4-1-1 综合训练 抗生素效价的微生物学测定
抗生素效价的测定方法
抗生素效价的测定方法1. 磁敏感性法：该方法是将细菌和抗生素共同培养在琼脂平板上，然后在琼脂平板的一侧放置磁性探针，通过磁力对菌落的影响，测定抗生素效价。
这种方法操作简单，结果可重复性好。
2. 微量滴定法：该方法是将不同浓度的抗生素加入含有微生物的培养基中，控制每次加量相同，直至培养基中出现明显的抑菌圈，然后根据最小抑菌浓度来测定抗生素的效价。
这种方法对药物浓度的变化比较敏感，但误差较大。
3. 黏度测定法：该方法是根据细菌代谢后产生的黏性物质的变化，来测定抗生素的效价。
该方法操作简单，但对试验条件较为严格。
4. 限制性酶切割法：该方法是将抗生素和细菌混合后，通过限制性酶将其切割成小片段，进而测定抗生素的效价。
这种方法需使用限制性酶切割试剂和设备，相对较为复杂。
5. 形态学观察法：该方法是观察抗生素对细菌的形态和结构的影响，来判断抗生素的效价。
这种方法适用于细菌的菌落比较大的情况，但操作比较繁琐。
6. 代谢产物测定法：该方法是根据细菌代谢产物的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法操作比较简单，但对试验条件较为严格。
7. 荧光标记法：该方法是将抗生素用荧光标记，然后与细菌共同培养，通过荧光强度的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件要求比较高，但结果可靠性较高。
8. 酶联免疫吸附测定法：该方法是将抗生素用于特定的抗体结合，然后通过检测抗体与细菌结合的情况，来测定抗生素的效价。
这种方法的优点是灵敏度高，同时避免了细菌对抗生素的耐药性。
9. 质谱法：该方法是使用质谱仪分析样品中的分子质量的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法可分析多种抗生素，但设备价格昂贵。
10. 核磁共振法：该方法是使用核磁共振仪测定样品中的氢、碳、氮等原子的共振频率和空间结构，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件的要求非常高，且设备也价格昂贵。
测定抗生素效价的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，应根据具体情况选择合适的方法，以确保测定结果的准确性和可靠性。
抗生素效价的测定
单位（unit,位 以抗生素的生物活性部分重量作单 位
１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单 位。
２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重量 作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸 盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克（ｕ ｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。这是 根据国际使用习惯而来的。
2 供试品及标准品的配制
标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。 供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。 称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反 复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免 吸水。
标准品的称量最好用1/100,000克的分析天 平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平 。天平中的干燥加入剂应保持经常注意更换。
３、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为单 位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位
４、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量 定为一单位。
微生物发的分类
稀释法 浊度法 双碟法
2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中 对试验菌生长的抑制作用，通过测定培 养后细菌浊度值的大小，比较标准品与 供试品对试验菌生长抑制的程度，以测 定供试品效价的种方法。
抗生素效价赵微永成生生物工检10定01 法
4104100139
1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量 便具有选择性地杀死或抑制其他病原微 生物生长的一类天然有机化合物。
