乙肝五项检测操作规程
检验科操作规程
检验科操作规程血常规（Sysmex KX-21血液分析仪）操作规程：1．准备稀释液：加样器取稀释液500微升加入一次性塑料试管中备用。
2．采血：75%乙醇棉球消毒患者左手中指或无名指皮肤待干后，一次性无菌采血针采血，干棉球拭去第一滴血后按要求依次采血，推血片，采血完毕后用干棉球压迫伤口止血。
3．稀释标本和全血标本室温放置3~5分钟。
4．将标本混匀，插入仪器吸样管中，按start键检测开始。
5．打印结果，异常结果应进行手工分片。
6．登记：项目齐全、及时、准确。
7．每周六下午仪器进行周保养并记录。
尿常规操作规程：1．一次性尿杯留尿。
2．尿试纸浸湿，卫生纸吸取多余尿液。
将尿试纸放在测试仪上，按start键测试开始并打印结果。
3．涂片：塑料吸管吸取少许尿液后涂片镜检并报告结果。
异常标本离心后镜检。
4．登记：准确及时项目齐全。
5．每天下班时将载物台取下清洗，擦干放回原处。
血流变操作规程：1．打开普利生自清洗旋转式粘度计机器，待温度上升至370C，打开主机，进入血流变操作程序，并等待操作。
2．静脉采血5ml加入肝素抗凝管内，充分混匀。
3．将抗凝血注入温氏管至10刻度，1小时后报告血沉数，然后以3000r/min离心20分钟，报告红细胞压积数值。
4．吸取800微升抗凝血，加入普利生自清洗旋转式粘度锥板内，按下全血实验（F5）键，测出高切、中切、低切的数值。
5．将抗凝血离心5分钟，吸取800微升血浆加入普利生自清洗旋转式粘度剂锥板内，按下血浆实验（F6）键，测出血浆粘度数值。
6．打印报告。
7．冲洗机器5遍，烘干关机。
病区化验室血常规（Sysmex-21）操作规程：1．准备稀释液，将稀释液用加样器取500微升加入一次性塑料试管中，备用。
2．采血：采病人中指或无名指，酒精消毒后用一次性采血针采血，拭去第一滴血后取20微升，完毕干棉球止血。
3．检测：室温放置3~5分钟后混匀，上机检测。
4．登记：出结果后登记病人姓名、年龄、性别、科别及结果的记录。
乙型肝炎病毒抗体诊断(胶体金法SOP)标准操作程序
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T ）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色条带。
这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内（T）将没有紫红色条带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。
乙肝五项检测操作规程
乙肝五项检测(乳胶法)(一)检测目的乙型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。
(二)测定原理HBsAg、HBsAh、HBeAg均采用双抗体(原)夹心法原理。
用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBs鲰单克隆抗体HBsAh，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆中HBsAg；用HBsAg重组抗原与链霉亲与素一BSA包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的HBs如重组抗原与生物素一BSA及其他试剂，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆标本中HBsAb；用抗HBeAg单克隆抗体(Ehl)包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBeAg单克隆抗体(Eh2)。
应用双抗体夹心法原理，用于定性检测血清或血浆中HBeAg。
HBsAg、HBsAb、HBeAg测试时，将血清／血浆标本滴人试剂板加样处．标本在毛吸效应下向E层析，如标本中含有相应的待测物质，在测试区(T)内会出现一条红色条带，则是阳性结果。
如标本中不含有相应的待测物质，则测试区(T)将没有红色条带，是阴性结果。
无论待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。
质控区内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAh、HBcAh采用竞争法原理。
用HBeAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的鼠抗HBeAg单克隆抗体。
应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆巾HBeAI，；用HBcAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的HBcAb单克隆抗体，应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆中HB。
Ah。
测试HB。
Ah、HBcAb时，将血清／血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛吸效应下向上层析。
如标本中含有相应的抗体．则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。
如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。
检验科操作规程
检验科操作规程血常规（Sysmex KX-21血液分析仪)操作规程：1（准备稀释液：加样器取稀释液500微升加入一次性塑料试管中备用。
2( 采血：75%乙醇棉球消毒患者左手中指或无名指皮肤待干后,一次性无菌采血针采血，干棉球拭去第一滴血后按要求依次采血,推血片,采血完毕后用干棉球压迫伤口止血。
3（稀释标本和全血标本室温放置3～5分钟。
