青钱柳种子不同部位发芽抑制物质的测定
青钱柳种子休眠机制
Ｓｅ ｄ Ｄｏ ｍ ａ ｃ ｅ ｈａ ｓ ｆＣｙ ｌ ｃ ｒ ａ ｐａ ｉ ｕ ｅ ｒ ｎ ｙ Ｍ ｃ ｎｉｍ ｏ ｃ ｏ ａ ｙ ｌ ｕｒ ｓ
Ｓ ａ ｇ Ｘｕ ａ Ｘｕ Ｘｉ ｅ ｇ Ｆ ｎ ｈ ｎ ｚ ｏ ｈ ｎ ｌｎ ｚ ｎ ａ ｇ Ｓ ｅ ｇｕ
（ ｏｌ ｅｏ ｏｅｔ ｅ ｕｃ ｒ ｎ ｉ ｎ ｅ ｔ Ｎ ｎ ｎ ｏｅ ｒ Ｕ ｉ ｒ ｔ Ｎ ｎｉ ０ ７ Ｃ ｌ ｇ Ｆ ｒ ｓ ｒｅ ａｍ Ｅ ｖ ｏ ｍ ｎ ， ａ ｆ ｇ Ｆ ｒ ｔ ｎ ｅｓｙ ｅ ｆ ｓＲ ｏ ｓ ｒ ｉ ｓｙ ｖ ｉ ａ ｊ ｇ ２ ３ ） ｎ １ ０
皮 存 在 一 定 的机 械束 缚 和 透水 、 气 性 障碍 ， 皮 中存 在 活 性 较 强 的 内 源 抑 制 物 质 是 引 起 青 钱 柳 种 子 休 眠 的 主 要 透 果
原 因 。 ） 子 各 部 分 甲醇 浸 提 液 的 生 物 测 定 结 果 说 明 ， 钱 柳 种 子 各 部 分 均 含 有 内源 抑 制 物 质 ， 制 活 性 为 果 ２种 青 抑 皮 ＞ 皮 ＞完 整 种子 ＞ 胚 。３ 对 抑 制 活性 最 强 的果 皮 甲醇 提 取 液 采用 系统 溶 剂 法进 行 初 步 分 离 ， 物 测 定 结 果 种 种 ） 生 表 明各 分离 相 中 乙 醚 相 的 抑 制 活 性 最 强 ， Ｃ ＭＳ 定 结 果 显 示 乙醚 相 中 相 对 含 量 为 ３ ． ９ 的 组 分 是 具 有 较 强 抑 Ｇ — 鉴 ５０ ％
Ａｂｓｒ ｃ ： Ｇｒｗｎ ｆｒｂ ｔ ｔ ｉｅ ｔ ｅ ｎ ｄｃｎ ｌｕ ｅ，Ｃ ｃｏ ａ ｙ ｌｕ ｕ ｓａ ｍｏ ｏｙ ｉ ｅ ｕ ｆＪ ｇａ ｄ ｃ ａ ｔ ａ ｔ ｏ ｏ ｏｈ ｉ ｆ ｉ ｓ ｎ ｍｂ ｒａ ｄ ｍｅ ｉｉ ａ ｓ ｙ ｌｃ ｒａｐａｉ ｒｓｉ ｎ ｔｐｃ ｇ ｎ ｓｏ ｕ ｌ ｎ ａ ｅ ｅ，
青钱柳种子不同部位发芽抑制物质的测定
ｔ ｓｏ ｙ（ Ｃ— Ｓ ．Ｔ ｅｂｏ ｓ ｙｒｓ ｌ ｄ ａｅ ａ ｔ ｈｂｔ ｓ ｅｅ ｉ ｒ ｕｅ ｌ ｔｅ ｒｃ ｏ ｓ ｆ ｈ ｅ ｓ ａ ｄ ｒ ｃ ｐ Ｇ Ｍ ） ｈ ｉａｓ ｕｔ ｉ ｉ ｔ ｔ ｔ ｈ ｉ ｉ ｏ ｒ ｄｓ ｂ ｔｄｉ ａｌｈ ａｔ ｎ ｅｓ ｄ ， ｎ ｏ ａ ｅ ｓｎ ｃ ｄ ｈ ｅ ｎ ｉ ｒ ｗ ｔ ｉ ｎ ｆ ｉ ｏｔ ｅ
■ 譬 ｊｉ ｎ １０ － １ １２ １ ． ５ ０ ７ ｏ：０ ３ ６ ／．ｓ ．０ ０ ８ ０ ．０ ０ ．０ ｓ １
青 钱 柳 种 子 不 同部 位 发 芽抑 制 物 质 的测 定
尚旭 岚 孙 容 徐 锡 增 方 升 佐 ， ， ，
准 品 进 行 生物 测 定 ， 定 其 半 抑 制 浓 度 （Ｃ０ 分 剐 为 ４ ８６ Ｉ ／ 确 Ｉ５） ７ ． ３￣ Ｌ和 ６ ２ ５ ｍ ／ 。 ． Ｌ ０ ．６ ｇ Ｌ
