水貂生长激素受体cDNA克隆与序列分析
水貂阿留申病毒5个分离株的全基因测序及遗传变异分析
1 材料与方法
1. 1 材料 1. 1. 1 主 要试剂 UN I Q 1 0 柱式 病毒基 因组 抽 提 试剂盒为 上 海 生 工 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司 产 、 感受态细胞J 品; MD 1 8 TV e c t o r M 1 0 9、 T 4D NA p 连接酶 、 D NA M a r k e rD L20 0 0、 E x犜 犪 NA 聚合 狇D 酶、 d NT P为 T a K a R a 公 司 产 品; D NA 凝 胶 回 收 试 剂盒 、 溴化乙锭 ( 、 琼 脂 糖、 琼脂粉为维特杰公司 E B) 产品 。 1. 1. 2 病毒 由 吉 林 农 业 大 学 经 济 动 物 疾 病 实 验 室所分离和保存的 5 株具有致病性 的水 貂阿留 申病 病 毒 分 离 株 ,分 别 命 名 为 A D V D L 1 2 4、 A D V A D V Z 3、 A D V Q 2、 A D V Q 3。 D L 1 2 5、 1. 2 方法 1. 2. 1 引物的设计 根 据 G e n B a n k上公布的不同 A D V 全基因序列 ( A D V G 登 录 号 :M 2 0 0 3 6、
4] 毒粒子构 建 疫 苗 带 来 了 许 多 的 困 难 [ 。 对 此, 国外
许 学者认为基于 病 毒 衣 壳 构 建 疫 苗 应 该 是 无 效 的 ,
] 5 多尝试也证明 了 这 一 点 [ 。因为 A D V 特有的致病
给水貂养殖业造成了 水貂养殖场均 发 现 阿 留 申 病 ,
2] 巨大的经济损失 [ 。A 水貂体内不 D V 感染水貂 后 ,
产生或只产生 少 量 的 中 和 抗 体 , 而产生的多数抗体 不仅不能具有 中 和 病 毒 的 毒 力 , 反而通过介导抗体 依赖性增 强 作 用 , 进一步帮助 A D V 对靶细胞的侵 [ 3] 染 。而且, 由于病毒抗原与抗体形成的复合物 ( , 特有的理化特点可导致I i mm u n ec o m l e x I C) C p 沉积并引发肾小球肾炎和动脉炎 。 这些 都 对基 于病
水貂β-干扰素基因的克隆、测序与遗传进化分析
w e o a e t n t e a i e a i l. h n c mp rd wi a o h rc n n n mas h
Ke o d : ik B—it e ngn ;c nn n e u nig eei n v l in yw r s m n ; ne r e e l iga dsq e c ;h r t a deo t f r o o n dy uo
bt)gn a d s n da dsnh s e yD A tra a s , ae tt N a xrc d rm teif t e a eew s ei e n ytei db N s t nl is w r ,oa R A w s t t o e e g z a yso l e aef h ncd
T e r s l s g e t t a —i t r r n n ce t e s q e c o l g r 0 0 h e ut u g s h tB s n e e o u l oi e u n e h moo y a e 1 0. % a d a n cd h mo o y a e f d n mi o a i o lg r
Z HANG Yi u n ,Z —y a HANG T n i g—h n ,C og HANG We —s a i hh
( r e v e r ayMein ,C lg nm l c ne n eh o g ,Sa dn gi l r U i rt,Tia S ad n 70 0, hn ) Pe mi Vti r dc e ol eo ia i c a dTcnl y h n ogA r ut e nv sy a ’n, hn og2 10 C ia v e en i e fA Se o c u ei
一株水貂阿留申病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析
Ivtgn公 司 ; a N 聚 合 酶 、 N P D200 nioe r TqD A d T 、 I 0
D A Mak r感受 态 大肠 杆菌 D- c 小量 胶 回收试 N re、 I  ̄ I 、 S
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1 试 验 材 料
病 料 山东威海养 殖户送检 的疑似 A V感染致 D 死 的水貂样 本 , 采集其 实质器官 , 一0℃保存 。 置于 2 试 剂和 细胞 蛋 白酶 K、MD 8 T载 体 购 自宝 P 1一
t e V 2 g n e u n e eo e a d atrs p r t n w u d b e u n e .T e r s t ee c mp rd w t t e DV VP h P e es q e c s b fr n f e a ai o l e s q e c d e o h e u s w r o ae i o h rA 2 l h
g n e u n e ban dfo teGe B n .A sri fAD e esq e c so t e rm h n a k tan o V。w ih cud go omal nCRF c H n me V. i hc o rw n r l i l y K e s( a d AD Z 1 .w so tie .Amioai e u n ea ay i idctsta eVP rti e u n eo eADV. YL tanh s YL ) a ban d n cdsq e c n lss n iae htt 2 poensq e c fh h t Z 1sri a