4（将标本混匀，插入仪器吸样管中，按start键检测开始。
5（打印结果，异常结果应进行手工分片。
6（登记:项目齐全、及时、准确。
7（每周六下午仪器进行周保养并记录.尿常规操作规程：1（一次性尿杯留尿。
2（尿试纸浸湿,卫生纸吸取多余尿液.将尿试纸放在测试仪上,按start键测试开始并打印结果.3（涂片:塑料吸管吸取少许尿液后涂片镜检并报告结果.异常标本离心后镜检。
4（登记：准确及时项目齐全。
5( 每天下班时将载物台取下清洗，擦干放回原处。
血流变操作规程:01（打开普利生自清洗旋转式粘度计机器，待温度上升至37C，打开主机,进入血流变操作程序，并等待操作.2（静脉采血5ml加入肝素抗凝管内，充分混匀.3（将抗凝血注入温氏管至10刻度,1小时后报告血沉数,然后以3000r/min离心20分钟，报告红细胞压积数值。
4（吸取800微升抗凝血，加入普利生自清洗旋转式粘度锥板内,按下全血实验(F5）键，测出高切、中切、低切的数值。
5（将抗凝血离心5分钟，吸取800微升血浆加入普利生自清洗旋转式粘度剂锥板内，按下血浆实验(F6)键,测出血浆粘度数值。
6（打印报告。
7（冲洗机器5遍，烘干关机。
病区化验室血常规(Sysmex-21）操作规程:1( 准备稀释液，将稀释液用加样器取500微升加入一次性塑料试管中，备用。
2（采血：采病人中指或无名指，酒精消毒后用一次性采血针采血，拭去第一滴血后取20微升,完毕干棉球止血.3( 检测:室温放置3～5分钟后混匀，上机检测。
4( 登记：出结果后登记病人姓名、年龄、性别、科别及结果的记录。
乙肝五项检测
乙肝五项检测（ELISA法）一、检测目的：乙型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。
二、测定原理：分别采用双抗体（抗原）夹心法和竞争法。
HBsAg、HBsAb原理：采用单克隆抗-HBs(HbsAg)包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP(HBsAg-HRP),当标本中存在HBsAg（HBsAb）时，该HBsAg（HBsAb）与包被抗- HBsAg（HBsAb）结合并与抗- HBsAg-HRP （HbsAb-HRP）结合形成抗- HBsAg（HBsAb）-抗- HBsAg-HRP（HBsAb-HRP）复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
HBeAg原理：采用抗-HBe包被反应板，加入待测标本，同时加入抗—HBe-HRP，如待测样本中抗HBeAg时，就与包被抗-HBe、抗—HBe-HRP结合形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
HBeAb原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量高，则抗—HBe-HRP 与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。
HBcAb原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBc含量高，则抗—HBc-HRP 与HBcAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。
三、操作步骤：1、将试剂从冷藏室中取出，30分钟后平衡至室温方可开启使用。
2、用蒸馏水将PBST浓缩液20倍稀释，作为洗液。
3、将微孔条固定于支架上，按序编号。
4、按具体使用试剂盒说明书加样、孵育、洗板、显色。
9、用酶标仪读数，取波长450nm,先用空白调零，然后读取各孔OD值。
四、结果判断：样品OD值／阴性对照平均OD ≥2.1，判断为阳性，否则为阴性。
乙肝五项检查注意事项
乙肝五项检查注意事项乙肝五项检查注意事项1、乙肝五项检查前要空腹，虽然乙肝五项检查与肝功能检查具有着本质的区别，在空腹饮食上没有肝功能那么的严格，不过，从原理上来说，乙肝患者进行五项检查最好要空腹，以免影响结果。
2、乙肝患者进行乙肝五项检查前不要熬夜，要注意休息，如果患者过度的熬夜，过度的疲劳，在一定的程度上会影响结果的准确性。
3、在做乙肝五项前患者要严禁酗酒，在生活中，酗酒是导致肝脏受损的一个常见的因素，尤其是对肝病患者来说，酗酒会对患者要检查的各项指标都有影响，因而，为了确保结果的准确性，乙肝患者不要酗酒。
4、在检查前24小时内不要饮食，尤其是高脂肪、高糖、油腻等食物。
5、对于正常人来说，每三到五年复查一次乙肝五项，若没有抗体的话，要及时接种乙肝疫苗。
对于乙肝病毒携带者来说，最好每三到六个月查一次乙肝五项，其他乙肝患者应该在医生的指导下，按照医生安排定时进行乙肝五项检测。
通过乙肝五项检查可以了解机体是否感染乙型病毒，以及可以区分出乙肝大三阳、乙肝小三阳，对患者来说具有着非常重大的意义。
因此，乙肝五项检查对于乙肝的预防与治疗都有很大意义，那么哪些人需要做乙肝五项检查呢？一、健康人健康人一般没有进行乙肝疫苗接种时，需要检查乙肝五项，必要时进行疫苗补种。
如果已经成功接种过乙肝疫苗的健康人，并不代表永远有抗体，一般3-5年需复查一次乙肝五项，如果乙肝抗体滴度小于10，需要及时接种乙肝疫苗加强针。
二、出现乙肝症状的人群1、久咳不愈者要查乙肝五项少数病人首先表现为呼吸道感染，甚至出现典型的病毒性肺炎症状，此时需警惕肝炎症状的出现。
2、精神状态不佳者需查乙肝五项如果在日常生活中经常出现疲倦乏力、食欲下降、恶心，厌油腻，食后胀满或有黄疸，口干，大便或干或溏，小便黄，头昏耳鸣，面色发黄等症状时，有必要进行乙肝五项检查，判断是否感染了乙肝病毒。
3、腰痛需查乙肝五项如果出现双侧腰部隐痛，有的以右侧腰痛为主，化验时小便可有血尿、蛋白尿，但肾功能无明显改变，血沉、抗“O”正常时。
乙型肝炎病毒抗体诊断 胶体金法SOP 标准操作程序