关 键词 ： 青钱柳种子 ； 芽抑制物质 ； 发 邻苯二 甲酸二 乙酯； 榈酸 棕
Ｅ ａｕ ｔ ｎｏ ｅｍｉａｉｎｉｈｂｔｒ ｉｅｅ ｔ ｒｃｉｎ ｙｌｃｒａ ａ ｕｕ ｅｄ ∥Ｓ Ａ ＧＸ —ｎ ｖ ｌａｉ ｎｇ ｒ ｎ ｔ ｉｉ ｓｉ ｄｆ ｒｎ ａｔ ｓ ｆＣ ｃ ａｙ ｆ ｒｓｓｅｓ Ｈ Ｎ ｕｌ ， ｏ ｏ ｎ ｏ ｎ ｆ ｏ ｏ ｏ ｐｉ ａ
ｔｅ ｅ ｅ ｉｔｄ ｓ ｖ ｒ ｌｉ ｈｂ ｔｒ ｕ ｈ ａ ｅ ｔ ｎ ｉ ｃｄ，ｏ ｔ ｎ ｉ ｃｄ，ｈ ｘ ｄ ｃ ｎ ｉ ｃ ｄ ａ ｄ ｄ ｅｈ ｌｐ ｔ ａａｅ ｈ ｒ ｘ ｓ ｅ ｅ ａ ｎ ｉ ｉ ｓ ｓ ｃ ｓ ｈ ｐ ａ ｏｃ ａ ｉ ｅ ｏ ｃａ ｏ ｃ ａ ｉ ｅ ａ ｅ ａ ｏ ｃ ａ ｉ ｎ ｉ ｔｙ ｈｈ ｌｔ ．Ｔ ｅ Ｉ ５ ｈ Ｃ０
青钱柳组织培养及次生代谢物调控的初步研究的开题报告
青钱柳组织培养及次生代谢物调控的初步研究的开
题报告
一、研究背景
青钱柳（Mallotus barbatus）是一种广泛分布于亚洲地区的树种，其具有一定的药用价值。
近年来，随着人们对天然药物的认识和需求的提高，青钱柳的药用价值得到了越来越多的关注。
青钱柳中主要活性成分为倍半萜内酯类物质，其中最具代表性的成分为丹参酮II A。
因此，青钱柳在生产过程中的质量和效果主要取决于倍半萜内酯类物质的含量和质量。
然而，目前仍缺乏针对青钱柳倍半萜内酯类物质的系统研究，因此，有必要开展对该物质的相关研究。
二、研究目的
本研究旨在通过培养青钱柳及次生代谢物的调控，探究倍半萜内酯类物质的合成产量和质量，进而提高青钱柳的药用价值和生产效益。
三、研究内容
本研究拟开展青钱柳培养及其倍半萜内酯类物质的调控以及产物分析与鉴定等内容。
1、青钱柳组织培养：采用离体组织培养方法，分别培养青钱柳根、茎、叶等不同组织，寻找倍半萜内酯类物质合成的最佳组织。
2、倍半萜内酯类物质调控：通过添加植物生长调节剂、营养成分等方法，调控青钱柳倍半萜内酯类物质的合成产量和质量。
3、产物分析与鉴定：采用高效液相色谱等方法，对倍半萜内酯类物质进行分离、纯化和鉴定。
四、研究意义
本研究将为青钱柳倍半萜内酯类物质的生产与应用提供技术支持，同时具有重要的理论和实用价值。
我们的研究将为青钱柳的生产和利用提供必要的基础研究资料，并有助于开发和利用该物种的潜力。
青钱柳种子无菌萌发研究
庆 吴群英 李伯 林 ， ，
５ １０ ） ４ ０ ４
５ １０ ４ ０ ４； ２ 广 西师 范大 学生命 科学 院 ， ． 广西 桂林
摘要 ： 目的 探讨不同处理方式对青钱柳种子无菌萌发的影响。方法 浓硫酸对种子进行预处理后， 采用正交设计对影响
其萌发 的 Ｇ ３浓度 、 Ａ 浸种温度 和浸种 时间进行研 究 ， 再将 外植体进 行 消毒 ， 接种 于不 同激 素组合 的 ＭＳ培养基 中进行 无
