复方苦参注射液抗肿瘤作用及其机制实验研究进展

复方苦参注射液抗肿瘤作用及其机制实验研究进展标签：复方苦参注射液；抗肿瘤；实验研究；综述复方苦参注射液是以苦参、白土苓为主经现代技术加工制成的中药制剂，其功效为清热利湿、凉血解毒、散结止痛，临床多用于晚期癌症的辅助治疗。

为帮助临床医生能更加合理使用复方苦参注射液，笔者现对其近年来的相关实验研究成果作一较为系统的整理和分析。

1 抗肿瘤作用研究1.1 体外实验1.1.1 对肺癌细胞的杀伤林氏等[1]报道了复方苦参注射液对体外培养肺癌LAC细胞的抑瘤效果，实验表明复方苦参注射液能抑制肺癌LAC细胞的生长，其作用机制与含药血清的浓度及作用时间呈一定的相关性。

1.1.2 对肝癌细胞的杀伤李氏等[2]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测复方苦参注射液对于人肝癌HepG2、BEL-7402细胞的体外杀伤作用。

结果显示，当药物浓度达到150 μL/mL时HepG2和BEL-7402细胞存活率最低，表明复方苦参注射液对肝癌细胞HepG2和BEL-7402具有明显的体外杀伤作用。

另有研究表明，复方苦参注射液还对人肝癌SMMC-7721细胞有明显的抑制增殖作用，并随着药物作用时间延长和剂量增加而逐渐增强；当与阳性药奥沙利铂联合使用时，表现为两药的相加或协同作用[3-4]。

1.1.3 对胃癌细胞的杀伤李氏等[2，5-7]采用MTT法观察了复方苦参注射液对胃癌细胞SGC-7901的增殖作用的影响。

结果显示，复方苦参注射液可以抑制SGC-7901细胞增殖，具有明显的体外杀伤作用，该作用呈剂量和时间依赖性。

1.1.4 对大肠癌细胞的杀伤有研究采用台盼蓝染色法进行细胞计数，结果显示复方苦参注射液可抑制人大肠癌LoV o细胞的生长，并且复方苦参注射液与低浓度的化疗药物有协同作用，可产生较强的抑制细胞增殖的作用[8-9]。

1.1.5 对前列腺癌细胞的杀伤有研究采用MTT分析法测定复方苦参注射液不同剂量组对人前列腺癌PC-3细胞生长的调控作用，结果显示，复方苦参注射液可抑制PC-3细胞的增殖[10-11]。

1.2 体内实验1.2.1 对肝癌实体瘤的抑制林氏等[1]观察了复方苦参注射液对肝癌细胞Hep、H22实体瘤的抑瘤效果。

显示复方苦参注射液高、中、低剂量组对H22实体瘤的抑瘤率分别为37.9%、30.6%、24.2%，表明复方苦参注射液能明显抑制H22实体瘤的生长。

钱氏等[12]建立H22肝癌荷瘤小鼠模型后随机分为5组：5%葡萄糖注射液阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组、奥沙利铂组、复方苦参注射液组、复方苦参注射液+奥沙利铂联合组。

各组均给予腹腔等容量注射10 d，测定各组瘤质量的差别。

结果显示，奥沙利铂单药及联合复方苦参注射液组的瘤质量均明显低于阴性对照组（P＜0.05），提示奥沙利铂对H22肝癌细胞小鼠皮下移植瘤肿瘤组织具有明显抑制作用，联合复方苦参注射液具有明显相加抑制作用。

张氏等[13]用小鼠H22移植瘤模型观察复方苦参注射液的抗肿瘤作用，造模成功后将动物分为复方苦参注射液组和对照组，测定2组瘤质量的差别，结果显示，复方苦参注射液组与对照组相比抑瘤率为59.49%，2组差异有统计学意义（P ＜0.01），显示复方苦参注射液有对H22肝癌细胞小鼠皮下移植瘤肿瘤组织具有明显抑制作用。