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一. 原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。
这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内(T)将没有紫红色条带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。
质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。
乙肝五项检测卡
乙肝五项检测卡 This manuscript was revised on November 28, 2020乙肝五项检测卡（胶体金法）使用说明书[产品名称]通用名称：乙肝五项检测卡（胶体金法）英文名称：Diangnostic Kit for Multi-HBV（Colloidal Gold）[包装规格]25人份/盒[预期用途]本试剂盒用于体外定型检测人血清、血浆样本中的乙型肝炎病毒表面抗原、乙型肝炎病毒表面抗体、乙型肝炎病毒e抗原、乙型肝炎病毒e 抗体、乙型肝炎病毒核心抗体。
乙型肝炎病毒引起的感染带来了严重的公共卫生问题。
母婴传播、性传播和血液传播是主要的传播途径。
尽早的发现感染可以有效的减少疾病的传播。
该产品用于乙型肝炎病毒感染的辅助诊断。
[检验原理]乙肝五项检测卡（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起。
同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg金标试条利用双抗本夹心法原理，在玻璃纤维膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗（Au-sAb1），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠lgG。
检测阳性样本时，样本中HBsAg与胶体金标记抗体结合形成复合物，在层析作用下复合物没膜带向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成“Au-sBb1-HBsAg-sAb2”夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠lgG结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
抗—HBs金标试条利用双抗原夹心法原理，在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原（纯化抗原）（Au—sAg），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包装（纯化抗原）HBsAg和羊抗HBsAg。
检测阳性样本时，样本中的HBsAb与胶体金标记表面抗原结合形成复合物，在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时邓预包被的表面抗原结合形成“Au-sAg-HBsAb-sAg”夹心物而凝聚显色，游离金标抗原则在对照线处与羊抗HBsAg结合而富集显色。
乙肝五项操作方法
乙肝五项操作方法
乙肝五项操作方法指的是乙肝病毒五项筛查。
乙肝病毒五项筛查是指采用检测HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg和HBeAb五个标志物来判断一个人是否感染了乙肝病毒。
具体操作方法如下：
1. 采集血样：可以通过采集患者的静脉血进行操作。
首先清洁患者的皮肤，然后用一次性注射器采集静脉血。
2. 检测HBsAg：将采集到的血样进行实验室操作，使用酶联免疫吸附法(ELISA)或免疫荧光法(IF)等方法检测血样中的HBsAg。
3. 检测HBsAb：对于HBsAg阳性的血样，进一步检测HBsAb。
同样使用ELISA 或IF等方法检测血样中的HBsAb。
4. 检测HBcAb：如果HBsAg和HBsAb都阳性，进一步检测HBcAb。
仍然使用ELISA或IF等方法检测血样中的HBcAb。
5. 检测HBeAg和HBeAb：对于HBcAb阳性的血样，可以继续检测HBeAg 和HBeAb。
同样使用ELISA或IF等方法进行检测。
通过对血样中这五个标志物的检测，可以判断一个人是否感染了乙肝病毒，以及感染状态的不同。
这对于乙肝病毒的预防和控制具有重要意义。
乙肝两对半操作规程
免疫室乙肝两对半操作规程一、试验原理“乙肝两对半”指乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBSAb）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）此五项指标，目前国内医院最常用的乙肝病毒感染检测血清标志物，判断是否感染乙肝与粗估病毒复制水平初步检查。
两对半中各项试验反应原理如下： 1、乙型肝炎病毒表面抗原检测：采用ELISA“双抗体夹心法”原理，用抗-HBs包被板条，用HRP 标记抗-HBs为酶标记物，以四甲基联苯氨（TMB）和过氧化物为底物。
当标本中存在HBSAg时，该表面抗原与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBSAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
在试验结束时，有颜色变化的，提示有HBSAg存在，无颜色或颜色变化微弱的，则提示不存在HBSAg。
2、乙型肝炎病毒表面抗体检测：采用ELISA“双抗原夹心法”检测人血清或血浆中的抗-HBS,采用HBSAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBSAg-HRP进行孵育。