抗生素的生物检定是以抗生素对微 生物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
一、抗生素的效价和单位
抗生素的含量用效价和单位表示。该 词有时不加区别统称为效价单位。
抗生素微生物效价测量实验的研究
抗生素微生物效价测量实验的研究抗生素微生物效价测量实验的研究一、实验简介：抗生素微生物效价检定法是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。
此方法恰好与临床应用的要求相符合，能够确定抗生素的医疗价值，虽然随着仪器分析的发展，部分抗生素含量测定被物理、化学方法所代替，但微生物效价检定法仍然作为抗生素含量测定的经典方法之一被各国药典所采用。
抗生素微生物效价测定法可分为稀释法、比浊法和渗透法三类[1]，通常稀释法用于测定药物的MIC，各国药典均未收载该方法。
除中国药典外，《USP》23 版第六增补版，《BP》1998，《EP》1997第三版，《日抗基》1998均收载了比浊法，其优点是采用液体培养基，无扩散因素的影响。
试验过程短于渗透法。
轩书堂[2]也曾用比浊法测定过泰乐星效价，但该法要求仪器设备较高，且菌种容易污染，故一直未被中国药典所采用。
《日本药局方》虽然收载了该方法，但几乎没有机构使用。
渗透法也称扩散法，其中管碟扩散法即管碟法是国内外最常用的方法。
中、美、英、日和欧洲药典均收载了该方法。
管碟法是利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将抗生素稀释液加入已放置含有高度敏感性的试验菌培养基的小管内，经培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，形成一定浓度的球型区，产生透明的抑菌圈。
通过测量抑菌圈的大小可进行效价计算。
管碟法分为一剂量法，二剂量法，三剂量法三种。
一剂量法是用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，以换算出效价。
该方法较为繁琐，目前除《日抗基》1998及《USP》23 版收载外，其他药典均未收载，而《中国药典》自1997年版后已经淘汰了该方法。
基于抗生素对微生物作用所产生的抑菌圈的大小是随着抗生素剂量的变化而变化，是可以测量的，二剂量法采用标准品与供试品对比试验的平行线原理，实验设计出其浓度与反应的直线关系。
抗生素效价测定实验报告
抗生素效价测定实验报告抗生素效价测定实验报告引言：抗生素是一类能够抑制或杀灭细菌生长的药物，广泛应用于医疗领域。
然而，由于抗生素的滥用和不当使用，导致了细菌的耐药性问题日益严重。
为了更好地控制抗生素的使用和开发新的抗生素药物，了解抗生素的效价是非常重要的。
本实验旨在通过测定抗生素的效价，为抗生素研发和临床应用提供参考。
材料与方法：1. 实验菌株：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 抗生素：选择一种常见的抗生素，如青霉素。
3. 培养基：选择适合实验菌株生长的培养基。
4. 细菌培养器：提供适合细菌生长的环境条件。
5. 稀释液：用于制备不同浓度的抗生素溶液。
6. 培养皿：用于培养细菌和抗生素溶液的混合物。
7. 灭菌器：用于灭菌培养皿和其他实验用具。
8. 显微镜：用于观察细菌生长情况。
实验步骤：1. 准备工作：将培养皿和其他实验用具放入灭菌器中进行灭菌处理，以防止实验中的污染。
2. 制备抗生素溶液：根据实验要求，将抗生素溶解在稀释液中，制备不同浓度的抗生素溶液。
3. 制备菌液：将实验菌株接种到含有适合其生长的培养基中，培养至合适的生长期。
4. 稀释菌液：将培养好的菌液按照一定比例稀释，以获得一定浓度的菌液。
5. 实验操作：在灭菌的培养皿中加入一定量的抗生素溶液和稀释后的菌液，使其均匀混合。
6. 培养细菌：将培养皿放入细菌培养器中，提供适合细菌生长的条件，培养一定时间。
7. 观察结果：使用显微镜观察培养皿中细菌的生长情况，记录下不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
结果与讨论：根据实验结果，我们可以得到不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
通常情况下，抗生素浓度越高，细菌的生长受到的抑制作用也越强。
通过对比不同浓度下的细菌生长情况，我们可以确定抗生素的效价。
效价越高的抗生素，其抑菌作用越强，对细菌的杀灭效果也越好。
实验中还可以进行一些控制实验，以确保结果的准确性。
例如，可以设置对照组，即不加入抗生素的培养皿，以观察细菌的正常生长情况。
第四章抗生素效价的微生物检定法
授课人:汪穗福(高级讲师) 苏惠虹(助理讲师)
广州市医药中专学校
教学目标：
１.解释抗生素概念、叙述医疗用抗生素特点、 了解抗生素的主要作用机制
