作业22动物细胞培养
动物细胞培养(“细胞”相关文档)共10张
传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（DAPI染色）
正常细胞
凋亡细胞
分裂中期细胞
• 汇合后挑取少许细胞，染色，观察拍照。
倒置显微镜下观察拍照。 原代培养的绍鸭成纤维细胞，相差显微镜照片 5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液，保持湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。 02 %EDTA ）消化2-3分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。 单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。 细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 加适量营养液吹打分散，补加营养液后，1：2分装培养。 02 %EDTA ）消化2-3分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天后更换培养液。 倒置显微镜下观察拍照。 原代培养 ：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养。 双蒸水、Hank’s液、0. 单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。 实验九 动物细胞培养 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。 酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加Hank’s 液，剪碎为0.
湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。 • 3. 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天后更换培养
液。 • 4 .倒置显微镜下观察拍照。
• 5.单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。
五、传代培养
• 当培养细胞接近汇合成片时，倾去培养液。
1万单位/ml青、链霉素）。 • 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
动物细胞培养
动物细胞培养简介动物细胞培养是一种在体外控制环境下培养和繁殖动物细胞的技术，广泛应用于生物医学研究、药物筛选、疾病治疗等领域。
动物细胞培养是通过提供适当的养分和生长条件，使细胞可以在无体内环境的情况下生长和繁殖。
培养基选择动物细胞培养的首要任务是提供合适的培养基，以满足细胞的生长和繁殖需求。
培养基通常由基础培养液和补充物组成。
基础培养液提供细胞生长所需的基本营养物质，如糖、氨基酸、维生素等。
补充物则包括生长因子、激素、抗生素等，以促进细胞生长和抑制细菌的污染。
常用的培养基有DMEM（Dulbecco最小培养基）、RPMI （Roswell Park红斯威尔纸培养基）、MEM（最小必需培养基）等。
选择适合特定细胞类型和研究目的的培养基对细胞的生长和研究结果至关重要。
细胞分离和传代在动物细胞培养过程中，细胞通常需要经过分离和传代的步骤，以保持细胞的健康状态并扩散细胞数量。
细胞分离细胞分离是将细胞从组织中分离出来的过程。
常用的细胞分离方法包括胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法、机械剪切法等。
分离得到的细胞可以直接用于培养，也可以进行进一步的传代。
细胞传代细胞传代是将已培养细胞进行分离并移植到新的培养皿中的过程，以维持细胞的持续生长。
传代可以通过机械分离、胶原酶等酶处理或稀释离心等方法进行。
传代过程中需要注意的是细胞的密度和周期，以避免细胞过度生长或死亡。
培养条件在动物细胞培养过程中，提供适当的培养条件对细胞的生长和繁殖至关重要。
温度和湿度动物细胞通常在37℃下生长，因此培养箱和孵育器需要保持恒定的温度。
同时，湿度的控制也是必要的，以避免细胞脱水。
CO2和pH值大多数动物细胞需要CO2的存在来维持酸碱平衡。
因此，在培养过程中，需要添加适量的CO2到培养箱中，以维持合适的pH值。
一般来说，细胞培养需要在5% CO2下进行，pH范围为7.2-7.4。
搅拌和通气为了促进细胞的生长和分裂，培养基需要定期搅拌以保持养分的均匀分布。
动物细胞培养
动物细胞培养
动物细胞培养是一种重要的生物技术手段，广泛应用于医药、生物学研究、食
品工业等领域。
通过细胞培养，可以获取大量同质的细胞群体，为疾病治疗、新药研发提供重要的支持。
动物细胞培养的原理
动物细胞培养是将动物组织或细胞在人工培养基中进行维持、增殖、传代等过程。
培养基通常包括营养物质、生长因子、激素等成分，提供细胞生长所需的营养和环境。
动物细胞培养的步骤
1.细胞来源：从动物体内收集组织样本，获得原代细胞。
2.细胞分离：通过消化酶等手段将组织分离成单个细胞。
3.传代培养：将分离的细胞在培养基中培养，定期传代以增殖细胞数
量。
4.检测与分析：对培养的细胞进行检测、分析，确保其健康状态。
动物细胞培养的应用
1.生物医学研究：细胞培养在癌症、遗传疾病等方面的研究中发挥重
要作用。
2.药物研发：通过细胞培养可以进行药物筛选、毒性测试等工作。
3.食品工业：利用细胞培养技术可以生产细胞培养肉等食品。
动物细胞培养的发展
随着生物技术的不断发展，动物细胞培养技术也在不断创新和提升。
新的培养
基配方、生长因子的发现以及工程技术的应用，使得动物细胞培养在医学和生物学领域有着广阔的应用前景。
动物细胞培养作为一种重要的生物技术手段，将继续在各个领域发挥重要作用，为人类健康和科学研究进步做出贡献。
动物细胞培养的步骤及注意事项
动物细胞培养的步骤及注意事项
动物细胞培养的步骤主要包括取材、清洗、消化、分散、传代和冻存等步骤。
在实验前，需要做好充分的准备工作，包括制备操作卡片、收集和清点实验用品等。
取材时，需要记录所取动物组织的各种情况，并严格遵守无菌操作。
清洗和消化过程需要使用适宜的方法，以保证细胞损伤较小。
分散和传代过程中，需要注意细胞的贴壁和接触抑制现象。