当标本中存在抗-HBS时，该抗体与包被的HBSAg结合并与酶结合物形成HBSAg-抗-HBS-HBSAg-HRP复合物，洗去游离反应物，加入显色剂，将有明显颜色变化；当标本中没有抗-HBS时，加入底物后没有或只有很轻微的颜色变化。
3、乙型肝炎病毒e抗原检测：采用ELISA“双抗体夹心法”检测，用单抗-HBe包被板条，用HRP标记抗-HBe为酶标记物，以四甲基联苯氨（TMB）和过氧化物为底物。
当标本中存在HBeAg时，该HBeAg与包被抗-HBe结合并与抗-HBe-HRP结合形成抗-HBe-HBeAg-抗-HBe-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
在试验结束时，有颜色变化的，提示有HBeAg存在，无颜色或颜色变化微弱的，则提示不存在HBeAg。
检验科操作规程
检验科操作规程血常规（Sysmex KX-21血液分析仪）操作规程：1．准备稀释液：加样器取稀释液500微升加入一次性塑料试管中备用。
2．采血：75%乙醇棉球消毒患者左手中指或无名指皮肤待干后，一次性无菌采血针采血，干棉球拭去第一滴血后按要求依次采血，推血片，采血完毕后用干棉球压迫伤口止血。
3．稀释标本和全血标本室温放置3~5分钟。
4．将标本混匀，插入仪器吸样管中，按start键检测开始。
5．打印结果，异常结果应进行手工分片。
6．登记：项目齐全、及时、准确。
7．每周六下午仪器进行周保养并记录。
尿常规操作规程：1．一次性尿杯留尿。
2．尿试纸浸湿，卫生纸吸取多余尿液。
将尿试纸放在测试仪上，按start键测试开始并打印结果。
3．涂片：塑料吸管吸取少许尿液后涂片镜检并报告结果。
异常标本离心后镜检。
4．登记：准确及时项目齐全。
5．每天下班时将载物台取下清洗，擦干放回原处。
血流变操作规程：1．打开普利生自清洗旋转式粘度计机器，待温度上升至370C，打开主机，进入血流变操作程序，并等待操作。
2．静脉采血5ml加入肝素抗凝管内，充分混匀。
3．将抗凝血注入温氏管至10刻度，1小时后报告血沉数，然后以3000r/min离心20分钟，报告红细胞压积数值。
4．吸取800微升抗凝血，加入普利生自清洗旋转式粘度锥板内，按下全血实验（F5）键，测出高切、中切、低切的数值。
5．将抗凝血离心5分钟，吸取800微升血浆加入普利生自清洗旋转式粘度剂锥板内，按下血浆实验（F6）键，测出血浆粘度数值。
6．打印报告。
7．冲洗机器5遍，烘干关机。
病区化验室血常规（Sysmex-21）操作规程：1．准备稀释液，将稀释液用加样器取500微升加入一次性塑料试管中，备用。
2．采血：采病人中指或无名指，酒精消毒后用一次性采血针采血，拭去第一滴血后取20微升，完毕干棉球止血。
3．检测：室温放置3~5分钟后混匀，上机检测。
4．登记：出结果后登记病人姓名、年龄、性别、科别及结果的记录。
ELISA法和ECLIA法检测乙肝五项的结果分析
ELISA法和ECLIA法检测乙肝五项的结果分析发表时间：2016-09-02T16:02:19.587Z 来源：《医药前沿》2016年8月第24期作者：刘志洲吕波刘杨张晓雷郑俞杨鹏（通讯作者）[导读] 我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染人数最多的国家，HBV携带者约占总人口的10%左右[1]。
刘志洲吕波刘杨张晓雷郑俞杨鹏（通讯作者）（解放军第210医院403临床部辽宁大连 116021）【摘要】目的：分析酶联免疫吸附试验（ELISA）和电化学发光技术（ECLIA）检测乙肝五项的结果差异。
方法：分别用ELISA法和ECLIA法测定107例乙肝病人血清标本的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，检测结果用阴性和阳性来表示，并用χ2检验进行统计学分析。
结果：两种方法对于HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb检测结果无统计学差异，对于HBcAb检测结果有显著性差异。
结论：ECLIA法检测灵敏度可能高于ELISA法，有条件的实验室应尽量采用ECLIA法检测乙肝五项。
【关键词】乙肝；酶联免疫吸附试验；电化学发光技术【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）24-0081-02 Analysis the Results of Detecting Five Items of Hepatitis B Serum Markers by ELISA and ECLIA Liu Zhizhou, Lv Bo, Liu Yang, Zhang Xiaolei, Zheng Yu, Yang Peng.403 Clinical Department, 210 Hospital of PLA, Dalian 116021 【Abstract】 Objective To analysis the results of detecting five items of serum markers for Hepatitis B by ELISA and ECLIA. Methods A total of 107 Hepatitis B patients serum samples were randomly selected to test five items of hepatitis B serum markers, using enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) and electrochemiluminescence immunoassay(ECLIA) separately．There were Hepatitis B virus surface antigen(HBsAg)，Hepatitis B virus surface antibody(HBsAb)，Hepatitis B virus e antigen(HBeAg)，Hepatitis B virus e antibody(HBeAb) and Hepatitis B virus core antibody(HBcAb)．