小鼠脑组织病理总结 ppt课件
小鼠脑组织匀浆的制备 -回复
小鼠脑组织匀浆的制备-回复小鼠脑组织匀浆的制备，是一项常用的实验技术，在神经科学研究中具有重要的应用。
该技术可以用于分离和富集脑组织内的特定类型细胞（如神经元、星形细胞等），进而研究其结构、功能和分子机制等。
本文将一步一步介绍小鼠脑组织匀浆的制备方法，并解释其原理和注意事项。
第一步：准备实验器材和材料在进行小鼠脑组织匀浆实验之前，我们需要准备以下器材和材料：1. 小鼠大脑（获取小鼠的脑组织需要进行相应的伦理审批和操作）2. 磷酸盐缓冲液（PBS）：含有适当的盐浓度和pH值，用于缓冲和洗涤组织。
3. 离心管和离心机：用于离心和分离脑组织。
4. 组织破碎器：用于破碎脑组织，如高速均质机或超声波细胞破碎机。
第二步：取得小鼠脑组织首先，用PBS溶液冲洗小鼠的大脑，以去除血液和杂质。
然后，将小鼠的大脑放在清洁的工作台上，用小匀针或刀片将大脑从小鼠头部剥离下来。
注意要小心操作，避免损伤脑组织。
第三步：组织均质将剥离下来的大脑放入预先冷却的PBS缓冲液中，以避免组织的氧化和变质。
然后，将大脑转移到组织破碎器中。
根据实验需要，选择适当的均质方法进行组织均质。
常用的方法包括高速均质机和超声波细胞破碎机。
这些方法可以将脑组织破碎成均匀的细胞悬浮液。
在均质过程中，可以添加一定比例的PBS缓冲液，以保持细胞悬浮液的稀释度和比重。
第四步：离心和分离细胞将均质得到的细胞悬浮液转移到离心管中，并进行离心分离。
一般来说，离心速度和时间的选择应该根据细胞类型和实验目的来确定。
例如，对于富集神经元的细胞悬浮液，可以选择低速离心（如1000 g，10分钟），以沉淀较大的细胞碎片和细胞器。
然后，将上清液转移到新的离心管中，再次进行高速离心（如12000 g，15分钟），以沉淀细胞核和细胞膜。
得到的上清液即为小鼠脑组织的匀浆。
第五步：保存和应用最后，将脑组织匀浆保存在低温的液氮或冰箱中，以便后续实验的使用。
脑组织匀浆可以用于各种实验技术，如蛋白质分析、RNA/DNA提取、细胞培养和酶活性测定等。
小鼠缺氧病理实验报告
一、实验目的1. 复制小鼠缺氧模型，了解缺氧对机体的影响。
2. 观察缺氧对呼吸系统、中枢神经系统及血液的影响。
3. 分析影响缺氧耐受性的因素。
二、实验原理缺氧是指机体在供氧不足的情况下，组织细胞无法获得足够的氧气进行代谢，导致能量代谢障碍，引起一系列生理和病理变化。
本实验通过模拟不同类型的缺氧，观察缺氧对小鼠的影响，以期为临床治疗缺氧相关疾病提供理论依据。
三、实验材料1. 实验动物：健康小白鼠10只，体重20-25克。
2. 实验仪器：缺氧箱、呼吸机、显微镜、离心机、电子天平等。
3. 实验试剂：生理盐水、亚硝酸钠、氰化钾、钠石灰等。
四、实验方法1. 缺氧模型制备（1）低张性缺氧：将小白鼠放入缺氧箱中，箱内氧气浓度控制在5%以下，持续30分钟。
（2）一氧化碳中毒性缺氧：将小白鼠放入一氧化碳发生装置中，持续吸入一氧化碳30分钟。
（3）氰化钾中毒性缺氧：将小白鼠腹腔注射氰化钾50mg/kg，观察动物中毒症状。
2. 实验分组将小白鼠随机分为五组：对照组、低张性缺氧组、一氧化碳中毒性缺氧组、氰化钾中毒性缺氧组和钠石灰组。
3. 指标检测（1）呼吸频率：观察并记录实验前后小鼠的呼吸频率。
（2）中枢神经系统功能：观察并记录小鼠的行为变化，如兴奋、抑制、抽搐等。
（3）血液指标：检测小鼠血红蛋白、血氧饱和度等指标。
（4）组织学观察：取小鼠脑组织、肺组织等，进行光镜和电镜观察。
五、实验结果1. 低张性缺氧组（1）呼吸频率明显下降，表现为呼吸困难。
（2）中枢神经系统功能受到影响，出现兴奋、抑制等症状。
（3）血红蛋白和血氧饱和度明显降低。
（4）组织学观察：脑组织出现水肿、神经元变性等。
2. 一氧化碳中毒性缺氧组（1）呼吸频率明显下降，出现紫绀。
（2）中枢神经系统功能受到影响，出现昏迷、抽搐等症状。
（3）血红蛋白和血氧饱和度明显降低。
（4）组织学观察：肺组织出现水肿、肺泡出血等。
3. 氰化钾中毒性缺氧组（1）呼吸频率明显下降，出现紫绀。
脑组织特异表达S100B转基因小鼠的建立
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【 文章编号 】６ １７５ （０ ０ １７ －８ ６ ２ １ ）
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小鼠脑组织病理总结ppt课件
冰冻切片的制作
• 取材和固定： 灌注后立即切取组织块，并 快速投入固定液中，或者处死后直接冷冻。 • 脱水和透明：梯度蔗糖 • 包埋：OCT，3%聚乙烯醇。 • 切片制作：切片 • 贴片：直接贴 • 固定：冰冻丙酮3-5分 • 保存：-20°C
