泛耐药鲍氏不动杆菌携带多种转座子与插入序列
鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药性分析
鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药性分析鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）是一种广泛存在于自然环境中的革兰阴性细菌，其在医疗卫生机构中广泛分布，常常对患者产生严重的感染，尤其是对于危重病患者来说，可能导致严重的并发症甚至死亡。
鲍曼不动杆菌的耐药性问题在临床上也备受关注，因为它对多种抗生素产生耐药，又具有易弥散性，所以对其的耐药性分析显得尤为重要。
一、鲍曼不动杆菌的临床分布鲍曼不动杆菌最常见的感染部位是呼吸道、尿路、伤口和血液，而在重症监护病房内，其感染率更是较高。
据统计，约有10%至35%的重症监护病房内的病患受到鲍曼不动杆菌感染，并且这个比例还在不断上升。
鲍曼不动杆菌对于长期卧床的患者、使用呼吸机的患者、接受长时间生命维持治疗的患者、有手术史的患者等人群更容易导致感染。
在临床分布上，鲍曼不动杆菌主要通过医源性途径传播，例如医护人员、病人的手接触传播、呼吸机连接管的交叉感染等。
在医疗卫生机构中，重点感染控制的工作也应重视对鲍曼不动杆菌的控制。
鲍曼不动杆菌因其广泛分布以及对多种抗生素的耐药性而备受关注。
其对β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、喹诺酮类抗生素等多种抗生素产生耐药性，使其在临床上的治疗变得日益困难。
1. β-内酰胺类抗生素鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素产生了较强的耐药性，包括头孢菌素、青霉素等。
在临床治疗中，使用这类抗生素往往难以有效清除鲍曼不动杆菌，使感染难以控制。
2. 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素对于鲍曼不动杆菌的效果也较差，其中包括庆大霉素、阿米卡星等。
对于合并感染的患者来说，这类抗生素的减敏现象增加了治疗的难度。
3. 喹诺酮类抗生素喹诺酮类抗生素如环丙沙星、左氧氟沙星等对于鲍曼不动杆菌也存在一定的耐药性，造成了在临床上的治疗困难。
针对鲍曼不动杆菌的耐药性问题，临床医生需要结合患者的临床情况和药敏试验结果进行药物选择，尽可能采用联合用药或者选择对其具有一定敏感性的抗生素进行治疗。
鲍曼不动杆菌耐药机制研究及感染治疗控制方面的新进展
鲍曼不动杆菌耐药机制研究及感染治疗控制方面的新进展作者：邝咏云来源：《中国卫生产业》 2013年第30期邝咏云云南楚雄州人民医院，云南楚雄?675000[摘要]?鲍曼不动杆菌是临床常见的条件致病菌，分布在自然和医院环境中，它有极强环境适应能力和获得外源性耐药基因的能力，易在医院内引起暴发流行。
近年来，多重耐药及泛耐药鲍曼不动杆菌引起的医院感染增多，可引起呼吸道相关性肺炎、尿路感染、菌血症等，由于临床治疗困难，引起了广泛关注。
泛耐药菌株几乎无药可治，病死率极高，因此它们被称为21世纪革兰阴性杆菌中的“耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）”[1]引起广泛关注。
本文主要就多重耐药鲍曼不动杆菌流行情况、耐药机制研究及临床感染治疗控制方面的新进展作一综述。
[关键词]?鲍曼不动杆菌；耐药机制；临床治疗；医院感染[中图分类号]?R516 [文献标识码]?A [文章编号]?1672-5654(2013)10(c)-0193-02鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌。
近年来的感染在增多，且其耐药性日益严重，已引起临床和微生物学者的严重关注。
鲍曼不动杆菌主要引起呼吸道感染，也可引发败血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎等。
鲍曼不动杆菌在医院的环境中分布很广且可长期存活，对危重患者和CCU及ICU中的患者威胁很大，也将此类感染称做ICU获得性感染。
国内耐碳青霉稀类的鲍曼不动杆菌发展很快，在最近发现的“多重耐药”与“耐碳青霉烯类”的鲍曼不动杆菌（MDRAB）和（CRAB），在我国内地很多地方均已出现，所以要引起高度警惕，并要及时采取重要措施。
1 多重耐药鲍曼不动杆菌的流行现状多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB），通常指的是对抗绿脓的头孢菌素、碳青霉烯类、β-内酰胺抗生素复合制剂、氟喹诺酮类、氨基糖苷类五类抗菌药物中三类以上耐药的菌株，泛耐药菌株鲍曼不动杆菌（PDRAB）通常指对以上抗菌药物均耐药的菌株[2]。
目前，我国临床分离的MDRAB和PDRAB有逐年上升趋势，根据2010年中国耐药监测网数据[3]显示，鲍曼不动杆菌位于临床分离阴性菌的第三位，5523株不动杆菌属（鲍曼不动杆菌占89.6％）对亚胺培南和美罗培南耐药率为57.1％和58.3％，其中泛耐药鲍曼不动杆菌从2009年17.0%升到21.4%。
鲍曼不动杆菌耐药性相关基因及其调控机制研究进展
鲍曼不动杆菌耐药性相关基因及其调控机制研究进展温海初;牛雨佳;陈丽华【摘要】鲍曼不动杆菌作为一种耐药机制复杂、耐药范围广泛的条件致病菌受到临床和科研人员的高度关注.目前临床用于鲍曼不动杆菌治疗的主要抗菌药物有β-内酰胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类和磺胺类药物等,然而几乎所有抗菌药物都已出现不同程度的耐药现象.基因水平研究有助于阐明复杂的耐药机制,提出治疗新方案.本文主要对近年来发现的常用抗菌药物耐药基因及其调控机制作一综述.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)002【总页数】3页(P137-139)【关键词】鲍曼不动杆菌;耐药基因;调控机制【作者】温海初;牛雨佳;陈丽华【作者单位】中南大学湘雅医学院检验系,长沙410013;中南大学湘雅医学院检验系,长沙410013;中南大学湘雅三医院检验科,长沙410013【正文语种】中文【中图分类】R446.5鲍曼不动杆菌为不动杆菌属中最常见的一种革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界的水及土壤、医院环境、人体皮肤、呼吸道、消化道和泌尿生殖道中，引发败血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎、院内获得性肺炎等。