The detecting results were described by negative and positive. Date was statistically analysed by χ2 test. Results There are no statistical difference for the detecting results of HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb between two methods. Whereas, there is significant difference for the detecting results of HBcAb . Conclusions The detectability of ECLIA is higher than ELISA, and ECLIA maybe the more appropriate test for detecting five items of serum markers for Hepatitis B.【Key words】 Hepatitis B; ELISA; ECLIA我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染人数最多的国家，HBV携带者约占总人口的10%左右[1]。
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程
乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。
5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。
5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。
5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。
5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。
5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。
检验科操作规程
检验科操作规程血常规（Sysmex KX-21血液分析仪）操作规程：1( 准备稀释液:加样器取稀释液500微升加入一次性塑料试管中备用. 2（采血：75%乙醇棉球消毒患者左手中指或无名指皮肤待干后,一次性无菌采血针采血, 干棉球拭去第一滴血后按要求依次采血,推血片，采血完毕后用干棉球压迫伤口止血. 3( 稀释标本和全血标本室温放置3～5分钟。
4( 将标本混匀,插入仪器吸样管中，按start键检测开始。
5（打印结果,异常结果应进行手工分片.6（登记:项目齐全、及时、准确。
7( 每周六下午仪器进行周保养并记录。
尿常规操作规程：1（一次性尿杯留尿.2( 尿试纸浸湿,卫生纸吸取多余尿液。
将尿试纸放在测试仪上，按start键测试开始并打印结果。
3（涂片:塑料吸管吸取少许尿液后涂片镜检并报告结果。
异常标本离心后镜检。
4（登记:准确及时项目齐全。
5（每天下班时将载物台取下清洗，擦干放回原处。
血流变操作规程：01( 打开普利生自清洗旋转式粘度计机器，待温度上升至37C，打开主机,进入血流变操作程序，并等待操作.2( 静脉采血5ml加入肝素抗凝管内，充分混匀.3（将抗凝血注入温氏管至10刻度，1小时后报告血沉数，然后以3000r/min 离心20分钟，报告红细胞压积数值。
4（吸取800微升抗凝血，加入普利生自清洗旋转式粘度锥板内，按下全血实验（F5）键，测出高切、中切、低切的数值。
5( 将抗凝血离心5分钟，吸取800微升血浆加入普利生自清洗旋转式粘度剂锥板内，按下血浆实验（F6)键，测出血浆粘度数值。
6（打印报告.7（冲洗机器5遍,烘干关机.病区化验室血常规(Sysmex-21）操作规程:1（准备稀释液,将稀释液用加样器取500微升加入一次性塑料试管中,备用。
2（采血：采病人中指或无名指，酒精消毒后用一次性采血针采血，拭去第一滴血后取20微升,完毕干棉球止血。
3（检测：室温放置3～5分钟后混匀，上机检测。
4( 登记：出结果后登记病人姓名、年龄、性别、科别及结果的记录。
乙型肝炎病毒抗体诊断(胶体金法SOP)准则操作程序1
精心整理乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进HBsAgHBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg试区内（T）将没有紫红色带。
无论HBsAg（C）。
质控区内（C同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg-HBsAb-HBsAg(T)将没有紫红色条带。
无论HBsAg(C)。
质控区内(C)同时也作为试剂的内控标准。
T）的乙肝e抗体。
HBeAg抗体反应。
然后，HBeAg结HBeAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。
这条带是抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内(T)HBeAg抗体是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。
质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAb,HBcAb检测试剂才有竞争抑制法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。