1.2.2 对肝癌腹水瘤的抑制作用林氏等[1]观察了复方苦参注射液对Hep腹水瘤模型的影响。

复方苦参注射液高、中、低剂量组对Hep腹水型肝癌的抑瘤率分别为34.8%、17.5%和15.6%，表明复方苦参注射液对Hep肝腹水癌细胞的生长亦有一定的抑制作用。

1.2.3 对肺癌实体瘤的抑制有报道，复方苦参注射液高、中、低剂量组对Lewis肺癌的抑瘤率分别为46.0%、32.8%、22.3%，提示复方苦参注射液对实体瘤Lewis肺癌有明显抑制作用[1]。

1.2.4 对小鼠移植性S180肉瘤的抑制贾氏等[14]通过建立小鼠肿瘤模型，运用免疫组化方法，观察复方苦参注射液对小鼠移植性S180肉瘤抑制作用。

结果显示，小鼠腹腔注射复方苦参注射液0.3、0.6 g/kg，连续给药8 d后瘤体较对照组分别减小25%和36%，表明复方苦参注射液能够抑制S180肉瘤的生长。

2 分子机制研究2.1 影响肿瘤细胞周期及凋亡细胞周期与细胞增殖密切相关，正常细胞周期主要由G1、S、G2和M期组成，G0期是暂时脱离细胞周期不进行增殖的时期。

G1-S相和G2-M相转换处各有一个节点，通过对这2个节点的控制可调控细胞周期的进程，使不同的细胞周期事件在时间和空间上相互协调。

因此，抑制细胞周期的正常转换，可以阻止细胞有丝分裂，抑制细胞增殖，引起细胞凋亡。

叶氏等报道[4]应用流式细胞术分析复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响，发现复方苦参注射液可使细胞被阻滞于G0/G1期，与阳性药奥沙利铂联合后作用更为显著；凋亡率明显高于对照组，联合组明显优于单药组。

采用流式细胞仪检测复方苦参注射液作用后的人肝癌HepG2细胞的细胞周期及凋亡率的研究显示，复方苦参注射液作用后的HepG2细胞G0/G1期、G2/M期明显增高，S期的细胞数量明显减少，凋亡率明显高于对照组[2，15]。

李氏等[2，7]采用流式细胞仪测定经不同浓度复方苦参注射液处理后SGC-7901细胞周期。

发现复方苦参注射液使细胞周期阻滞于G0/G1、G2/M期，S期细胞明显减少，凋亡率明显高于对照组。

有研究采用流式细胞仪分析复方苦参注射液对PC-3细胞周期分布的影响。

结果显示，复方苦参注射液可抑制PC-3细胞的增殖，诱导其凋亡，改变细胞周期分布，使G0/G1期PC-3细胞比例增高，且作用具有时间和剂量的依赖性[10-11]。

上述研究表明，复方苦参注射液能够影响肿瘤细胞的细胞周期及细胞凋亡，其发生作用的主要分子机制在于以下途径。

2.1.1 增加p16的蛋白表达p16是细胞周期G1-S关卡的细胞周期素D（cyclin D）-RB通道上极其重要的一个抑癌基因，它可与细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）和细胞周期素依赖性激酶6（CDK6）特异性结合，竞争性抑制它们与Cyclin D的结合。

当p16蛋白含量减少时，Cyclin D-CDK4或6复合物的含量增加，结果将是细胞周期进程过度向前发展，细胞过度增殖，以致于癌变。

张氏等[13]用小鼠H22移植瘤模型观察复方苦参注射液的抗肿瘤作用，造模成功后分为复方苦参注射液组和对照组，采用免疫组化法检测两组p16基因表达。

结果显示，苦参组的p16基因表达较对照组明显增加；采用限制性内切酶酶切、聚合酶链反应检测两组p16基因启动子区甲基化状态，表明苦参组较对照组明显降低。

说明复方苦参注射液具有抑瘤作用，其主要作用机制可能是由于p16蛋白表达的增加及p16启动子区域甲基化水平的降低。

2.1.2 下调cyclin E的蛋白表达细胞周期运行过程中cyclin E在晚G1期形成cyclin E/CDK2复合体，加强促转录活性，由此促进细胞越过G1/S点，进入S 期。