２.叙述抗生素的效价和单位及其表示方法 ３.熟知抗生素效价检定操作流程与基本要求 ４.述说测定原理。 教学重点： 抗生素概念、医疗用抗生素特点、抗生素的效价 和单位及其表示方法 抗生素效价检定操作方法与基本要求
单位（unit,u）：是衡量抗生素有效成分 的具体尺度。
二、抗生素的效价单位的表示方法
１、质量单位 以抗生素的生物活性部分质量作 单位，１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０ ００单位。
２、类似质量单位 以特定的纯粹抗生素盐类 的质量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四 环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内） １微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００ 个单位。
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第三节 管碟法测定操作
教学目标：
熟知抗生素效价检定操作流程与基本要求
教学重点： 抗生素效价检定操作方法与基本要求
教学难点：
抗生素效价检定操作方法
第三节 管碟法测定操作
1. 试验用菌液、缓冲液、培养基的制备 按药 典规定进行制备。
2. 标准品与供试品溶液的制备 按药典规定制备标准品 与供试品高低不同浓度溶液。
抗生素效价检定管碟法操作流程:
标准品的称量 →标准品的稀释→标准品溶液 --─┐
缓冲液的制备
供试品的称量 →供试品的稀释→供试品溶液 ─┐
┌───平板的制备────┐
（二）抑菌圈的形成
1、抑菌圈： 将不锈钢小管(俗称为牛津杯)
放置在含敏感试验菌的琼脂培养 基上，将抗生素溶液注入小钢管 中，抗生素分子随溶剂向培养基 内呈球面状放射状扩散。同时将 培养基置入适宜试验菌生长的培 养箱中，琼脂培养基中的试验菌 开始生长。抗生素分子在琼脂培 养基中的浓度，随离开小钢管的 距离增大而降低，离小钢管愈远， 琼脂培养基中抗生素分子愈少， 相应的抗生素浓度愈低。当抗生 素分子扩散到一定时间，在小钢 管周围形成一个能有效的抑制试 验菌生长的范围，也就是通常所 说的抑菌圈。
抗生素效价的测定
微生物发的分类
• 稀释法 • 浊度法 • 双碟法
• 2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中对 试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后 细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品 对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品 效价的种方法。
3、管碟法：是利用抗生 素在含敏 感试验菌的 琼脂培养 基中的球面 扩散渗透 作用，从而 形成一定的抑菌圈。 通 过 琼 脂培 养 基 ，可 观 察并测量 出抑菌圈的 大小。
管碟法测定操作
• 1. 试验用菌液 • 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌 的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面 上，在35~37℃培养20h到22h，；临用前用 水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备 用
2 供试品及标准品的配制
• 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供 试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量 最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取， 取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。 • 标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平， 样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平 中的干燥加入剂应保持经常注意更换。 • 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液， 定容至刻度，过滤并稀释。
（二）抑菌圈的形成
• 在平板底部四边，分别 对角注明“SH”、 “SL” 和“UH”、 “UL”标记 • 将不锈钢小管(俗称为牛 津杯)放置在含敏感试验 菌的琼脂培养基上。
th sl
uh