测试时，血清或血浆标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。
如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区(T)的抗体竞争与预包被在金标粒子的相应抗体反应。
如果标本中没有相应抗体，预包被在金标粒子的复合物的相应抗原则同膜上测试区(T)的抗体全部结合。
阳性标本，测试区内(T)将没有紫红色条带，阴性标本，测试区内(T)将会出现明显的紫红色条带。
无论相应的抗体是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。
质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
二.试剂：英科新创乙肝五项检测卡（胶体金法）。
乙肝病毒表面抗原测定操作规程010
乙型肝炎病毒表面抗原测定操作规程文件号：WH-MY-010版本：第1版共：3页2009年3月1日起实施本规程每2年复审一次复审日期：2010年2月27日复审人：雷凤珠规程编写者：王莉红审批者：王金成批准日期：2010年2月28日检验科主任：雷凤珠1、检验目的：乙肝表面抗原测定2、检测原理：本试剂在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标抗体（HBsAb-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，采用双抗体夹心法法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝表面抗原（HBsAg）.3、试剂和仪器：3.1试剂：上海科华生物有限公司3.23.3试剂稳定性：原装试剂在2－8℃避光保存，有效期6个月。
3.4仪器：3.4.1 TE-B型定时微量振荡器3.4.2 37℃水浴箱（上海山连）4、标本：4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管)，将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后，分离血清。
4.2样品后收到后不要急于分离血清，以免血块收缩不良造成结果假阳性。
4.3溶血标本不能用于检测，因溶血可造成假阳性结果出现。
4.4用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2－8℃冰箱中保存一周。
4.5样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由专人按医疗垃圾处理。
5、操作5.1操作步骤：5.1.配液：将20ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释至400ml备用。
5..2编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同），5. 3加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50ul。
5.4加酶：每孔加入酶标试剂1滴（50ul）,轻轻振荡混匀。
5.5温育：用封板模封板后置37℃温育30分钟。
5.6洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液洗涤5遍，用吸引器吸干。
5.7显色：每孔加入显色剂A、B液各1滴(50ul),,轻轻振荡混匀, 37℃避光显色10分钟。
(2024版)乙肝SOP
可编辑修改精选全文完整版【标本的采取和保存】采静脉血2ml,分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐【检验原理】乙肝五项检测卡（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗（AU-SAbI）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG。
检测阳性样本时，样本中HBsAg与胶体全标记抗体结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成"Au-sAbl-HBsAg-sAb2"夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠I g G结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBsAb金标试条利用双抗原夹心法原理，在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原（重组抗原）（Au-SAg）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被（重组抗原）HBsAg和羊抗HBsAg。
检测阳性样本时，样本中HBsAb 与胶体全标记表面抗原结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包破的表面抗原结合形成"Au-sAg-HBsAb-sAg"夹心物而凝聚显色，游离金标抗原则在对照线处与羊抗HBsAg结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBeAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤雄素膜上预包被金标鼠抗HBeAg单抗(Au-eAbl),在硝酸纤维素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗e单抗(eAb2)和羊抗鼠IgG。