灌注
0.5%戊巴比妥钠100mg/Kg麻醉小鼠，5分钟 左右小鼠麻醉好，仰卧位固定四肢，用酒 精棉球擦胸腹部毛，前开皮肤暴露胸部肌 肉层，剑突上成V型剪开胸廓，暴露心脏， 剪掉右心耳（即视野下心脏上色暗红组 织），与心尖处30°角刺入左心室，37° 左右生理盐水约10ml缓慢注入，冲净血液 止，换4%多聚甲醛溶液（4°预冷），1020分钟，鼠僵硬为好。
病理相关试剂配制
• 4%多聚甲醛：40g多聚甲醛粉末溶于500ml 水（50°左右）黄枪头加一滴1M氢氧化钠 至澄清，冷却至室温，与500ml0.2MPBS混 合，滤纸过滤。 • 0.2MPB:1000ml 0.2M磷酸氢二钠810ml称57.996g 0.2M磷酸二氢钠190ml称5.928g • 蔗糖：用0.1MPBS配制 • 生理盐水：0.85%氯化钠溶液
切片
• 石蜡：冷水——温水（54°-56°）—— 烤片（80°） 切好烤片后可以室温保存。 • 冰冻：切片温度-18°—-20° 直接贴 切好于冰冻丙酮中固定5分后-20° 保存。
小鼠解剖知识点总结
小鼠解剖知识点总结小鼠（Mus musculus）是一种常见的啮齿动物，也是实验室中常用的动物模型之一。
对小鼠的解剖学知识的掌握对于实验室工作者来说非常重要，因为对小鼠的解剖可以帮助科研人员更好地了解小鼠的内部结构和器官功能，从而为其实验研究提供更准确的数据和结果。
本文将总结小鼠解剖知识点，帮助读者更好地了解小鼠的内部结构和解剖特点。
一、小鼠的外部特征小鼠的头部呈圆锥形，眼鼻较突，触须发达，上颌略长于下颌，耳大而外露，耳垂圆圆的，四肢短小，尾巴较长。
小鼠的毛色一般为灰色或棕色，也有白色或黑色的个体。
在解剖时，我们可以根据这些外部特征来初步判断小鼠的品种、性别和年龄。
二、小鼠的骨骼系统1. 小鼠的颅骨小鼠的颅骨由颅底骨和颅顶骨构成，颅骨的形状因品种而异。
在解剖时，我们可以通过观察颅骨的形状和结构来初步判断小鼠的品种和年龄。
2. 小鼠的脊柱小鼠的脊柱由颈椎、胸椎、腰椎和尾椎组成，其中颈椎的数量为7，胸椎的数量为13，腰椎的数量为6，尾椎的数量为28-31。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的脊柱来了解其躯干的骨骼结构和解剖特点。
3. 小鼠的四肢骨骼小鼠的四肢骨骼包括肱骨、桡骨、骨和尺骨，其形态特征因品种而异。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的四肢骨骼来了解其四肢的骨骼结构和特点。
4. 小鼠的骨骼连结小鼠的骨骼连结主要是通过关节连接，以及肌腱和韧带的连接。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的骨骼连结来了解其骨骼系统的连结结构和功能。
三、小鼠的消化系统1. 小鼠的口腔小鼠的口腔由牙齿、舌头和颊粘膜组成，其中牙齿主要包括门齿、臼齿和犬齿。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的口腔结构来了解其牙齿的形态特征和生长情况。
2. 小鼠的食道小鼠的食道位于颈部，连接口腔和胃。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的食道来了解其食道的结构和功能。
3. 小鼠的胃小鼠的胃位于腹部，具有前胃、中胃和后胃三部分。
在解剖时，我们可以通过观察小鼠的胃来了解其胃的结构和功能。
小鼠共济失调实验报告
共济失调是一种常见的神经退行性疾病，其特征是运动协调性障碍。
脊髓小脑共济失调（SCA）是一组以小脑损害为主的遗传性共济失调，可分为多种亚型，其中SCA1、SCA2、SCA3等亚型主要由基因突变引起。
本研究旨在构建小鼠共济失调模型，并通过脑深部刺激（DBS）治疗探讨其治疗效果。
二、实验材料与方法1. 实验动物：选用健康成年C57BL/6小鼠，雌雄各半，体重20-25g。
2. 实验分组：将小鼠随机分为以下四组：（1）正常对照组：未经任何处理的健康小鼠；（2）模型组：通过基因敲入技术构建SCA1小鼠模型；（3）DBS治疗组：在模型组基础上，采用DBS技术进行脑深部刺激治疗；（4）DBS+运动治疗组：在DBS治疗组基础上，进行运动训练。
3. 实验方法：（1）模型构建：采用基因敲入技术，将SCA1基因敲入C57BL/6小鼠，获得SCA1小鼠模型。
（2）脑深部刺激（DBS）治疗：将DBS电极植入小鼠小脑区域，通过电刺激改善运动功能。
（3）运动训练：对DBS+运动治疗组小鼠进行一定时间的运动训练，观察其对运动功能的影响。