该菌在医院环境中可长期存活，极易造成危重患者的感染，是医院感染的重要病原菌。
因此，在已发现多种耐药机制的前提下，对鲍曼不动杆菌耐药性相关基因及其调控机制的进一步研究具有重要临床意义。
本文对此作一综述。
根据现有研究，鲍曼不动杆菌的耐药机制包括产生灭活酶和修饰酶、细胞外膜通透性的改变、抗菌药物作用靶位改变和生物被膜的形成，此外主动外排泵在鲍曼不动杆菌获得性耐药中也扮演重要角色。
1.1 药物灭活酶和修饰酶的合成在鲍曼不动杆菌耐药机制研究中受到关注较多的灭活酶为B类金属β-内酰胺酶和D类苯唑西林β-内酰胺酶，其可水解破坏菌体内的相应β-内酰胺类抗菌药物的β-内酰胺环。
另外，鲍曼不动杆菌可产生常见的3类氨基糖苷修饰酶：乙酰转移酶(AAC)使游离氨基乙酰化；磷酸转移酶(APH)使游离羟基磷酸化；核苷转移酶(AAD)使游离羟基核苷酰化。
同时携带TEM-1、ADC-57、DHA-1、OXA-234种β-内酰胺酶基因的泛耐药鲍曼不动杆菌的发现
Ｏ Ｘ Ａ． ２ ３ 这２ 种ｐ － 内酰胺酶基因菌 ；Ｂ 一 内酰胺类 ；耐药基 因；１ ３ ． 内酰胺酶 ；插入序列
中图 分 类 号 ：Ｒ ３ ７ ８ 文 献标 志码 ：Ａ
Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐａ ｎｄｒ ｕｇ — ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ Ａｃ ｉ ｎｅ ｔ ｏ ｂ ａｃ ｔ ｅ ｒ ｂ ａｕ ｍａ ｎｎ ｉ ｉ ｃ ａ ｒ ｒ ｙｉ ｎ ｇ ＴＥＭ 一 １ ， ＡＤＣ一 ５ ７ ，
Ｐ ＤＲ — ＡＢ Ａ菌进行１ ４ 种Ａ 类 、１ ０ 种Ｂ 类ｐ ． 内酰胺酶编码基 因（ 金属 ｐ ． 内酰胺 酶） 、２ 种Ｃ 类和８ 种Ｄ 类ｐ 一 内酰胺 酶编码基因（ 合计３ ４ 种ｐ 一 内酰胺酶基 因） 的基 因检测 ，并使用Ｐ Ｃ Ｒ 法对插入序 ｊ ￣ Ｊ ｌ ｌ Ｓ Ａ ｂ ａ ｌ 与ｐ 一 内酰胺 酶ｂ ｌ ａ … 基 因（ Ｉ Ｓ Ａ ｂ ａ １ ． Ｏ Ｘ Ａ 一 ２ ３ ） 、插入序ｙ Ｊ ｌ ｌ Ｓ Ａ ｂ ａ ｌ 与ｐ ．
（ １ Ｗｕ ｘ ｉ Ｐ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ Ｓ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ａｆ ｉｌ ｆ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ Ｒ ｅ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｗｕ ｘ ｉ ２ １ ４ ０ ２ ３ ； ２ Ｗｕ ｘ ｉ Ｐ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ’ Ｓ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ａ ｉｌ ｆ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ Ｎａ ｎ ｉ ｉ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｙ ｔ ｉ ｎ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｒ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ， Ｗｕ ｘ ｉ ２ １ ４ ０ ２ ３ ）
鲍曼不动杆菌
生物学特性
• 鲍曼不动杆菌是属于不动杆菌属的一个菌 种，它是一种不发酵糖类、氧化酶阴性、 不能运动的革兰氏阴性杆菌。菌体大小为 1~1.5μm×1.5~2μm，无芽胞无鞭毛，需氧， 可在普通培养基上生长良好，最适温度 37℃，但41~44℃条件下亦能生长。在血平 板上经18~24h的孵育可形成圆形、灰白色、 光滑的菌落。而且鲍曼不动杆菌具有复杂 的抗原构造，包括菌体抗原以及荚膜抗原， 根据抗原的不同可以将鲍曼不动杆菌分为 34个血清型。
不动杆菌属于不发酵糖的 革兰阴性球杆菌，至少分为
16个基因种：
①鲍曼不动杆菌（A baumanii） ②醋酸钙不动杆菌（A calcoacelicus） ③溶血性不动杆菌（A haemolyticus） ④约翰逊不动杆菌（A johnonii） ⑤洛菲不动杆菌（A lwoffii） ⑥琼氏不动杆菌（A junii） ⑦耐放射性不动杆菌（A radioresistens）
• 广泛耐药鲍曼不动杆菌（Extensively Drug Resistant A。 baumannii，XDRAB）是指 仅对1～2种潜在有抗不动杆菌活性的药物 （主要指替加环素和/或多黏菌素）敏感的 菌株。
Байду номын сангаас
• 全耐药鲍曼不动杆菌（Pan Drug Resistant A。 baumannii， PDRAB）则指对目前所 能获得的潜在有抗不动杆菌活性的抗菌药 物（包括多黏菌素、替加环素）均耐药的 菌株
• 感染源可以是病人自身（内源性感染），亦可以 是不动杆菌感染者或带菌者，尤其是双手带菌的 医务人员。传播途径有接触传播和空气传播。在 医院里，污染的医疗器械及工作人员的手是重要 的传播媒介。易感者为老年患者、早产儿和新生 儿，手术创伤、严重烧伤、气管切开或插管、使 用人工呼吸机、行静脉导管和腹膜透析者，广谱 抗菌药物或免疫抑制剂应用者等。在使用呼吸机 者中，肺炎发生率约为3%～5%。
烧伤患者创面细菌分布特点及耐药性分析
烧伤患者创面细菌分布特点及耐药性分析刘军;付晋凤;魏迪南【摘要】目的了解烧伤患者创面细菌的分布特点及其耐药情况.方法回顾性分析2012年1-12月昆明医科大学第二附属医院烧伤科患者创面分泌物标本,分析检出菌株的分布特点及耐药情况.结果检出率较高的前10种细菌革兰阴性菌为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌,革兰阳性菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌,占总检出菌的86.63%,革兰阴性菌数量明显多于革兰阳性菌.其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对大多数抗菌药物的耐药率达90%以上.结论烧伤病区创面细菌感染及耐药问题较为严重,需严格实施消毒隔离措施,加强抗菌药物的合理使用.【期刊名称】《解放军医药杂志》【年(卷),期】2013(025)012【总页数】4页(P20-23)【关键词】烧伤;细菌;感染;抗药性【作者】刘军;付晋凤;魏迪南【作者单位】650101,昆明,昆明医科大学第二附属医院烧伤科;650101,昆明,昆明医科大学第二附属医院烧伤科;650101,昆明,昆明医科大学第二附属医院烧伤科【正文语种】中文【中图分类】R378;R978.1感染对中重度烧伤患者的抢救造成严重威胁。