检测时，样本中的eAg可与胶体金标记抗体结合形成免疫复合物，在层析作用下复台物沿膜带移动，经过检测线时与预包被的抗体形成&Ab2-eAg-eAbl-Au”夹心物而凝聚显色;阴性样本仅在对照线处显色。
乙肝两对半操作规程
乙肝两对半操作规程免疫室乙肝两对半操作规程一、试验原理“乙肝两对半”指乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBSAb）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）此五项指标，目前国内医院最常用的乙肝病毒感染检测血清标志物，判断是否感染乙肝与粗估病毒复制水平初步检查。
两对半中各项试验反应原理如下： 1、乙型肝炎病毒表面抗原检测：采用ELISA“双抗体夹心法”原理，用抗-HBs包被板条，用HRP 标记抗-HBs为酶标记物，以四甲基联苯氨（TMB）和过氧化物为底物。
当标本中存在HBSAg时，该表面抗原与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBSAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
在试验结束时，有颜色变化的，提示有HBSAg存在，无颜色或颜色变化微弱的，则提示不存在HBSAg。
2、乙型肝炎病毒表面抗体检测：采用ELISA“双抗原夹心法”检测人血清或血浆中的抗-HBS,采用HBSAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBSAg-HRP进行孵育。
当标本中存在抗-HBS时，该抗体与包被的HBSAg结合并与酶结合物形成HBSAg-抗-HBS-HBSAg-HRP复合物，洗去游离反应物，加入显色剂，将有明显颜色变化；当标本中没有抗-HBS时，加入底物后没有或只有很轻微的颜色变化。
3、乙型肝炎病毒e抗原检测：采用ELISA“双抗体夹心法”检测，用单抗-HBe包被板条，用HRP标记抗-HBe为酶标记物，以四甲基联苯氨（TMB）和过氧化物为底物。
当标本中存在HBeAg时，该HBeAg与包被抗-HBe结合并与抗-HBe-HRP结合形成抗-HBe-HBeAg-抗-HBe-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
在试验结束时，有颜色变化的，提示有HBeAg存在，无颜色或颜色变化微弱的，则提示不存在HBeAg。
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乙肝五项检测(乳胶法)
(一)检测目的
乙型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。
(二)测定原理
HBsAg、HBsAh、HBeAg均采用双抗体(原)夹心法原理。
用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBs鲰单克隆抗体HBsAh，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆中HBsAg；用HBsAg重组抗原和链霉亲和素一BSA包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的HBs如重组抗原和生物素一BSA及其他试剂，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆标本中HBsAb；用抗HBeAg单克隆抗体(Ehl)包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBeAg单克隆抗体(Eh2)。
应用双抗体夹心法原理，用于定性检测血清或血浆中HBeAg。
HBsAg、HBsAb、HBeAg测试时，将血清／血浆标本滴人试剂板加样处．标本在毛吸效应下向E层析，如标本中含有相应的待测物质，在测试区(T)内会出现一条红色条带，则是阳性结果。
如标本中不含有相应的待测物质，则测试区(T)将没有红色条带，是阴性结果。
无论待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。
质控区内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAh、HBcAh采用竞争法原理。
用HBeAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的鼠抗HBeAg单克隆抗体。
应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆巾HBeAI，；用HBcAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的HBcAb单克隆抗体，应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆中HB。
Ah。
测试HB。
Ah、HBcAb时，将血清／血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛吸效应下向上层析。
如标本中含有相应的抗体．则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。
如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。
阳性标本，测试区(T)将没有红色条带；阴性标本，测试区(T)会出现明显的红色条带c无论相应的抗体是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。
质控医内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准．
(三)操作步骤
具体方法参照试剂盒说明书。
举例如下：
