桑叶中白藜芦醇的提取及含量的测定_季华梅

称取桑叶粉末 10. 0 g 5 份，放入 1 ～ 5 号圆底烧瓶，分别加 入 150 mL 乙醇回流提取，乙醇浓度为 80% ，提取时间 90 min， 提取温度分别为： 40 ℃ 、50 ℃ 、60 ℃ 、70 ℃ 、80 ℃ 。提取液 过滤除渣后减压浓缩，用甲醇溶解至 10 mL，再离心分离，以 后操作与上面相同，如表 4。
醇 ＞ 乙酸乙酯 ＞ 乙醚 ＞ 氯仿； 在 366 nm 的紫外光照射下产生 紫色荧光，遇氨水等碱性溶液显红色，遇镁的甲醇溶液显粉红 色，并能和三氯化铁 － 氰化钾起显色反应； 在低温、避光条件 下较为稳定，碱性环境中不稳定。在自然条件下，以自由态和 糖苷两种形式存在。白藜芦醇还具有顺、反式两种结构。
称取桑叶粉末 10. 0 g 5 份，放入 1 ～ 5 号圆底烧瓶，提取时 间 90 min，提 取 温 度 60 ℃ ，乙 醇 浓 度 为 80% ，提 取 次 数 为 1 次，乙醇用量为： 90 mL、110 mL、130 mL、150 mL、170 mL， 提取液过滤除渣后减压浓缩，用甲醇溶解至 10 mL，再离心分 离，以后操作与上面相同，如表 3。
文章编号： 1001 － 9677（ 2013） 01 － 0056 － 03
The Extraction of Resveratrol in Mulberry Leaves and Content Determination*
JI Hua － mei，RAN Su － hua，YANG Fang － biao，XIE Bing，JIANG Yong （ Yangtze Normal University，College of Chemistry and Chemical Engineering，Chongqing 408100，China）
2 桑叶中白藜芦醇的提取及测定
1 白藜芦醇的化学结构及理化性质
白藜芦醇是蒽醌萜类 （ 非黄酮类） 的多酚化合物，具有酚 和芪的特性，分 子 式 为 C14 H12 O3 ，相 对 分 子 量 为 228. 25； 无 味、白色针状结晶，难溶于水，易溶于乙醚，氯仿、甲醇、乙 醇、丙酮等有机极性溶剂。其溶解性大致为： 丙酮 ＞ 乙醇 ＞ 甲
表 1 不同有机溶剂对白藜芦醇提取的影响
溶剂
峰面积
含量 /%
80% 乙醇
1420
0. 0015
80% 甲醇 80% 丙酮 乙酸乙酯
1424. 3 1427. 8 767. 2
0. 00152 0. 00155 0. 0008
由表 3 可知，随着料液比的增加，白藜芦醇的提取率增 加，但增加的效果不明显，所以选择 1∶13 较为合适。 2. 2. 1. 4 温度对提取白藜芦醇的影响
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广州化工
2013 年 1 月
3 HPLC 法测定白藜芦醇的条件
3. 1 实验仪器及药品
色谱柱： HypersilODS 柱 （ 250 mm × 416 mm，5 μm） ； 流 动相： 乙腈∶水 （ 35∶65） ； 检测波长： 303 nm； 柱温： 室温； 流速： 1 mL / min。在测定白藜芦醇标准样品的相同条件下依次 将各提取液进样 10 μL。
称芪三酚，早在 1924 年人们就发现了白藜芦醇，1939 年，日 本科学家高岡道夫从毛叶藜的根部分离得到白藜芦醇［1］，属于
多酚化合物，是一种广泛存在于虎杖、葡萄、桑叶等植物中的 抗毒素，尤以葡萄皮中含量最为丰富［2 － 3］，白藜芦醇具有很强 的抗炎、抗氧化活 性［4］，以 及 抑 制 癌 细 胞［5］、降 低 血 脂［6 － 7］、 防治心血管 疾 病［8 － 9］、抗 辐 射 抗 衰 老 以 及 抗 艾 滋 病 等 药 理 作 用［3］。其中，最令人瞩目和最有发展前景的是抗肿瘤作用，被
Key words： resveratrol； Mulberry leaves； biological action； extraction
白藜芦醇 （ resveratrol，RES） 又名虎杖苷元，化学名为 3，
5，4＇－ 三羟基 － 1，2 二苯乙烯（ 3，5，4＇ － trihydroxy － stilbene） ，简
称取桑叶粉末 10. 0 g 5 份，放入 1 ～ 5 号圆底烧瓶，提取时 间 90 min，提取温度 60 ℃ ，提取次数为 1 次，乙醇浓度分别 为： 50% 、60% 、70% 、80% 、90% ，提取液过滤除渣后减压 浓缩，用甲醇溶解至 10 mL，再离心分离，以后操作与上面相 同，如表 2。
的最佳条件： 提取溶剂为乙醇； 回流时间为 90 min； 乙醇浓度为 80% ； 物料比为 1∶13； 回流温度为 60 ℃ 。原料经微波回流提取、 过滤除渣后旋蒸得到白藜芦醇浓缩液，再用高效液相色谱法测定白藜芦醇的含量。
关键词： 白藜芦醇； 桑叶； 生理活性； 提取
中图分类号： O629. 9
文献标识码： B
表 2 不同乙醇浓度对白藜芦醇提取的影响
溶剂
峰面积
含量 /%
50% 乙醇 60% 乙醇 70% 乙醇 80% 乙醇 90% 乙醇
1380. 2 1389. 7 1409. 2
1420 1430. 1
0. 0012 0. 00124 0. 00137 0. 0015 0. 00154
由表 2 可知，随着乙醇体积分数的增大，白藜芦醇的提取 率增加。当乙醇的体积分数大于 80% 后，提取效果增加不明 显。 2. 2. 1. 3 料液比对提取白藜芦醇的影响
表 4 不同温度对白藜芦醇提取的影响
温度 /℃
峰面积
