大实验一.从土壤中分离纯化蛋白酶产生菌
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大实验一 从土壤中分离纯化蛋白酶产生菌
实验目的要求
1、掌握菌株分离纯化的基本原理和方法 2、分离获得并纯化蛋白酶产生菌
实验原理
实验步骤
5g 土样 45ml dH2O 玻璃珠
振摇15min
配制 酪蛋白培养基 （150 ml / 瓶）
划线纯化 （每人1平板）
各0.5ml
(37℃，24～48h)
4.5ml
2）如要分离淀粉酶产生菌，应如何设计培养 基？怎样识别目标菌？从何种环境取样？
准 备：
1、酪蛋白培养基 （1200ml; 150ml/bottle; 8瓶） 2、牛肉膏蛋白胨斜面 （300ml; 分装50支）
( 616-L1 & 616-R1) ( 616-L2 & 616-R2)
3、稀释用灭菌水 （4.5ml dH2O /管，5×8 = 40支） ( 619-L1 & 619-R1)
牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 10.0g， H2O 1000ml，pH值7.0,琼脂粉15g
在大实验的第2次实验时准备（下个实验用）：
1）稀释用水： 4.5ml dH2O/管，50管 ( 616-L1 & 616-R1) 2）淀粉培养基（固体）：每瓶250ml，4瓶 ( 619-L1 &百度文库619-R1) 3）牛肉膏蛋白胨（液体）：500ml三角瓶装80ml，12瓶
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 各100 ul (各2套)
接种斜面
37℃培养24～48h
涂平板
37℃培养24～48h；4℃冰箱保存菌种
实验结果
可直接观察平板上有无具 透明圈的菌落 如透明圈不清晰，可向平 板内菌落间加入少许10%三 氯醋酸，过片刻再观察
实验报告
1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题 1） 为分离获得产蛋白酶的细菌，应从何种环 境取样？
( 619-L2 & 619-R2)
4）卢戈氏碘液：300ml
( 616-L2 & 616-R2)
附 配 方： 1、淀粉培养基： 蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，H2O 1000ml， pH7.2；琼脂15g 2、牛肉膏蛋白胨液体培养基：配方见上，不加琼脂 3、卢戈氏碘液：碘1g，碘化钾2g，H2O 300ml 配法：先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解在碘 化钾溶液中，待碘完全溶解后加足水即可
4、制备土壤悬液用水 （45ml dH2O，玻璃珠; 8瓶） ( 619-L2 & 619-R2)
培 养 基 配 方： 1、酪蛋白培养基: 酪素5g （先用0.2N的NaOH充分溶解），牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 10.0g，pH7.0～7.5， H2O 1000ml,琼脂粉15.0g 2、牛肉膏蛋白胨培养基：
实验目的要求
1、掌握菌株分离纯化的基本原理和方法 2、分离获得并纯化蛋白酶产生菌
实验原理
实验步骤
5g 土样 45ml dH2O 玻璃珠
振摇15min
配制 酪蛋白培养基 （150 ml / 瓶）
划线纯化 （每人1平板）
各0.5ml
(37℃，24～48h)
4.5ml
2）如要分离淀粉酶产生菌，应如何设计培养 基？怎样识别目标菌？从何种环境取样？
准 备：
1、酪蛋白培养基 （1200ml; 150ml/bottle; 8瓶） 2、牛肉膏蛋白胨斜面 （300ml; 分装50支）
( 616-L1 & 616-R1) ( 616-L2 & 616-R2)
3、稀释用灭菌水 （4.5ml dH2O /管，5×8 = 40支） ( 619-L1 & 619-R1)
牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 10.0g， H2O 1000ml，pH值7.0,琼脂粉15g
在大实验的第2次实验时准备（下个实验用）：
1）稀释用水： 4.5ml dH2O/管，50管 ( 616-L1 & 616-R1) 2）淀粉培养基（固体）：每瓶250ml，4瓶 ( 619-L1 &百度文库619-R1) 3）牛肉膏蛋白胨（液体）：500ml三角瓶装80ml，12瓶
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 各100 ul (各2套)
接种斜面
37℃培养24～48h
涂平板
37℃培养24～48h；4℃冰箱保存菌种
实验结果
可直接观察平板上有无具 透明圈的菌落 如透明圈不清晰，可向平 板内菌落间加入少许10%三 氯醋酸，过片刻再观察
实验报告
1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题 1） 为分离获得产蛋白酶的细菌，应从何种环 境取样？
( 619-L2 & 619-R2)
4）卢戈氏碘液：300ml
( 616-L2 & 616-R2)
附 配 方： 1、淀粉培养基： 蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，H2O 1000ml， pH7.2；琼脂15g 2、牛肉膏蛋白胨液体培养基：配方见上，不加琼脂 3、卢戈氏碘液：碘1g，碘化钾2g，H2O 300ml 配法：先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解在碘 化钾溶液中，待碘完全溶解后加足水即可
4、制备土壤悬液用水 （45ml dH2O，玻璃珠; 8瓶） ( 619-L2 & 619-R2)
培 养 基 配 方： 1、酪蛋白培养基: 酪素5g （先用0.2N的NaOH充分溶解），牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 10.0g，pH7.0～7.5， H2O 1000ml,琼脂粉15.0g 2、牛肉膏蛋白胨培养基：