无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验
培养基模拟灌装试验(07.7.7)教材
培养基模拟灌装试验（MFT） 二、培养基灌装试验的要求
模拟试验应尽可能模拟常规的无菌生产工艺。 每次灌装数量应大于 5000 瓶。 对于小批量产品，培养基灌装数量至少应等于产品 数量。 5000 瓶的染菌数应为0。 再验证周期 单一规格品种：2次/年。 多规格品种：每一规格品种 1次/年。 生产工艺、生产环境、主要设备变更时，连续试验3 批。 每位无菌操作者每年至少参加1 次成功的MFT 。
培养基模拟灌装试验（MFT）
（7）人员 A. 更衣?
B. 消毒?
C. 操作过程? D. 操作人员?
E. QC人员?
F. 管理人员? G. 其它人员?(如外来参观人员等)
培养基模拟灌装试验（MFT）
（8）细菌种类鉴别及污染源
A. 链菌、球菌
B. 杆菌 C. 其它细菌
人员
水系统 其它
四、MFT的前期工作
模拟灌装试验人员的培训 （1）模拟灌装试验人员无菌操作知识培训 （2）模拟灌装试验人员无菌检验知识培训 （3）模拟灌装装备检修人员的无菌设备维修 知识培训 （4）模拟灌装试验SOP培训（含生产、QC、 计量、装备） （5）模拟灌装试验SOR培训（含生产、 QC、计量、装备）
生产环境变更 生产工艺变更 主要设备变更 主要关键岗位生产人员变更 阳性试验变更 阳性试验变更
培养基模拟灌装试验（MFT）
无菌原料药和无菌制剂（非最终灭菌制剂） 生产出现如下情况
长期停产后复产 新生产线投产前 染菌事故复产
培养基模拟灌装试验（MFT）
Hale Waihona Puke 六. 培养基灌装试验（MFT）样品的培养 和结果分析 样品的培养
培养基模拟灌装试验(07.7.7)
转入20～25℃至少培养7天。 在第三天和第七天至少观察培养基样品微 生物的生长情况一次，并且在检测期间的 最后一天至少再观察一次。
培养基模拟灌装试验（MFT）
结果的分析
对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容
至少应包括菌落、细胞形态学及革兰染色特性等。 不成功（染菌）原因 （1）环境？（生产？检验？储存？） （2）设备？ （3）物料？ （4）转移过程的容器？ （5）水？ （6）检测?
培养基模拟灌装试验（MFT）
环境验证
（1）HVAC系统的微生物、尘粒验证 （2）洁净区压差验证 （3）洁净区风速验证 （4）B级背景下A级单向层流验证
培养基模拟灌装试验（MFT）
无菌生产设备的灭菌验证
（注意：模拟分装设备应在无菌效期内进行） （1）灭菌设备如隧道烘箱、干热灭菌柜、湿 热灭菌柜灭菌效果验证 （2）直接接触无菌药品的设备、容器、管道 灭菌效果验证 （3）除菌过滤器除菌效果验证
生产环境变更 生产工艺变更 主要设备变更 主要关键岗位生产人员变更 阳性试验变更 阳性试验变更
培养基模拟灌装试验（MFT）
无菌原料药和无菌制剂（非最终灭菌制剂） 生产出现如下情况
长期停产后复产 新生产线投产前 染菌事故复产
培养基模拟灌装试验（MFT）
六. 培养基灌装试验（MFT）样品的培养 和结果分析 样品的培养
培养基模拟灌装试验（MFT） 一、定义
MFT——Media Fill Test 英文的缩写。中文意思为： 培养基灌装试验 MFT——是用于证明无菌产品的生产过程在确定的环 境、人员、工艺、物料、设备和监控条件下，是否能 有效地防止微生物污染，保证所提供产品的无菌可靠 性的一种方法。 MFT是用一种模拟替代物质来模拟整个无菌生产过 程，在所得的模拟产品中加注培养基，再对所得的全 部培养基样品进行无菌培养。 培养基模拟试验是无菌生产工艺的验证手段，是任何 非最终无菌药品生产必须进行的一项验证。
无菌制剂(滴眼剂)培养基模拟灌装工艺验证
培养基模拟灌装验证验证小组人员培养基模拟灌装验证方案目录1 概述2 验证目的3 适用围4 相关部门职责5 验证条件6 验证引用的文件7 培养基8 培养基模拟灌装试验条件9 培养基模拟灌装试验的频率10培养基模拟灌装量和灌装数量的确定11培养基模拟灌装最差条件的设计12培养基配制和无菌灌装操作过程13 取样计划14试验样品的培养15 试验结果评价16环境监控和微生物限度控制17清场与清洁18培养基灌装过程监控记录19偏差调差20纠偏措施21异常情况处理程序22变更23拟定再验证周期24验证结果评定与结论附录附录1：人员培训附录2：系统验证及设备验证确认附录3：纯化水检验报告单附录4：注射用水检验报告单附录5：环境监测报告单附录6：胰酪胨大豆肉汤培养基适应性实验结果附录7：胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查结果附录8：培养基及包材确认附录9：最差条件确认附录10：包材检验结果附录11：未参加培养灌装瓶原因说明附录12：培养基的培养观察记录附录13：培养基的培养阳性结果和培养基灌装失败情况说明附录14：培养基灌装过程中监控统计表附录15：灌装生产结束清洁记录附录16：质控过程监控1 概述培养基模拟灌装主要用的是胰酪胨大豆肉汤培养基，适用于天龙药业江北新厂滴眼剂车间生产线。