含量 /%
40
1367. 3
0. 001
50
1387. 8
0. 0012
60
1411. 2
0. 00139
70
1420
0. 0015
80
1430. 3
0. 00154
由表 1 可以看出，不同溶剂对桑叶中的白藜芦醇提取效果 不同白藜芦醇提取效果不同，考虑到丙酮与甲醇的毒性及挥发 性均较乙醇强。因此，选择安全、无毒、易回收的乙醇为提取 剂。 2. 2. 1. 2 乙醇浓度对白藜芦醇的影响
第 41 卷第 1 期
季华梅等： 桑叶中白藜芦醇的提取及含量的测定
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2. . 2. 1 提取
2. 2. 1. 1 不同溶剂对提取白藜芦醇的影响 称取桑叶粉末 10. 0 g 4 份，分别放入 1 ～ 4 号圆底烧瓶，分
别加入 150 mL 乙醇、乙酸乙酯、甲醇、丙酮回流提取，乙醇、 甲醇、丙酮浓度为 80% ，提取次数为 1 次，水浴温度为 60 ℃ ， 提取时间分别为 90 min。提取液过滤除渣后，用旋转蒸发仪进 行减压浓缩，用 10 mL 的甲醇溶液溶解浓缩物，再用离心机离 心，取上层清夜，放入 10 mL 的试管中进行保存。再用高效液 相色谱法测定白藜芦醇的含量，如表 1。
第 41 卷第 1 期 2013 年 1 月
广州化工 Guangzhou Chemical Industry
Vol. 41 No. 1 January. 2013
桑叶中白藜芦醇的提取及含量的测定*
季华梅，冉素华，杨方彪，谢 兵，蒋 勇
（ 长江师范学院化学化工学院，重庆 408100）
摘 要： 介绍白藜芦醇理化性质、生物活性及其药理作用，采用有机溶剂微波回流法提取桑叶中的白藜芦醇，确立了提取
表 5 不同时间对白藜芦醇提取的影响
时间 / min
峰面积
含量 /%
45
1367. 3
0. 001
60
1387. 6
0. 0012
75
1411. 2
0. 00139
90
1420
0. 0015
105
2430. 3
0. 00154
由表 5 可知，随着提取时间的增加，白藜芦醇的提取率增 加。当提取时间大于 90 min 后，提取效果增加不明显，所以选 择 90 min 比较合适。 2. 2. 2 最佳提取方法
喻为继紫杉醇之后又一新的绿色抗癌药物； 因此，白藜芦醇在
医药、食品工业上的应用越来越广泛，市场价值极高。有关白 藜芦醇的研究主要集中在虎杖和葡萄等植物中［10］，对花生中白 藜芦醇也有研究［11 － 12］，但对桑树中白藜芦醇的研究很少。白
藜芦醇因其具有多种保健作用而受到人们广泛关注，经研究测
定在桑叶中有一定的含量。
表 3 不同料液比对白藜芦醇提取的影响
液料比
峰面积
含量 /%
1∶9
1389. 7
0. 00124
1∶11
1411. 2
0. 00115
1∶15
1427. 3
0. 00152
1∶17
1430. 3
0. 00154
由表 4 可知，随着温度的增大，藜芦醇的提取率增加，当 温度大于 70 ℃ ，增加的效果不明显，所以选择 60 ℃ 较为合 适。 2. 2. 1. 5 时间对提取白藜芦醇的影响
将采集的桑叶晾干粉碎，以料液比为 1∶13 加入 80% 的乙 醇，在 60 ℃ 条件下微波加热回流提取 90 min，过滤得提取液， 将此提取液减压浓缩，乙醇回收循环使用，剩余物加入碱液并 搅拌溶解，过滤除去不溶性杂质，所得滤液再用酸调节 pH = 5. 0 左右，过滤收集沉淀物，最后将沉淀物用乙醇 － 水重结晶 即得白藜芦醇。 2. 2. 3 方案流程图
称取桑叶粉末 10. 0 g 5 份，放入 1 ～ 5 号圆底烧瓶，提取时 间分别为： 30 min、45 min、60 min、75 min、90 min，提取温 度为 60 ℃ ，乙醇用量为 150 mL，提取液过滤除渣后减压浓缩， 用甲醇溶解至 10 mL，再离心分离，以后操作与上面相同，如 表 5。
Abstract： Resveratrol had various health care functions by the extensive attention of the people，by the study on the determination of content in mulberry leaves. The resveratrol，physicochemical properties，biological activity and pharmacological effects were introduced，and using organic solvent reflux extraction of resveratrol，the optimal extraction conditions were extraction solvent reflux time 90 min，ethanol concentration 80% ，the material ratio 1∶13，and reflow temperature of 60 ℃. The resveratrol concentration liquid was got by raw materials through reflux extraction，filtering to remove dregs after rotary evaporation，and then the content of resveratrol was determined with liquid chromatographic method.