菌培养。结果 青钱 柳种子萌发的最佳处理为 ： 浓硫酸 酸蚀 ９ ５ ＋ｌ０ ｍ ／ ． ｈ Ｏ ０ ｇＬ的 Ｇ 溶液 ＋浸种 ２ ｈ＋浸种 温度 ３ ℃ ； Ａ ４ ５ 种 子萌发的最优 激素组合 为 ： ＭＳ＋ ６一Ｂ ０ ５ ｇ Ｌ＋Ｎ Ａ ．ｍｇＬ＋ Ｇ ３ ｇ Ｌ 对青钱 柳幼 苗进 行 离体 培养 ， Ａ ．ｍ ／ Ａ ０１ ／ Ａ ０ｍ ／ ； 液体培 养
青钱柳 Ｃ ｃ ｃｒａｐ ｌ ｒｓ（ ａａ． Ｉｉｓａ 又 名摇钱树 、 ｙｌ ａｙ ａ ｕｕ Ｂ ｔ ）ｌｎｋｊ ｏ ｉ １ ｊ ａ 山 ２ ０ｍ ／ Ｎ Ａ０ １ｍ ／ ． ｇＬ＋ Ａ ． ｇ Ｌ的 固体 培 养 基 和 液 体 培 养 基 中。 沟 树 （ 江 ）、 浙 麻柳 （ 北 ） 青 钱 李 等 ，系 胡 桃 科 青 钱 柳 属 植 物 ， ２ ６ 培养基的设 计 ＭＳ为基本 培养基 ， 湖 、 ． 附加 ３ 的蔗糖 ， ％ 固体培 为 我 国特 有 的 珍 稀 树 种 ， 国 家 重 点 保 护 的濒 危 植 物 之 一 。 ， 养基 附加 ０ ７ 是 ． ％的琼 脂 ， 培养基灭菌前将 ｐ Ｈ值调 至 ５ ８— ． 。 ． ６ ０ 在 广 西 桂 林 等 地 也 有 分 布 。青 钱 柳 有 降 血 糖 、 血 压 、 血 脂 等 ２ ７ 培养条件 接种后 先 进行 暗培养 ， 子萌 芽后 转为光 照培 降 降 ． 种 作 用 ， 认 为是 治 疗 ２型 糖 尿 病 的 安 全 低 毒 的 良药 。 被 养， 光照 时 间 １ ｈ ｄ 光强 １５ ０～２ ０ ｘ 培 养 温 度为 （ ５ ± ２／ ， ０ ００Ｌ ， ２ 现有 的青钱柳多零星分布于深 山老林和一些 自然保护 区中， ０ ５）ｏ 。 ． Ｃ 主要 是 天 然 林 ， 钱 柳 种 子 发 育 差 ， 子 败 育 很 严 重 且 具 有 深 休 ２ ８ 实验结果 的统计和计算 每一处理在接种后定期观察 、 青 种 ． 记录 眠特性 ， 人工育苗 出苗率低 ， 一般 播种后 需隔年甚 至 ２年后才 萌 种子 的污染情况 和生长 情况 ， 分别 记 录接 种 ２ ４ ，０ ｄ种子 的 ０，０ ６ 发 ， 硬 种 壳 是 阻 碍 种 子 萌 发 的 因 素 之 一 ， 在 一 定 程 度 上 发芽 情况 ， 坚 这 接种 ６ ０ｄ时统计 发芽率 ： 发芽 率（ ）：萌芽种 子数／ ％ 制约 了青钱柳人工资源 的培育和开发利用 ， 严重影 响了青钱柳 的 未 受 污 染 的 接 种 数 ×１０ 。 ０％ 开发与产业化进程 。目前有关 青钱柳种 子萌 发的研究 报道并 不 ３ 结 果 多， 本试验 以青 钱柳种子 为外植体 ， 采用浓硫酸软化种子种壳 ， 结 ３ １ 浓硫酸酸蚀 时间对 青钱柳种 子萌发 的影响 青 钱柳不 经酸 ． 