依据批准的滴眼剂车间培养基模拟灌装验证方案，实施培养基模拟灌装试验；评价无菌生产工艺的可信限度达到可接受的合格标准，确认滴眼剂车间生产过程的可靠性，有效性。
本方案规定了滴眼剂车间培养基模拟灌装的验证方法和标准。
2 验证目的通过对滴眼剂灌装过程中采用与正常生产工艺相同的条件和操作方法（包括生产环境等），向8ml滴眼瓶灌装经过除菌过滤的无菌培养基，在适当条件下培养，并对培养品观察、结果判定的验证，来确定滴眼剂车间生产无菌灌装工艺的无菌保证水平，判定无菌生产要素是否能够达到可接受的合格标准的能力，以确认无菌生产工艺过程的可靠性。
3 适用围本验证方案适用于本公司江北分厂滴眼剂车间滴眼液生产线。
无菌工艺验证培养基模拟灌装试验(葛均友)
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
干预举例—冷冻干燥工艺 冷冻干燥工艺
设备组装 加入胶塞 取出卡住的胶塞 取走倒下的玻瓶 手工装载到冻干机 放置热电偶
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不同区域玻瓶破碎 设备故障 更换灌装针头 灌装针头位置调整 自动称量故障 自动加塞故障
环境监测-放置和取走培养皿 操作人员进出及更衣
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3、验证与确认 验证与确认
稳定的产品质量
性能确认及工艺验证（PQ/PV）
可靠的设备性能
运行确认（OQ）
材质与安装质量
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安装确认（IQ） 安装确认 设计确认（DQ） 设计确认
用户需求与设计
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验证开始前的准备工作
设备设施确认
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2010版GMP附录一 附录一：无菌制剂
培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的 培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性 产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量 培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装 试验的目标是零污染，应遵循以下要求 应遵循以下要求： （1）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品 不得检出污染品； （2）灌装数量在5000至10000支时 支时： 有1支污染，需调查，可考虑重复试验 可考虑重复试验； 有2支污染，需调查后，进行再验证 进行再验证。 （3) 灌装数量超过10000支时： ： 有1支污染，需调查； 有2支污染，需调查后，进行再验证 进行再验证。 （4）发生任何微生物污染时， ，均应进行调查。
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培养基模拟灌装验证的若干问题_顿昕
Warning Letter
The written procedures related to the production simulations – “media fills” - conducted to validate your capability to aseptically produce small volume parenteral (SVP) were found to be inadequate. The media fills for this line did not represent actual operations used in the aseptic production of ampoules and vials. 培养基灌装没有模拟实际的生产过程。
抑菌因素影响分析
抑菌影响分析---物料准备，储存过程