• 以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至满但不溢出 管外 • 且四杯内液面高度相同， 盖上平皿盖，静置30分 钟。
• 将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中， 琼脂培养基中的试验 菌开始生长。
• 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关； • 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小， 可计算出抗生素的效价。
微生物检定法测抗生素活性效价
微生物检定法测抗生素活性效价概述由于抗生素多为结构复杂的多组分物质，异构体多，且不稳定，容易产生降解杂质，故各国药典均以微生物检定法为主要含量测定法，因为抗生素药品的医疗作用主要是它的抗菌活力，而微生物检定法正是以抗生素的抗菌活力为指标来衡量抗生素效价的一种方法，其测定原理与临床要求相一致，能直接反映抗生素医疗价值，因此一直为各国药典所采用的主要测定方法。
微生物检定法测定抗生素效价，一般可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法三类。
以琼脂扩散法应用最广泛，为目前国际上测定抗生素效价的通用方法。
琼脂扩散法，亦称管碟法。
系采用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
2015版药典四部通则（B）63 501〕的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。
用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）悬液取短小芽孢杆菌（CMCC （B）63 202〕的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26 003〕或〔ATCC29 213〕的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌〔CMCC （B）28 001〕的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面，用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠埃希菌（Escherichia coli）悬液取大肠埃希菌〔CMCC （B）44 103〕的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
抗生素生物效价测定[参考]
![抗生素生物效价测定[参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/ed9845a5dc88d0d233d4b14e852458fb770b38f5.png)
抗生素生物效价测定[参考]抗生素生物效价测定是用来测定抗生素杀菌或抑制菌落生长能力的一种方法。
该方法通过对一定菌种进行抗生素浓度递减系列的稀释，然后观察菌落生长情况来测定抗生素的生物效价。
测定结果可以确定出单位药物中所含抗菌物质的含量，并且通过该结果可以明确指导抗生素的使用。
抗生素生物效价测试的操作步骤如下：实验仪器:清洁平板、无菌匙、无菌棉签、培养皿、移液器、蒸气灭菌器、执卡器、点斑枪。
试验材料:抗生素标准品（如青霉素）、待检物（例如新的抗生素类别）、接种菌种、琼脂片。
操作步骤:1.准备琼脂平板，把琼脂熔化后加入相应的接种菌液并充分混合,倒入无菌平板中，等待琼脂凝固。
2.将待检物或标准品分别通过滴定法配制成一系列浓度递减的抗生素溶液,分别置于移液器或执卡器中。
3.在琼脂平板上均匀涂上少量接种菌液,用无菌点斑枪在琼脂平板上进行不同抗生素浓度的斑点法, 每个浓度上进行三个重复点斑法,保证试验的可靠性和精确度,同时在控制组和空板上也进行斑点法，以和实验组对比。
4.在施抗生素后，将琼脂平板放入恒温器中进行培养。
观察24小时后菌落生长的情况并记录下来。
5.统计不同浓度下的抗生素和菌落生长的比率，画出不同浓度与生长抑制之间的关系曲线。
6.计算抗生素的生物效价，通常以最低有效抑制浓度（MIC）为单位。
其计算公式如下：生物效价=标准品浓度/待检样品浓度。
7.将实验结果与临床使用常规剂量比较，如得出实验效价与常剂相近或更高，则证明该抗生素是有效的。
反之，如果效价较低，则应进一步测试，或对该抗生素进行结构修饰或改进。
抗生素生物效价测定是非常重要的实验手段，它可以确定抗生素的药效值并为临床用药提供科学依据。
在新药物的研发和临床实践中，抗生素生物效价测定是不可或缺的方法，也是提高治疗效果和减少药物滥用的重要手段。
抗生素效价测定方法
抗生素效价测定方法抗生素效价测定方法引言：抗生素是一类用于抑制或杀灭细菌生长的药物。
它们的广泛应用已经在医学领域产生了积极的影响，但随之而来的是细菌对抗生素产生的抗药性问题。