合赤霉素浸泡后进行无菌培 养 ， 讨浓硫 酸 、 探 赤霉素综 合处理 及 蚀 ， 种壳对种子 的萌发产生 了很大 的阻力 ， 发芽率为 ０ 结果 见表 （ 培养基激素等 因素对青钱柳种子萌发 的影响 ， 探讨提 高青 钱柳 种 １ 。 用浓 硫 酸 进 行 不 同 时 间 的酸 蚀 后 ， 蚀 ４ ５，． 个 处 理 ） 酸 ． ９ ５ｈ两 子发 芽 率 的方 法 。 中均有种子发芽 ， ９ ５ｈ的发芽率最 高 ， 明在 一定范 围内， 以 ． 说 随 １ 材 料 酸蚀 时 间 的延 长 ， 子 的 发芽 率 升 高 ， 酸蚀 时 间 过 长 ， 蚀 种 但 酸 青钱柳种 子由桂林 医学 院药理 教研 室提供 （０ ５年采集 于 １ ． ， 导致 种 子胚 的损 坏 ， 终 导 致 种 子 无 法 萌 发 。 ２０ ３ ５ｈ 会 最 桂林 资 源 县 中 峰 乡 野生 青 钱 柳 植 株 ） 。 一 一 一 一 表１ 浓硫障对青钱柳种子萌 发的 影响 ２ 方 法 处理时间 第 １ 颗种子 ２ ｄ ０ 发芽数 ４ ｄ ０ 发芽数 ６ ｄ发芽数 污染数 发芽率 ０ ２ １ 种子 的预处 理 ４ 条件 下 ， ． ℃ 用浓 硫酸 分别 浸 泡种 子 ４ ５ ．， ｔｈ ／ 发 芽 时 间 ｔｄ ／ （ ） 颗 （ ） 颗 （ ） 颗 （ ） 颗 （ ） ％ ９ ５ １． ， ． ，３ ５ｈ 自来 水下将种 子表 面黑色 碳化 物搓洗 干净 ， 消毒 经 Ｏ加 ０ 对 照 ４． ５ ３ ９ 一 后接种于不含激素的固体培养基中 ， 以清 水 浸 种 作 为 对 照 。 ｌ ９ １ ９５ ． ２ ２ 种子 的综合处理 采用正交 实验设计 ， Ｇ ，浓度 、 ． 对 Ａ 浸种 时 １ ５ ３． 间 和 浸 种 温 度 均 设 ３个 水 平 ， 别 为 ： Ａ 分 Ｇ 浓 度 设 １０ ５ ０ １０ ０ ，０ ，００ ． Ａ ｍ ／ ；Ａ ｇ Ｌ Ｇ 浸 种 时 间设 １ ，４，８ｈ 浸 种 温 度 设 ５ ２ ，５ 。 种 ３ ２ 不 同浓度 Ｇ 浸种 时间和浸种 温度对 青钱 柳种 子萌发 的 ２２ ４ ； ，５ ３ ℃ 子综合处理方案见表 ２ 。 影响 不同浓度的 Ｇ 浸种可显著 促进种子萌发 ， Ａ 有效解 除种子 ２ ３ 种子 的消 毒和接 种 将 处理过 的种 子用清 水洗 净 ， ７ ％ 休 眠 Ｊ ． 于 ５ 。正交实验结果表 明， 合处理 可促进种 子萌发 ， 综 但发芽 酒 精 中浸 泡 １ｍｉ， 入 ０ １ 升 汞 浸 泡 １ ｉ， 菌 水 清 洗 ４次 时间和发 芽率 有差 异 ， ８ 理的青钱柳种子发 芽时间最早 ，７ｄ ｎ转 ．％ ５ｍｎ 无 Ａ 处 １ 后 ， 人培养基 ， 接 每一处理接种 ２ ０颗种子 。 就 可 以看 到种 子发 芽 ，０ｄ时发 芽 率 可 达 ４ ．