4. 数据采集与处理：（1）运动功能评估：采用旋转杆实验、平衡木实验等方法评估小鼠的运动功能；（2）神经电生理检测：采用脑电图（EEG）等方法检测小鼠的神经电生理变化；（3）组织学观察：采用苏木素-伊红（HE）染色、尼氏染色等方法观察小鼠小脑组织病理变化；（4）统计分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较各组小鼠运动功能、神经电生理变化和组织病理变化等指标。
1. 运动功能评估：与正常对照组相比，模型组小鼠在旋转杆实验、平衡木实验等运动功能测试中表现明显下降，说明模型构建成功。
DBS治疗组和DBS+运动治疗组小鼠的运动功能较模型组显著改善。
2. 神经电生理检测：与正常对照组相比，模型组小鼠EEG波幅降低，频率降低，表明神经电生理功能受损。
DBS治疗组和DBS+运动治疗组小鼠的EEG波幅和频率较模型组显著提高。
小鼠脑细胞提取流式
小鼠脑细胞提取流式引言：流式细胞术是一种常用的实验技术，可以对细胞进行高通量的分析和筛选。
在神经科学研究中，对小鼠脑细胞进行提取和分析是非常重要的一步。
本文将从提取小鼠脑细胞的方法、相关实验步骤以及结果分析等方面进行介绍，以帮助读者更好地理解和应用流式细胞术。
一、方法1. 小鼠脑组织的收集：a. 使用无菌手术器械将小鼠的头部固定并取出脑组织。
b. 将脑组织置于含有冷离心缓冲液的离心管中，并尽快将其置于冰上冷却。
2. 细胞溶解：a. 将脑组织取出后，在无菌条件下将其切碎，加入含有酶解液的离心管中。
b. 将离心管置于37摄氏度的恒温水浴中，进行细胞酶解。
3. 细胞过滤：a. 使用细胞过滤网将酶解后的细胞悬液过滤。
b. 将过滤后的细胞悬液置于离心管中，进行离心。
4. 细胞洗涤：a. 将离心后得到的细胞沉淀加入含有冷离心缓冲液的离心管中。
b. 进行洗涤，去除残留的酶解液和细胞碎片。
5. 细胞计数：a. 使用细胞计数板或自动细胞计数仪对提取的小鼠脑细胞进行计数。
b. 记录细胞数目，以备后续实验使用。
二、实验步骤1. 样本准备：a. 准备正常小鼠脑组织样本。
b. 按照上述方法提取小鼠脑细胞。
2. 细胞标记：a. 准备适当的抗体，用于标记感兴趣的细胞亚群。
b. 将提取的小鼠脑细胞与抗体进行孵育，使其发生特异性结合。
3. 流式细胞仪检测：a. 将标记后的细胞悬液注入流式细胞仪。
b. 设置合适的仪器参数，进行细胞检测和数据采集。
4. 数据分析：a. 使用流式细胞仪分析软件对采集到的数据进行分析。
b. 根据细胞标记的结果，对不同细胞亚群进行定量和定性分析。
三、结果分析通过流式细胞仪的检测和数据分析，我们可以得到关于小鼠脑细胞的丰富信息。
例如，我们可以分析不同细胞亚群在脑组织中的比例，以及它们在不同条件下的变化。
此外，通过进一步的数据分析，我们还可以探究细胞间的相互作用和信号传导机制。
结论：提取小鼠脑细胞并进行流式细胞分析是神经科学研究中的重要一步。
小鼠血脑屏障实验报告
一、实验背景血脑屏障（Blood-Brain Barrier，BBB）是中枢神经系统的一个重要生理结构，主要由脑毛细血管内皮细胞、周细胞、星形胶质细胞和基底膜等组成。
BBB的主要功能是维持中枢神经系统内环境的稳定，阻止有害物质进入脑内，对脑内神经元的正常生理活动至关重要。
近年来，血脑屏障功能紊乱与多种神经系统疾病的发生发展密切相关，如阿尔茨海默症、脑卒中和脑胶质瘤等。
因此，研究血脑屏障的功能及其调节机制对于神经系统疾病的治疗具有重要意义。
本研究旨在通过实验研究小鼠血脑屏障的功能，探讨血脑屏障在神经系统疾病中的作用。
二、实验材料与方法1. 实验动物：健康成年雄性C57BL/6小鼠，体重约20g。
2. 实验试剂：免疫荧光染色试剂盒、神经特异性荧光染料（Fluorescein isothiocyanate，FITC）、神经元特异性抗小鼠抗体（Neuronal Nuclei Antibody，Nestin）、脑毛细血管内皮细胞特异性抗体（Endothelial Cell Markers，ECM）、周细胞特异性抗体（Pericyte Markers，PCM）、星形胶质细胞特异性抗体（Astrocyte Markers，AM）、基底膜特异性抗体（Basement Membrane Markers，BMM）。
3. 实验仪器：荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、图像分析软件。
4. 实验方法：（1）动物分组：将实验小鼠随机分为对照组和实验组，每组10只。
（2）血脑屏障损伤：实验组小鼠通过尾静脉注射生理盐水，对照组小鼠注射等量生理盐水。
（3）免疫荧光染色：取小鼠脑组织，固定、切片、漂洗、封闭、加一抗（Nestin、ECM、PCM、AM、BMM），加二抗（FITC标记），复染细胞核（DAPI），封片。