风险点 配制溶液的注射用水温 度高于６０ 度高于６０℃ 解释 控制方法 将配制培养基的注射用水冷却 到室温， 到室温，在室温下（ 在室温下（20-25℃ ）配制 培养基的pH调整到适合微生物 生长的范围 培养基在储存容器中常温保存
高温会抑制微生物生长
低温冷冻
低温会抑制微生物生长
不进行冷冻操作， 不进行冷冻操作，保持常温
4、在2011年11月开展的对制剂分装车间培养基灌装试验中，灌装过程中剔除 的部分西林瓶数量在灌装批记录中未体现。具体情况如下，企业于2011年11月 3日签发了培养基灌装的验证方案，于2011年11月4日进行培养基灌装操作。 清洗西林瓶14940支，灌装13425支，剩余1515支由于培养基用完未灌装。在 灌装的13425支中，送QC实验室做无菌培养的有11845支，有88支用于目检/ 称量取样，有102支因未加塞剔除，有2支因轧盖不严剔除，以上数据在批记录 中有记载。另有357支在灌装开始阶段因生产线装配及排尽灌注针头空气而剔 除，有1031支因验证方案规定的各种原因而剔除，但以上剔除的西林瓶数量及 原因未在批记录中记载，仅在验证记录中记载了剔除数量。
培养基模拟灌装工艺验证方案
培养基模拟灌装工艺验证方案1.引言2.验证目标验证目标是确保培养基在灌装过程中的质量和完整性，包括以下几个方面：(1)确保培养基的成分和性能符合要求。
(2)确保培养基在灌装过程中不受到污染，避免细菌和其他有害微生物的污染。
(3)确保培养基的容器和封闭系统能够有效地保护培养基。
(4)确保培养基的灌装工艺能够满足生产需求，包括速度、稳定性和灌装量的精度。
3.验证方法(1)实验室测试：通过实验室测试，对培养基的成分、pH值、微生物负荷、渗透压等进行定性和定量分析。
(2)灌装设备验证：验证培养基灌装设备的性能和操作规程是否符合要求，包括设备的灭菌能力、管道清洗和灭菌程序的有效性等。
(3)灌装过程模拟：使用类似的物料和操作条件，模拟培养基的灌装过程，包括培养基的灌装速度、灌装量的精度、容器封闭性的测试等。
4.验证参数(1)培养基的成分和性能：对培养基的成分进行定性和定量分析，包括有机物、无机盐、氨基酸、维生素等。
(2)培养基的pH值：测试培养基的初始pH值和在灌装过程中的pH值变化。
(3)培养基的微生物负荷：测试灌装前、灌装过程中和灌装后的培养基微生物负荷，包括总菌落数、细菌干扰菌和真菌的检测。
(4)培养基的渗透压：测试培养基的渗透压，在灌装过程中进行监测。
5.验证流程(1)准备灌装设备和培养基：准备灌装设备，包括容器、管道和灌装机等。
根据所需灌装量制备相应的培养基。
(2)实验室测试：对培养基的成分、pH值、微生物负荷、渗透压等进行实验室测试，确保符合要求。
(3)灌装设备验证：验证灌装设备的灭菌能力和管道清洗程序，确保设备的操作规程符合要求。
(4)灌装过程模拟：使用类似的物料和操作条件，模拟培养基的灌装过程。
进行实际灌装操作，包括灌装速度的控制、灌装量的精度和容器封闭性的测试等。
(5)验证结果的分析：根据实验结果，对验证过程和结果进行分析和总结，评估培养基模拟灌装工艺的可靠性和稳定性。
6.验证结果的分析根据验证实验的结果，对培养基模拟灌装工艺进行分析和评估，包括以下几个方面：(1)培养基的成分和性能是否符合要求。
培养基模拟灌装(小容量注射剂)无菌生产工艺验证方案
分发部门：培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证小组一、概述厂区无菌操作生产线，按2010版GMP及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。
某某产品因无法进行F0≥8分钟湿热灭菌，以达到SAL≤10-6，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，故采用除菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。
无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一，确保产品无菌是该工艺最大的难点，减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施为：①人员的培训 ②无菌工艺验证。
按SFDA 化学药品注射剂基本技术要求：培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验证，是判断无菌保证水平的关键手段。
故在正式生产前必须按某某产品生产工艺进行培养基模拟灌装验证。
1 本次验证关键生产工艺流程图2 验证原理将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。
