蛋白纯化层析技术与工艺放大共84页
第三章 蛋白质的分离纯化-层析技术
第五节层析技术简介蛋白质分离纯化中的层析技术是基本工具⏹层析（chromatography）是最有效的分离手段，也是最重要的蛋白质纯化工具。
层析主要是物理方法，是混合熵减少的过程，必然消耗自由能。
⏹基因工程下游的核心是层析。
⏹层析技术的理论与实践已高度发展和完善。
层析的概念在把微细分散的固体或是附着于固体表面的液体作为固定相，把液体（与上述液体不相混合的）或气体作为移动相的系统中，使样品中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边移动，利用各成分对固定相亲和力不同所引起的移动速度差，将它们彼此分离开的定性与定量分析方法，称为层析，亦称色谱法。
根据移动相种类的不同，分为液体层析、气体层析二种。
层析的类型◆分配层析：固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。
◆吸附层系：利用被分离组分对固定相表面吸附中心吸附的能力的差别即吸附系数的差别而实现分离。
如亲和、疏水、金属螯合、离子交换等相关杂质◆目标产物相关杂质：聚集体（抗体）、片段◆过程相关杂质和污染物：宿主细胞蛋白：免疫测定宿主细胞DNA：DNA杂交、QPCR、DNA结合预知分析、荧光测定-picogneen细胞培养基蛋白质：病毒：QPCR、电子显微镜、体内体外分析（逆转录酶）微生物：生菌数实验、内毒素实验◆其他种类杂质或污染物：层析柱、容器的沥出物；可抽提物；细胞培养基组分；纯化中使用的试剂；蛋白质层析介质基体须具备的特性◆生物兼容性：亲水性，大孔径不会使生物大分子失活，没有生物化学毒性--过强吸附，泄漏.◆化学稳定性：在生物大分子存在的化学条件下是稳定的。
pH,络合物,氧化还原性,巯基化合物……◆必要的机械性能: 流体中的耐压性，弹性化学组成: 亲水多孔高聚物等◆天然高分子多糖:纤维素、交联葡聚糖、琼脂糖及其共聚物----孔径分布宽、较软◆合成高聚物:聚丙烯酰胺类、聚丙烯酸脂类、聚乙二醇聚、丙烯酸脂共聚物、亲水性处理的聚苯乙烯类（都是交联大孔高聚物）◆无机化合物: 硅胶、羟基磷灰石、氧化锆聚合物基体(matrix)孔的结构◆多孔结构：内表面占整个表面积的95% 以上◆孔径分布: 分配层析要求分布宽、均匀，相应于低交联度◆高交联度导致孔径分布偏向高，介质本身微观不均匀性变大，适合大孔径高硬度吸附层析孔的结构可分为三种类型标志产品:◆SepharoseHP,ToyopearlSepharoseHP,Toyopearl;MacroPrep,UNOSphere,FractogelEMD,SourceMacroPrep,Source ◆UNOQUNOQ，POROSBeads 结构：典型层析介质的放大观察Confocal Microscopy ImagesMonolith 结构示意图方案的特点◆捕获（Capture）：离子交换、疏水、金属螯合、亲和、分配层析◆中间纯化：离子交换、疏水、金属螯合、亲和、分配层析◆精制：离子交换、疏水、金属螯合、亲和、分配层析◆样品中的污染物：核酸、胆固醇、甘油三脂、磷脂、脂肪酸、小分子络合物、金属离子◆层析步骤间的过渡方式：如离子交换接疏水动物组织中蛋白质的例子◆组织匀浆1:4（w/v）◆匀浆后蛋白浓度：5mg/ml （如植物要低）◆目标蛋白浓度：0.001mg/mlE.Coli表达例子◆E.Coli表达蛋白：10菌体/1培养基◆抽提蛋白中目标蛋白为10%◆1:4（w/v）抽提蛋白为30mg/ml◆产量为150mg/ml◆目标蛋白浓度：3mg/ml细胞培养上清的例子◆蛋白质浓度（含血清培养基）：4mg/ml ◆IgG总浓度：0.8mg/ml◆目标IgG浓度：0.03mg/ml电泳分析的样品制备原则◆电泳检测贯穿整个纯化过程◆上样缓冲液对蛋白质的溶解性要高于抽提液，否则拖尾。
蛋白纯化层析技术与工艺放大[高级课件]
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过滤技术的分类