冻存时，需要选择合适的冷冻保护剂，以保证细胞的存活率。
动物细胞培养的注意事项包括避免污染、保证无菌操作、选择适宜的培养基和添加剂、控制温度和pH值等。
此外，还需要注意细胞运输和交流中的问题，如使用特殊的运输容器等。
在实验过程中，需要严格遵守操作规范，避免交叉污染和意外事故的发生。
同时，需要注意实验后的废物处理，避免对环境和人体造成危害。
动物细胞培养方法
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
动物细胞培养
概念动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
细胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。
2简介动物细胞培养液的成分体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。
将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。
由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。
[1]动物细胞培养液的特点液体培养基、通常含动物血清。
动物细胞培养的条件1.无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。
此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2.营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）3.血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份)4.温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4）5.气体环境（95%的空气+5%CO动物细胞培养2的混合气体）其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定基本过程取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。
将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），形成分散的单个细胞，将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。
当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。
此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。
再配成一定浓度的细胞悬浮液。
另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。
当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。
动物细胞培养练习题
补2.3下列选项中，哪个是“胚胎干细胞”的正确 的英文翻译：D A. multipotent stem cell B. Adultderived Stem Cell C. Totipotent stem cell D. Embryonic Stem Cell 补2.4. 下列哪个选项不属于转基因动物的常用方 法（D） A.反转录病毒法 B.基因显微注射法 C.胚胎干细胞移植法 D.基因敲除法
补3.4.以下选项中关于植物组织培养的特点 描述不正确的是:（B） A. 取材少，培养材料经济 B.人为控制培养条件，受自然条件影响。 C.生长周期短，繁殖率高， D.管理方便，利于自动化控制
补3.5．动物克隆是一种通过核移植过程进 行有性繁殖的技术。× × 补3.6．胚胎克隆与体细胞克隆的最主要差 ． 异在于所使用的核供体细胞不同，前者来自 多细胞阶段的胚胎，而后者使用的核供体细 胞来自动物体。
显微注射技术显微注射技术就是借助光学显微镜的放大作用利用显微操作仪直接把dna注射到动物早期胚胎胚胎干细胞体细胞或卵母细胞中然后生产动物个体的技术
练习
第一次：
补1.1. 世界上第一种克隆成功的生物是：C A牛 B人 C羊 D鸡 补1.2. 显微注射技术 显微注射技术就是借助光学显微镜的放大作用，利 用显微操作仪，直接把DNA注射到动物早期胚胎、 胚胎干细胞、体细胞或卵母细胞中，然后生产动物 个体的技术。 补1.3. 组织培养可以根据培养物的不同可以分为： 器官培养、组织培养、胚胎培养、细胞培养、原生 质体培养等。
第六次
补5.1.胚胎干细胞（embryonic stem cell， ES）是从早期胚胎内细胞团分离出来的， 能在体外培养的一种高度未分化的多能干细 胞 补5.2.细胞融合（cell fusion)，又称体细 胞杂交（somatic hybridiazation），是 指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合 形成单个细胞的过程
动物细胞培养
4.干细胞的应用 （1）应用原理：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、 器官的发育、再生和修复等密切相关。 （2）应用实例： 造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的 造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
加培养液
细胞悬液
转入
培养瓶内培养 （原代培养）
（ 细胞贴壁长成单层细胞,有接触抑制现象）
1.取动物组织 （1）取材:一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。 （2）取材原因: 细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养
2.制成细胞悬液
（1）将组织分散成单个细胞