抗菌药物的使用仍然是当前控制感染的有效手段之一，其不仅对烧伤创面愈合的治疗效果造成影响，同时也会影响烧伤病区患者创面的细菌生态变化及耐药性的改变。
本研究回顾性分析昆明医科大学第二附属医院烧伤科2012年住院患者创面分泌物标本中分离培养的菌株情况，分析其菌种的分布特点及耐药性，以期为临床感染控制提供指导。
1 对象与方法1.1 临床资料标本来源于2012年1—12月昆明医科大学第二附属医院烧伤科患者创面分泌物。
1.2 菌种鉴定及药物敏感试验由笔者单位检验科细菌室参照《全国临床检验操作规程》，应用法国生物梅里埃公司生产的Vitek-32型全自动细菌分析系统进行菌种鉴定。
药物敏感试验参照纸片琼脂扩散法进行操作，按美国国家临床实验室标准化委员会标准判定结果。
鲍曼不动杆菌多重耐药机制的研究进展
鲍曼不动杆菌多重耐药机制的研究进展作者：王福平付玲罗玲来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第07期【摘 ;要】鲍曼不动杆菌（A. baumannii）属于革兰阴性杆菌，为最常见的多重耐药（MDR）细菌之一，是医院感染最常见的病原菌之一，明确其多重耐药机制，对于其防治具有非常重要的意义，本文就其耐药机制作一综述。
【关键词】鲍曼不动杆菌;多重耐药;机制【中图分类号】R446.5;;;;;;【文献标识码】A; ;;;;【文章编号】1672-3783（2019）07-0142-01鲍曼不动杆菌为医院感染的重要病原菌之一。
多重耐药鲍曼不动杆菌是指对头孢菌素、碳青霉烯类、β-内酰胺酶抑制剂复合制剂、氟喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药物中至少3类抗菌药物耐药的菌株[1]。
目前，鲍曼不动杆菌多重耐药给临床抗感染治疗带来很大的困难和严峻挑战。
因此，明确鲍曼不动杆菌的耐药机制，对于防治多重耐药，具有重要意义。
1 鲍曼不动杆菌多重耐药总的机制：1.1 鲍曼不动杆菌多重耐药与外排泵的过度表达有关。
主动外排泵由菌体细胞膜表面蛋白组成，可将进入细菌体内的药物排出到细胞外，外排泵的过度表达可引起喹诺酮类、氯霉素、红霉素、庆大霉素、卡那霉素、敏感性降低，从而引起耐药[2]。
外排泵基因是分布在 ICU 和呼吸内科的鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素[3]。
河北省石家庄市河北医科大学第一医院检验科分离的96 株多重耐药鲍曼不动杆菌检测到 adeB、adeR、adeS基因等，且发现分离出的 adeB 阳性株中，均携带有adeS 基因，且多数携带有adeR;[4]。
1.2 鲍曼不动杆菌的耐药与耐药质粒导致适应性下降有关。
适应性是指耐药菌在没有药物选择压力的情况下生长、定植等方面的能力。
抗菌药物一般作用于细菌细胞壁的生物合成、染色体超螺旋的调节、RNA转录和蛋白质的生物合成，因此相关部位产生的耐药突变常常伴随着细菌适应性的下降，耐药质粒通常携带多种耐药基因，如质粒pHN7A8同时携带rmtB、bla CTX-M-65和fosA3等耐药基因，对宿主菌的生长代谢及其在环境中的适应性造成一定影响。
鲍曼不动杆菌抗生素多重耐药性：耐药机制与感染治疗对策
Ａ． ａ ｍａ ｉ ｉ ｅ ｆ ｄ ｓ ｌ ｙ ｉ ｎ ｆｃ ｎ ｎ ｒｎ ｉ ｅ ｉ ｔ ｎ ｅ ｏ ｉ ｇ ｔ ｈ ｎ ｅ ｐ ａ ｅ ｗｅ ｎ ｔ ｅ ｏ ｔ ｒｍ ｅ ｒ ｎ ｂ ｕ ｎ ｉ ｔ ｌ ｉｐ ａ ｓ ｓｇ ｉ ａ ｔｉ ｔｉ ｓ ｃ ｒ ｓ ｓａ ｃ ｗｎ ｎ ｏ ｔ ｅ ｉ ｔ ｒ ｌ ｙ ｂ ｔ ｅ ｈ ｕ ｅ ｍｂ ａ ｅ ｓ ｉ
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泛耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺类耐药机制研究
胺酶基因，如：ｓＩＭ．１（金属肛内酰胺酶）、ＧＥＳ・１１（具 碳青霉烯酶活性的超广谱ｐ．内酰胺酶）‘２－３】、首个具超
基金项目。无锡市医院管理中心科技发展基金项目：插入序列介导的全耐药鲍曼不动杆菌耐药机制研究（ＹＧＭｌ００１）。
作者简介：王春新。男。生于１９７３年，副研究员．副主任技师。主要从事临床微生物的诊断和耐药机制研究． ‘通讯作者。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｃｘｓｔａｒ＠１６３．ｃｏｒｎ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ
ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｒｉｎ ｃａｒＯ ｇｅｎｅ ｍｉｇｈｔ ｐｌａｙ
ｂａｕｍａｎｎｉｉ；３－ｌａｃｔａｍａｓｅ
ｇｅｎｅｓ；Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｒｉｎ；ｃａｒＯ ｇｅｎｅ；Ｐａｎｄｒｕｇ—
在革兰阴性杆菌中新型臣内酰胺酶不断被发现ｆｌ】ｏ 人们同样也不断从鲍曼不动杆菌中查出新型ｐ．内酰
Ｏ．０２％（ｗ／ｏ），Ｔａｑ
ＤＮＡ ｐｏｌ
ＩＵ（不计体
２０株ＰＤＲ．ＡＢＡ菌３６种Ｂ．内酰胺酶基因检测结 果：Ａ类ｐ．内酰胺酶基因中检出ＴＥＭ（经测序比对均 为ＴＥＭ．１型）、ＣＡＲＢ（经测序比对为ＣＡＲＢ．２型）；Ｃ 类Ｂ一内酰胺酶基因中检出ＡＤＣ（经测序比对均与登录 号为ＥＦ５６９５８８的ＡＤＣ序列相同，但由于该登录号未 命名亚型，本组序列与ＡＤＣ．３０型最接近，仅有一个
Ｓｔｕｄｙ
ｏｎ［Ｉ－ｌａｃｔａｍ
ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ｐａｎｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ
Ａｃ觑ｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ
Ｗａｎｇ Ｃｈｕｕ－ｘｉｎｌ，Ｇｅｎｇ Ｘｉａｎ－ｌｏｎ９１，Ｘｕ＇ｉｒａ—ｆｅｎ９１，Ｃｈｅｒｔ Ｇｕｏ—ｑｉａｎｌ，Ｚｈａｏ Ｑｉｌ，Ｚｈｏｕ