为了准确评估抗生素的效力以及制定合适的治疗方案，科学家们研发了多种抗生素效价测定方法。
本文将深入探讨这些方法的原理、应用和局限性。
正文：一、生物学测定法生物学测定法是一种常见的抗生素效价测定方法，它基于抗生素对细菌的抑制或杀菌作用。
主要包括最小抑菌浓度（MIC）测定和最小杀菌浓度（MBC）测定。
1. 最小抑菌浓度（MIC）测定：MIC测定是通过在含有细菌的培养基上逐渐加入不同浓度的抗生素，观察最低的有效浓度，以抑制细菌的生长或形成可见的生长抑制区域。
这个测定方法通常可以定量地测量出抗生素的最低有效浓度。
2. 最小杀菌浓度（MBC）测定：MBC测定是在MIC测定的基础上，进一步通过将培养基转移到不含有抗生素的培养基中培养，观察最低有效浓度，以杀灭细菌生长。
这个测定方法可以提供更准确的抗生素效价评估，因为它考虑了抗生素的细菌杀菌作用。
二、色谱分析法色谱分析法是一种基于抗生素化学性质的效价测定方法。
它通过使用色谱柱将样品中的抗生素分离出来，并测量其峰面积或峰高，以定量分析其浓度。
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的色谱分析技术，可以有效地分离、定量和鉴定抗生素。
它利用高压泵将样品溶液推入色谱柱，通过样品在固定相和流动相之间的分配系数差异来实现分离。
定量的抗生素效价可以通过峰面积或峰高与标准曲线的关系来计算。
2. 气相色谱法（GC）：GC是一种适用于易挥发性物质的色谱分析方法，在某些情况下可以用于抗生素浓度测定。
样品经过气相柱，抗生素蒸发后进入气相检测器进行分析和定量。
三、生物化学测定法生物化学测定法是一种基于抗生素与生物体或其代谢产物之间的相互作用来评估抗生素效力的方法。
常见的生物化学测定法包括酶抑制测定法和細胞毒性試驗。
抗生素生物效价测定详细参考
---一参照秘斗一一页眉页脚可删除一一实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2.掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于乂集（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）（式 2.10-1）V=（UH+UL）-（SH+SL）（式2.10-2）式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出① 0=D-antilog（IV/W）（式 2.10-3）式中：。
抗生素的测定
抗生素效价的生物测定一、目的要求学习了解抗生素效价的生物测定（管碟法）的基本原理和方法。
二、基本原理某些微生物在代谢过程中所产生的次级代谢产物能在低浓度的情况下抑制或杀死某些微生物，这种物质称为抗生素。
抗生素效价的生物测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。
管碟法是扩散法中的一种，本法是利用抗生素在琼脂培养基的扩散渗透作用，将已知浓度的标准溶液与未知浓度的样品溶液在含有敏感性试验菌的琼脂表面进行扩散渗透，比较两者对被试菌的抑菌作用，求出抑菌圈的大小，以测定抗生素的浓度。
在一定范围内，浓度与抑菌圈直径在双周半对数表上（浓度为对数值，抑菌圈直径为数字值）成直线函数的关系，由此绘制成标准曲线，从样品的抑菌圈大小可在标准曲线上求得其效价。
由于本法是利用抗生素抑制敏感细菌的特点，所以符合临床使用的实际情况，而且灵敏度也很高，不需特殊设备，故一般实验室及生产上多采用此法。
但此法也有缺点，即操作步骤多，手续繁杂，培养时间长、得出结果慢。
尽管如此，由于它有上述的独特优点而被世界各国所公认，成为国际通用的方法被列入各国药典法规的范围内。
本实验以龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）产生的土霉素效价测定为例。
三、器材黄色八叠球菌（Sarcina flava）；（土霉素效价测定用）培养基，（供培养试验菌用）培养基Ⅰ，（供摊布双碟的上、下层用）培养基Ⅱ；培养皿，牛津杯（或不锈小钢管），陶瓦圆盖，50ml、250ml、1000ml容量瓶， 0．1mol/LHCl，土霉素标准品等。
四、操作步骤1．pH6．0磷酸缓冲液的配制准确称取KH2PO40．8g和K2HPO40．2g，置100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，灭菌备用。
2．标准土霉素溶液的配制精确称取20mg土霉素标准品，每毫克含880单位（880r/mg），先用0．1mol/LHCl溶解（按称量每10mg加酸1ml），然后加入无菌蒸馏水稀释成每毫升含1000单位（1000r/ml）的溶液，此液在5℃以下保存。
抗生素效价的测定方法
抗生素效价的测定方法引言抗生素是一类可以抑制或杀灭细菌生长的药物，广泛应用于医疗和农业领域。
抗生素的功效取决于其浓度和效价。
因此，准确测定抗生素的效价对于临床治疗和农业防疫都具有重要意义。