１ ， ９处 理 发 芽 ６ ２ １％ Ａ ２４ 初代培养 培养基为固体培养基 ， ． 激素组合采用正交实验 设 时 间 最 迟 ， 月 才 发 芽 ， 发 芽 率 仅 为 １ ． ３ （ 表 ２ ， 明 １个 且 ０５ ％ 见 ）说 计 ， 计 方案 见 表 ３ 设 。 Ａ ８处理 能较快地 打破 青钱柳种 子休眠 和提高青 钱柳 的发 芽率 ； ２５ 继代培养 当青钱柳幼苗长至 ４～ ｃ ． ６ ｍ高 时 ， 将根 尖和萌 发 极 差 分 析 表 明 ， Ａ Ｇ 浓 度 产 生 影 响 的极 差 最 大 ， 种 温 度 的极 差 浸 芽剪下 （ 度 约 为 ２ ｃ 左 右 ） 分 别 接 人 激 素 水 平 为 ６ Ｂ 值最小 ， 长 ｍ ， －Ａ 浸种时 间次之 ， 说明 Ｇ 的浓度对青钱柳 种子发芽 率影 Ａ 响最大 ， 温度对青钱柳种 子 的发芽率影 响最小 ， 优化组 合为 Ｇ Ａ ｌ０ ｍ ／ 浸 种 ２ Ｏ ０ ｇＬ＋ ４ｈ＋浸 种 温 度 ３ ℃ 。 ５ 基 金项 目 ： 西壮 族 自治 区科 学研 究与 技术 开发 计划 项 目（ ｏ０２０８１ ） 广 Ｎ ．４４０ —Ｌ ３３ 不同激素种 类及 浓度对 青钱 柳种 子萌发 的影响 不 同的外 ． 作者 简 介 ： 徐 庆 （ ９ ６） 男 （ 族 ）， 东胶 州 人 ， 任 桂 林 医 学 院 药 理 源激素及其不 同处 理浓度 对种 子发 芽势有 明显 影 响 ， １５ 一 ， 汉 山 现 ｏ 本试 验
青钱柳种子休眠与萌发的研究
称此种子 为酸一 ＣＫ； 未经 酸处理 ， 仅水浸 ４ ８小时的为水 一 而未 经任何处理 的风 干种子 ， ＣＫ； 直接进行 沙藏 的称干一 Ｋ。 Ｃ
１ ２ ３ ＧＡ， 理 ： 酸 蚀 ９ ５小 时 的 种 子 ， ２ ℃中 用 不 同浓 度 的 ＧＡ 溶 液 浸 种 ４ ． ． 处 将 ． 在 Ｏ 。 ８小 时 。 １ ２４ 层 积 处 理 ： 各 类 处 理 种 子 与 湿 沙 相 拌 后放 入 瓦 盆 中 ， 口用 塑 料 布 扎 紧 ， 室 外 低 温 层 积 。 间 从 １ ９ 年 １ ．． 将 盆 置 时 ９７ ２月 ３日开 始 。 １ ９ 年 ２月 １ 日倒 出 盆 中种 子 ， 一 次 记 录 种 子 发 芽 数 量 ， 测 芽 鲜 重 ， 在 每 一 处 理 中 ， 生 长 最 好 的 １ ９８ ２ 第 并 即 取 Ｏ个 芽 ， 子 叶后 称 其 鲜 去 重 。１ ９ ９ ８年 ２月 １ ９日结 束 层 积 时 ， 次 取 出 萌 发 的 种 子 ， ２ 记 录 萌 发 种 子 数 。然 后 将 剩 余 的 未 发 芽 种 子 ， 当 天 置 ２ ℃恒 温 箱 再 第 次 于 ５ 中 发 芽 。结 束 后 ， 次 记 录 的 发 芽 率 总 和 为 总 发 芽 率 。 三