按照过滤操作方式分： 死端过滤( Normal Flow Filtration ,
NFF )
切向流过滤( Cross -flow Filtration, CFF)
精制课件
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切向流过滤
切向流过滤又称错流过滤，过滤过程中 平行于膜的切向流不断清洗冲刷膜表面， 有效的缓解膜表面滤饼层和浓差极化层 的形成，避免过滤阻力的快速增加，有 利于保持稳定的过滤流速和压力，从而 实现更高的膜过滤处理量，延长滤膜寿 命
（1）样品、试剂：样品来源（原核或真核、 胞内或胞外等），目标蛋白的性质（等电点、
分子量、稳定性等），缓冲液（pH、溶质类 型、盐离子浓度等）
（2）介质的选择（离子、疏水、亲和填料， 介质的化学耐受性、强度，载量，不同批次 介质的稳定性）
（3）质量合格，符合GMP要求，生产成本，
（4）微滤膜用于蛋白澄清去除细胞碎片具有更好的 目标蛋白收率：例如中空纤维0.1µm滤膜用于较难 过滤的大肠杆菌裂解液澄清，保护层析柱。
精制课件
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过滤操作方式选择
过滤常见的操作方式包括NFF死端过滤和CFF切 向流过滤
精制课件
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精制课件
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切向流过滤技术的选择
中空纤维柱和平板膜包的优缺点：
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精制课件
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菌种的特性，相关论文、专利，药典，试剂等
亲和层析、离子层析、疏水层析、分子筛、超滤， 层析介质粒径大小，纯化步骤等
精制课件
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精制课件
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精制课件
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精制课件
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载体构建优化、发酵工艺优化、纯化工艺优化、检测方法选择等
发酵工艺是否能够放大、纯化工艺是否能放大等，工艺稳定性
蛋白质化学中的层析技术PPT课件
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蛋白质化学中的层析技术PPT 课件
目
CONTENCT
录
• 层析技术简介 • 层析技术在蛋白质分离纯化中的应
用 • 层析技术原理 • 层析技术的应用实例 • 层析技术的优缺点及展望
01
层析技术简介
层析技术的定义
层析技术
是一种分离和纯化混合物中各组分的方法，基于各 组分在固定相和流动相之间的分配差异进行分离。
05
层析技术的优缺点及展望
层析技术的优点
分离效果好
层析技术能够根据分子间的吸附、分配等作用力 的差异，将混合物中的组分进行有效的分离，得 到高纯度的产物。
适用范围广
层析技术可以应用于不同性质的混合物分离，如 有机物、无机物、离子、蛋白质等，具有广泛的 适用范围。
分离过程可重复
层析技术是一种物理分离方法，不涉及化学反应 ，因此分离过程可以重复进行，适用于大规模分 离和制备。
凝胶过滤层析原理
原理概述
凝胶过滤层析是一种基于分子 大小差异的分离技术。通过不 同孔径的凝胶介质，不同大小 的分子会以不同的速度通过凝 胶，从而实现分离。
应用范围
凝胶过滤层析常用于蛋白质、 多糖等大分子物质的分离和纯 化。
技术特点
操作简便、分离效果好、分辨 率高。