本文将详细探讨抗生素效价的测定方法，包括传统方法和现代方法。
传统方法生物法1.半数致死浓度法：这是最常用的测定抗生素效价的方法之一。
该方法通过将细菌和抗生素溶液一起培养，然后观察细菌生长情况来确定抗生素的效价。
半数致死浓度（MIC）是指在特定细菌培养条件下，抗生素能够抑制细菌生长的最低浓度。
通过逐渐增加抗生素的浓度，观察细菌生长情况，可以确定半数致死浓度，从而确定抗生素的效价。
2.环形扩散法：该方法将抗生素溶液均匀涂抹在培养基的平板上，之后在培养基上均匀撒播细菌。
通过观察细菌生长的抑制圈直径，可以推测抗生素的效价，即抑制圈直径越大，抗生素效价越高。
化学法1.生物活性法：该方法通过测定抗生素和特定细菌的反应，来确定抗生素的效价。
一般会选取对该抗生素敏感的细菌，并观察其生长情况。
通过比较不同浓度的抗生素溶液对细菌生长的抑制程度，可以确定抗生素的效价。
2.光度法：该方法基于抗生素溶液的质量与透过溶液的光的强度之间的关系。
通过使用光度计测量透过溶液的光的强度，可以计算出抗生素的浓度，从而确定其效价。
现代方法分子生物学方法1.PCR法：通过使用聚合酶链式反应（PCR）来测定抗生素效价。
该方法首先提取细菌的DNA，然后在PCR反应中加入不同浓度的抗生素。
根据PCR反应产物的强度和带状图的分析，可以确定抗生素对细菌的抑制能力。
2.荧光标记法：该方法通过将抗生素和荧光物质进行结合，然后观察荧光标记的细菌的生长情况。
荧光信号的强弱可以反映抗生素的浓度，从而确定抗生素的效价。
分析化学方法1.气相色谱法：该方法通过将抗生素溶液进行分离和检测，来测定其浓度和效价。
气相色谱法使用气相色谱仪来分离和定量抗生素化合物。
通过测定抗生素峰的面积和相对保留时间，可以计算出抗生素的浓度和效价。
抗生素生物效价测定(详细参考)
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素生物效价测定
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素效价测定技术—抗生素效价微生物检定法
知识点3：浊度法
四、检定操作方法
（一）线性试验
除另有规定外，取适宜的大小厚度均匀的已灭菌试管，在各试验
管内精密加入含试验菌的液体培养基9. 0ml，再分别精密加入各浓
度的标准品溶液1.0ml，立即混匀，按随机区组分配将各管在规定
条件下培养至适宜测量的浊度值（通常约为4小时）。
知识点3：浊度法
（三）空白试验
线关系，可采用t检验。
4．测定结果的计算及可信限率估计。
5．实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的1 10%，则检验
结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。
知识点3：浊度法
6．原料药效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符
合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。
供试品低剂量溶液
（即SH→TH→SL→TL）
6.测量抑菌圈 双碟透明度好，无破损和不透明现象；抑菌圈应圆满，无破
圈或圈不完整现象，否则应弃去该双碟。
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
在恒温培养箱中培养至规定时间
技能点1：二剂量法操作规程
• 测量抑制圈
的污染，放双碟的台面应用水平仪调水平。
玻璃/塑料
平皿(d=90mm
h=16-17mm)
菌层
5ml
含菌培养基
底层
20ml
灭菌培养基
技能点1：二剂量法操作规程
制备底层
制备菌层
技能点1：二剂量法操作规程
4.放置钢管
5.滴碟、培养
毛细滴管（或滴管）滴碟
滴加顺序：按标准品高剂量溶液→供试品高剂量溶液→标准品低剂量溶液→
抗生素效价测定的方法
抗生素效价测定的方法
抗生素效价测定是用来评估抗生素药物对特定微生物的杀菌或抑菌能力的方法。
以下是几种常见的抗生素效价测定方法：
1. 系列稀释法：通过将抗生素药物制剂按照一定比例进行稀释，然后将每个浓度的药物与一定数量的微生物接种在培养基上，观察药物对微生物生长的影响。
根据微生物的生长情况，确定能抑制或杀灭微生物生长的最小药物浓度，即最低抑菌浓度（MIC）。
2. 纸片扩散法：将含有一定浓度抗生素的纸片放置在含有微生物的琼脂平板上，通过抗生素扩散至琼脂中的方式，形成药物浓度递减的梯度。
培养一段时间后，观察纸片周围菌落的生长情况，根据纸片周围菌落的性状和大小，判断抗生素在不同浓度下对微生物的效果。
3. 悬浮液法：将一定浓度的微生物悬浮液与不同浓度的抗生素药物混合，在一定时间后，通过感光度测定、比色法或荧光法等方法，测定混合液中微生物的生长情况，根据微生物的生长情况确定抗生素的效价。