鲍曼不动杆菌相关耐药机制
鲍曼不动杆菌相关耐药机制（一）对ß-内酰胺类抗生素的耐药机制1）质粒介导或染色体突变使细菌产生ß-内酰胺酶通过水解或非水解方式破坏ß-内酰胺环使抗生素失活这是大多数病菌对ß-内酰胺类抗生素产生耐药的主要机制。
金属酶属Ambler B类ß-内酰胺酶属于Bush功能分类3群。
根据金属ß-内酰胺酶的底物特征将其分为3a、3b、3c三个亚群。
不动杆菌产生的能水解碳青霉烯类的金属酶属3a亚群。
目前报道的有IMP一1、IMP-2、IMP-4、IMP5及VIM1、VIM2等。
该类酶能介导碳青霉烯类、头孢他啶、拉氧头孢等抗生素耐药性而对哌拉西林和氨曲南敏感性不受影响。
其活性不被克拉维酸等抑制剂抑制但可被乙二胺四乙酸(ED-AT)所抑制。
2）碳青霉烯水解酶(OXA）即苯唑西林水解酶为染色体介导。
OXA型酶为Ambler分子结构分型为D类ß-内酰胺酶属Bush功能分类2d群。
D类OXA型酶可使碳青霉烯类抗生素失活但其水解活性明显低与金属ß-内酰胺酶[32]。
但是随着插入序列ISAbal的发现对OXA型碳青霉烯酶介导鲍曼不动杆菌碳青霉烯类抗生素的耐药作用有了新的认识研究发现鲍曼不动杆菌特有的插入序列ISAbal常与OXA-23,OXA-51组基因关系密切其与基因传递关系密切并且能够很大程度上增强这些耐药基因的表达水平从而介导不动杆菌对ß-内酰胺类抗生素的高水平耐药[33]。
一些OXA酶能够水解广谱头孢菌素比如OXA型超广谱酶有些OXA型酶能水解碳青霉烯抗菌药物。
最早在鲍曼不动杆菌中发现的具有碳青霉烯酶活性的OXA酶是OXA-23在1985年苏格兰一株临床分离的鲍曼不动杆菌种发现当时碳青霉烯类抗生素尚未在临床开始使用。
之后陆续在英国、巴西、玻里尼西亚、新加坡、韩国和中国出现。
现已确认为OXA-51/69-like是鲍曼不动杆菌染色体天然携带的一组碳青霉烯酶基因。
鲍曼不动杆菌多重耐药及转座子Tn1548携带频率的研究
３ 讨 论
转 座 子 （ｒｎ ｐ ｓｎ ） 在 单 个 细 胞 基 因组 内 ｔａ ｓｏ ｏ ｓ 是 可 以随机 移动 的独立 ＤＮＡ 序 列 。转座 子 可位 于 质 粒 或染 色体 上 。细 菌 转 座 子 可 携 带 ８内酰胺 酶 、 一
ｍｍｏ／ Ｋ １１ ｍｍｏ／ （ ｌＬ、 Ｃ ０ ｌＬ、 ＮＨ４ ２ Ｏ ｍｍｏ／ 、 ） Ｓ ４８ ｌＬ
Ｍｇ １ ２ Ｃ ２ ｍｍｏ／ ｌＬ、ＴｒｓＨＣｌ（ Ｈ９ ｉ － ｐ ．０） １ ｍｍｏ ／ ０ ｌ Ｌ、 ＮＰ ｏ ． ４０ ５％ 、 Ａ ． ２ （ ｖ 、 ｑ ＤＮＡ ｏ Ｕ ＢＳ ０ ０ ｗ／ ） Ｔａ ｐ ｌ１
２ 结 果
１ １ 菌 株 来源 ６ ． ２株 ＭＤＲ ＡＢ 均 分 离 自 ２ ０ － Ａ ０７ 年 ｌ 月－０ ８年 ２月 问 浙江 大学 医学 院 附属第 一 医 １ ２０
２ １ 药敏 试 验 结 果 ６ ． ２株 ＭＤＲ ＡＢ 对 ２ － Ａ Ｏ种 抗 菌 药 物的药 敏试 验结 果 见表 １ 。 ２ ２ Ｐ Ｒ 结 果 ６ ． Ｃ ２株 ＭＤＲ ＡＢ 中 ３ — Ａ ４株 检 出 ｔ ｐ 基 因 片 段 ， 性 率 ５ ． 。ｔｐ 基 因 Ｐ Ｒ ｎＵ 阳 ４８ ｎＵ Ｃ 产 物测 序 后 经 Ｂ ＡＳ Ｌ Ｔｎ比对 ， Ｇｅ Ｂ ｎ 与 ｎ ａ ｋ已登 录
ＡＢ 已成为 医 院感 染 的重要 病 原菌 ， 菌严 重 耐 药 Ａ 该 性 似乎 已到无 药可 用境 地 。获得 产 酶耐药 基 因是该 类 菌重 要的耐 药机制 。质粒 、 座子 、 转 整合 子 等可 移 动的遗 传元 件 （ ｂｌ ｅ ｅｉ ｅｅ ｎ ｓ ｍｏ ｉ ｇ ｎ ｔ ｌｍｅ ｔ）是产 酶 耐 ｅ ｃ 药 基 因 重要 的载 体 。 国 内 已有 ＭＤ － Ａ 整 合 子 Ｒ ＡＢ 的检 测报告 Ｌ ］ １ 。但 ＭＤＲ ＡＢ 的 转座 子 遗 传标 记 － Ａ 检 测报告 鲜见 。２ ０ ０ ７年 ｌ Ｏ月 Ｄｏ 等从 ＭＤ — Ａ ｉ Ｒ ＡＢ
多重耐药菌定义
Hale Waihona Puke 多重耐药（泛耐药）鲍曼不动杆菌
鲍曼不动杆菌通过质粒、转座子或整合子等可移动基因元件，获得对多种抗菌药物的耐药性。多重耐药鲍曼不动杆菌（MDR-AB）是指对5类抗菌药中的3类及以上药物耐药，为多重耐药菌株，包括头孢菌素类（如头孢他啶或头孢吡肟）、碳青霉烯类（如亚胺培南）、β-内酰胺酶抑制剂（如头孢哌酮/舒巴坦）、氟喹诺酮类（如环丙沙星）和氨基糖苷类（如阿米卡星）。若对以上看菌药物均耐药，包括头孢吡肟、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/三唑巴坦、环丙沙星、左氧氟沙星则称之为泛耐药鲍曼不动杆菌（PDR-AB）（但不包括对多粘菌素及替加环素）。鲍曼不动杆菌科广泛定制与医院内各种干燥或潮湿物体表面（如窗帘、门把手、机械通气设备等）和人体皮肤，往往是造成该菌在医院内传播的重要原因。
耐万古霉素肠球菌
肠球菌属通常存在于人体肠道和女性生殖道中，而且常常存在于环境中，这类细菌可造成感染。万古霉素常常作为治疗肠球菌属感染的最后有效抗菌药物，某些情况下，肠球菌属对万古霉素产生耐药（若MIC=16ug/ml，则肠球菌对万古霉素中敏；若16ug/ml∠MIC∠64ug/ml,则需应用E试验来确定肠球菌对万古霉素耐药；若MIC≥64ug/ml则确认为肠球菌对万古霉素耐药），这类细菌称为耐万古霉素肠球菌（VRE），大多数的VRE感染通常发生在医院内。
耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌CRE（对亚胺培南、美罗培南和厄他培南中任一种耐药者）
多重耐药（泛耐药）铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌可以通过获得各种β-内酰胺酶编码基因、广谱或超广谱β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶、借助整合子qacEE基因对抗菌药物或消毒剂耐药。对5类抗菌药中的3类及以上药物耐药，为多重耐药株，包括头孢菌素类（如头孢他啶或头孢砒腭）、碳青霉烯类（如亚胺培南）、β-内酰胺酶抑制剂（如头孢哌酮/舒巴坦）、氟奎洛酮类（如环丙沙星）和氨基糖苷类（如阿米卡星）。若对以上抗菌药物均耐药，包括头孢砒腭、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/三唑巴坦、环丙沙星、左氧氟沙星则称之为泛耐药铜绿假单胞菌（PDR-PA）。铜绿假单胞菌适宜在潮湿环境中生长，氧气湿化瓶、沐浴头、医疗器械等常有铜绿假单胞菌的污染，常常为造成医院内感染暴发的主要原因。