１２ ５ 空粒率 、 ．． 有仁 率及发 芽率 测定 ： 因种子 数量有 限 ， 验前未 作详 细空粒 率测 定 ， 室 内发芽结 束后 ， 将未 萌发 种子 逐个剪 试 待 再 开， 统计空粒 占整个试 验种子 数的百分 比。 空粒 率（ 一（ ％） 空粒数／ 总粒数 ） ０ ； ×１０ 有仁 （ 有胚种 子） （ 一１ ０ 一空粒率 。 率 ％） ０ 发 芽率 ： 以发 芽种子数 占有胚种子数 的百分 比： 发芽率 （ ） 已发芽种子 数／ 总粒数 一空粒数 ） ×１ ０ 。 一［ （ ］ ０
CO_2对青钱柳种子萌发的影响
１ 材 料 与方 法
１１ 主要仪器与设备 ． 主要仪器与设备有 ：Ｒ ２０ Ｐ Ｘ一 ５Ｂ
属植物 ， 为我国特有的单种属珍稀树种， 既是国家重点保
护的濒危植物之一…， 也是河南省重点保护植物之一。
型智能人工气候培养箱 （ 由宁波海 曙赛福实验仪器厂生 产 ）Ｃ ５ Ｃ ： 、１０型 Ｏ 培养箱（ 由德国 Ｂｎｅ 公司生产 ）Ｓ ｉ ｒ ｄ 、Ｗ
ｃ ｒ ａ ｐ ｌ ｒｓ ｓ ｅ ｓ ｉ ｈ ｒａ ｍｅ ｔ ｒ ｕ ｓａ ｏ ｅ５ ． ８ ，ａ ｄ ｔ ｅｒａ ｅａ ｅ ｇ ｒ ｎ ｔ ｎ ｄ ｒｔ ｎ ｗａ ｂ ｕ ａ ｓ ｓ ｏ ｔｒｔ ａ ａ ｙ ａ ｉ ｕ ｅ ｄ ｎ ｔｅ ｔｅ ｔ ｎ ｏ ｐ ｗａ ｂ ｖ ２ ３ ％ ｕ ｇ ｎ ｈ ｉ ｖ ｒｇ ｅｍｉａ ｉ ｕ ａｉ ｓａ ｏ ｔ ｄ ｙ ｈ ｒ ｈ ｎ ｏ ｏ ７ ｅ ｔ ａ ｎ ｔ ｅｃ ｎ ｒｌ ｏ ｐ，ａ ｄ ｔ ｅ ｓ ｅ ｓｏ ｙ ｌｃ ｒａｐ ｌ ｒ ｓｉ ｅｔ ａｍｅ ｔｇｏ ｐ ｈ ｖ ｅ ｎ ｃ ｒｕ ｔｄ ｂ ｙ ｒ ｇ ｎ ｐ ｒｘ ｄ ｒｃ ｎ ｈ ｔｉ ｏ ｔ ｕ ｈ ｏｇ ｒ ｎ ｈ ｅ ｄ ｆＣ ｃｏ ａ ｙ ａ ｉ ｕ ｎ ｔ ｅ ｔ ｎ ｕ ａ ｅ ｂ ｅ ｏ ｒ ｐ ｅ ｙｈ ｄ ｏ ｅ ｅ ｏ ｉｅｏ ｏ ・ ｕ ｈ ｒ ｒ
Ｃ Ｅ Ｇ Ｍａ —ｇｏ ， Ｉ ０ Ｑｎ —ｍ ｉ， Ａ ｉ ｉ Ｈ Ｎ ｏ ａ Ｑ Ａ ｉｇ ｅ Ｃ Ｏ Ｊ ｎ—ｂ ｎ （ ．Ｄ ｐｒ ｅｔ ｆ ｈｒ ａｙＥ ｇ ｅｒ ｇ Ｚ ｅｇｈ ｕＣ ｌｇ ｎ ｌ ｕｂｎｒ ｎｉｅｒ ｇ Ｚ ｅｇｈｕ４０ ０ ， ｈ ａ ２ １ ｅ ａｔ ｎ ｏ ａｍ ｃ ｎ ｉ ｅ ｎ ， ｈｎｚｏ ｏ ｅｅｏ Ａ ｉ ｓａｄｙＥ ｇｎｅ ｎ ， ｈｎｚｏ ５ ０８ Ｃ ｉ ； ． ｍ Ｐ ｎ ｉ ｌ ｆ ｍａ Ｈ ｉ ｎ
青钱柳种子发芽试验
青钱柳种子发芽试验温中林（广西生态工程职业技术学院 ，广西 柳州 545004）［摘要］本文针对青钱柳柳种子外壳坚硬、致密难透水，实生苗培育种子发芽率低的生产现状，采用酸蚀处理、温水处理、对照处理、层积处理4种处理和不同浓度赤霉素催芽方法共16种处理方法进行研究；试验表明：酸蚀处理+200mg/L 赤霉素种子发芽率最高，酸蚀处理+300mg/L 赤霉素其次；酸蚀处理+200mg/L 赤霉素种子未发芽率和霉烂率也最低，酸蚀处理+300mg/L 赤霉素其次。
