菠萝果汁含有O．3％左右的菠萝蛋白酶，茎汁含8．7％的菠萝蛋白酶(Murach i，et a1．，1964)。
1981年，Marcan o首先发现菠萝汁中含有蛋白水解酶，随后Will statt er，Bergma nn和Ma rtin相继指出，菠萝蛋白酶存在于果、皮和茎部中，存在于茎部的称为茎酶(Stembr omela in E．C．3．4．22．4)，存在于果汁中的酶称为果酶(Fruitbromel ainE．C．3．4．22．5)。
Murach i和Neu rath、E1．G harbaw i和Whi taker采取层析法分离提取了菠萝蛋白酶并研究了它的活性成分。
结构特性研究表明，果菠萝蛋白酶是酸性酶，等电点为pH4．6，茎菠，约为33，000，等电点为pH9．5，其活性中心的氨基酸顺序和催化机理与木瓜蛋白酶相似，并确定茎菠萝蛋白酶为糖蛋白。
Ota S et aL研究指出，茎菠萝酶分子量为36000，末端氨基酸残基是丙氨酸，果酶分子量为30000，末端氨基酸残基也为丙氨酸，碳水化合物分析与Mur aclli 的分析结果相似。
1988年，T．L．迈诺特等由十二烷基硫酸钠．聚丙烯胺凝胶电泳(SDS．PAGE)测定果菠萝蛋白酶分子量22200．25080，等电点3．8~4．8。
菠萝蛋白酶是各种酶的混合物，已知菠萝蛋白酶粗品中包含至少五种蛋白水解酶，也包含非蛋白水解酶，包括酸性磷酸酶和过氧化物酶，并含有淀粉酶和纤维素酶活性，还存在其他成分。
菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响
菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响实验目的学习菠萝蛋白酶的提取纯化方法，学习酶活力的测定原理及方法，了解影响菠萝蛋白酶活性的因素。
实验原理菠萝蛋白酶是一种典型的巯基蛋白酶，相对分子质量为3.3*107，等电点为9.55，能分解蛋白质、肽、脂质和酰胺。
蛋白质在水溶液中的溶解度由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度及蛋白质分子所带电荷的情况决定的，当加入硫酸铵后，由于盐离子对水的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜被破坏，同时其表面的电荷被盐离子中和，导致蛋白质溶解度下降，从而从溶液中沉淀析出。
粗品中的硫酸根离子可由透析的方法除去，铵根离子可由CM琼脂糖FF 层析柱除去。
菠萝蛋白酶活力定义为在特定条件下（pH7.0，37℃），每分钟水解酪蛋白生成1 μg酪氨酸所需的菠萝蛋白酶的量规定为1个酶活力单位，以U/g表示。
根据紫外吸光度（275nm处）建立标准曲线，确定水解产生的酪氨酸含量，从而计算出酶活力。
菠萝蛋白酶活性依靠巯基维持，文献资料显示，含多羟基化合物对巯基具有保护作用，因此通过向菠萝蛋白酶中加入甘油、乙二醇、甘露醇以及葡萄糖，探究验证这类有机物的保护作用。
而N-乙酸马酰亚胺（NEM）是巯基修饰剂，因此可以利用NEM 验证菠萝蛋白酶中的半胱氨酸残基为其酶活性所必需。
实验仪器和试剂材料：菠萝汁（菠萝榨汁后用纱布过滤得澄清溶液）仪器：烧杯、玻璃棒、离心机、离心管、滴管、透析袋、恒温水浴锅、冰箱、电炉、磁力搅拌器、凝胶柱、试管、白瓷板试剂：纯化水，硫酸铵，1mmol/L EDTA的2% NaHCO3溶液，1mmol/L EDTA溶液，1%BaCl2溶液，磷酸缓冲溶液（称取KH2PO4 2.69g以及K2HPO4 13.97g，加水溶解后定容至1000mL，pH7.4 实验中需要大量该溶液），CM琼脂糖FF凝胶，20%乙醇溶液，洗脱液：1M NaC-20mM pH4.0 含0.01% EDTA醋酸缓冲液（取2M醋酸钠溶液13ml与2M醋酸溶液87mL，加入含铜1mg/mL的硫酸铜溶液0.5mL，加入0.1g