替加环素与米诺环素对多药耐药及泛_省略_药鲍氏不动杆菌的体外抗菌活性分析_褚少朋
收稿日期：２０１２－０４－１５ ； 修回日期：２０１２－０５－２０
鲍氏不 动 杆 菌 （ＡＢＡ）是 人 体 重 要 的 条 件 致 病 菌 ，随 着 各 种 侵 入 性 诊 疗 技 术 的 频 繁 使 用 ，该 菌 感 染
中华医院感染学杂志２０１２年第２２卷第１５期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ Ｖｏｌ．２２Ｎｏ．１５ ２０１２
１ 材 料 与 方 法
１．１ 菌 株 来 源 ２０１０ 年 ７ 月 －２０１１ 年 ６ 月 南 通 大 学附属医院各类 临 床 标 本 中，共 筛 选 出 １２７ 株 多 药 耐药或 泛 耐 药 鲍 氏 不 动 杆 菌，其 中 ＭＤＲＡＢ ６０ 株、 ＰＤＲＡＢ ６７ 株 。 １．２ 主要试剂与仪 器 细 菌 鉴 定 使 用 法 国 生 物 梅 里埃 ＡＴＢ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 型 测 试 仪；替 加 环 素 和 米 诺 环素 Ｅ－ｔｅｓｔ试条及 Ｍ－Ｈ 培 养 基 均 购 自 法 国 生 物 梅 里埃公司。质控菌株为铜绿假单胞菌 ＡＴＣＣ ２７８５３ 和大肠埃希菌 ＡＴＣＣ ２５９２２。 １．３ 测 定 方 法 １．３．１ Ｅ－ｔｅｓｔ操作 无 菌 生 理 盐 水 调 ０．５ 麦 氏 单 位菌液，按 标 准 Ｋ－Ｂ 法 将 菌 液 涂 布 于 Ｍ－Ｈ 平 板 表
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ ａｎｄ ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ ａｇａｉｎｓｔ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ （ＭＤＲＡＢ）ａｎｄ ｐａｎｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ （ＰＤＲＡＢ）ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＭＩＣｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｄｒｕｇｓ ａｇａｉｎｓｔ ＭＤＲＡＢ ａｎｄ ＰＤＲＡＢ，ｓｏ ａｓ ｔｏ ｉｎｓｔｒｕｃｔ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ６０ ＭＤＲＡＢ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ６７ＰＤＲＡＢ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｊｕｌ，２０１０ｔｏ Ｊｕｎ，２０１１．Ｅ－ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ
鲍曼不动杆菌生物膜形成和耐药性的研究进展
鲍曼不动杆菌生物膜形成和耐药性的研究进展鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,ABA) 是非发酵糖的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界和人体的各个部位，是医院感染最常见的病原菌之一。
近年来临床分离的致病菌中ABA 逐年增多，对常见抗生素的耐药率达84.96％，给临床治疗带来了极大困难[1]。
ABA 具有多重耐性及耐药途径多的特点，生物膜的形成是其出现多重耐甚至泛耐药的主要原因，当人体免疫系统受损时，细菌容易在人体组织或导尿管等医疗设备形成生物膜[2] ，了解最新国内外ABA 的生物膜相关信息对我们研究ABA 具有重要意义，本文就ABA 生物膜的形成和耐药性的研究进展作一综述。
1 鲍曼不动杆菌生物膜的结构和功能细菌生物膜被膜又称菌膜，是细菌为适应自然环境在生长过程中吸附于医学辅材或机体黏膜表面后形成的特殊形式菌群，生物膜的启动和发展，并不只是一个细菌偶然的表面黏附，相反是一个高度调控的一系列变化过程[3]。
鲍曼不动杆菌具有较强的黏附功能，细菌很容易吸附于人体组织或物体表面，通过自身分泌胞外多糖基质，脂蛋白和纤维蛋白的复合物使细菌互相粘连形成菌膜[5]，当环境刺激细胞并通过胞外多糖基质、表面蛋白等之间的信号表达引来其它ABA 的聚集，通过细胞的双组分泌调节系统产生的细菌群体感应效应，促使浮游生物和微菌落互相融合，使其逐渐形成一个彼此之间有液体通道相连的三维聚合物网状结构的成熟的生物膜[4] 。
ABA 生物膜的形成一般包括如下过程：（1）细菌利用菌毛等胞外细菌器不稳定的吸附在载体表面上，此为可逆过程。
（2）通过细菌分泌的胞外多糖等基质使细菌不断增殖和积累而形成多层微菌落，此为不可逆过程。
（3）生物膜通过形成聚合物的结构而形成生物膜的初级结构，在细菌的群体感应系统（QS）的不断作用下使菌膜的厚度增加形成成熟的生物膜结构。
（4）成熟的生物膜在内在调节和外部作用下部分脱落不断释放细菌，向远处传播使之形成新的生物膜[5]。
多重耐药鲍曼不动杆菌流行及诊治
临床表现
• • • • • • 发热100%, 轻度意识障碍49%, 头痛26% ， 抽搐 7.8% 脑膜炎的诊断时间35 + 16 h (2–72) 6/39出现脑脓肿
Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2008) 61, 908–913
微生物学
• 混合感染17例，33.3%，包括
常用鉴定方法(六)
全基因组测序分类法
优点：最可靠的 鉴定手段。 缺点：费时费力， 对实验室要求高， 无法大规模应用 于临床。
PLoS One. 2013;8(1):e54287. doi: 10.1371/journal.pone.0054287. Epub 2013 Jan 24.
临床常见不动杆菌属细菌 （不同分类法结果比较）
– 铜绿假单胞菌5例 – 表皮葡萄球菌5例 – 金黄色葡萄球菌3例 – 粪肠球菌2例 – 阴沟肠杆菌2例
Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2008) 61, 908–913
抗菌药物使用
Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2008) 61, 908–913