水貂α-干扰素基因的克隆、测序与遗传进化分析
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[】胡友 军,林 映才,周 桂莲 , 德谦 ,郑黎 补. 类 中草药 提取 物对 黄 4 余 几 羽 肉鸡 生 产 性 能和 T 巴细 胞 亚群 的影 响 [ _中 国畜牧 杂 志 . 0 , : 淋 J 1 2 4 9 0
去 上 清 , 室 温 晾 干 沉 淀 ( 约 5 n , 沉 淀 溶 于 5 — 0 g 大 mi) 0 10 l R NA溶 解 液 中 , 5 ~ 0C孵 育 1mi, 即获 得 水 貂 脾 脏 总 5 6 0 0 n
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通 讯作 者
基 因 的 核 苷 酸 序 列 , 设 计 一 对 引 物 : F5 T AA C T :-AG Tr A "
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世 纪 生物 科 技 有 限 公 司 。 1 引物 设 计 与 合 成 . 2 根 据 G n ak 发 表 的 雪 貂 IN— eB n上 F a
近 年来 ,貂 、狐狸 、貉 等犬科 动物 作 为特种 经 济动
物 饲 养 正 在 兴 起 。 而 犬 科 动 物 各 种 病 毒 性 疾 病 是 造 成 死
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1 水貂脾 脏总R . 3 NA的提取
水貂细胞色素b基因(Cytb)克隆、序列分析及与鼬属动物的进化关系
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水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析[1]
西北农业学报 2008,17(6):21224A cta A g riculturaeB oreali2occi dentalis S inica水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析苏凤艳,宗春苗,王卓聪,丁庆东,王全凯3(吉林农业大学中药材学院,吉林长春 130118)摘 要:以犬瘟热病毒水貂分离株RNA为模板,经R T2PCR反应,扩增出融合蛋白基因的1053bp DNA片段,通过T2A克隆技术,成功构建克隆载体PMD218T/F。
序列分析表明:分离株与01-2689株、25442Han95株、A75217株、DO G D K91C株、00-2601株、ON P株、PDV22株核苷酸序列同源性分别为94.3%、93.5%、94.4%、93.6%、95.3%、97.3%和94.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%、96.6%、97.4%、97.4%、97.4%、97.2%和98.0%。
抗原指数分析表明分离株与疫苗ON P株、强毒A75-17株在40-50位氨基酸间存在明显差异。
关键词:水貂;犬瘟热病毒;融合蛋白基因;克隆;序列分析中图分类号:Q959.838 文献标识码:A 文章编号:100421389(2008)0620021204Cloning and Sequence Analysis of Fusion Protein G ene ofC anine Distemper Virus Isolated from MinkSU Feng2yan,ZON G Chun2miao,WAN G Zhuo2cong,DIN G Qing2dong and WAN G Quan2kai3(Chinese Medicinal Materials College,Jilin Agricultural University,Changchun130118,China)Abstract:The genomic RNA was ext racted f rom isolated st rain.The1053bp DNA segment of f usion p rotein(F)gene was amplified by reverse t ranscriptase polymerase chain reaction(R T2PCR).The clone vector PMD218T2CDVS J F was const ructed successf ully by T2A clone technique.The sequence of t he f usion gene and deduced amino acid of isolated st rain showed an identity of94.3%,93.5%, 94.4%,93.6%,95.3%,97.3%,94.5%and97.2%,96.6%,97.4%,97.4%,97.4%,97.2%, 98.0%wit h01-2689,2544Han95,A75-17,DO GD K91C,00-2601,ON P,PDV22,respectively. Antigenicity analysis showed t hat isolated st rain was different f rom ON P and A75217in40-50t h ami2 no acid antigenicity.K ey w ords:Mink;Canine distemper virus;Fusion protein gene;Cloning;Sequence analysis 水貂犬瘟热亦称水貂瘟或水貂瘟热病,系由副粘病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus,CDV)引起的急性、热性、高度接触性传染病[1]。