对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长并评价结果，确定实际生产中产品污染的可能性。
对于失败的验证进行菌种分析并调查，确认并解决可能造成失败的原因后，重新进行验证。
3验证次数按2010版GMP 附录1要求因该生产线为新建厂区设施，为培养基模拟灌装试验的首次验证，故需进行连续三个批次的验证活动。
二、验证目的1通过该工艺验证活动证明新设计厂房采用既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求； 2通过该工艺验证活动证明无菌操作相关人员资格，降低人员带入无菌的风险； 3通过该工艺验证活动确保生产符合现行GMP 法规要求。
三、验证范围和实施时间1本验证方案适用于厂区小容量注射剂车间无菌生产线正式投入使用前某某品种小容量注射剂无菌生产工艺培养基模拟灌装验证活动；2计划验证实施时间为2013年3月~4月连续三个批次。
四、验证小组和职责1 验证小组根据验证的内容和验证管理文件要求，成立验证小组，验证小组成员见下表，小组人员应在最终验证报告中签名确认。
无菌生产工艺验证—培养基模拟灌装试验浅析
2.2 多产品简化试验思路
一条灌装线生产多个产品时，根据下列因素可被划分为不同的类型组：
⑴ 灌装工艺。⑵ 不同的容器、密封方式。由此选出两个或更多个下列方面能 涵盖所有其他的相关产品：⑴ 容器的大小、开放或密封的设计。⑵ 灌装线的 速度和干预；⑶ 涉及的操作人员数量。⑷ 储存容器的形式、转移的方式等。 自包装容器代表性选择方面，对于多规格、容器形状不同的灌装生产线，
6. 培养基配制
一般将大豆胰蛋白胨培养基（TSB）配制成3%的溶液，并用湿热蒸 汽灭菌（121℃、15分钟），冷却后的培养基用已清洁灭菌的园筒过滤
器（装入已灭菌的0.22um滤芯）过滤于已清洁灭菌的储罐中（过滤过
程应遵守无菌操作）。 培养基在灌装前保存在储罐中的时间也应挑战至少最长工艺允许 时间。所有在这一段可能进行的操作，如取样、过滤器的完整性试验 等也按实际模拟。 配制用于验证分装生产线的培养基溶液体积应满足灌装所设定的 灌装瓶数需要的量。
应对不同大小、形状的容器进行评估；多数可选用最大敞口直径的容器和最 低生产线速度；有时也应选择容易倒落的小型容器用来代表最差情况，因可 能需要更多的人工干预；当不能兼顾时，应考虑选取有代表性的几种容器进 行培养基模拟灌装试验。
2.3 最差条件设计
2.3.1储存时间的设计
灌装设备、部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌装前能够放置
9.15
10.51 11.84 13.15 14.43
15.7
16.96
10.培养基灌装试验的合格标准
10.培养基灌装试验的合格标准
10.3 合格标准
目前，国际上认可的培养基灌装试验合格标准（允许最大污染率）如下表：
批灌装数量 允许阳性数量 2996～4742 0 4743～6294 1 6295～7751 2 7752～9151 3
培养基模拟灌装(小容量注射剂)无菌生产工艺验证方案11
分发部门：培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证小组一、概述厂区无菌操作生产线，按2010版GMP及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。
某某产品因无法进行F0≥8分钟湿热灭菌，以达到SAL≤10-6，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，故采用除菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。
无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一，确保产品无菌是该工艺最大的难点，减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施为：①人员的培训②无菌工艺验证。
按SFDA化学药品注射剂基本技术要求：培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验证，是判断无菌保证水平的关键手段。
故在正式生产前必须按某某产品生产工艺进行培养基模拟灌装1 本次验证关键生产工艺流程图2 验证原理将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。
对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长并评价结果，确定实际生产中产品污染的可能性。