4. 动物试验法：选择一种特定的动物模型，如小鼠、兔子等，将不同浓度的抗生素药物注射或灌胃给动物，观察抗生素对动物体内微生物的杀菌或抑菌效果。
根据动物的生理反应、细菌计数等指标，确定抗生素的效力。
需要注意的是，不同的抗生素和微生物对上述方法的适用性可能有所差异，具体选择方法时需要根据具体实验目的和条件进行判断。
此外，还需要遵循相关实验操作规范和安全操作指南，确保实验的准确性和安全性。
抗生素效价测定实训报告
一、实训目的1. 掌握抗生素效价测定的原理和方法。
2. 熟悉管碟法测定抗生素生物效价的相关操作步骤。
3. 提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实训时间2023年11月X日三、实训地点实验室四、实训内容本次实训采用管碟法测定抗生素的生物效价，以青霉素为例进行实验。
五、实验原理抗生素的效价是指在一定条件下，抗生素对特定微生物的抑制作用。
抗生素效价测定通常采用微生物学方法，其中管碟法是目前国际上通用的方法。
管碟法的基本原理是：在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管，管内放入标准品和检品的溶液，经过恒温培养后，抗生素在菌层培养基中扩散，形成抑菌圈。
抑菌圈的大小与抗生素的浓度呈线性关系，通过比较标准品和检品的抑菌圈大小，可以计算出抗生素的效价。
六、实验步骤1. 准备工作- 准备实验所需材料：无菌平板、牛津杯、青霉素标准品、青霉素样品、产黄青霉、琼脂、生理盐水等。
- 将青霉素标准品和样品分别稀释成不同浓度的溶液。
2. 制备琼脂平板- 将产黄青霉接种于琼脂平板，培养至适宜的生长状态。
3. 放置牛津杯- 在琼脂平板上均匀放置牛津杯，每个平板放置4个。
4. 加入溶液- 在牛津杯中分别加入不同浓度的青霉素标准品溶液和样品溶液。
5. 培养- 将平板放入恒温培养箱中，培养16-18小时。
6. 观察和测量- 观察抑菌圈的形成情况，测量抑菌圈的直径。
7. 数据处理- 根据抑菌圈直径，计算青霉素标准品和样品的效价。
七、实验结果与分析1. 实验结果- 青霉素标准品在不同浓度下，抑菌圈直径与浓度呈线性关系。
- 青霉素样品在不同浓度下，抑菌圈直径与浓度呈线性关系。
2. 数据分析- 通过比较青霉素标准品和样品的抑菌圈直径，可以计算出青霉素样品的效价。
八、实验总结1. 通过本次实训，掌握了抗生素效价测定的原理和方法，熟悉了管碟法测定抗生素生物效价的相关操作步骤。
2. 提高了实验操作技能和数据分析能力，为今后的科研工作打下了基础。
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液，经过检定后，测得抑菌圈直径等结果如表
表 抑菌圈测量结果
碟号
1 2 3 4 ∑
UH（mm）
24.0 24.0 24.5 24.0 96.5
UL（mm）
18.5 18.0 18.0 18.0 72.5 24.5 24.5 24.5 24.5 98.0
SH（mm）
18.5 18.0 18.0 18.0 72.5
5．枯草芽孢杆菌菌悬液的制备 取培养好的实验菌枯草芽孢杆菌斜面 培养物，临用时，用生理盐水或肉汤培养 基将菌苔洗下备用。
6．混菌平板的制备 取灭过菌的平皿4个，在培养皿底部划分成四个 区，并于各平皿底交叉做“SH”“SL”“UH’“ UL” 四个标记，然后以20ml大口移液管于每个平皿中加 入融化了的底层培养基20ml，使其在皿底均匀摊平， 放置水平台面上使之凝固，作为底层。用2ml无菌移 液管吸取一定量的枯草芽孢杆菌菌悬液，加入到 50℃保温的100ml琼脂培养基中，轻轻振摇混匀。以 5ml大口移液管取5ml含供试菌培养基分别加入到每 个已凝固的底层培养基上面，使其摊布均匀作为上 层，放置水平台面上，凝固待用。
• 牛津杯(小不锈钢管)、培养皿、无菌吸管、镊子、 陶瓦盖、游标卡尺、容量瓶、蒸馏水、移液管等。
（四）操作步骤
1．试验菌的培养 在琼脂培养基上接种枯草芽孢杆菌培养传代一 次后，再移种至营养肉汤培养基中，35-37℃ 培养16～18h，取出备用。 2．配制1％的pH8.0缓冲溶液 于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，转 入试剂瓶中灭菌备用。
算出待检品的效价 。
（三）材料和用具
• 枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501]菌悬液 。
• 罗红霉素标准品高浓度溶液(10U／ml)、罗红霉素 标准品低浓度溶液(5U／m1)、罗红霉素供试品高 浓度溶液(估计浓度为10U／m1)、罗红霉素供试品 低浓度溶液(估计浓度为5U／m1)、pH8.0缓冲液 。
注意：为了减少误差，一般做 4 个 培养皿，然后计算出每个数值 4 皿的 平均值，最后代入公式，计算出待检 品的效价。
（五）实训结果
（六）思考题 ▲ 抗生素效价测定为什么不用玻璃皿盖 而用陶瓦盖? ▲ 抗生素的效价测定，除了微生物方法 外还有哪些方法?