①方法: 机械法 用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能 力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞则相反。所以，一般来 说，幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养。同样，分化 程度越低的细胞，增殖能力越强，所以更容易培养。
2.动物细胞培养和植物组织培养有什么相同和不同之处？
思考-讨论:
（1）培养前为什么分散成单个细胞？
②原因: Ⅰ.从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼 此限制了生长和增殖； Ⅱ.能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。
去掉组织
（一）
动 物
动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
间蛋白 胰蛋白酶
单个细胞
剪碎
加培养液
细胞 悬浮液
细
分化程度低， 增殖能力强
胞
①成块组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长与增殖 ②利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告实验目的本实验的目的是通过培养和观察动物细胞，了解细胞的结构和功能。
实验材料和设备•动物细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养罩•无菌移液器•显微镜•离心机实验步骤步骤一：准备工作1.将工作台、实验室器材和手部清洗消毒，确保无菌环境。
2.准备所需的实验材料和设备。
步骤二：细胞培养基的制备1.将细胞培养基倒入细胞培养皿中，每个培养皿倒入适量的培养基。
2.用无菌移液器将细胞培养基均匀涂布在培养皿内表面。
3.将培养皿放入细胞培养罩中，用透明膜封闭。
步骤三：细胞的收获1.从实验动物体内提取所需的组织样本，保持组织样本的完整性和无菌状态。
2.将组织样本置于离心管中，加入少量的预先准备好的细胞培养基。
3.使用无菌移液器将组织样本与细胞培养基充分混合。
4.将混合液转移到培养皿中，确保液体均匀覆盖培养皿表面。
步骤四：细胞培养1.将培养皿放入孵化器中，设置合适的温度和湿度，提供细胞生长所需的最佳环境条件。
2.定期观察培养皿内细胞的生长情况，记录细胞的数量和形态变化。
步骤五：细胞观察1.从培养皿中取出一小部分细胞，放入显微镜载玻片上。
2.将载玻片放入显微镜下，使用适当的倍率观察细胞的形态特征和细胞器的结构。
3.记录细胞的形态特征、大小和细胞器的分布情况。
实验结果和讨论通过以上步骤，我们成功地进行了动物细胞的培养实验，并观察到了细胞的生长和形态变化。
在显微镜下观察到的细胞形态特征和细胞器的结构，可以帮助我们更好地理解细胞的组成和功能。
细胞培养是生物学研究中常用的技术手段，通过培养和观察细胞，我们可以深入了解细胞的生命活动和疾病发生机制。
在实验过程中，我们需要保持无菌操作，以确保细胞的纯度和生长条件的良好。
细胞培养实验的结果和观察对于生物医学研究和药物开发具有重要意义。
通过改变培养条件和添加适当的药物，我们可以研究细胞的响应和代谢途径，为新药物的筛选和评估提供重要依据。
结论通过本次实验，我们成功地培养和观察了动物细胞。
动物细胞培养实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
2. 熟悉动物细胞培养过程中常用的仪器和试剂。
3. 通过动物细胞培养实验，了解细胞生长、增殖、分化的过程。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或器官中的细胞取出，在体外模拟体内环境，使其在适当的营养和条件下生长、增殖、分化。
动物细胞培养是生物学、医学、药理学等领域的重要研究手段。
三、实验材料1. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、移液器、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌生理盐水洗涤，加入适量DMEM培养基，在37℃、5%CO2培养箱中复苏。
2. 细胞传代：将复苏后的细胞用胰蛋白酶消化，加入适量的DMEM培养基终止消化，用移液器吹打细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于培养皿中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察：在显微镜下观察细胞的生长状态，记录细胞生长、增殖、分化的过程。
4. 细胞传代：待细胞铺满培养皿底部时，用胰蛋白酶消化细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于新的培养皿中，重复上述步骤。
五、实验结果1. 细胞复苏：复苏后的细胞在显微镜下观察到细胞呈圆形，细胞质清晰，细胞核明显。
2. 细胞生长：细胞接种后，在培养箱中培养，细胞逐渐铺满培养皿底部。
细胞生长过程中，细胞体积逐渐增大，细胞核逐渐增多。
3. 细胞增殖：细胞生长过程中，细胞数量逐渐增多，细胞铺满培养皿底部的时间逐渐缩短。
4. 细胞分化：在培养过程中，部分细胞发生分化，形成不同形态的细胞。
如神经细胞、肌肉细胞等。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、CO2浓度、培养基成分等条件对细胞生长、增殖、分化具有重要影响。
实验中应严格控制这些条件，以确保细胞正常生长。
2. 细胞传代过程中，应注意防止污染。
操作应在超净工作台中进行，使用无菌器材，避免细菌、真菌等微生物污染。
3. 细胞培养实验过程中，应定期观察细胞生长状态，及时调整实验条件，以保证细胞正常生长。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告动物细胞培养实验报告引言：动物细胞培养是一项重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物开发和生物工程等领域。
本实验旨在通过培养动物细胞，观察细胞的生长、分裂和功能表达，以及研究细胞在不同环境条件下的生理和生化特性。
材料与方法：1. 细胞培养基：选择适合培养动物细胞的培养基，如DMEM或MEM等。
2. 细胞培养器具：细胞培养瓶、细胞培养皿、离心管、显微镜等。