离子交换层析原理
01 02
原理概述
1950年代
随着凝胶技术的发展，凝胶层 析、电泳等新型层析技术逐渐 兴起。
1970年代至今
层析技术不断改进和创新，应 用范围越来越广泛，成为生物 化学领域中重要的分离分析方 法。
层析技术的分类
根据固定相和流动相的物理状态
可分为液相层析和气相层析。液相层析又可分为液-固层析和液液层析，是生物分子分离纯化中最常用的技术。
层析分离纯化技术策略共58页PPT资料
8
pH 的重要性: 蛋白质净电荷随 pH 改变
滴定曲线
3
+
pH
10
稳定性范围
不同 pH 下的分离情况
1
蛋白质净电荷
用阳离子交换
用阴离子交换
2
-
1
2
9
pH 的重要性: 蛋白质净电荷随 pH 改变
流动相的 pH 选择性
Abs
Abs
Abs
Abs
V
V
V
V
+ 阳离子
表面净电荷
0
pH
阴离子
-
Abs
Abs
Abs
3
沉淀蛋白质的方法
(1) 盐析法 (2) 有机溶剂沉淀法 (3) 重金属盐沉淀法 (4) 加热变性沉淀法
4
蛋白质纯化策略
融合蛋白质
简单纯化
一步 亲和层析 90 - 97 % 纯度
更高纯度
多步纯化
表达
非融合蛋白质
5
粗提 中度纯化 精细纯化
三步纯化策略
高效纯化策略
分辩率 精细纯化
纯化
分解目标分子
17
预防措施
膜过滤、离心、匀 浆
离心、如可跟目标 分子兼容，可用有
机溶剂
添加硫酸链霉素、 硫酸精蛋白或锰盐 沉淀核酸、添加核
酸酶
添加蛋白酶抑制剂 、用亲和层析去除 蛋白酶、缩短粗分 时间、低温操作
粗提
目的
纯化粗样 快速浓缩 (减少体积) 和稳定样品 (去除蛋白
酶) 最适用层析技术: 离子交换 / 疏水层析
Step
12
三步纯化策略
层析填料的 颗粒大小
精细纯化 中度纯化
蛋白纯化技术简介
在固定相和流动相之间经过多次分配以不同的速率移
动，从而达到分离的目的。
蛋白质层析技术
Company Logo
蛋白质层析技术
Company Logo
❖ 层析技术基本原理
1. 吸附层析
混合物随流动相通过固定相（吸附剂）时，由于固定相 对不同物质的吸附力不同而使混合物得到分离。
蛋白质纯化技术蛋白质纯化技术companylogo切向流过滤蛋白质纯化技术companylogo切向流工艺优化参数切向流流量跨膜压tmp透出液控制膜面积透析条件蛋白质纯化技术companylogocompanylogo具有透过液控制的切向流过滤系统示意图蛋白质纯化技术companylogo蛋白质纯化技术盐析等电点沉淀透析凝胶过滤层析离子交换层析亲和层析高压液相层析密度梯度离心companylogo蛋白质纯化技术companylogocompanylogo蛋白质纯化技术盐析等电点沉淀透析凝胶过滤层析离子交换层析亲和层析密度梯度离心companylogo层析技术层析分离又称色谱分离chromatographicresolutioncr或色层分离
亲水性聚合物--- 纤维素(Cellulose) 球状纤维素(Sephacel) 葡聚糖 (Sephadex)琼脂糖(Sepharose)
蛋白质层析技术 ❖ 根据目的蛋白的pI选择合适的缓冲液pH
▪ pH=pI时，蛋白质表面电荷为零；
▪ pH<pI时，蛋白质带正电荷；
▪ pH>pI时，蛋白质带负电荷。
强度相对较低
高效凝胶介质：颗粒尺寸小（一般为5~50 μm），机械强度相
对较高，柱效明显提高，适合于高分辨率或更快的分离。
蛋白质层析技术
❖ 琼脂糖凝胶 由β-D-半乳糖和3,6-脱水
蛋白纯化技术简介课件
蛋白纯化技术简介课件CATALOGUE目录•蛋白纯化技术概述•蛋白纯化技术方法•蛋白纯化步骤与流程•蛋白纯化技术挑战与解决方案•蛋白纯化技术展望与发展趋势•蛋白纯化技术案例分析CATALOGUE蛋白纯化技术概述蛋白纯化目的蛋白纯化的定义与目的各种方法基于不同的物理或化学原理，如电荷分布、分子大小、特异性结合等，实现对蛋白质的分离与纯化。
蛋白纯化技术的分类与原理原理分类蛋白纯化技术的应用领域01020304生物化学研究临床诊断制药工业食品工业CATALOGUE蛋白纯化技术方法应用盐析法在蛋白纯化中应用广泛，适用于大多数蛋白质的纯化。