对于失败的验证进行菌种分析并调查，确认并解决可能造成失败的原因后，重新进行验证。
3验证次数按2010版GMP 附录1要求因该生产线为新建厂区设施，为培养基模拟灌装试验的首次验证，故需进行连续三个批次的验证活动。
二、验证目的1通过该工艺验证活动证明新设计厂房采用既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求； 2通过该工艺验证活动证明无菌操作相关人员资格，降低人员带入无菌的风险； 3通过该工艺验证活动确保生产符合现行GMP 法规要求。
三、验证范围和实施时间1本验证方案适用于厂区小容量注射剂车间无菌生产线正式投入使用前某某品种小容量注射剂无菌生产工艺培养基模拟灌装验证活动；2计划验证实施时间为2013年3月~4月连续三个批次。
四、验证小组和职责 1 验证小组根据验证的内容和验证管理文件要求，成立验证小组，验证小组成员见下表，小组人员应在最终验证报告中签名确认。
在验证实施前，方案起草人应对所有相关参与人员进行验证方案的培训，做好培训记录，并将记录附于验证报告后。
无菌工艺验证-培养基灌装试验
法规要求： 法规要求：
-EC Guide to Good Manufacturing Practice, Annex I, Manufacture of Sterile Medicinal Products -FDA Guidance for Industry — Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing Current Good Manufacturing Practice 药品生产质量管理规范（ -药品生产质量管理规范（2010 ） 药品生产质量管理规范
duration of fill灌装时间
media fills should be long enough to include all of the required interventions and stoppage保证有足够的时间来模拟实际生产过程中的所有
操作。
For very large batches or long campaigns, some blank units (either empty or water filled) are used to maintain operating conditions during the simulation 对于非常大的批量或较长的生产过程，通常使用一些空白样品（空的或 者灌水）以维持模拟试验的动态环境。
Container/closure type and size/ Filling speed 容器类型尺寸大小灌装速度
The large container often filled at the lowest speed because of its large fill volume 最慢的速度，最大的瓶子规格 The small container often filled at the highest speed for its lower fill volume 最小的瓶子规格，最快的速度
粉针剂无菌工艺验证——培养基模拟灌装试验
内容摘要：【摘要】目的为确保粉针无菌分装生产过程对产品不产生污染，保证粉针生产药品质量。
方法先注入液体培养基，再以无菌甘露醇干燥粉为替代物，模拟分装于注射剂瓶，盖胶塞，轧铝盖。
分装样品先后在30～35℃与20～25℃下培养7d，并作阴性、阳性对照。
结果无菌灌装环境及操作人员表面微生物检查合格, 阴性、阳性对照成立, 试验样品微生物未检出。
结论无菌粉针灌装过程中，经培训的操作人员在规定的洁净环境中按操作规程操作所生产的产品可以确保无菌。
【关键词】粉针剂无菌工艺验证培养基灌装试验无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素。
无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法和规程进行。
产品的无菌或其它质量特性绝不能依赖于任何形式的最终处理或成品检验。
培养基模拟灌装试验——使用培养基作为药品的替代品（placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行验证。
培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验，因为几乎在所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际产品中更容易。
能全面反映整个生产过程采用无菌工艺生产无菌产品的能力。
而且也是各国药品法规要求的基本内容。