（4）图像采集与分析：使用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察小鼠脑组织切片，利用图像分析软件进行图像采集和分析。
三、实验结果1. 对照组小鼠脑组织切片中，Nestin、ECM、PCM、AM、BMM荧光染色均呈阳性，表明血脑屏障结构完整。
可移植性人脑胶质瘤组织裸小鼠脑内移植
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小鼠脑的结构范文
小鼠脑的结构范文小鼠是常用的实验动物，其脑结构复杂且具有类似于人类脑的基本组织结构。
小鼠脑主要由脑干、小脑、大脑半球和间脑组成。
1.脑干：脑干是小鼠脑的基础部分，连接脊髓与脑神经系统，并控制基本的生理功能如呼吸、心跳等。
脑干包括中脑、桥脑和延髓。
中脑位于脑干的顶部，控制听觉与视觉的处理，调节身体姿势与运动。
桥脑是中脑与延髓之间的结构，负责控制眼睛的五十肌运动和面部表情。
延髓位于脑干的下部，控制心跳、呼吸和消化功能。
2.小脑：小脑位于脑干的后部，控制平衡、协调和运动。
小脑由两个半球组成，每个半球都有类似于大脑皮层的分层结构。
小脑蚓部是小脑的中央部分，其外层由白质组织构成，内层是灰质。
小脑蚓部通过蚓间沟与两个半球相连接，协调肌肉运动。
3.大脑半球：大脑半球是小鼠脑的最大部分，负责嗅觉、视觉、听觉和学习记忆等高级功能。
大脑半球由两个半球组成，每个半球有一个裂缝将其分为两个叶片。
大脑半球的外层是皮质，受到外部刺激并将其转化为感觉和认知信息。
大脑半球的内部包含多个结构，包括海马体和纹状体。
-海马体：海马体位于大脑半球的内侧，参与学习和记忆的过程，特别是空间记忆的形成。
海马体具有让新信息与已有记忆相结合的功能。
-纹状体：纹状体分为内侧纹状体和外侧纹状体。
纹状体参与到运动控制、奖赏和行为规划等过程中。
内侧纹状体与海马体相连，外侧纹状体与其他脑区进行信息交流。
4.间脑：间脑负责调节内分泌系统，参与调节体温、水平衡、食欲和性行为等生理过程。
间脑包括丘脑和下丘脑。
丘脑位于大脑半球之间，是感觉信息与运动控制之间的重要途径。
下丘脑激活和控制腺体分泌激素。
总结起来，小鼠脑的结构包括脑干、小脑、大脑半球和间脑。
脑干控制基本的生理功能，小脑负责协调平衡和运动，大脑半球是高级功能的中心，间脑调节内分泌系统。
这些脑区域相互协同工作，实现了小鼠各种复杂的行为和认知功能。
小鼠的脑结构相对简单，因此成为研究神经系统功能和疾病机制的重要模型。
动物大脑病理切片
摘自：《萱草根素对家兔中枢神经损害的病理学研究》6.2.1 大脑染色观察结果6.2.1.1 大脑 HE 染色结果正常对照组家兔大脑皮质结构清晰，神经细胞结构完整，无炎性细胞浸润。
白质部神经纤维染色均匀，为淡粉红色，排列整齐纹理清晰(图 6-1)。
试验开始后第 4 天，即可发现试验组家兔白质部神经纤维脱髄鞘，神经纤维排列紊乱，结构疏松，此时神经细胞未见明显病变(图 6-2)，第 7 天，脱髄鞘进一步加强，髄鞘间的空隙进一步加大，胶质细胞核有所减少，第 10 天，神经细胞胞体固缩，染色较深，有的细胞固缩呈三角形，胞核染色深，结构模糊，核仁不明显(图 6-3)，13 d 后，坏死细胞进一步增多，有时胞核和深染的胞质不易区分开来，神经细胞变性、坏死，被胶质细胞吞噬，有明显的“噬神经”现象，胶质细胞增生，有的形成结节(图 6-4)，16 d、19 d，细胞坏死普遍，毛细血管扩张，周围有淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，白质部神经纤维脱髄鞘，神经纤维排列紊乱，结构疏松，呈丝瓜络样变，胶质细胞核减少(图 6-5)。
6.2.1.2 大脑甲苯胺蓝染色结果正常对照组家兔神经细胞结构清晰，胞核大而圆，核仁粗大清晰可见，胞桨内含有丰富蓝色呈块状的尼氏体，白质中胶质细胞核分布密集(图 6-6)，试验组家兔 4 d、7 d未见神经细胞的明显变化，10d，神经细胞固缩，呈三角形或长椭圆形，染色深，胞核结构消失，与胞桨一起染成深蓝色，尼氏体溶解、消失(图 6-7)，13 d、16 d、19 d，坏死细胞进一步增多，视野中可见多个坏死的细胞，呈深染的团块状(图 6-8)。
6.2.1.3 大脑透射电镜结果试验组家兔有髄神经纤维髄鞘板层结构疏松，出现较大的空隙，严重的髄鞘断裂(图6-9)。
大脑神经细胞胞膜溶解消失，失去细胞界限，胞桨内细胞器出现严重病变，数目减少，粗面内质网和高尔基体发生扩张，结构不清，线粒体肿胀，嵴断裂、溶解、消失，呈空泡状，有的神经细胞出现明显的细胞内染色体边集现象，核膜消失，粗面内质网扩张，有的神经细胞染色质浓缩，核周间隙扩张，细胞坏死，坏死细胞被胶质细胞黏附和围绕，呈现“噬神经现象”(图 6-10, 6-11, 6-12)。
解剖小白鼠PPT课件