水貂生长激素基因重组腺病毒的构建
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水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析
水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析苏凤艳;宗春苗;王卓聪;丁庆东;王全凯【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2008(017)006【摘要】以犬瘟热病毒水貂分离株RNA为模板,经RT-PCR反应,扩增出融合蛋白基因的1053bp DNA片段,通过T-A克隆技术,成功构建克隆载体PMD-18T/F.序列分析表明:分离株与01-2689株、2544-Han95株、A75-17株、DOGDK91C 株、00-2601株、ONP株、PDV-2株核苷酸序列同源性分别为94.3%、93.5%、94.4%、93.6%、95.3%、97.3%和94.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%、96.6%、97.4%、97.4%、97.4%、97.2%和98.0%.抗原指数分析表明分离株与疫苗ONP株、强毒A75-17株在40-50位氨基酸间存在明显差异.【总页数】4页(P21-24)【作者】苏凤艳;宗春苗;王卓聪;丁庆东;王全凯【作者单位】吉林农业大学,中药材学院,吉林长春,130118;吉林农业大学,中药材学院,吉林长春,130118;吉林农业大学,中药材学院,吉林长春,130118;吉林农业大学,中药材学院,吉林长春,130118;吉林农业大学,中药材学院,吉林长春,130118【正文语种】中文【中图分类】Q959.838【相关文献】1.犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析 [J], 鞠会艳;乔军;高玉伟;杨松涛;夏咸柱2.4株鹅源新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 万洪全;吴艳涛;刘秀梵;张如宽3.犬瘟热病毒A株N蛋白基因编码区的克隆与序列分析 [J], 李昌文;张洪英;刘怀然;关云涛;刘立奎;张坦;陈洪岩4.犬瘟热病毒山东株的分离及N蛋白基因的克隆与序列分析 [J], 孟培培;张洪亮;黄娟;单虎5.犬瘟热病毒蓝狐分离株融合蛋白基因的序列分析 [J], 苏凤艳;丁庆东;宗春苗;王卓聪;王春雨;王全凯因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
水貂α-干扰素基因的克隆与序列分析
水貂α-干扰素基因的克隆与序列分析赵春霏;张海玲;罗国良;闫喜军;柴秀丽;王凤雪;赵建军;邵西群;易立【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2008(030)004【摘要】采用RT-PCR方法从体外诱导的水貂外周血淋巴细胞中扩增出水貂的α-干扰素基因(MiIFN-α).测序结果显示,水貂的IFN-α基因序列全长为564个核苷酸.共编码187个氨基酸,与GenBank上已发表的雪貂的IFN-α核苷酸序列同源性为97.5%,氨基酸同源性为92%.【总页数】4页(P6-9)【作者】赵春霏;张海玲;罗国良;闫喜军;柴秀丽;王凤雪;赵建军;邵西群;易立【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109【正文语种】中文【中图分类】S865.2;Q785【相关文献】1.水貂白细胞介素-6基因的克隆与序列分析 [J], 张东亮;范思宁;廉士珍;常彤;高冰;闫喜军;张海玲2.水貂干扰素-β基因的克隆与序列分析 [J], 杨培培;衣服德;冯永胜;张倩3.中国黑白花奶牛干扰素-τ成熟蛋白基因的克隆与序列分析及牛干扰素-τ的分类[J], 张明;管晓斌;朱庆;刘学方;冯玉梅;赖松家4.水貂白细胞介素-4基因的克隆、序列分析与原核表达 [J], 范思宁;赵辉;廉士珍;闫喜军;张海玲;赵建军;王洋;胡博;吕爽;马凡舒;李欣彤;凌明玉5.水貂部分Toll样受体(TLRs)基因的分子克隆、序列分析及组织表达分析 [J], 仝明薇;易立;杨勇;程悦宁;王建科;赵航;林鹏;程世鹏因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
水貂MLPH基因第一外显子序列结构及特征分析
水貂MLPH基因第一外显子序列结构及特征分析
张敏
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2011(039)018
【摘要】[目的]克隆辽西地区饲养水貂的MLPH基因第一外显子序列及其侧翼序列,预测其结构特征,为培育彩色水貂提供理论依据.[方法]扩增水貂MLPH基因第一外显子和5'侧翼序列,利用SignalP 3.0Server、ClustalX 1.83、Mega 4.1、TMHM 2.0、ProtComp-v6.0等生物学软件进行序列分析.[结果]测序得到1029 bp长的序列片段,利用Mega4.1软件计算水貂与大家鼠的遗传距离是最近的
0.5405,与人的遗传距离是最远的0.6552,构建水貂分子系统进化树.[结论]水貂MLPH基因是一个分泌蛋白.