1验证准备工作1.1所有的相关设备及其工艺均应事先通过确认或验证,如洁净生产区环境须通过静态验证(空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均应符合相应的规定)，操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训,生产主要设备(如分装机等)以及与生产相关的其它辅助工艺(如淋洗、湿热灭菌、干热灭菌去热原、除菌过滤等)，均须通过确认或验证。
1.2甘露醇粉末无菌的处理[1]事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约15～25kgy），并进行无菌性、抑菌性和溶解度的测试。
在甘露醇粉末的抑菌性试验中，每天观察微生物生长情况，全部样品对照品试管中均有明显的微生物生长，说明甘露醇对枯草杆菌和白色念珠菌均无抑制作用。
培养基模拟灌装验证
培养基模拟灌装验证一、目的建立培养基模拟灌装验证的管理规程，确保培养基模拟灌装验证符合生产工艺及GMP要求。
二、适用范围适用于制剂车间生产的产品需要培养基模拟灌装验证的整个工艺过程，包括从部件、材料的灭菌准备，一直到完成灌装和容器密封的整个过程。
三、责任者制剂车间、生产部、公用事业部、质量控制部、物流部、质量保证部及验证部遵照执行。
四、缩写与定义1. 最差条件（worst case）在SOP范围内（或超出），由工艺参数的上、下限和相关因素组成的一个或一系列条件。
与理想条件相比时，最差条件使产品或者生产工艺失败的几率为最大，这样的条件不一定导致产品或生产工艺的失败。
2. 干预（Intervention）操作人员在无菌操作区域内的操作活动。
3. 正常干预（Inherent Interventions）在无菌工艺灌装过程中发生的正常的在计划中的活动（例如，设备安装、装量调节、胶塞的再补给、灌装容器的再补给、环境监测、取样等等）。
4. 纠正干预（Corrective Interventions）在无菌工艺灌装过程中的纠正或调整的活动，其不属于计划性。
（例如，灌装容器的破损、倒瓶、掉塞、更换灌装针、灌装设备维修）五、健康、安全和环境无六、程序1. 验证小组职责：1.1 验证部1.1.1 负责编制培养基模拟灌装验证管理规程。
1.1.2 协助起草并审核培养基模拟灌装验证方案及培养基模拟灌装验证报告。
1.1.3 验证工作的组织与协调，参与并监督培养基模拟灌装验证的实施，模拟灌装样品的接收、培养及结果观察。
1.1.4 对验证过程中偏差、变更处理过程追踪。
1.2 质量保证部1.2.1 审核培养基模拟灌装验证方案及培养基模拟灌装验证报告。
1.2.2 验证工作的组织与协调，参与并监督培养基模拟灌装验证的实施，负责验证过程中取样。
1.2.3 负责培养基模拟灌装验证环境监控，参与模拟灌装样品的接收、培养及结果观察。
1.2.4 参与验证过程中偏差、变更处理。
无菌模拟灌装工艺验证[指南]
![无菌模拟灌装工艺验证[指南]](https://img.taocdn.com/s3/m/f74cc6ae6c85ec3a86c2c524.png)
无菌工艺模拟验证-培养基灌装试验王新峰QA/QC 厂房设施人员灭菌工艺无菌保证培养基灌装HVAC，水操作规程日常监控EM&PM内容1.培养基灌装的目的2.法规要求3.不同制剂工艺的培养基灌装（液体、冻干产品，干粉分装产品）4.风险分析5.实验设计6.审计要点培养基灌装试验的定义定义:培养基灌装－采用培养基代替产品，按照正常生产的程序来进行无菌灌装工艺验证。
培养基灌装试验目的目的：–评估在既定无菌生产环境和过程控制条件下生产无菌产品的能力–证明指定的无菌工艺设计和变更是否可行–证明无菌工艺过程中的相关操作是否可行–评估无菌工艺人员的操作水平（资格确认组成部分）– QAR调查的手段–证明符合cCMP的要求–发现无菌工艺过程中潜在的微生物污染因素培养基灌装试验应用范围•无菌药品和生物制剂的生产•用无菌工艺进行医疗器械，人和动物保健品的生产法规要求2010GMP•第四十七条无菌生产工艺的验证应当包括培养基模拟灌装试验。
•应当根据产品的剂型、培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基。
应当尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对无菌结果有影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。
•培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应当连续进行3次合格试验。
空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验。