动物编号１ 2 3 ４ 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
随机数目16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23
归 组Ｂ Ｂ Ａ Ｂ Ａ Ａ Ｂ Ａ Ｂ Ｂ Ａ Ａ
现令单数代表A组，双数代表B组，结果列入A组 的动物有8只，列入B组的动物有6只。如要使两组相 等，须将A组减少一只，划入B组。应把哪一只小鼠划 入B组，仍可用随机数字表，在上述抄录的14个数后 面再抄录一个数字为78，此数以8除之，因为归入A组 的小鼠有8只，故以8除，得余数6。于是把第6个A （即编写为第12号的小鼠）划给B组。经过这样调整， 两组小鼠的分配如下。
（1）颈椎脱臼处死法 此法是将实验动物的 颈椎脱臼，断离脊髓致死，为小鼠最常用 的处死方法。操作时实验人员用右手抓住 鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他 粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按 压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉 向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断 离，实验动物立即死亡。
17
（2）断头处死法 此法适
10,20,30,40,50, 60,70,80,90。
4
小白鼠的分组
动物实验时，常常要将选择好的实验动物， 按研究需要分成若干 组，分组时为了避免人为 的因素影响常应用随机 字表进行完全随机化的 分组 ：
1．将实验单位随机分成两组 设有小鼠14号， 试用随机数字表将其分成两组。先将小鼠依次 编为1、2、3……14号，然后任意从随机数字 表的某 行某数字开始抄录14个数，编排如下：
单手抓取固定
（图3） 放松拇指和食指，用
另外三个手指控制小鼠，然后用
食指和拇指捏住小鼠头部两边疏
松的皮肤提起小鼠完成抓取保定。
8
取小鼠脑组织完整版
取小鼠脑组织HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】丁香园上面总结的方法，排版有点乱。
其实过程与大鼠近似，我的经验是：1.?材料准备；大剪刀、眼科剪、眼科镊、大镊子、滤纸、竹签等；2.?步骤：处死小鼠，取头颅；剪开皮肤，漏出颅骨；用大尖镊子夹住两侧眼眶，用眼科剪稍剪除颅骨中线；再用眼科镊夹住颅骨从内向外夹，从下向上逐步去除颅骨；当全脑露出时，再用眼科镊去除脑膜和血管；然后用竹签从嗅球处向下取出全脑，即可。
3.?注意事项：用力轻柔，否则容易弄破脑部；用剪刀剪颅骨时，一定要贴壁向上剪，否则容易剪破脑部；去除脑膜时，不能硬拉，否则容易弄破大脑；取出全脑时应把头顶朝下，用竹签轻轻取出，离桌面也不要太远、高；若留病理，建议一定要取完整无损的大脑。
做免疫组化的话，稍微麻烦一点儿，因为脑组织含水量多，要固定的好，就需要先灌注。
先麻醉小鼠剪开胸腔，找到心脏，从心尖入针，剪开右心耳先用生理盐水灌注直到从心耳流出来的水清亮了再改用固定液（一般是4%多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬小鼠只需要用注射器就行了，我做的25～35g的小鼠一般用50mLNS+30mL多聚甲醛。
具体步骤：常规麻醉小鼠，将其固定，用剪刀剪开胸部皮肤，暴露出皮下组织，剪开时注意钝性分离，以免误伤。
然后用镊子提起剑突，用剪刀剪开胸腔，剪断两侧肋骨，暴露整个胸腔，小心误伤肺及心脏、大血管。
用镊子撕开心包膜，暴露心脏，用眼科剪剪开右心耳，然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入左心室，注射，注射时小心针头滑脱。
生理盐水灌流至肺和肝的颜色都变成灰白色即可。
然后用多聚甲醛灌流，针孔最好是同一个，多聚灌流时小鼠四肢会抽搐，待抽搐结束，小鼠僵硬即可。
取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅，用剪刀在小鼠头颅中间皮肤剪一刀，将两边皮肤向下翻用手捏住，暴露整个颅骨，用眼科剪从脊髓端插入椎孔，沿着颅正中线剪开颅骨，注意剪刀向上翘一些，以免误伤脑组织，剪开后用弯眼科镊分离颅骨，小心分离，直至暴露整个大脑，然后用弯镊伸入颅底离断颅底神经，就可以取出整个脑子了。
小鼠脑组织匀浆的制备 -回复
小鼠脑组织匀浆的制备-回复小鼠脑组织匀浆是一种常用的实验方法，用于提取脑组织中的细胞、蛋白质或核酸等物质。
这种方法可以在许多研究领域中使用，包括神经科学、药理学和分子生物学。