【总页数】3页(P11097-11099)
【作者】张敏
【作者单位】辽宁医学院锦州畜牧兽医学院,辽宁,锦州,121001
【正文语种】中文
【中图分类】S821.3
【相关文献】
1.多浪羊DQB1基因第二外显子序列分析 [J], 方翟;王熙凤;高庆华
2.多浪羊MHC-DRB3基因第二外显子序列分析 [J], Fang Di;Ma Xiao-long;Gao Qing-hua
3.多浪羊MHC-DRB3基因第二外显子序列分析 [J], 方翟; 马小龙; 高庆华
4.拉萨白鸡PMEL17基因第10外显子序列突变的研究 [J], 冯静; 石海仁; 鹏达; 郑晓彤; 张浩; 马雪英
5.五种牛THRSP基因部分第一外显子序列PCR-SSCP多态性研究 [J], 张小白;昝林森;王洪宝;桂林生
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水貂黑素皮质素受体-4基因部分序列的克隆测序
水貂黑素皮质素受体-4基因部分序列的克隆测序刘宗岳;杨洪雁;白秀娟【摘要】对水貂黑素皮质素受体-4(MC4R)基因进行了克隆和序列分析,以期为进一步开展水貂MC4R基因与其肥胖性状的相关分析及基因定位等研究提供理论基础.首先采用特定引物对水貂MC4R基因进行PCR扩增、克隆和测序,然后用DNAMAN软件拼接MC4R基因全序列,并进行序列的同源性分析.试验获得水貂MC4R基因序列816 bp.水貂MC4R基因序列与同一种属的水獭的同源性最高,达96%,而与犬、狐、大熊猫、河马、野猪、山羊、人及小鼠这些哺乳动物的同源性在89%~95%之间,另外,与贝加尔湖海豹和加州海狮的同源性也较高,均为94%.本研究成功克隆了水貂的MC4尺基因.结果表明,其在物种间具有较高的保守性.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)002【总页数】4页(P101-104)【关键词】MC4R基因;克隆测序;序列分析;水貂【作者】刘宗岳;杨洪雁;白秀娟【作者单位】东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨,150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨,150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】Q343.15动物的体重及体内的脂肪含量是由动物体内一个反馈调节环所调控的。
在此调控环中,中枢黑素皮质素系统(the central melanocortin system,CMS)对动物的体重和能量稳态调控起着重要的作用(Fan等,2007)。
CMS包括阿黑皮质素原(proopiomelocortim,POMC)、神经肽 Y(neuropeptide Y,NPY)、黑素皮质素颉颃物-agouti相关蛋白(agouti-related protein,AgRP)和5个黑素皮质素受体(melanocortin receptors,MC1R~MC5R)。
黑素皮质素受体-4(melanocortine receptor-4,MC4R)由332个氨基酸残基组成,具有七次跨膜结构,是跨膜G蛋白藕联受体家族成员之一(Schioth等,1997)。
水貂生长激素基因重组腺病毒的构建
水貂生长激素基因重组腺病毒的构建王友东;张乐萃【摘要】本研究利用AdEasyTM XL腺病毒载体系统构建了水貂生长激素基因重组腺病毒.利用PCR、酶切、凝胶回收等方法,从质粒pCMVmGH中获得水貂生长激素基因(mGH),构建穿梭质粒pShuttle-CMV-mGH.pShuttle-CMV-mGH经Pme Ⅰ酶切线性化后转化至BJ5183感受态大肠杆菌内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-mGH.重组质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后转染AD-293细胞.Pac Ⅰ酶切结果表明质粒重组成功.转染第10天,细胞出现圆缩、死亡、漂浮等典型病变,透射电镜检测到重组病毒.TCID50测得第2代重组病毒的滴度达到10-7.89/0.1ml.RT-PCR结果证实,重组病毒能够正确转录目的基因.结果表明本试验成功构建了水貂生长激素基因重组腺病毒,为水貂促生长的研究提供了新的科学手段.【期刊名称】《青岛农业大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2010(027)002【总页数】6页(P144-149)【关键词】水貂;生长激素基因;重组腺病毒【作者】王友东;张乐萃【作者单位】青岛农业大学动物科技学院,山东,青岛,266109;青岛农业大学动物科技学院,山东,青岛,266109【正文语种】中文【中图分类】Q789水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)是由脑垂体前叶细胞分泌的一种蛋白质激素,它具有广泛的生理功能:促进水貂生长,增加体长,提高毛皮质量。
传统方法直接从水貂脑垂体中提取生长激素产量甚微,不能满足水貂养殖业发展的实际需求,目前人们试图利用基因工程的手段来获取大量的水貂生长激素。
1990年,Harada以猪生长激素为探针,从水貂生长激素脑垂体的cDNA文库中克隆出水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)[1]。
此后,Jolanta 2006年经人工发酵,使生长激素蛋白得以大规模生产[2]。
一株水貂阿留申病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析