在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书．使用前将试剂板和血清／血浆标本恢复至室温(20～30％)。
从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在l小时内应尽快地使用。
1.将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2。
3滴)。
2.加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。
在20分钟后读取的结果无效．
(四)结果判定
由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项日HBeAb、HbcAb 使用竞争法原理。
因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不同的．请注意区别。
l .HBsAg、HBsAb、HbeAg
(1)阳性(+)：两条红色条带出现。
一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。
阳性结果表明：标本中含有待测物质。
(2)阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。
阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。
(3)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。
如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
(4)注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。
只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。
2 HBeAb、HBcAb
(1)强阳性(+)：仅质控区(c)出现一条红色条带．在测试区(T)内无红色条带出现。
阳性结果表明：标本中含有待测物质。
(2)弱阳性(+)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带出现。
阳性结果表明：标本中含有待测物质。
(3)阴性(一)：两条红色条带出现。
一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(c)。
阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。
(4)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。
在此情况下，应重新测试。
如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
(五)注意事项
l.请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。
2.乳胶法乙肝五项检测试剂板(血清／血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。
3.由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果可能有错误。
对可疑结果应作相应的进一步检测。
(六)生物安全防护
1.在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。
2.如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。
3.操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。
4.HBV对低温、干燥、紫外线、70％乙醇均有耐受性。
煮沸100℃10分钟、高压蒸汽灭菌121℃15分钟或f热160℃2小时均可灭活HBV。
5～10g／L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72小时，O 5％过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。
(七)临床意义
1. HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。
HBsAg也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。
2. HBsAh阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期，或既往曾感染过HBV，现在已恢复，而且对HBV 有一定的免疫力；同时，HBsAh阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即接种免疫成功的指标。
3. HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为70％～90％。
4. HBeAh阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb；在HBsAg和HBsAh 阴性时，如能检出HBeAh和HhcAh，也能确诊为乙型肝炎近期感染。
5. HBcAh—lgG阳性：高滴度表示正在感染}iBV，低滴度则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。
6. HBcAb—IgM阳性：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示检验对象血液
有较强传染性。
同时，HBcAh—IgM阳性还见于慢性活动性乙型肝炎。