EDTA，再加水稀释至1000ml），双缩脲试剂（取1.50g CuSO4·5H2O，6.0g酒石酸钠，加水约500ml溶解后加入300ml 10% NaOH，用水配成1L），酪氨酸标准液（精确称取105℃下干燥至恒重的酪氨酸5mg，用pH7.4磷酸缓冲溶液定容至100ml ），酶激活剂（20mmol/L L-半胱氨酸盐酸盐，1mmol/L EDTA-Na，用磷酸溶液定容至100ml），酪蛋白溶液（精确称取酪蛋白5mg，用磷酸缓冲液定容至100ml），三氯醋酸溶液（取三氯乙酸1.8 g，无水醋酸钠2.99 g，冰醋酸液1.9 mL，加水溶液并稀释至100 mL），50%甘油溶液，50%乙二醇溶液，50%甘露醇溶液，50%葡萄糖溶液，NEM，吡啶，苯，己烷，0.1M pH4.6 柠檬酸缓冲溶液（0.1M柠檬酸溶液10.3ml，0.1M柠檬酸钠溶液9.7ml）实验方法1 菠萝蛋白酶的提取在5~8℃下硫酸铵少量多次加入菠萝汁形成饱和溶液，搅拌30min，离心（11000g，20min，4℃），弃去上清液，得粗酶固体。
菠萝蛋白酶的稳定化和提取研究
本论文探讨了金属离子，超声波及茶多酚对菠萝蛋白酶活性，热稳定性的影响。
采用圆二色谱分析了不同浓度及种类的金属离子、不同功率及处理时间的超声波和不同浓度的茶多酚对菠萝蛋白酶二级结构的影响，并研究了茶多酚-菠萝蛋白酶络合物的温度、pH值、Km值等。
论文主要获得了以下结论：1．Ca2+，Mg2+，Mn2+对菠萝蛋白酶的活性以促进作用为主。
Ca2+浓度为2mmol/L 时对酶活性促进作用最好，比原酶活性高出约6％，而低浓度（1mmol/L）和高浓度（5mmol/L）的Ca2+对菠萝蛋白酶的活性却有抑制作用。
Mg2+浓度为4mmol/L时促进作用最好，菠萝蛋白酶酶活性升高4．15％，但浓度小于4mmol/L时，Mg2+对菠萝蛋白酶酶活性有抑制作用。
Mn2+浓度为2mmol/L时对酶活性促进作用最明显，酶活性升高了7．17％，其他浓度的Mn2+使得菠萝蛋白酶活性增加了3％～6％。
Zn2+对菠萝蛋白酶的活性仅有抑制作用，且无论其浓度为多少均表现出强抑制性，并随浓度的增大抑制作用越大。
2．金属离子对菠萝蛋白酶热稳定性的影响与其对菠萝蛋白酶活性的影响作用基本相同。
Ca2+浓度除1 mmol/L外，其他浓度的Ca2+与菠萝蛋白酶作用后，酶的半衰期均有所延长，其中，Ca2+浓度为3mmol/L时菠萝蛋白酶的半衰期比原菠萝蛋白酶的半衰期增加了59．5％。
Mg2+浓度为4mmol/L时半衰期比原菠萝蛋白酶的半衰期增加了20％。
Mn2+浓度为1mmol/L时半衰期比原菠萝蛋白酶的半衰期增加了29％，这是Mn2+作用下最好的效果。
Zn2+浓度为1mmol/L时半衰期比原菠萝蛋白酶的半衰期增加了8．5％，其他浓度都缩短了菠萝蛋白酶的半衰期。
由半衰期比较可知，这四种金属离子中Ca2+对菠萝蛋白酶的热稳定性作用效果最好，而Zn2+作用效果最差。
3．由圆二色谱曲线发现，与无热处理的游离菠萝蛋白酶相比，热处理后的菠萝蛋白酶的α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲均有所变化。
中国药科大学生化设计性实验报告参考——菠萝蛋白酶酶活力影响因素及测定酶活力方法的研究进展
1.1 湿度、温度和 pH[1-2]
在干燥环境中，菠萝蛋白酶活力相对稳定，随着环境湿度 增大，高水分增加了酶结构的柔性，也使蛋白酶发生自水解作 用，酶失活速率加快。详见表 1。
表 1 湿度对菠萝蛋白酶的影响 Tab.1 Effect of humidity on bromelain
度达到 0.035 mg/mL 时，修饰酶的活力高达 147.25 %。
1.5 有机溶剂[7]
将果菠萝蛋白酶分别加至不同浓度有机溶剂中处理 60 min，
分别在含对应浓度的有机溶剂的测活体系中测定它们的剩余酶
活力，结果见表 3，随着有机溶剂浓度增大，酶活力呈直线下降，