一株水貂阿留申病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析桑宇;张段玲;钱毓斌;张彦龙【摘要】为了对水貂阿留申病毒的诊断防治提供依据,验证水貂阿留申病毒在我国的遗传演化情况,研究了阿留申病毒的诊断抗原.将疑似阿留申病毒感染致死的迭检水貂进行PCR初步诊断,并应用猫肾传代细胞系(CRFK)进行了分离培养.提取细胞培养物的DNA,经PCR检测呈阳性后,对分离前后的阿留申病毒VP2基因全序列进行克隆测序,其结果与GenBank上传的其它ADV亚型VP2序列进行了比较后证明:获得了一株可以在CRFK细胞中稳定生长的水貂阿留申病毒毒株(命名为ADV-ZYL1).氨基酸分析发现,ADV-ZYL1毒株与美国强毒力毒株ADV-Utah-l的氨基酸同源性最高,为96.1%,与ADV-Far East的氨基酸同源性为92.7%,表明ADVZYL1的VP2蛋白氨基酸存在很高的突变率.%An experiment was conducted to study the genetic evolution types of Aleutian mink disease parvovirus in order to provide more conveniences for the future researches of ADV antigen in China. The samples collected from minks, which were suspected of being infected with ADV, were amplified using PCR method for a primary diagnosis, and the viruses were extracted and serially passaged in Crandell Feline Kidney cells ( CRFK) . If a PCR amplification indicated a positive result, the VP2 gene sequences before and after separation would be sequenced. The results were compared with other ADV VP2 gene sequences obtained from the GenBank. A strain of ADV, which could grow normally in CRFK cells ( named ADV-ZYL1) , was obtained. Amino acid sequence analysis indicates that the VP2 protein sequence of the ADV-ZYL1 strain has a highest homology of 96.1% with ADV-Utah-1, which is ahighly pathogenic strain in USA; while it has only a homology of 92.7% compared with ADV-Far East, indicating that the VP2 protein of ADV-ZYL1 presents a high mutation rate.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2012(040)009【总页数】4页(P97-100)【关键词】水貂阿留申病毒;VP2;分离;鉴定【作者】桑宇;张段玲;钱毓斌;张彦龙【作者单位】东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.2水貂阿留申病(Aleutian Ddisease,AD)是由阿留申病毒(Aleutian disease parvovirus,ADV)引起的水貂慢性传染性疾病,主要侵害水貂的免疫系统,以浆细胞弥漫性增生和持续性病毒血症为特征[1-2]。
水貂犬瘟热病毒F基因的克隆及序列分析和表达的开题报告
水貂犬瘟热病毒F基因的克隆及序列分析和表达的开题报
告
1. 研究背景和意义
水貂犬瘟热是一种由犬瘟病毒(CDV)引起的高度传染性疾病,主要影响犬科动物和水貂。
该病毒属于单链RNA病毒,其基因组长度约为15kb,由6个基因组成,包括核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、重复蛋白(M)、糖蛋白(G)、RNA依赖性RNA聚合酶(L)和F蛋白。
F蛋白是CDV的一个糖蛋白,具有重要的生物学功能。
它能够与宿主细胞膜上的受体结合,进而介导CDV病毒与宿主细胞之间的融合和入侵。
因此,对F基因的研究能够帮助我们更好地理解CDV的传播和致病机制,为病毒防治提供理论依据。
2. 研究内容和方法
本研究拟采用RT-PCR技术从CDV分离株中克隆F基因,并进行序列分析。
根据已知F基因序列,设计特异性引物,利用PCR扩增目的基因片段,然后将其插入表达载体中,利用细胞转染技术将表达载体导入哺乳动物细胞中,最终通过Western blot 技术检测表达情况。
3. 预期成果
本研究的主要预期成果包括:
1) 成功克隆CDV F基因,并对其进行序列分析;
2) 成功构建F基因的表达载体,并进行细胞转染;
3) 成功检测表达F蛋白的情况,验证表达载体在哺乳动物细胞中的表达能力。
4. 研究意义和价值
本研究将有助于深入了解CDV F蛋白的生物学功能,为CDV的病毒防治提供理论指导。
同时,也为其他相关领域的研究提供有价值的参考。
水貂IFN-α基因的克隆与原核表达
水貂IFN-α基因的克隆与原核表达
盖春云;张灿;单虎
【期刊名称】《中国兽医杂志》
【年(卷),期】2010(046)006
【摘要】从水貂基因组中通过PCR的方法克隆得到干扰素α基因(IFN-α),将IFN-β成熟肽插入原核表达载体pET32a,在E.coli BL21(DE3)工程菌中表达重组蛋白.结果表明IFN-β片段长564 bp,与已报道的水貂干扰素-α基因相比同源性98%.IFN-α成熟肽可编码166个氨基酸.重组质粒经ITPG诱导6 h后蛋白表达产物较高,表达量占菌体表达量的50%,分子量约为36 ku,与预期结果相符.