3. 细胞株：选择合适的细胞株，如人类肺癌细胞株A549。
4. 细胞培养条件：温度、湿度、CO2浓度等。
5. 细胞培养试剂：胎牛血清、抗生素等。
实验步骤：1. 细胞传代：将细胞株从冻存管中取出，加入培养基中，将细胞传代至合适的密度。
2. 细胞培养：将细胞悬浮液均匀地加入细胞培养器具中，放入培养箱中培养。
3. 细胞观察：使用显微镜观察细胞的形态、数量和分裂情况。
4. 细胞染色：使用荧光染料或细胞染色剂对细胞进行染色，观察细胞内部结构。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测细胞中特定基因或蛋白的表达情况。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞，如药物处理、温度变化等，观察细胞的反应和变化。
7. 细胞计数：使用细胞计数板或细胞计数仪等工具，统计细胞的数量。
结果与讨论：1. 细胞生长：观察到细胞在培养基中呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、对数期和平台期。
2. 细胞形态：细胞在培养基中呈现出典型的形态特征，如细胞核的形状、细胞质的颜色等。
3. 细胞分裂：观察到细胞在培养基中进行有丝分裂或无丝分裂，并计算细胞分裂指数。
4. 细胞染色：通过荧光染料或细胞染色剂染色后，观察到细胞内部结构的变化，如细胞器的位置和形态。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测到特定基因或蛋白在细胞中的表达水平。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞后，观察到细胞的形态、数量和功能发生变化，如细胞凋亡、增殖等。
高中生物(新人教版)选择性必修三同步习题：动物细胞培养(同步习题)【含答案及解析】
第2节动物细胞工程第1课时动物细胞培养基础过关练题组一归纳动物细胞培养的条件1.(2020河北沧州一中高二月考)一般来说,动物细胞体外培养需要满足以下哪些条件(易错)①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加入血清④温度与动物体温相近⑤需要O2,不需要CO2⑥适宜的渗透压A.①②③④⑤⑥B.①②③④C.①③④⑤⑥D.①②③④⑥2.(2020江苏南通高三一模)在进行动物细胞培养时,需要(易错)A.用胃蛋白酶处理以获得细胞悬液B.充入5%CO2以刺激细胞正常呼吸C.加入经高压蒸汽灭菌的血清以提供营养D.定期更换培养液以清除代谢物题组二理解动物细胞培养的过程3.(2020山东章丘四中高三月考)动物细胞培养的顺序是()①原代培养②传代培养③胰蛋白酶处理组织,形成分散的悬浮细胞A.③①②B.①②③C.②①③D.①③②4.下列有关动物细胞培养的叙述,错误的是()A.细胞通常贴壁生长B.细胞进行有丝分裂和减数分裂C.细胞之间有接触抑制现象D.体外培养的动物细胞的分类:一类悬浮在培养液中生长增殖,另一类贴附于某些基质表面生长增殖5.(2020辽宁六校协作体高二期中)下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是()A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶瓶壁上可形成多层细胞B.传代培养时,贴壁生长的细胞可直接用离心法收集C.细胞的传代培养次数通常是无限的D.动物细胞培养中定期更换培养液可以清除代谢物6.(2020江苏徐州一中高二开学考试)某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性,准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行细胞培养。
下列说法正确的是(易错)A.在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时,也可用胃蛋白酶处理B.细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行,CO2的作用是刺激细胞呼吸C.甲、乙细胞在持续的培养过程中,乙会出现停止增殖的现象D.仅用培养肝细胞的培养液也能用来培养乙肝病毒7.(2020云南师大附中高三二模)如图为动物细胞培养过程的示意图。
《第2章第2节 动物细胞工程—动物细胞培养》分层作业1
《第2章第2节动物细胞工程—动物细胞培养》分层作业1一、单选题1．如图是动物细胞培养过程中可能出现的接触抑制现象，对此下列有关叙述错误的是（）A．正常动物细胞培养过程中均会出现接触抑制现象B．癌细胞无接触抑制因而培养时可形成多层细胞C．出现接触抑制时细胞将停止分裂活动D．出现接触抑制后需利用胰蛋白酶消化后才可进行传代培养2．下列有关动物细胞培养及细胞工程的叙述，正确的是（）A．动物组织培养过程中不会出现细胞的分化B．动物成熟体细胞的细胞核仍然具有脱分化和使其后代细胞再分化实现全能性的能力C．培养骨髓瘤细胞时要定期使细胞从培养瓶壁上脱离，以解除接触抑制D．细胞传代培养过程中，一定要用到胰蛋白酶处理3．某研究小组为测定药物对体外培养细胞毒性的大小，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。
下列说法正确的是（）A．制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶代替胰蛋白酶处理肝组织B．CO2培养箱中CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸C．本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小D．为防止细胞培养过程中细菌的污染，需适量添加干扰素4．下列关于动物细胞培养所需条件的叙述，错误的是（）A．无毒、无菌的环境B．温度与动物体温相近C．不需要O2，需要CO2调节培养液的pH D．合成培养基中通常需加入血清5．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件（）①无毒的环境②无菌的环境③培养基需加动物血清④温度与体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥需要保持稳定的pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥6．下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是（）A．一般选取动物胚胎或幼龄组织细胞进行细胞培养B．为防止杂菌污染，可在培养基中添加一定量的抗生素C．培养动物细胞的培养基中无需添加血清、血浆，以免造成污染D．定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害7．下图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。