说明采用酸蚀处理+200mg/L 赤霉素种子、酸蚀处理+300mg/L 赤霉素种子，可以提高种子发芽率，未发芽率和霉烂率也降低，在生产上可优先采用。
［关键词］青钱柳 ；种子发芽 ；试验１材料和方法1.1材料青钱柳种子、98%浓硫酸、900C 温水、赤霉素(GA3)。
1.2试验方法1.2.1种皮破壳预处理设2个处理，一个对照。
（1）酸蚀处理：将种子用98%浓硫酸浸泡，酸蚀时间20min 至30min。
种子处理完，立即置流水或清水冲洗1小时，冲洗后风干，然后供试。
(2)温水处理：将种子用900C 温水浸泡自然冷却，冷水浸泡种子处理完，风干，供试。
(3) 对照处理：种子不做任何处理，直接供试。
激素处理：酸蚀后的种子，分别用不同浓度的赤霉素(GA3)溶液浸种，设有有4个水平，一个对照：即0mg/L（对照）、200mg/L、300mg/L、400mg/L、500mg/L。
赤霉素浸种时间为即24小时。
层积处理：层积处理为1个水平，即将处理好的青钱柳种子放在室内层积处理，1.2.2激素处理酸蚀后的种子，分别用不同浓度的赤霉素(GA3)溶液浸种，设有有4个水平，一个对照：即0mg/L （对照）、200mg/L、300mg/L、400mg/L、500mg/L。
赤霉素浸种时间为即24小时。
1.2.3层积处理层积处理为1个水平，即将处理好的青钱柳种子放在室内层积处理，种子与湿沙按1：3比例混合防入容器中，容器封好口，360天结束层积。
青钱柳不同营养器官次生代谢产物分析
ｐｏｉ ｅｗ ｒ ｅｅ ｉ ｄａｄ ｒｖ ｃ ｅ ｄ ｔ ｎ ｎ ｅ ｍａｅ ｎ
ｓ ｉ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｅｏ ｄ ｒ ｔｂ ｌｅ ｌ ｅ ｉｔｄ ｉ ｉｅｅ ｔｎ ｔ ｅ ｔ０ ｎ ｆＣ ｃ ￣，ａ ｖ ￣ ｍ ｕｔ ｓ ｏ ｄ ｔａ ｓｃ ｎ ａｙｍｅａ ｏｉ ａｌ ｘｓｅ ｄｆ ｒｎ ｕｒ ｎ 】 ｓｏ ｙ ／ ｙ ａ／ ｓ ６ ｔ ｓ ｎ ｉ ａ ｏ ｕ
Ａｎ ｌｓｓＯｌｔｅｓ 嘎＿ａ ｙ Ｍ ｅａ ｏｌｅ ｎ ｆｅｔ ｒｅ ｔ０ 卿皓 ｏ ｙ ｍ ｒａ口 ａｙ ｉ ｉ ｈ Ｉ ｄ ｒ ｔ ｈ ｉ ｓｉ Ｄｉ ｒｍｔＮｕｔｉｎ ｔ ｆ Ｃ ｄｏ ｙ
ＪＮ Ｚ ．ｉ ｔａ （ｎｔｕｅｏ Ｅｏｏｙ Ｔ ｉ ｏ ｏｌ ｅ ｉ ａ，ｈ 油 ｎ １０ ０ Ｉ ｅｘｎｅ ｌ Ｉｓｔｔ ｆ ｃｌ ， ａｚ ｕ Ｃｌ ｇ ，Ｌｎ ｉＺｅ ｇ３７０ ） ｉ ｇ ｈ ｅ ｈ