【总页数】3页(P15-17)
【作者】盖春云;张灿;单虎
【作者单位】青岛农业大学预防兽医学实验室,山东,青岛,266109;青岛农业大学预防兽医学实验室,山东,青岛,266109;青岛农业大学预防兽医学实验室,山东,青
岛,266109
【正文语种】中文
【中图分类】Q513+2
【相关文献】
1.水貂IFN-β基因的克隆与原核表达 [J], 盖春云;张灿;单虎
2.白羽鹌鹑IFN-γ基因克隆、序列分析及原核表达 [J], 刘梓欣;赵宏敬;王雨;陶金;邢明伟
3.水貂白细胞介素-4基因的克隆、序列分析与原核表达 [J], 范思宁;赵辉;廉士珍;闫喜军;张海玲;赵建军;王洋;胡博;吕爽;马凡舒;李欣彤;凌明玉
4.藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定 [J], 李原野;殷玥;陈瑛琪;张继宗;杨晓宇;王佳煜;朱玲;徐志文
5.犬瘟热病毒水貂分离株F基因的克隆及原核表达 [J], 袁小远;单虎;王志亮;李俊因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
水貂FSH-β基因序列的克隆与测序
水貂FSH-β基因序列的克隆与测序
李玉梅;白秀娟
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2007(34)9
【摘要】从水貂腿部肌肉中分离提取总DNA,经PCR扩增出水貂FSH-β基因DNA序列.PCR产物经凝胶回收纯化,连接到pMD-18T载体上,然后转化到感受态细胞JM109中.在含X-gal和IPTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆菌落,提取质粒作限制性酶切及PCR鉴定后,对目的片段进行测序.结果表明,PCR扩增出的DNA 片段碱基数为500 bp,通过Blast比对,分析了其与人、牛、猪、绵羊、鼠促卵泡激素核苷酸序列的同源性.
【总页数】3页(P61-63)
【作者】李玉梅;白秀娟
【作者单位】东北农业大学,哈尔滨,150030;东北农业大学,哈尔滨,150030
【正文语种】中文
【中图分类】Q785
【相关文献】
1.水貂α-干扰素基因的克隆、测序与遗传进化分析 [J], 张译元;常维山
2.山东地区水貂肠炎病毒VP2基因的克隆和测序分析 [J], 陈童;杨瑞梅;单虎
3.水貂黑素皮质素受体-4基因部分序列的克隆测序 [J], 刘宗岳;杨洪雁;白秀娟
4.水貂β-干扰素基因的克隆、测序与遗传进化分析 [J], 张译元;张廷红;常维山
5.水貂α-干扰素基因的克隆、测序和生物信息学分析 [J], 孙颖杰;王哲
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美洲水貂(Neovison vison)黑素皮质激素受体-1(MC1R)基因序列鉴定及生物信息学分析
美洲水貂(Neovison vison)黑素皮质激素受体-1(MC1R)基因序列鉴定及生物信息学分析宋兴超;徐超;岳志刚;王雷;丛波;刘琳玲;杨福合【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2015(046)005【摘要】旨在探明美洲水貂黑素皮质激素受体-1(Melanocortin-1 receptor,MC1R)基因序列结构特征及其对皮毛颜色的调控机制.根据欧洲水貂MC1R基因(GenBank登录号:AB189820)核苷酸序列设计1对特异性引物,利用PCR及克隆技术测定美洲短毛黑水貂MC1R基因完整编码区序列(CDS),并对该序列进行了BLAST比对及生物信息学预测和分析.结果表明,获得的美洲水貂MC1R 基因与欧洲水貂相似性为95%,为单一外显子基因,核苷酸序列长度为1 324 bp,包括部分5'UTR(188 bp)、CDS(954 bp)和3'UTR(182 bp),编码区碱基G+C含量高达66.04%,由CDS推导共编码317个氨基酸,预测的MC1R蛋白理论分子质量为34.49 ku,等电点(PI)为8.97,不稳定系数是36.63,属于弱碱性稳定蛋白质.进一步分析发现,美洲水貂MC1R基因编码的蛋白存在1个低复杂度结构域和7个典型的跨膜区,N-端不存在信号肽,定位于细胞质膜,具有典型的细胞膜受体结构.分子进化分析显示,美洲水貂与欧洲水貂亲缘关系较近,与二者均属鼬科、鼬属动物的传统动物分类学一致.美洲水貂MC1R基因的获取及序列结构特征分析为揭示其皮毛颜色多样性的分子遗传学机制奠定了详细的生物信息学基础.【总页数】8页(P752-759)【作者】宋兴超;徐超;岳志刚;王雷;丛波;刘琳玲;杨福合【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室,长春130112【正文语种】中文【中图分类】S865.22【相关文献】1.黑素皮质激素受体1(MC1R)基因系统发育树与犬的毛色 [J], 杨前勇;叶俊华;任军;谢爱芳;徐波2.黑素皮质激素受体1(MC1R)基因与猪的毛色 [J], 邓素华;黄路生;高军;任军;陈克飞3.4种犬科动物黑素皮质激素受体1基因序列比对及遗传进化分析 [J], 徐超;宋兴超;岳志刚;李光玉;赵蒙;赵伟刚;魏海军;赵家平4.橘色双冠丽鱼黑素皮质素受体1基因(MC1R)整胚原位杂交 [J], 潘贤辉;郑曙明;胡隐昌;宋红梅;周康奇;汪学杰;刘奕;牟希东;余梵冬;杨叶欣;刘超5.人恶性黑色素瘤A375细胞黑素刺激素受体(MC1R)的检测 [J], 李铁征;李泽鸿;李月红;邱业峰;张培因;王树君;朱平因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