多重耐药菌（MDR）：不同菌种 定义不完全一致
通用定义：对三种以上不同类别的抗菌药物耐药的细菌
针对主要非发酵菌
多重耐药菌（Multidrug-resistance)：
对以下≥3类抗菌药物耐药 抗假单胞菌头孢菌素（头孢他啶、头孢吡肟） 抗假单胞菌碳青霉烯类抗生素（亚胺培南、美罗培南） 含有β内酰胺酶抑制剂的复合制剂 氟喹诺酮类 氨基糖苷类
Acb complex (329) Acb complex (6) Acb complex (131), A.lwoffii (3)* A.baumannii (35) Acb complex (35)* Non-Acinetobater spp. (1)* Acb complex (34) A.haemolyticus (2) A.johnsonii (4)
泛耐药鲍氏不动杆菌携带多种转座子与插入序列
论 著泛耐药鲍氏不动杆菌携带多种转座子与插入序列许亚丰1,王春新1,陈国千1,耿先龙1,赵琪1,周丽珍1,糜祖煌2(1.南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科,江苏无锡214023; 2.无锡市克隆遗传技术研究所,江苏无锡214026)摘要:目的 调查泛耐药鲍氏不动杆菌(P DRA B)临床分离菌株中8种转座子、插入序列遗传标记的存在情况。
方法 收集南京医科大学附属无锡人民医院2010年3-5月临床标本中分离的P DRA B 共20株,采用微量肉汤稀释法进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析8种转座子、插入序列遗传标记。
结果 20株鲍氏不动杆菌(A BA )对15种抗菌药物均耐药,20株PDR AB 均检出转座子、插入序列,包括ISCR1、tnpU 、IS26、ISaba1、IS903,检出率分别为100.0%、95.0%、95.0%、95.0%、10.0%;18株同时携带tnpU 、ISCR1、IS26、ISaba1等4种基因;1株同时携带tnpU 、ISCR1、IS26、IS903、ISaba1等5种基因;1株同时携带ISCR1、IS903等2种基因;未检出ISEcp1、ISaba4、I Saba9。
结论 A BA 对 内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等药物呈泛耐药,可能与它们携带多种转座子、插入序列等可移动遗传元件相关。
关键词:鲍氏不动杆菌;转座子;插入序列;泛耐药中图分类号:R378 文献标识码:A 文章编号:1005 4529(2011)13 2651 04Investigation of transposons and insertion sequencesin pandrug resistant acinetobacter baumaniiXU Ya feng *,WAN G Chun x in,CH EN Guo qian,GENG Xian long,ZH AO Qi,ZH OU Li zhen,M I Zu huang (*Wux i Peop le s H osp ital A f f iliated to N anj ing Medical University ,Wux i ,J iangsu 214023,China)Abstract:OBJECTIVE T o investig ate the distr ibut ion o f tr ansposons and insert ion sequences in pandr ug r esistant A cinetobacter baumanii (A .baumanii ).METHODS F ro m M ar 2010t o M ay 2010,20st rains o f pandr ug r esistant A .baumanii w ere collected fro m Wux i Peo ple s Ho spital A ffiliated w ith N anjing M edical U niv er sity ,China.T hen,8kinds of tr ansposons and insertio n sequences w ere analy zed by PCR and v erificated by DN A sequencing.RESULTS All 20strains of pandrug resistant A .baumanii wer e r esistant to 15kinds of ant imicro bial ag ents.A nd the transposons and inser tio n sequences wer e detected in 20st rains of A.baumanii ,and 20st rains(100.0%),19stra ins(95.0%),19str ains(95.0%),19str ains(95.0%),2stra ins (10.0%)wer e detected to carr y ISCR1,tnpU ,IS26,I Saba1,I S903,respect ively.Fur ther mor e,18strains wer e det ected to car ry 4kinds of g enes (tnpU ,ISCR1,IS26,ISaba1);1st rain w as detected to car ry 5kinds of g enes (t npU ,ISCR1,IS26,IS903,ISaba1);and 1strain w as det ected to car ry 2kinds of g enes (ISCR1,IS903).H ow ever ,3other kinds of genes:ISEcp1,ISaba4,ISaba9,could not be detected.C ONCLUSION Car ry ing tr ansposons and inser tio n sequences in this g r oup of pandr ug resistant A .baumanii may play a r ole in resistance to beta lactams,aminog ly cosides and quino lo nes.Key words:A cinetobacter baumanii ;T r ansposon;Insert ion sequence;P andrug resistance收稿日期:2011 03 07; 修回日期:2011 04 25基金项目:无锡市医院管理中心科技发展基金项目(YG M 1001)通讯作者:王春新,E mail:wang cx star@多药耐药鲍氏不动杆菌(M DR ABA)和泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB)所引起的感染已是临床十分棘手的问题,且MDR ABA 和PDRAB 株已播散至全球各地[1 3]。