张氏等[11]采用流式细胞仪分析复方苦参注射液对人前列腺癌PC-3细胞周期分布的影响，并用免疫细胞化学方法观察了复方苦参注射液对PC-3细胞周期调控蛋白cyclin E的影响。

结果发现，复方苦参注射液可以抑制PC-3细胞进入S期，从而使PC-3细胞在G0/G1期堆积，同时下调细胞周期调控蛋白cyclin E 表达。

2.2 抑制肿瘤侵袭转移肿瘤侵袭与转移是肿瘤发生演进中最危险的阶段。

癌细胞与基膜间的异质黏附是肿瘤细胞侵袭转移的前提，游走、侵袭能力是肿瘤细胞侵袭周围组织和侵入及穿出血管所必需的。

抑制异质黏附，能消除分侵袭转移的前提，而抑制肿瘤细胞运动将抑制肿瘤细胞的浸润和转移[16]。

代氏等[17]应用黏附试验、Transwell趋化运动和Matrigel侵袭实验，研究复方苦参注射液及其不同浓度下对SGC-7901细胞的黏附、运动以及侵袭能力的影响。

结果显示，复方苦参注射液不同浓度处理SGC-7901细胞后，使SGC-7901细胞的黏附Matrigel的能力明显降低，明显抑制细胞体外侵袭基底膜成分Matrigel的能力，细胞体外趋化运动能力明显降低，并呈剂量依赖性下降。

肿瘤转移抑制基因主要是抑制肿瘤细胞的转移表型，nm23基因是目前研究较多的转移抑制基因，nm23编码的产物具有抑制肿瘤转移的功能，nm23在分化良好的肿瘤中呈高水平表达，且nm23基因表达与淋巴结转移呈负相关，与整个生存期呈正相关，因此，检测nm23基因的表达高低，可以作为判断肿瘤有无转移的一个重要指标。

而CD44是位于人类第11号染色体短臂上的基因所编码的细胞黏附分子，为整合膜糖蛋白。

CD44v6是CD44的一种拼接变异体，其表达可有助于肿瘤细胞获得转移潜能。

CD44v6的促进转移作用机制可能是表达CD44v6的肿瘤细胞与远隔的淋巴管和血管内某一配体结合，使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长，由此形成转移瘤。

有研究发现，CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关[18]。

代氏等[17]采用免疫细胞化学法检测复方苦参注射液作用后人胃癌SGC-7901细胞CD44v6的表达，发现经复方苦参注射液（1.5 mg/mL）作用后SGC-7901细胞CD44v6蛋白表达减弱，胞浆及胞膜棕黄色颗粒减少。

对照组和治疗组免疫细胞化学评分分别为（2.572±0.030）分和（2.026±0.020）分，2组差异有统计学意义（P＜0.01）。

李氏等[2]采用流式细胞仪检测复方苦参注射液作用后的BEL-7402肿瘤细胞的细胞周期、凋亡率及bcl-2、CD44v6和nm23基因表达的变化，发现复方苦参注射液组CD44v6表达阳性细胞百分率较对照组低，复方苦参注射液组nm23表达阳性率（97.85%）明显高于对照组（41.01%）。

结果表明，复方苦参注射液能够明显的抑制细胞体内CD44v6的表达，促进抑转移因子nm23的表达，具有显著的抑制肿瘤转移的作用。

2.3 抑制肿瘤血管生成肿瘤的发生、发展和转移与血管的生成关系密切，断绝或减少肿瘤血管供应，抑制肿瘤血管生成是近年来肿瘤治疗新的热点。

李氏等[19-20]采用transwell板观察复方苦参注射液对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）迁移的影响，并采用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型，观察复方苦参注射液对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。

结果显示，复方苦参注射液具有抑制HUVEC增殖的作用，相同浓度范围内对人结肠癌LoV o细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制，提示该注射剂具有明显的抗血管生成作用。

复方苦参注射液联合热疗或阳性药奥沙利铂在体外具有抗血管生成的协同效应；另外，复方苦参注射液还具有抑制HUVEC迁移的作用，并对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管具有明显的抑制作用，与奥沙利铂联合应用具有协同效应。