原理盐析法主要是利用蛋白质在低盐浓度时溶解度降低，高盐浓度时溶解度升高的特性，通过在中间盐浓度时加热或静置，使溶解度降低的蛋白质析出。
优缺点盐析法操作简单，成本低，但有时会造成蛋白质的变性，影响其生物活性。
盐析法原理凝胶色谱法主要用于蛋白质分子量的分离和纯化。
应用优缺点原理应用优缺点030201原理应用优缺点电泳法原理应用优缺点膜分离法CATALOGUE蛋白纯化步骤与流程初步分离缓冲液置换细胞破碎粗分离阶段03疏水相互作用色谱01亲和色谱02离子交换色谱精细分离阶段质谱分析HPLC分析SDS-PAGE电泳纯度检测与鉴定阶段CATALOGUE蛋白纯化技术挑战与解决方案1 2 3亲和色谱法离子交换色谱法凝胶过滤色谱法杂蛋白的去除选择合适的纯化方法根据蛋白的性质和纯化要求，选择适合的纯化方法，以尽可能提高目标蛋白的回收率。
优化实验条件对实验条件进行优化，如pH值、温度、离子强度等，以提高目标蛋白的回收率。
多次纯化将纯化过程分为多个步骤，每个步骤针对不同的杂质进行去除，从而提高目标蛋白的回收率。
目标蛋白的回收率添加保护剂避免剧烈操作低温操作蛋白的稳定性与活性保持CATALOGUE蛋白纯化技术展望与发展趋势纳米材料新型介质新材料与技术的发展集成化自动化集成化与自动化技术进步生物药物研发蛋白纯化技术在生物药物研发中具有重要作用。
蛋白纯化层析技术和工艺放大
过滤操作方式选择
过滤常见的操作方式包括NFF死端过滤和CFF切 向流过滤
切向流过滤技术的选择
中空纤维柱和平板膜包的优缺点：
切向流过滤技术的选择
中空纤维滤膜具有开放式流道(Open Channel ) ，剪切力低且容尘量高，适合病 毒和蛋白等生物大分子低剪切力的温和超滤 浓缩、可直接处理高固含量高黏度的复杂料 液，如细胞菌体收集、裂解液澄清和硫酸铵 沉淀收集等应用。 平板膜包的筛网流道结构( Screen Channel ) ，适合无固体颗粒的低黏度低浓 度样品的浓缩，如层析柱之间的缓冲液交换 和浓缩等。
蛋白质层析技术和工 艺放大
曹杰
2013.05.11
一、离子交换层析技术 二、亲和层析技术 三、切向流过滤技术 四、工艺放大
一、
阴离子交换
阳离子交换
分辨率: 1 选择性: 填料的性质及所带功能基团的数目、 pH值、离子强度、洗脱条件 2 柱效： 填料颗粒大小、层析柱装填效果 3 样品： 能应用的样品量即样品各成分性质
二、
亲和层析原理
亲和层析的策略
配基与目标蛋白的特异性
尽可能简单 设计洗脱方案
抗体纯化
——基于G蛋白/A蛋白的IgG的纯化
1. LMW Markers
2. Mouse cell culture, nonredued,diluted 1:10
3. PoolⅠ,unbound material,nonredued,diluted
了解相关法律、法规、验证计划、QA和QC等
如何保证质量？确定分析方法、检测方法、如何保证工 艺稳定性。
工艺放大（以蛋白纯化为例）
要考虑的问题：
蛋白纯化层析技术和工艺放大
原理
离子交换层析基于蛋白质带电性质差 异分离蛋白质。在一定pH值下，蛋白 质带电性质不同，与离子交换剂上的 离子发生交换，从而实现分离。
应用
离子交换层析常用于分离和纯化特定 类型的蛋白质，如酶、激素和抗体等。
疏水层析
原理
疏水层析基于蛋白质疏水性差异分离蛋白质。蛋白质与疏水配体结合后，通过改变流动相的pH值或离子强度， 使蛋白质与配体间的疏水相互作用减弱而分离。
原理
层析技术基于不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡差异，从而实现分离。 目标蛋白与固定相的相互作用力较强，随着流动相的流动，逐渐从固定相中解 离并被收集。
常用蛋白纯化层析技术
凝胶过滤层析
利用不同大小的蛋白质分子在凝胶上 的扩散速度不同实现分离。常用凝胶 有Sepharose、Sephacryl等。
蛋白纯化层析技术的应用场景
生物药物研发
用于分离和纯化抗体、酶、蛋白质等生物药 物，提高药物的纯度和质量。