当甲醇、乙醇、乙二醇浓度分别达到 25.5 %、20.5 %和 24.0 %
2.2 紫外分光光度法[15]
菠萝蛋白酶在一定的温度与 pH 条件下，水解酪蛋白底物， 然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪蛋白沉淀除 去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。根据吸 光度计算其酶活力。1 g 固体酶粉(或 1 mL 液体酶)，1 min 水 解酪蛋白产生 1 μg 酪氨酸为一个酶活力单位，以 U/g(U/mL) 表示。该方法所需试剂较少，操作手续较简便，但灵敏度较低。
饰，得到菠萝蛋白酶的修饰酶。PEG 作为一种修饰剂与菠萝
蛋白酶相连从而在菠萝蛋白酶外形成一个保护膜，一定程度上
抵抗了热、酸碱的破坏。与天然菠萝蛋白酶相比，经 PEG 修 饰的酶在热稳定性及酸碱稳定性上都有显著提高。并且 Ca2+ 和 Mg2+对修饰酶的活力有很强的激活作用。当 Ca2+的浓度达 到 0.05 mg/mL 时，修饰酶的活力高达 257.66 %；当 Mg2+的浓
菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定
菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定14食安（1）班杨泽杰摘要：本文结合考马斯亮蓝G250染色法，研究了不同纯化方法，包括硫酸铵沉淀法、透析法，对菠萝蛋白酶活性的影响。
实验结果表明，两种纯化方法都能有效纯化菠萝蛋白酶，但是会对菠萝蛋白酶的活性造成一定的损失。
关键词：菠萝蛋白酶沉淀法透析法纯化酶活性前言菠萝蛋白酶（Bromelain，EC 3.4.22.3）简称菠萝酶，是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶，它广泛存在于菠萝的果实、芽、叶、茎。
菠萝蛋白酶属于糖蛋白，是由巯基蛋白酶和非蛋白酶组分构成的复杂复合物，因含有一个不稳定的游离巯基，所以菠萝蛋白酶极易被氧化而使其酶活下降。
菠萝蛋白酶的相对分子质量大约为33 000，等电点 9.55，最适pH 在7.1左右，在偏酸环境下酶活下降较快，碱性环境能延缓失活。
菠萝蛋白酶的温度的最稳定范围是55℃~65℃。
金属盐离子中NaCl、KCl对酶活的影响不是很大，维生素C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂，EDTA能通过螯合对酶活有影响的金属离子而保护菠萝蛋白酶，有机溶剂中甲醇、乙醇、乙二醇对酶活损失较大。
在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等，可用于肉质嫩化、水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。
在医药上它可以治疗水肿及多种炎症，它能帮助迅速结痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。
1 实验材料与仪器1.1实验材料与试剂1.1.1 实验材料新鲜菠萝（3个），透析袋1.1.2 实验试剂（1）盐析粗提液0.1mo1/L pH 7.8磷酸缓冲液配制（PBS）（配4 000mL），0.01mo1/L pH 7.8磷酸缓冲液配制（PBS）（配4 000mL）（2）酶活力测定试剂1％酪蛋白（进口分装）（配100mL），激活剂[含20mmo1／L半胱氨酸-盐酸盐、1mmo1/L EDTA-Na2 (乙二胺四乙酸二钠)] ，10％三氯乙酸(TCA) 