牛源鲍曼不动杆菌的鉴定及体外药敏试验
牛源鲍曼不动杆菌的鉴定及体外药敏试验王孝武;王旭荣;李建喜;王学智;林杰;杨志强【摘要】为鉴定山西省某奶牛场引起奶牛子宫内膜炎的相关病原菌.采用细菌分离培养、革兰染色镜检和16S rDNA测序分析法对采集的奶牛子宫分泌物进行细菌鉴定;通过体外药敏试验和小鼠致病性试验检测其耐药性和致病性,并与已知序列进行比对,了解其亲缘性.结果显示,共分离到1株鲍曼不动杆菌,该株菌与中国内地和美国的分离菌株属于同一分支,且与美国的分离菌株亲缘较近;该菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、卡那霉素、链霉素、庆大霉素、红霉素、先锋霉素Ⅳ均耐药;对小白鼠有较强的致病性.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2015(024)005【总页数】5页(P13-17)【关键词】鲍曼不动杆菌;子宫内膜炎;奶牛【作者】王孝武;王旭荣;李建喜;王学智;林杰;杨志强【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州 730050【正文语种】中文【中图分类】S857.2+3鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是一种革兰阴性球杆菌、短棒状，稳定期呈球状，属于奈瑟氏球菌科(Neisseriaceae)不动杆菌属(Acinetobacter)。
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论 著泛耐药鲍氏不动杆菌携带多种转座子与插入序列许亚丰1,王春新1,陈国千1,耿先龙1,赵琪1,周丽珍1,糜祖煌2(1.南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科,江苏无锡214023; 2.无锡市克隆遗传技术研究所,江苏无锡214026)摘要:目的 调查泛耐药鲍氏不动杆菌(P DRA B)临床分离菌株中8种转座子、插入序列遗传标记的存在情况。
方法 收集南京医科大学附属无锡人民医院2010年3-5月临床标本中分离的P DRA B 共20株,采用微量肉汤稀释法进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析8种转座子、插入序列遗传标记。
结果 20株鲍氏不动杆菌(A BA )对15种抗菌药物均耐药,20株PDR AB 均检出转座子、插入序列,包括ISCR1、tnpU 、IS26、ISaba1、IS903,检出率分别为100.0%、95.0%、95.0%、95.0%、10.0%;18株同时携带tnpU 、ISCR1、IS26、ISaba1等4种基因;1株同时携带tnpU 、ISCR1、IS26、IS903、ISaba1等5种基因;1株同时携带ISCR1、IS903等2种基因;未检出ISEcp1、ISaba4、I Saba9。
结论 A BA 对 内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等药物呈泛耐药,可能与它们携带多种转座子、插入序列等可移动遗传元件相关。
关键词:鲍氏不动杆菌;转座子;插入序列;泛耐药中图分类号:R378 文献标识码:A 文章编号:1005 4529(2011)13 2651 04Investigation of transposons and insertion sequencesin pandrug resistant acinetobacter baumaniiXU Ya feng *,WAN G Chun x in,CH EN Guo qian,GENG Xian long,ZH AO Qi,ZH OU Li zhen,M I Zu huang (*Wux i Peop le s H osp ital A f f iliated to N anj ing Medical University ,Wux i ,J iangsu 214023,China)Abstract:OBJECTIVE T o investig ate the distr ibut ion o f tr ansposons and insert ion sequences in pandr ug r esistant A cinetobacter baumanii (A .baumanii ).METHODS F ro m M ar 2010t o M ay 2010,20st rains o f pandr ug r esistant A .baumanii w ere collected fro m Wux i Peo ple s Ho spital A ffiliated w ith N anjing M edical U niv er sity ,China.T hen,8kinds of tr ansposons and insertio n sequences w ere analy zed by PCR and v erificated by DN A sequencing.RESULTS All 20strains of pandrug resistant A .baumanii wer e r esistant to 15kinds of ant imicro bial ag ents.A nd the transposons and inser tio n sequences wer e detected in 20st rains of A.baumanii ,and 20st rains(100.0%),19stra ins(95.0%),19str ains(95.0%),19str ains(95.0%),2stra ins (10.0%)wer e detected to carr y ISCR1,tnpU ,IS26,I Saba1,I S903,respect ively.Fur ther mor e,18strains