蛋白质组学研究
用于鉴定和分离蛋白质，促进蛋白质结构和 功能的研究。
细胞培养与分离
用于分离和纯化细胞中的蛋白质、细胞器等， 研究细胞内各组分的相互作用。
食品安全与质量控制
用于检测和纯化食品中的蛋白质，确保食品 的安全和质量。
标准化操作程序
制定标准化的操作程序，确保每批次 分离效果的稳定性和一致性。
流速与压力控制
采用先进的流速和压力控制系统，确 保分离过程中的稳定性和层析柱寿命。
放大效应评估
在小规模试验阶段对放大效应进行评 估，以便预测和解决大规模生产中可 能出现的问题。
05
未来展望与研究方向
新技术与新方法的发展
01
03
工艺放大技术
实验层析技术血清球蛋白的分离纯化与鉴定正式版ppt
G-75 G-100
40～120 40～120
12～15 15～20
3×103 ～ 8×104 4和个性
共性： *生命高分子：透析、超滤、超离心、凝胶层析 *蛋白质溶液是亲水胶体：稳定因素为水化膜和电荷→盐析/
有机溶剂沉淀 *两性电解质和等电点：pH> pI，蛋白质带负电；反之带正 电→电泳、离子交换层析 *有一定的功能：抗原性→ 免疫沉淀
交联葡聚糖凝胶层析介质的有关技术参数
凝胶型号 颗粒大小（μm) 溶胀体积(ml/g) 分离范围（Mr）
G-10 G-15 G-25 G-50
40～120 50～150 50～150 40～120
2～3 2.5～3.5 4～6 9～11
＜7×102 ＜1.5×103 1×103 ～5×103 1.5×103 ～ 3×104
*洗脱液：溶解待分离物质，不变性
阳离子交换剂 带负电荷，与混合物中带正电的组分结合 阳离子交换层析
交联葡聚糖凝胶
➢多聚葡萄糖与环氧丙烷交联而成，网状结构珠状颗 粒，商品名为Sephadex G系列 ➢G—交联度：G后面的阿拉伯数字表示不同的规格型 号，有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100， G-150，和G-200八种，具体含义为凝胶得水值的10 倍或吸水量（g）/10g干胶 ➢交联度与孔径大小成反比：交联度越大，孔径越小， 吸水性小；交联度越小，孔径越大，吸水性大。因此， “G”反映凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
异—吸附力、分子形状、大小、酸碱性或分子 ③浓缩：sephadex G-25吸水，利用高分子性质。
01M磷酸盐缓冲液（0. 分离依据：蛋白质理化性质的和个性
极性、分子亲和力以及分配系数。 蛋白质为两性电解质，有一定的等电点，在大于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动，由于各种蛋白质的分子大小与结构
蛋白质层析技术
蛋白质互作分析
利用蛋白质层析技术分析蛋白质之间的相互作用，揭示生命活动 的分子机制。
蛋白质复合物分离
通过蛋白质层析技术分离蛋白质复合物，研究其结构和功能，有 助于深入了解细胞内复杂的生物过程。
药物靶点筛选
在药物研发过程中，蛋白质层析技术用于筛选药物作用的靶点， 为新药研发提供有力支持。
THANKS FOR WATCHING
荧光法需要使用荧光标记物，操作相 对复杂，成本较高。
免疫学检测法
免疫学检测法利用抗原-抗体反应的特异性，通过抗体对目标蛋 白质进行识别和检测。常用的免疫学检测法包括酶联免疫吸附 试验（ELISA）、免疫印迹和免疫沉淀等。
免疫学检测法具有高灵敏度、高特异性的优点，适用于蛋白 质的定性分析和定量分析。但该方法需要制备特异性抗体， 操作相对复杂，成本较高。
蛋白质层析技术的分类
根据固定相的不同
可分为凝胶电泳、滤纸电泳、薄层电 泳等。
根据分离机制
可分为等电点沉淀法、离子交换法、 亲和层析法等。
蛋白质层析技术的应用
01
蛋白质组学研究
用于分离和纯化蛋白质，为蛋白质 组学研究提供基础。
临床诊断
用于检测和分离疾病相关蛋白质， 辅助疾病诊断和治疗。
03
02
生物药物研发
疾病标志物检测
肿瘤标志物检测