(2019 人教版 新教材)2.2.1 动物细胞培养
二、动物细胞培养的过程
（一）
动 物 细 胞 培 养 过 程
动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
去掉组织 胰蛋白酶、 间蛋白
胶原蛋白酶 单个细胞
剪碎
加培养液
细胞 悬浮液
分化程度低， 增殖能力强
少部分突破细胞寿限 “癌变”，无限传代
细胞
50代细胞
动物细胞培养 不能最终培养
2.2.1 动物细胞培养
克隆猴 中中和华华
克隆皮肤
从社会中来
在治疗大面积烧伤时，通常采用的办法是取烧 伤病人的健康皮肤进行自体移植。
但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用 他人皮肤来源又不足，而且产生免疫排斥反应。
那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤？能不能用 自体皮肤的单个细胞培养出可供移植的皮肤？
2、目的： 获得细胞或细胞产物；不能获得完整动物个体。
3、原理： 细胞增殖（有丝分裂）
4、实例：
皮肤烧伤
克隆皮肤
那么，获得这些细胞或细胞产物需要哪些必要的条件？过程如何？
二、动物细胞培养的条件
1. 营养： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素
（合成培养基）+动物血清等
2. 无菌、无毒的环境：
不能用胃蛋白酶处理：由于大多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，而胃蛋白酶发挥作用的最适 pH为2.0左右，因此不能用胃蛋白酶使细胞分散开。
（3）在用胰蛋白酶处理组织时应注意 什么？
细胞膜含有蛋白质，长时间 处理会损伤细胞
要控制好时间
纤维蛋白、胶原蛋白等
（4）用胰蛋白酶两次处理的目的？
第一次使用的目的是使组织细胞分散开； 第二次使用的目的是使细胞从瓶壁上脱离下来，便于分散后继续培养。
2.2.1动物细胞培养(教师版)
《第2章细胞工程》第2节动物细胞工程一动物细胞培养必会知识考点梳理拓展延伸易错警示必会知识一动物细胞工程和动物细胞培养1．动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
2．动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
(1)相关组织：一般是指动物胚胎或出生不久的幼龄动物组织，因为这些组织细胞比老龄动物的组织细胞生命力旺盛，易于培养，同时增殖能力也更强。
(2)适宜的培养基：不同的细胞、组织适合生存的环境不同，需要配制不同的培养基。
3．动物细胞培养的条件(1)营养条件：细胞在体外培养时，培养基中应含有细胞所需要的各种营养物质。
将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。
由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基时，通常需要加入血清等一些天然成分。
培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。
(2)无菌、无毒的环境：在体外培养细胞时，必须保证环境是无菌、无毒的，即需要对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。
培养液还需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
(3)温度、pH和渗透压：维持细胞生存必须有适宜的温度。
哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5℃为宜。
多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。
此外，渗透压也是动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数。
(4)气体环境：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。
O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
在进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有95%空气和5% CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。
必会知识二动物细胞培养的过程1．体外培养的动物细胞可以分为两大类：一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖；另一类则需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，大多数细胞属于这种类型，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁。
动物细胞培养的流程和注意事项
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1. 细胞解冻和培养。
将冷冻保存的细胞从液氮中取出并快速解冻。
动物细胞培养-实验操作
动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
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作业22
1．用于动物细胞培养的细胞，最好选用()
A．任何个体的细胞B．成熟个体的体细胞