1.2实验仪器和用品1.2.1实验仪器HJ-6多头磁力搅拌器：常州国华电器有限公司MC-H18S012多功能红外炉：广东美的生活电器制造有限公司DS-1高速组织捣碎机：上海标本模型厂GKC110R2可控硅恒温水浴锅：赏花锦屏仪器仪表有限公司TD5M低速离心机：长沙湘智离心机仪器有限公司TDL-60B台式离心机：上海安亭科学仪器厂722型可见分光光度计：上海舜宇恒平科学仪器有限公司UV5100B型紫外可见分光光度计：上海元析仪器有限公司PL1502-S电子天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司BS110S分析天平北京赛多利斯天平有限公司BCD-539WT冰箱：青岛海尔股份有限公司1.2.2实验用品（1）以组为单位的用品大试管18mm×200 mm（10支）、试管架（2个）、烧杯（50mL×1，100mL×2， 200mL×1）、滴管（2支）、玻璃棒（2支）、移液管（5mL×1，1mL×2，0.1mL×1，0.2 mL×1）、漏斗（3个）、量筒（100mL×1）、研钵、白瓷板、纱布、滤纸、蒸馏水瓶、洗耳球、标签纸、橡皮筋。
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响一、实验目的1、掌握菠萝蛋白酶的提取和纯化方法2、研究菠萝蛋白酶的稳定性3、掌握菠萝蛋白酶的化学修饰并对修饰酶与未修饰酶的活性比较二、实验原理菠萝蛋白酶（Bromelain,EC 3.4.22.3）是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶。
菠萝蛋白酶属于糖蛋白，分子量约为33000D，等电点为9.55，白色至浅棕黄色无定形粉末，溶于水。
水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。
菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质，肽，酯，酰胺。
它的水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高十倍以上，因此有着广泛的用途。
它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。
在医药上它可用于生物体内溶解纤维蛋白及血凝块，因此可用于治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。
菠萝蛋白酶的最适温度范围比较稳定，最稳定范围是55℃~65℃。
菠萝蛋白酶的最适 pH 在7.1 左右，呈现中性。
金属盐离子中 NaCl、KCl对酶活的影响不是很大，较高浓度的 MgCl2、CaCl2对菠萝蛋白酶单宁复合物有一定程度的抑制作用，尤其在浓度较高的情况下对菠萝蛋2+白游离酶酶活的影响更大。
Zn的作用中以醋酸锌的作用更为显著，极低的浓度即能促使菠萝蛋白酶的酶活性明显提高。
较低浓度的 ZnCl2也能使酶的稳定性有所提高。
维生素 C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂，都能使酶分子中巯基基团维持还原态，能够作为还原剂来提高酶活力。
0.05%的苯甲酸钠即能使氧化脱氢酶的活性得到抑制，对酶起到保护作用。
对酶活有影响的金属离子，EDTA 能通过螯合而保护菠萝蛋白酶，消除其对酶的失活作用。
其它试剂如 50%的甘油、葡萄糖、40%的半乳糖都能使菠萝蛋白酶的半衰期延长，蔗糖、麦芽糖、棉籽糖、松三糖、乙二醇和甘露醇均对菠萝蛋白酶有一定的保护作用。
茶多酚对食品蛋白质乳化功能影响的研究进展
茶 是 公 认 有 益 于 人 类 健 康 的 最 佳 饮 料， 茶 多 酚 是 茶 叶 中 最 主 要 的 功 能 成 分， 约 占 茶 叶 干 重 的 25% ～ 30%。茶多酚是一系列化合物总称，其中儿茶 素占 60% ～ 80%，分为酯型儿茶索和游离型儿茶素， 酯型儿茶素占儿茶素的 70% 左右。已有研究表明其具 有较多生理、药理等功能 [1]。茶多酚由于具有特殊的 结构特点及价值，现已广泛应用在多个领域。近年来 食品工业茶多酚的应用研究也越来越多，部分研究已 表明茶多酚的添加对食品色、味的形成有重要影响 。 [2-3]