蛋白质层析技术用于检测肿瘤标志物，辅助肿瘤的诊断和预后评 估。
感染性疾病标志物检测
通过蛋白质层析技术检测感染性疾病标志物，有助于快速诊断和指 导治疗。
代谢性疾病标志物检测
蛋白质层析技术在代谢性疾病标志物检测中也有广泛应用，如糖尿 病、肥胖症等疾病的标志物检测。
蛋白质相互作用研究
缺点
蛋白质分离纯化及实验技术
第一节 能用作纯化依据的蛋白质性质
1 大小 2 形状
8 密度 9 配体结合能力
3 电荷
10 金属结合能力
4 等电点
11 可逆性缔合
5 电荷分布 12 特异性序列或结构
6 疏水性 7 溶解度
13 非寻常性质 14 基因工程构建的纯化标记
蛋白质分离纯化及实验技术
1. 大小 蛋白质的大小各不相同，可从含几个氨基酸 的小肽（几百个Da）至含10 000多个氨基酸 （上百万个Da）的巨大蛋白质不等。多数蛋 白质的分子量在10 000—150 000Da之间。
蛋白质分离纯化及实验技术
15. 基因工程构建的纯化标记 随着基因工程技术的进步，克隆编码某一蛋 白质的cDNA已变得比较容易。通过改变cDNA 而在被表达蛋白质的氨基端或羧基端加入少 许几个额外氨基酸，这个加入的“标记”可 用来作为一种有些的纯化依据。 最通行的标记之一是在蛋白质的氨基端加上 6—10个组氨酸，这样可以使肽链能与Ni2+螯 合柱紧密结合，经洗脱，再用游离咪唑洗脱 或通过将pH降至5.9，使组氨酸充分质子化， 与Ni2+分离而使蛋白质得以纯化。
8. 密度 多数蛋白质的密度在1.3—1.4g/cm3之间。分级 分离蛋白质时一般不用这个性质。但是，在含 有大量磷酸盐（如卵黄高磷蛋白，密度为1.8） 或脂质部分（如脂蛋白，密度为1.03）的蛋白 质，与一般蛋白质在密度上确有不同，可用密 度梯度法将它们从大部分蛋白质中分离出来。
蛋白质分离纯化及实验技术
蛋白质分离纯化及实验技术
（一）前处理
1、选材 2、破碎 3、混合物的分离
蛋白质分离纯化及实验技术
（二）粗分级分离
（1）盐析 （2）等电点沉淀 （3）有机溶剂分级分离 （4）超滤 （5）凝胶过滤 （6)冷冻干燥
蛋白纯化亲和层析分离技术
蛋白纯化亲和层析分离技术每一种新思想形成的背后都在积极面对“死胡同”时失落；每一种新方法的产生也在处处留心每跨一步留下的脚印；就像不积跬步无以至千里，不积小流无以成江海，一点一点的走心劳动，时间会在某个点积累汇聚，来到你想要的时刻。
这篇文章的主角是蛋白纯化亲和层析技术，在此概述了蛋白纯化亲和吸附层析的原理、应用等，该技术同样经过多年的慢慢演变过程，中间经历了前人的经验和智慧，才发展形成现在的一种新技术，1910年时，淀粉吸附淀粉水解酶；1951年，免疫吸附剂能够分离抗体；1967年，胰蛋白酶的不容酶提纯胰蛋白酶抑制剂。
所以，给予你的实验，包括时间、经历、探索、思维、心态，慢慢磨练，等待想要的实验结果。
——致终在实验台边奋斗的你一滴小水滴，也在映射着大海的样子后来隔了很久很久，故事的结局：正如你看到蛋白质亲和层析技术适应于理化性质差异性较小而难分离的蛋白质，亲和层析利用固相介质中的配基与混合生物分子之间亲和能力不同而进行分离，当蛋白混合液通过层析柱时，与配基能够特异性结合的蛋白质就会被吸附固定在层析柱中，其他的蛋白质对配体不具有特异性的结合能力，将通过柱子洗脱下来，这种结合在一定条件下是可逆的，选用适当的洗脱液，改变缓冲液的离子强度和pH 值或者选择更强的配体结合溶液将结合的蛋白质洗脱下来，而无亲和力的蛋白质最先流出层析住。
它通常只需要一步操作便能将目的蛋白从混合物中分离出来，并且纯度很高。
蛋白纯化亲和层析的固相载体具有稳定的理化学性质，是一种含有较多化学反应基团的羟基多糖类介质，具有机械强度高，透性好，不溶于水，非特异性吸附少，多孔网状结构的特点。
常用的载体有琼脂糖凝胶，其他的载体如葡聚糖凝胶，多孔硅胶，树脂，纤维素等，固相载体首先与特定的配体共价偶联形成具有化学活性的基团，即载体的活化，常见的有溴化氰活化载体，即将含有氨基偶联到载体的多糖基上，以及环氧氯丙烷在碱性条件下活化载体，其他的载体的活化剂还有戊二醛等。