C．动物的受精卵D．胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞
2．下列动物细胞培养过程中属于原代培养的是()
A．用胰蛋白酶使组织分散成单个细胞的过程
B．从机体取得细胞后立即进行培养的过程
C．出现接触抑制现象后取下的细胞的培养过程
D．哺乳动物细胞在培养基中的悬浮生长过程
3．动物细胞培养的特点是()
①细胞贴壁②有丝分裂③分散生长④接触抑制⑤减数分裂
A．①②④B．②④⑤C．①③④D．③④⑤
4．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是()
A．都需用CO2培养箱B．都须用液体培养基
C．都要在无菌条件下进行D．都可体现细胞的全能性
6．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是()
A．动物细胞培养B．动物细胞融合C．单克隆抗D．胚胎细胞核移植7．动物细胞培养过程的顺序是()
①原代培养②传代培养③用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液A．①②③B．①③②C．②①③D．③①②
8．(2014年北京西城区高二检测)下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是()
A．动物细胞培养的目的就是为获得细胞分泌蛋白
B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散开
C．动物细胞培养通常不会出现接触抑制现象
D．可以通过细胞培养技术获得完整的动物个体
9．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件()
①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加血浆
④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调节培养液pH A．①②③④⑤⑥B．①②③④
C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥
10．在动物细胞培养过程中，出现遗传物质改变的细胞是()
A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞
11．动物细胞培养技术的用途有()
①生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等②生产基因工程技术中所用的受体细胞③可以用于检测有毒物质④培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究
A．①②B．①②③C．②③④D．①②③④
12．动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。
如图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。
下列从该图提供的信息获得的结论中不．正确的是()
A．正常细胞与癌细胞的增殖速率相同
B．有无血清对正常细胞与癌细胞培养的影响不同
C．培养基中补充血清有助于正常细胞的培养
D．培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大
13．(2014年宣武高二检测)下列与动物细胞培养有关的表述中，不．正确的() A．动物细胞培养需要无菌、营养、适宜的温度和pH等条件
B．用胰蛋白酶作用于离体的动物组织，使其分散成单个细胞
C．放入CO2培养箱中培养动物细胞的主要目的是为了满足细胞对CO2的需求D．细胞株一般具有恒定的染色体组型、生化特性等
16．如图所示为动物细胞培养的基本过程示意图，请据此图回答下列问题。
(1)容器A中放置的是动物器官或组织，它一般取自
______________________________________________________
(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是________，然后用
________酶处理，这是为了使细胞分散开来。
这样做的目的是
_________________________。
(3)培育首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有
________________________________等。
在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这时培养到________代，到此时的培养称为________________。
(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用________处理，然后配置成________，再分装。
(5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是
____________________。
20．回答下列有关动物细胞培养的问题：
(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。
此时，瓶壁上形成的细胞层数是______。
要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是________。
(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现
____________________的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，该种细胞的黏着性__________，细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量________。
(3)在细胞培养过程中，通常在________条件下保存细胞。
因为在这种条件下，细胞中________的活性降低，细胞________的速率降低。
(4)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当做________进行攻击。