项目一 抗生素效价的微生物学测定技术
（一）实训目的
1．熟悉用管碟法进行抗生素效价 生物测定的实验原理； 2．掌握二剂量法测定生物效价的 实验方法。
（二）实训原理
物理、 化学法 微生物法
简便、快速，要 求药品纯度高 直接反映抗生素疗效， 灵敏度高。常用
效价测 定方法
抗生素效价的微生物学测定法指的是利用抗生素对某种微生 物具有抗菌性能的特点来测定抗生素含量的方法。 有稀释法、比浊法和琼脂扩散法 3 大类。 管碟法是琼脂扩散法中最常用的一种方法。在管碟法中又有一 剂量法、二剂量法和三剂量法。本实训采用二剂量法。 二剂量法是利用抗生素在琼脂培养基中的扩散、渗透作用，将 已知效价的标准品与未知效价的待检品均做同样倍数的稀释，取 高、低两种浓度的抗生素稀释液，在相同条件下分别加到含有敏 感试验菌的琼脂培养基平板表面的牛津杯(小不锈钢管)内，经培养 后，由于抗生素的抑菌作用，在抗生素扩散的有效范围内会出现 透明的抑菌圈。通过比较标准品和待检品的抑菌圈大小，就可计
3．标准溶液的配制 精确称取一定量的罗红霉素标准品，用pH 8.0 缓冲液溶解并稀释至1000U／ml作为原液，再 以ph8.0缓冲液(无菌)稀释至10U／ml和5U／ ml两个浓度，供测定时作对照使用。 4．待测供试品溶液的配制 确定供试品溶液(或发酵液离心后的上清液)的 估计效价，准确吸取供试品溶液，以pH8.0缓 冲液(无菌)稀释至10U／ml (估计值)和5U／ ml(估计值)两个浓度，备用。
7．生物效价测定(二剂量法)
加小钢管→加药液→换陶瓦盖→测量抑 菌圈直径→ 据测量结果计算抗生素效价。
测量抑菌圈直径：
游标卡尺
抑菌圈
8．效价计算实例 设有一个罗红霉素检品和5U／ml两种高低剂量 的待测液。将已知效价为1000U／ml的标准品也 配成10U／ml和5U／ml两种高、低剂量的标准
SL（mm）
代入计算公式，得： θ =log-1{[(∑UH+∑UL)-(∑SH+∑SL)]／[(∑SH+∑UH)(∑SL+∑UL)]}﹡I logθ ={[(96.5+72.5)-(98.0+72.5)]／[(98.0+96.5)(72.5+72.5)]}﹡log4/1 = -0.012 θ =0.97 供试品效价(U／ml)= θ ﹡估计效价=0.97﹡1000=970.00(U／ml) 其中：SH—标准品的高剂量稀释液的抑菌圈直径； SL—标准品的低剂量稀释液的抑菌圈直径； UH—待检品的高剂量稀释液的抑菌圈直径； UL—待检品的低剂量稀释液的抑菌圈直径； θ —相对效价(待检品与标准品效价之比)； Ps—标准品效价； Pu—待检品效价。