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文章编号:1001-4721(2014)01-0001-04收稿日期:2013-11-12基金项目:公益性行业(农业)科研专项经费(200903014);吉林市科技支撑计划(201162513)作者简介:荣敏(1980-),女,河北省景县人,博士,助理研究员,从事水貂分子遗传学研究。
▲通讯作者:杨福合,E -mail :yangfh @ .水貂生长激素受体cDNA 克隆与序列分析荣敏,王雷,吴琼,李一清,徐佳萍,邢秀梅,杨福合▲(中国农业科学院特产研究所吉林省省部共建特种经济动物分子生物学国家重点实验室,长春130112)摘要:根据已报道的物种GHR 基因cDNA 序列设计引物,利用RT -PCR 技术从水貂肝脏组织总RNA 中扩增出GHR 基因的cDNA 序列,并进行序列分析。
结果表明,RT -PCR 扩增出的cDNA 片段为826bp ,利用邻接法构建了分子系统进化树。
关键词:水貂;生长激素受体;反转录聚合酶链式反应;序列分析中图分类号: 文献标识码:AcDNA Cloning and Sequence Analysis of Growth Hormone Receptor from MinkR ONG Min ,WANG Lei ,WU Qiong ,LI Yi -qing ,XU Jia -ping ,XING Xiu -mei ,YANG Fu -he ▲(State Key Laborator y of Special Economic Animal Molecular Biology ,Institute of Special Wild Economic Animals and Plants ,Chinese Academy of Agricultural Sciences ,Changchun 130112,China )A bstract :The gene encoding Mink growth hormone receptor (GHR )was amplified by RT -PCR from the liver total RNA .The PCR product was sequenced and analyzed subsequentl y .The results indicated that length of mGHR cDNA fragment was 826bp in length ,the molecular phyloge -netic tree was constructed by the NJ method based on GHR gene sequences .Key words :Mink ;growth hormone receptor ;RT -PCR ;sequence anal y s is 水貂是一种小型珍贵毛皮动物,貂皮是高档裘皮原料,自古就有“裘皮之王”的美称。
对于水貂养殖业来说,皮张等级是直接影响经济效益的重要因素,而皮张大小是衡量皮张等级的重要指标。
提高水貂皮张张幅的因素主要有增大体型、增加营养等,所以研究调控水貂生长发育的生长轴基因有非常重要的意义。
生长轴是指动物体内从下丘脑—垂体—靶器官的由一系列激素及其受体所组成的神经内分泌系统。
生长激素(GH )在动物生长轴中起着十分重要的作用,但是GH 作为生物大分子,必须和靶细胞膜表面受体(GHR )相结合才能发挥作用[1]。
GHR 基因最早是由Tsushima T 等[2,3]1976年在兔肝细胞膜上发现的,Waters MJ 等[4]1979年提纯了兔的GHR 。
目前已经成功克隆出了人、兔、大鼠、小鼠、猪、牛、羊等多种动物GHR 基因[5~7]。
人的GHR基因位于第5号染色体上,基因全长8.7kb [8],有10个外显子,共编码638个氨基酸,外显子2编码18个氨基酸的信号肽,外显子3~7编码246个氨基酸的胞外结构域,外显子8编码24个氨基酸的跨膜部分,外显子9~10编码350个氨基酸的胞外结构域[7]。
成熟的人GHR 是一个含有629个氨基酸残基的糖基化位点。
猪的GHR 基因c DNA 也编码638个氨基酸,长1952bp[9]。
研究证明,哺乳动物的GHR 基因cDNA 同源性较高[10],目前,只有北美水特产研究Special Wild Economic Animal and Plant Research 1貂GHR基因的622bp部分序列报道。
本研究以哺乳动物GHR基因cDNA序列为基础,克隆出水貂GHR基因的cDNA序列,为研究水貂GHR基因的全序列、功能及水貂生长发育的调控机理打下基础。
1 材料与方法1.1 水貂肝脏采自中国农业科学院特产研究所野生生物资源野外观测试验站打皮期美国短毛黑水貂的肝脏。
1.2 试剂R NA提取试剂盒、反转录试剂盒、Ex Taq酶、胶回收试剂盒、pMD19-T载体及DH5α感受态细胞(Takara公司)。
1.3 水貂肝脏RN A提取按照RNA提取试剂盒说明书进行操作,提取完后放入-80℃超低温冰箱储存备用。