蛋白质是组成生物个体的主要元素，其具有发泡 乳化、持水力、形成胶体等特点，对改善食物品质、 质地构成产生较大影响 [4]。随着食品蛋白质结构及与 之相关联功能的发现以及对其营养功能的深入认识， 如何在食品加工中进一步改善食品的性能和质地构
成，改进食品营养成分及外观构成成为研究者重点关
注内容。研究表明茶多酚具有形成沉淀、产生涩味的 特点，并且对蛋白质生物利用率也能产生影响 [5]。为 更好地提高人们的生活水平，改善食品品质及其营养 成分特征，将茶多酚应用在食品蛋白质改进方面也成 为食品工业重点探索发展方向。
茶多酚应用于食用油脂可起到抗氧化作用，其抗 氧化能力比常规抗氧化剂高，低浓度（20 ～ 100 mg·L-1） 同样效果明显，此外还对众多食用油脂的过氧化值和 酸价有明显抑制作用，使用效果好于使用维生素 。 [11] 另外，油脂中使用茶多酚能使酸败延迟，防止油品在 销售期质量下降，增长商品销售时间 [12]。在方便面等 速食加工中使用茶多酚有较好防腐变效果 [13]。将茶多 酚用在油炸马铃薯片中效果显著，在室温无密封贮藏 环境下，添加茶多酚组 3 个月无异味，而无添加组在 43 d 即呈现酸败味 。 [14] 1.4 果品和菜蔬保鲜
菠萝蛋白酶纯化方法总结
菠萝蛋白酶的提取方法：（1）沉淀法沉淀法是粗提酶蛋白的方法之一，主要用于前期酶的初步分离和浓缩，常用的方法有盐析法，有机溶剂沉淀法，聚乙二醇沉淀法，等电点沉淀法等。
用新型吸附洗涤沉淀法和单宁沉淀法也可以提取菠萝蛋白酶，操作简单，产率也较高，但酶的产量与单宁的用量密切相关，而且所含单宁有毒，导致这种方法逐渐被淘汰了。
以酒精为沉淀剂提取菠萝蛋白酶时，酒精的加入量会对菠萝蛋白酶产生较大的影响，酒精的浓度太低时，不能使菠萝蛋白酶沉淀下来，浓度太高容易使酶变性失活。
酒精的浓度为80%时，酶的收率最高。
从茶叶中提取的多酚类物质茶多酚也可用于菠萝蛋白酶的分离，用0.5%的茶多酚提取物对菠萝汁中菠萝蛋白酶进行沉淀最多可达78%，其最大沉淀率明显比单宁法高。
（2）离子交换色谱法离子交换色谱层析法是蛋白质研究领域内比较高效的纯化技术，目前国外用于分离菠萝蛋白酶常用的离子交换剂有Sephacryl S-200柱、Mono S阳离子交换剂、S-Sepharose、弱酸性阳离子交换树脂、CM-纤维素阳离子交换柱、Q阴离子交换柱。
国内常用的有羧甲基纤维素（CMC）、二乙胺乙基纤维素（DEAE），酶的纯化过程通常是将若干色谱纯化技术联合使用来实现的。
Ota最早用SephadexG-75结合CM-SephadexC-25柱层析分离得到5种茎酶的组分。
用DEAE-52离子交换柱层析结合Sephadex G-75分子筛柱层析色谱法纯化果酶，能获得比活力为12.5U/mg的单一电泳纯酶制剂。
（3）固定化金属离子亲和色谱法固定化金属离子亲和色谱法是以普通凝胶作为载体，连接上合适的螯合配体和足够暴露的金属离子，制成亲和吸附剂，进行分离纯化蛋白质的方法。
此法介于高特异性的生物亲和分离法和低特异性的离子交换色谱法之间，对组氨酸基团有特异性。
Huali Nie 等（2008）首次应用固定化金属亲和膜（IMAM）—肽-尼龙膜，这是一种将七肽共价固定到复合膜上作为配体的新型尼龙膜，用其从菠萝中分离和提纯菠萝蛋白酶，可使菠萝蛋白酶纯化15.4 倍，回收率达94.6%，而且不会造成任何变性。
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响
菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响中国药科大学药学院 09级药化一、实验目的1、了解菠萝蛋白酶的提取方法2、研究菠萝蛋白酶的稳定性3、了解菠萝蛋白酶的纯化4、了解菠萝蛋白酶的化学修饰5、修饰酶与未修饰酶的活性比较二、实验原理菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白质,广泛存在于菠萝果实、芽、叶、茎中,分子量为33 000 , 等电点为9.55，白色至浅棕黄色无定形粉末，溶于水。
水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。
属糖蛋白，能分解蛋白质、脂类和酰胺等。
它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清. 还用于明胶、水解蛋白的生产,在医药上它可在生物体内溶解纤维蛋白及血凝块。
因此可以治疗水肿及多种炎症,它能迅速溶痂。
对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。
本实验先从新鲜的菠萝汁中使用有机酸（单宁）沉淀法提取菠萝蛋白酶，糖类、多元醇使得酶的稳定性得到增强。
三、实验材料1、材料：新鲜的成熟菠萝2、仪器：榨汁机、离心机、紫外分光光度计、恒温水浴锅、氯化钙的干燥器、CM Sepharose FF 凝胶（1.1cm×30.0cm）、研钵、滴管（大、小）、烧杯（大、中、小）、试管、具塞试管、白瓷板、温度计、PH计、搅拌棒3、试剂：0.2%单宁、5 %苯甲酸钠溶液、0. 1 %/0.5%EDTA 溶液、1. 5%氯化钠溶液、0. 5%乙酸锌溶液、0.06 %抗坏血酸溶液、0. 5%硫代硫酸钠、1 %L - 半胱氨酸溶液、20mM pH4.0 的醋酸缓冲液、1MNaCl~20mM pH4.0 醋酸缓冲液（含0.01%EDTA）、双缩脲试剂、pH7.0 的干酪素溶液、酶液激活液（pH4.5 ，L-cys 和EDTA-2Na 配制）、三氯乙酸溶液、标准酪蛋白试剂、0.1M盐酸、0.1M氢氧化钠、50%乙二醇、50%甘露醇、50%葡萄糖、50%甘油、O．1mol/L 柠檬酸盐缓冲液(pH 3．0)、NEM四、实验过程1、提取：菠萝洗净榨汁。
茶多酚对木瓜蛋白酶的回收及其特性的影响
茶多酚对木瓜蛋白酶的回收及其特性的影响王晓玲;王洪新【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2007(28)4【摘要】研究了茶多酚对木瓜蛋白酶特性的影响.采用不同茶多酚浓度、作用温度、pH、缓冲液类型及浓度使2者络合、沉淀及回收,并研究其对络合效果的影响.结果表明:茶多酚与木瓜蛋白酶具有起混活性;最佳络合条件为:茶多酚浓度0.8%,作用温度0～4 ℃,作用时间90 min,pH4.5,缓冲液为0.1 mol/L的Na2HPO4-柠檬酸,此时获得最大的木瓜蛋白酶活性回收率(92.3%);木瓜蛋白酶与茶多酚络合前后,其最适反应温度及最适pH无明显改变,分别为65℃和7.0左右,最适pH范围有所变窄,但热稳定性显著提高,25℃时的半衰期由原来的4 d延长到超过14 d,0℃贮藏30 d 后,残存酶活由原来的49.64%变为84.86%;Lineweaver-Burk图表明,络合后的菠萝蛋白酶Km值由3.07 mg/mL变为5.71 mg/mL.【总页数】5页(P63-66,88)【作者】王晓玲;王洪新【作者单位】江南大学,食品科学与安全教育部重点实验室,江苏,无锡,214036;江南大学,食品科学与安全教育部重点实验室,江苏,无锡,214036;石河子大学,食品学院,新疆,石河子,832003【正文语种】中文【中图分类】TS201.2【相关文献】1.木瓜蛋白酶对白茶浸提液中茶多酚含量的影响2.茶多酚对胃蛋白酶的回收以及特性的影响研究3.茶多酚对米曲霉α-淀粉酶的回收及其特性的影响4.茶多酚对木瓜蛋白酶的络合作用及特性的影响5.pH值对罗非鱼木瓜蛋白酶解物的功能特性影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。