培养基模拟灌装试验通常应当按照生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。
•培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。
批量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品的批量。
培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应当遵循以下要求：•（一）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品。
•（二）灌装数量在5000至10000支时：•1.有1支污染，需调查，可考虑重复试验；•2.有2支污染，需调查后，进行再验证。
•（三）灌装数量超过10000支时：•1.有1支污染，需调查；•2.有2支污染，需调查后，进行再验证。
无菌生产工艺验证—培养基灌装试验
合相 应 的规 定）操作 人 员 的卫生 及其操 作行 为均 须 ，
经过 严格 的培 训 ， 产 主要 设 备 （ 灌装 机 、 干 机 生 如 冻
等 ） 及 与 生 产 相 关 的 其 它 辅 助 工 艺 （ 淋 洗 、 热 以 如 湿
可靠性 。 ｌ 培 养 基 整 装 试 验 的前 提 条 件
ｂｃｎ ） 的悬 浮 液 ， ｉ ｓ］ ａ 菌液 浓度 控制 为 ｌ ０ ０ ０个 菌 ０ ～１ ０ ／ 。将上 述准 备好 的无菌 培养 基分成 三等 份 ， 每 ｍｌ 且 份 至 少 两瓶 （ ） 分 别 加 人 上述 菌 悬 液 各 ０ １ｍｌ 支 ， ． 。 将 接有枯 草芽孢 杆菌 和金 黄色 葡萄球菌 的培养基 于 ３ ～３ 培养 ， 有 白色念珠 菌 的培 养基 于 ２ ｂ ０ ５ Ｃ下 接 ０ ２ ｃ下培 养 。 ５ 如果 在 ７ｄ内 ． 种微生 物培 养基 均至 每 少 有 ５ 长菌 ， ０ 则认 为该 培养 基 可用 于无 菌 工艺 验
维普资讯
中 国 医药 工 业杂 志
Ｃｈｎｅｅ Ｊ ｒ ａ Ｐ ｉ ｓ ｏｕ ｎ １０
一 童 ． ．
一管 一 一理 一 一与 ｔ 号 ： ０ ｌ８％ （０ ２ ０ ０ ４０ 文Ｉ一 奠 １０ ２ ２ ０ ） １０ ３ ４
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证 试 验
首 先 ， 有 的相 关设 备 及 其工 艺 均 应事 先 通 过 所 确 认或 验证 ， 如洁净 生 产 区环境须 通过静 态 验证 （ 空
气 的 悬 浮 粒 子 、 游 菌 、 降苗 及 表 面 微 生 物 均 应 符 浮 沉
实践 证 明 ， 养 肉汤 培养 基或 大 豆胰 蛋 白胨 液 营 体 培养 基 （ｏ ｂ ａ —ａ ｅｎｄｇ ｓ ｍｅ ｉｍ口 ） ｓ ｙ ｅ ｎｃｓ ｉ ｉｅｔ ｄｕ 均适 用 于培养基 灌装 试验 。 ２ ２ 培 养基灌 装试 验 的频率 － ． ｝ ］
培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案
培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案一、研究目的及背景无菌生产是制药和食品工业中至关重要的一项工艺。
培养基是无菌生产过程中不可或缺的一部分，它提供了细菌、真菌等微生物的生长所需的营养物质。
因此，为了确保产品质量和安全性，对培养基的无菌灌装工艺进行验证是非常重要的。
本研究的目的是验证培养基的无菌灌装工艺的有效性，以确保生产过程中的无菌状态。
通过验证，可以确定灌装工艺的可行性和合理性，并提供指导和保障无菌生产的稳定性和安全性。
二、研究方法1.确定灌装工艺的关键参数和控制点：包括温度、压力和速度等因素。
通过前期的实验研究和参考相关文献资料，确定灌装工艺的最佳参数设置。
2.建立合适的实验方案：选择合适的微生物作为试验菌株，并使用合适的培养基进行培养。
根据已有的灌装工艺参数，进行一定数量的灌装试验，并尽可能模拟实际生产过程。
3.进行灌装工艺验证试验：根据实验方案，按照一定的时间和数量进行培养基的灌装试验。
同时，进行相应的对照试验，采集样品进行微生物学检验。
4.微生物学检验：采集灌装好的培养基样品，通过无菌条件下培养，观察是否有微生物生长。
并进行定性定量分析，以判断培养基是否被污染。
5.数据分析和结果评估：根据实验结果，对培养基的无菌灌装工艺进行评估。
比较实验组和对照组的差异，并统计相关数据，计算灌装工艺的合格率和不合格率。
6.结果报告和验证方案调整：将实验结果进行总结和分析，撰写验证方案报告。