制备小鼠脑组织匀浆的过程虽然相对简单，但需要一些专门的实验技巧和设备。
下面将介绍一种标准的小鼠脑组织匀浆制备方法。
步骤一：准备工作1. 准备所需仪器和试剂。
这包括放置小鼠的无菌操作台、灭菌的工作台、低温离心机、冷冻离心机、显微镜、均质器、离心管、缓冲液和杂质去除试剂等。
2. 打开通风机、紫外线灯和消毒柜等，进行无菌操作。
步骤二：小鼠准备1. 根据实验需要，选择合适的小鼠品系、性别和年龄。
一般来说，小鼠的年龄最好在6-12周之间。
2. 使用无菌操作技术，将小鼠放置在无菌的操作台上，并使用无菌器械进行操作。
3. 注射无菌盐水或其他适当的麻醉剂，使小鼠完全麻醉。
（使用合适的剂量和方法，遵循实验室内部的相关指导或法律法规。
）4. 完全麻醉后，用无菌钳子将小鼠取出放在工作台上。
检查小鼠是否完全麻醉，无反应和呼吸困难等。
步骤三：脑组织取样1. 使用无菌钳子将小鼠头部固定，使之保持相对稳定。
2. 使用手术剪刀和锋利的手术割刀，顺着中线切开小鼠头部，并小心地将头皮和肌肉剥离。
3. 用锐利的手术剪刀切开颅骨，在适当的位置用手术钻在头骨上打孔。
4. 将注射器配备的琼脂糖溶液慢慢注入脑室，然后用注射针或吸管将脑浆吸出。
步骤四：脑组织匀浆1. 取出放置有脑浆的离心管，进行一些常规操作，比如用显微镜检查样本的纯度。
2. 将脑浆转移到均质器中，并按照设备说明使用合适的条件均质。
比如，使用低速均质，并间歇性地加入冷冻离心机。
3. 将均质后的脑浆离心，以去除细胞碎片和杂质物。
4. 转移离心上清液到新的离心管中，并进行下一步的实验操作。
总结起来，制备小鼠脑组织匀浆的过程包括准备工作、小鼠准备和脑组织取样等关键步骤。
通过采用无菌操作技术和合适的设备和试剂，可以获取高质量的小鼠脑组织匀浆样本，为后续实验提供可靠的基础。
神经实验5 小鼠脑片免疫组织化学
实验5 小鼠脑片免疫组织化学（SABC法）实验一、实验目的了解免疫组织化学实验原理，熟练掌握实验操作步骤。
二、实验原理免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）是指用免疫学原理（从组织细胞水平进行抗原和抗体结合），通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。
一般认为凡具有抗原性或半抗原性物质都可以用免疫细胞化学方法检测并显示出来。
在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位，还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。
免疫组织化学的显著特点是特异性强，因为免疫学的基本原理是抗原与抗体“一对一”的特异结合，所以免疫组织化学从理论上讲也是“一对一”的组织细胞中抗原的特定显示。
如角蛋白(keratin)显示上皮成分、LCA显示淋巴细胞成分。
只是当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
敏感性高：在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍，现在由ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍乃至可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化的方法越来越方便地应用于常规诊断工作中。
定位准确、形态与功能相结合：虽然聚合酶链反应(PCR)方法已经广泛地应用于疾病的诊断，但由于不能在组织和细胞内进行明确的定位而限制了PCR在病理组织学上的应用。
免疫组化则可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可以同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对于病理学研究的深入是十分有意义。
三、实验器材略四、实验步骤1. 载玻片准备将新载玻片置于洗涤剂中煮沸30min，先后用清水和蒸馏水冲洗干净，晾干，放入浓硫酸-重铬酸钾洗液中浸泡12小时，流水冲洗后再用蒸馏水清洗，干燥，在95%的酒精中浸泡24h，擦干。
灌注取脑实验报告
一、实验目的1. 掌握动物解剖技术，熟悉小鼠心脏灌流及取脑的方法。
2. 了解脑组织在生理学、病理学等研究中的重要性。
3. 提高实验操作技能，培养严谨的科学态度。
二、实验原理灌注取脑实验是研究脑组织生理、生化及病理变化的重要方法。
通过心脏灌流，将生理盐水或特定试剂注入动物体内，达到清除脑组织中的血液、细胞等杂质，便于后续实验研究。
本实验采用小鼠作为实验动物，通过心脏灌流及取脑，获取脑组织样本。