wer e det ected to car ry 4kinds of g enes (tnpU ,ISCR1,IS26,ISaba1);1st rain w as detected to car ry 5kinds of g enes (t npU ,ISCR1,IS26,IS903,ISaba1);and 1strain w as det ected to car ry 2kinds of g enes (ISCR1,IS903).H ow ever ,3other kinds of genes:ISEcp1,ISaba4,ISaba9,could not be detected.C ONCLUSION Car ry ing tr ansposons and inser tio n sequences in this g r oup of pandr ug resistant A .baumanii may play a r ole in resistance to beta lactams,aminog ly cosides and quino lo nes.Key words:A cinetobacter baumanii ;T r ansposon;Insert ion sequence;P andrug resistance收稿日期:2011 03 07; 修回日期:2011 04 25基金项目:无锡市医院管理中心科技发展基金项目(YG M 1001)通讯作者:王春新,E mail:wang cx star@多药耐药鲍氏不动杆菌(M DR ABA)和泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB)所引起的感染已是临床十分棘手的问题,且MDR ABA 和PDRAB 株已播散至全球各地[1 3]。
细菌的质粒、转座子、插入序列和整合子都是可移动遗传元件(M GE)。
可移动遗传元件将自身的基因序列以及所携带的基因(包括耐药基因和毒力基因)在同种细菌菌株之间,甚至不同种细菌菌株之间传递,从而使其所携带的耐药基因快速传播[4]。
最近我院分离到一组PDRAB,为了解PDRAB 转座子、插入序列遗传标记存在状况,我们对20株PDRAB 进行了8种转座子、插入序列遗传标记检测,现报道如下。
1 材料与方法1.1 菌株 20株PDRAB均分离自2010年3-5月,南京医科大学附属无锡人民医院住院患者临床标本,其中痰液16份,尿液3份,伤口分泌物1份。
1.2 细菌鉴定与药敏试验 所有菌株鉴定及药敏试验采用法国生物梅里埃公司的VITEK 32全自动微生物分析系统,抗菌药物包括阿米卡星、氨苄西林、头孢唑林、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、头孢噻肟、头孢西丁、头孢他啶、头孢呋辛钠、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢呋辛酯。
质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC28753和鲍氏不动杆菌ATCC19606,购自卫生部临床检验中心。
1.3 细菌处理 挑纯培养菌落置入0.5m l离心管内(内预置200ng/ml蛋白酶K溶液200 l),56 水浴2h,改95 水浴10min,再加纯水500 l,即为基因检测的模板液,-20 冰箱保存备用。
1.4 基因检测 转座子、插入序列遗传标记检测均为PCR法。
各种靶基因PCR扩增体系均为:每反应体系P1引物1 l(1.0 m ol/L)、P2引物1 l (1.0 m ol/L),dNT Ps2 l(2m mol/L),10倍缓冲液2 l[KCl10mm ol/L,(NH4)2SO48mm ol/L, Mg Cl22m mol/L,T ris H Cl(pH9.0)10mm ol/L, NP400.5%,BSA0.02%(w/v)],T aq DNA pol1U (不计体积),超纯水9 l,模板液5 l,总反应体积20 l。
PCR扩增产物热循环参数均为:93 预变性2m in,然后93 30s 55 30s 72 60s,循环35周期,最后一个72 延长至5min。
产物经2%琼脂糖凝胶电泳,出现与阳性对照分子相当的目的条带为阳性。
耐药基因检测试剂盒、靶基因PCR 引物序列和阳性对照DNA由无锡市克隆遗传技术研究所提供。
靶基因引物识别序列和目的产物长度见表1。
1.5 阳性基因测序 PCR阳性产物为PCR直接全自动荧光法测序,委托上海博尚生物技术有限公司完成(测序在美国ABI公司3730型毛细管全自动测序仪上进行)。
1.6 测得序列比对 读序工具软件为Chrom as,测序结果用Chrom as直接作比对。
2 结 果20株ABA对15种抗菌药物均耐药,20株PDRAB均检出转座子、插入序列,其中18株同时表1 靶基因引物识别序列和目的产物长度Table1 T he pr imers sequence of ta rget g enes andthe length of ta rget pr oduct名 称引物序列(5 3 )产物长度(bp) tnpU P1:CCAACTGAT GGCGGTGCCT T403 P2:CGGT ATGGTGGCT TT CGCISCR1P1:ATGT CGCT GGC AAGGAACGC240 P2:GGGTT CGCTGCGAGGAT T GTIS26P1:CACATGAACCCAT TC AAAGGCC240 P2:TCT T TGCCCGTGGCACAT GGAT GAAIS903P1:GCAAT ACGCACGCTT T CAGGC240 P2:ACTGCACGGTT ACGGT CT GCAISEcp1P1:CTT CAT TGGCATT GATAAGT TAG299 P2:T GTAGCAT CGGT TT CCCAGT TT CISaba1P1:AATGAT TGGTGACAAT GAAG372 P2:ATGCAGCGC TT CT TT GC AGGISaba4P1:TT ACGGAT AAGCCAAAGATT T AATC303 P2:AGAGGCT AC ATT AGC CAACCATT AISaba9P1:GT T GT T ACTCAGCCCCT GAGA240 P2:ACGCT GAATGAGCT GT GCCAT携带tnpU、ISCR1、IS26、ISaba1等4种;1株同时携带tnpU、ISCR1、IS26、IS903、ISaba1等5种;1株同时携带ISCR1、IS903等2种;未检出ISEcp1、ISaba4、ISaba9。