根据结果对灌装工艺进行调整和改进，并制定相应的控制措施。
三、实施计划和进度安排1.研究期限：本研究计划为期三个月。
2.实施计划：-第一周：搜集相关文献资料，确定研究目的和方法。
-第二周：设计实验方案，确定试验菌株和培养基。
-第三周至第五周：进行实验，进行灌装试验并采集样品。
-第六周至第七周：进行微生物学检验，观察和分析实验结果。
-第八周：数据分析和结果评估，撰写验证方案报告。
-第九周至第十二周：根据结果调整灌装工艺，并制定相应的控制措施。
无菌工艺验证培养基模拟灌装试验(葛均友)
Validation of aseptic processin should include a process | ng simulation test using a nutrient t medium (media fill).
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
灭菌工艺验证
湿热、干热灭菌工艺 除菌过滤验证及空气过滤器的完整性检测 容器/胶塞密封完好性测试
人员培训
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无菌更衣确认
环境监控符合要求
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4、模拟灌装实验的设计
最差状况：高于或低于正常范围的条件限度，与 正常生产条件相比最有可能造成工艺或生产失败 的条件。 宜尽可能模拟实际无菌生产过程，并包括产品加 工中的“最差状况”。其设计应具有以下几方面 的代表性：
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培养基模拟灌装试验 试验设计
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1、试验涵盖范围
模拟必须包括产品成为无菌状态后的所有的无菌生产工艺步 骤(如转运, 灌装, 装载/卸载, 冻干, 加塞, 轧盖)
模拟必须包括所有的无菌处理(如灌装线的设置, 无菌连接, 人员的干扰操作)
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• 无菌过滤后存放在中间储罐内的培养基模拟实际生产时产 品的最大储存时间后再灌封
产品在灌装后密封前的储存时间
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最差条件的设计（2）
最长灌装的持续时间 最保守的设计：在培养基灌封试验中，模拟生产用时最长的 批量所需要的时间，其中包括正常的干扰时间（换班、设备 维修）。（一般不采用） 其他的设计：
无菌工艺验证-培养基灌封试验
－培养基灌封试验
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目录
主题1：为什么要进行培养基灌装验证？ 主题2：相关GMP法规对培养基灌装验证的要求 主题3：培养基灌封实验的常规要求 主题4：特殊剂型的培养基灌装验证方法 主题5：培养基灌装验证设计、执行与文件编制 主题6：培养基灌装验证的关键点分析 主题7：培养基灌装验证检查要点
➢ 中国药品生产质量管理规范 附录（1998年修订）
➢ SFDA 化学药品注射剂基本技术要求（试行）
… 培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一 种系统验证,是判断无菌保证水平的关键手段…
…采用无菌生产工艺的粉针剂，应能保证SAL不大于 10-3…
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附录一：无菌制剂
第四十七条 无菌生产工艺的验证应包括培养基模拟灌装 试验。
obtained by the use of media fills. An acceptable media fill shows that a
successful simulated product run can be conducted on the manufacturing line at that point in time.
➢ USP 31 <1116> 洁净室和其它控制环境的微生物学评价 To assure that minimal bioburden is achieved, additional information on the evaluation of the microbiological status of the controlled environment can be
✓ 对人员的资格再确认应纳入到定期再验证中。