三、实验材料1. 实验动物：成年小鼠2. 仪器：解剖显微镜、手术器械、灌流装置、剪刀、镊子、注射器、注射针、泡沫板、生理盐水、固定液等3. 药品：戊巴比妥钠、肾上腺素、生理盐水、固定液等四、实验步骤1. 麻醉：将小鼠放入戊巴比妥钠溶液中，待小鼠失去意识后，立即用针头固定在泡沫板上。
2. 解剖：扯起小鼠胸部皮肤，用剪刀剪开胸部肌肉，暴露心脏。
3. 心脏灌流：用注射针连接灌流装置，将生理盐水注入小鼠心脏，使血液流向脑部。
4. 取脑：待生理盐水灌流完成后，将小鼠头部朝下，用剪刀剪开颅骨，暴露脑组织。
5. 固定：将脑组织取出，放入固定液中固定，以便后续实验研究。
6. 清洗：将固定好的脑组织用生理盐水清洗，去除杂质。
7. 标本保存：将清洗后的脑组织放入装有固定液的容器中，密封保存。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过心脏灌流及取脑，成功获取了小鼠脑组织样本。
2. 结果分析：本次实验操作规范，脑组织样本质量良好，为后续实验研究提供了有力支持。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免损伤脑组织。
2. 灌流速度不宜过快，以免损伤脑组织。
3. 固定液的选择对脑组织样本质量有重要影响，应选用合适的固定液。
4. 实验过程中，应注意动物福利，尽量避免动物痛苦。
七、实验总结本次实验成功进行了小鼠心脏灌流及取脑操作，掌握了动物解剖技术，为后续实验研究奠定了基础。
在实验过程中，我们应注重操作规范，确保实验结果的准确性。
同时，本次实验也使我们认识到动物福利的重要性，为今后实验研究提供了有益经验。
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5
冰冻切片的制作
• 取材和固定： 灌注后立即切取组织块，并 快速投入固定液中，或者处死后直接冷冻。
• 脱水和透明：梯度蔗糖 • 包埋：OCT，3%聚乙烯醇。 • 切片制作：切片 • 贴片：直接贴 • 固定：冰冻丙酮3-5分 • 保存：-20°C
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灌注
0.5%戊巴比妥钠100mg/Kg麻醉小鼠，5分 钟左右小鼠麻醉好，仰卧位固定四肢，用 酒精棉球擦胸腹部毛，前开皮肤暴露胸部 肌肉层，剑突上成V型剪开胸廓，暴露心脏， 剪掉右心耳（即视野下心脏上色暗红组 织），与心尖处30°角刺入左心室，37° 左右生理盐水约10ml缓慢注入，冲净血液 止，换4%多聚甲醛溶液（4°预冷），1020分钟，鼠僵硬为好。
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9
脱水和透明，浸蜡
• 石蜡切片：75%，80%，85%，90%，95%（2 个），无水乙醇（2）中每个4小时-过夜， 正丁醇1-2天。二甲苯（2个）20-30分钟。 三个蜡，每个大于2小时。
• 冰冻切片：固定后脱水用10%20%30%蔗糖 （0.1MPBS溶）每个室温下4小时——过夜， OCT包埋，先在锡纸盒冻一层，在中间放组 织，切面朝下，再用OCT将组织没过，尽量 减少气泡，在液氮表面，保持小盒水平， 待中心尚透明时取出，放于-80°C保存。
小鼠脑组织病理实验总结
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1
内容
• 石蜡切片的制作 • 冰冻切片的制作 • 免疫组化 • 免疫荧光 • HE • 病理相关试剂配制 • 注意事项
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精品资料
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
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10
切片
• 石蜡：冷水——温水（54°-56°）——
烤片（80°）
切好烤片后可以室温保存 。
• 冰冻：切片温度-18°—-20°
直接贴Βιβλιοθήκη 分后-20°切好于冰冻丙酮中固定5
保存。
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11
固定方法注意事项
1.组织块大小2cmx2cmx0.5cm 2.组织标本应及时放入固定液中,切忌干涸 3.组织固定后必须冲洗,除去多余的固定液 4.一般固定剂温度以室温,某些病毒则须低温
—冷却至室温
—再修复一次冷却
—PBS5分×3
—2020/1擦1/13 片加一抗，4°过夜
15
—第二日PBS5分×3
—加二抗 室温20分
—PBS5分×3
—DAB显色