1.4 PCR扩增根据GenBank中人、大鼠、牛、小鼠、羊、猪的GHR基因cDNA序列,用ME GA4.1进行序列比对找到同源保守序列,结合Primer premier5.0进行引物设计,选择简并度最低且分值较高的引物进行扩增。
上游引物:5′ACAGTGATGACTCTTGGGTTG3′下游引物:5′GCATGATTTTGTTCAGTTGGT3′。
cDNA链的合成:按照反转录试剂盒进行。
PCR反应体系:E x Taq0.25μL,10×Ex Taq buffer 5μL,MgCl24μL,dNTP Mixture4μL,cDNA1μL,上、下游引物各1μL,ddH2O33.75μL。
PCR反应条件:94℃5min;94℃30s,58℃30s,72℃70s,30个循环;72℃5min。
取5μL产物进行电泳并紫外成像。
1.5 PCR产物的纯化将PCR产物进行1.5%凝胶电泳,并切胶回收(按照试剂盒操作进行)。
1.6 目的片段的测序鉴定将PCR纯化产物送往上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。
1.7 目的片段生物信息学分析在GenBank中进行blastn同源比对。
利用ME GA4.1软件进行进化树分析。
2 结果与分析2.1 水貂RN A提取水貂肝脏R NA提取后经紫外分光光度计测定, OD260/280在1.8~2.0之间,经1%琼脂糖凝胶电泳检测可清晰看到18S、28S2条核糖体R NA条带,说明提取的RNA未出现明显降解。
结果如图1。
图1 水貂肝脏总RNA1%琼脂糖凝胶电泳分析Fig.1 1%agarose gel electrophoresis analysis of Liver total RN A from mink2.2 PCR扩增结果2.2.1 cDNA链的合成 按照反转录试剂盒2步法合成cDNA,在1%琼脂糖凝胶电泳中检测,条带呈弥散状。
结果如图2所示。
M.DL2000;1.cDNA图2 第2链cDNA琼脂糖凝胶电泳Fig.2 Gel electrophoresis of second strand cDN A2.2.2 目的基因的扩增 用设计的特异引物进行2 特产研究2014年第1期扩增,结果如图3所示,扩增条带为900bp 左右,与设计的902bp 接近,说明是目的片段。
M .DL 2000;1、2、3.P CR 产物 M .DL2000;1,2,3.P CRproducts图3 PCR 扩增结果Fig .3 The PCR amplify results of aim gene2.3 水貂GHR 基因序列的生物信息学分析PCR 纯化产物测序后,对序列进行检查并去除两端的不准确序列,获得826bp 的水貂GHR mRNA 序列,如图4。
将序列提交到Http :∥blast .nc bi .nlm .nih .gov /网址进行序列比对,结果该序列与Genbank 中雪貂(XM 004811437)的GHR mR NA 预测序列同源性达98%;与獾(JN414715.1)的同源性也高达98%;与浣熊(JN414718.1)、小熊猫(JN414710.1)、新西兰海狗(JN414716.1)、海象(D Q240686.1)的同源性达94%;与港海豹(JN414717.1)、黑熊(DQ240683.1)、细尾獴(JN414712.1)同源性达93%;与大熊猫(AF395535.1)、家猫(E U448991.1)、狼(NM 001003123.1)、北极狐(E U304325.1)同源性达92%;与野猪(KC999114.1)同源性达89%;与山羊(D Q179245.1)同源性达87%;与梅花鹿(EU381142.1)、水牛(KC415270.1)、绵羊(NM 001009323.2)、牛(JQ711177.1)同源性达86%。
图4 水貂GHR 基因的核苷酸序列Fig .4 The sequence of GHR gene in m ink 经分析,本研究获得的826bp 水貂GHR 基因部分编码序列A 、T 、G 、C 的平均含量分别为:26.51%、21.79%、23.24%、28.45%,A +T (48.31%)<G +C(51.69%)。
通过与北极狐、大鼠、大熊猫、梅花鹿、牛、人、小鼠、羊、猪等其他哺乳动物的进化树分析(如图5所示),水貂与熊猫归为一支。
图5 水貂GHR 基因与其他哺乳动物同源基因序列系统进化树Fig .5 The phylogenetic tree of the nucleotide sequences of mink GHR and other mam mals第1期荣敏,等:水貂生长激素受体cDNA 克隆与序列分析33 讨论生长轴的作用机制是:下丘脑分泌的生长激素释放激素以及生长抑素双重作用于垂体,调节垂体分泌生长激素,分泌的生长激素经血液循环到达肝脏,与肝脏细胞膜表面的生长激素受体结合,启动细胞内的信号转导机制,促进胰岛素样生长因子(I GFs)的表达,I GFs通过与靶组织中的类胰岛素生长因子(IGF)受体结合发挥生物学效应,而此效应受与类胰岛素生长因子受体(IGFR)竞争结合I GFs的I GF结合蛋白的调节。
血液中高浓度的IGFs还可以负反馈作用于下丘脑和垂体,从而调节生长激素的释放。
在这些生长因子中,GH-IGF-I作为生长轴的中心环节,在动物的生长调控中起着重要作用[11~14]。
生长激素受体在动物生长发育过程中起着重要作用,它的突变将引起严重的生长障碍。