—水冲5-10分
—苏木素1-3分
—水冲10-15分
—80%85%90%每个3分
—95%（2个）无水乙醇（2个）二甲苯（2个 ）每个5分
—中性树胶封片。
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7
固定
• 4%多聚甲醛根据不同实验需求要求石蜡切 片的固定时间不同，几小时到一周。
• 我曾用过2天，可以。 • 冲水，固定的时间越长冲水时间越长，预
防甲醛沉积。
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8
取脑
断头，剪开皮肤拨向两侧暴露颅骨，从 枕骨大孔处沿正中线剪开露骨，用镊子掰 开露骨，暴露脑组织，用弯头镊将脑组织 勾出，在坐标纸上根据小鼠脑图谱取相应 脑区组织，厚3mm左右。
20-30分，加入g氧化汞煮沸2分钟，
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注意事项
• 安全 • 解剖位置 • 液体配制 • 染色时间 • 原因查找
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免疫荧光
—PBS5分×3
—5%BSA室温封闭1小时
—加一抗，4°过夜或根据说明书时间
—第二日PBS5分×3
—加二抗37°孵育1小时
—PBS5分×3
—DAPI染色
—PBS2分
—丙三醇封片荧光显微镜下观察照相。
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HE
—70°烤片一夜 —二甲苯3个每个10分钟无水乙醇，95%，90%
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• 阻断液：0.3% H2O2 甲醇溶液。30%双氧水 2ml加入甲醇定容至200ml。（现用现配）
• 修复液：（400ml） 柠檬酸0.16g 柠檬酸钠1.18g
• 苏木素： • 100g硫酸铝钾加热溶于1250ml水中 • 5g苏木素精粉末溶于100ml无水乙醇中 • 溶解后硫酸铝钾稍凉，加入醇溶苏木素煮沸
温度及孵育时间 5.每张切片应表明抗体名称,防止相互混淆
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13
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14
实验过程
—70°考片一夜
—二甲苯3个每个10分钟无水乙醇，95%，90%，85 ，80%每个10分钟
—3%双氧水阻断室温10分钟（现配现用）
—抗体修复液（现配，400ml一次一个抗体盒）
微波炉高火6-7分
• 4%多聚甲醛：40g多聚甲醛粉末溶于500ml 水（50°左右）黄枪头加一滴1M氢氧化钠 至澄清，冷却至室温，与500ml0.2MPBS混 合，滤纸过滤。
• 0.2MPB:1000ml 0.2M磷酸氢二钠810ml称57.996g
0.2M磷酸二氢钠190ml称5.928g
• 蔗糖：用0.1MPBS配制 • 生理盐水：0.85%氯化钠溶液
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
石蜡切片的制作
• 取材和固定： 处死动物后或者灌注后立即 切取组织块，并快速投入固定液中。
• 脱水和透明：梯度酒精和二甲苯 • 浸蜡和包埋：石蜡 • 切片制作：切片 • 贴片：捞片，展片 • 保存：烤片
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下处理,用丙酮-20度至-40度固定30分钟 5.浓度采用10%中性甲醛或4%多聚甲醛 6. 固定液量是标本体积20倍 7.固定时间不超过24小时
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组化实验设计
1.对常规组织切片进行仔细观察,根据可提供 形态学特点,选择最佳并能反映病变的组织 标本
2.列出免疫组化的指标 3.进行预实验(设立阳性、阴性对照) 4.找出抗体的最佳修复方法、稀释度、孵育
，85%，80%每个5分钟 —苏木素1-5分 —水 —盐酸酒精 —水 —0.5%氨水
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—水 —95%酒精2分 —0.5%醇溶伊红1秒 —95%酒精30秒 —95%酒精，无水乙醇（3个）每个2分 —二甲苯（2个）每个2分钟 —中性树胶封片，吹干
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病理相关试剂配制