ｈ ｈｓ ｉ ｉ ｔ ｇｈ ｔｈ ｃ ｄｒ ｍ ｔ ｏ ｔ ｗ ｒ ｍ ｉ ｙ ｏ ｐ ｌ ｆｈ ｇ／ ｏ ｌ ｆ ｎ ｏ ｅ ｅ ． ｉ ｌ ｇｍ ｌｉ ａ ｉ ｔ． ｈｒ ＂ ｓ ｉ ｅ ， ｎ ｃ ｉ ｔ ｔ ｓ ｏ ａ ｅ ｂ ｌ ｅ ａ ｌ ｃ ｏ ｔ Ｏ ｌ￥ ｆｅ ｄｒ ｄ ｔ ｔ ｗ ｔ ｓｏ 印 ｉＩ ｃ ｖ ｙ Ｔ ｅ ｗ ｇ ｔ ｄ ａｎ ａ ｅ ｅ ｎ ｙ ａ ｉ ｓ ｅ ｅ ｎ ｍ ￣ ｏ ｅ ｌｔ ｌ ＇ ａ ａ ｏ ｃ ｈ ｔｎ ｚ１ ｔ ｉ ｇ ｅ ａ
青钱柳种子休眠与萌发的研究
青钱柳种子休眠与萌发的研究
青钱柳(Glycyrrhiza uralensis.Fisch)属于Glycyrrhiza 科，有根、茎、叶和花，是多年生高
大草本植物。
青钱柳营养价值价值较高，中药中它有一定的作用，改善肝脏疾病，促进血
液循环等，是健康养身的有益之物。
众所周知，植物种子是一个重要的生活史结构，往往承载着植物繁殖和种群演替的重任。
青钱柳种子也不例外，其休眠与萌发过程也是一个复杂的大过程。
实际上，受到外界环境
的影响，青钱柳种子将进入休眠状态，此后形成如水分平衡、管型膨胀活性、脱落酸疏水性、果胶含量及内部氧分压等促进萌发的特征。
研究表明，青钱柳种子休眠的原因主要为其特殊的机体结构，包括种皮、种籽、种质等膜，以及种质层、种胚、种皮发育细胞、胚乳层等内部结构；其次是外界环境因素，如温度、光、水分等因素，影响青钱柳种子休眠与萌发，如果受外在环境影响，种子会落入休眠模
式从而形成种子萌发的稳定态。
究其代谢，青钱柳种子休眠期间表现出活性水平低、水分
分配不良、糖含量低，芽萌发期表现出生理活性强，相对水分分&&、糖类次数和类型的
分布有较大的变化。
根据上述研究，可见青钱柳种子休眠与萌发过程是一个复杂的大过程，需要机体结构和外
界环境等因素的协同作用以及代谢变化才能顺利完成。
未来，我们可以在此基础上继续深
入研究，从基因水平上探讨青钱柳种子休眠与萌发的机制，为提升植物的繁殖效率提供重
要的科学技术支持。
青钱柳种子不同方式浸种育苗技术试验
缘乞科枚Journal of Green Science and Technology2021年4月第23卷第7期青钱柳种子不同方式浸种育苗技术试验陈志洪(福建省安溪县西坪林业站，福建安溪362431)摘要：指出了青钱柳种子育苗采用3种不同方式浸种，其一用温水浸种处理，其二用闸喙乙酸200X10-°溶液浸种处理，其三用ABT3号3号生根粉200X10-6溶液浸种处理。
分别用于大田育苗试验。
实践证明：用ABT3号生根粉溶液浸种的种子发芽率，比用温水浸种、闸嗥乙酸溶液的种子发芽率分别提高&1%、7.8%，出土萌芽率分别提高6.7%、5.5%,苗木生长成活率分别提高&9%、4.4%。
一年生的苗木生长量，用ABT3号生根粉溶液浸种的种子培育的苗木，地径、苗高，比用温水浸种的种子和用闸喙乙酸溶液浸种的种子培育的苗木生长苗高，分别大13.0%、7.1%,地径粗26.4%、10.3%，生长率分别提高30.8%、5.6%。
关键词：青钱柳种子；不同方式；浸种育苗；技术试验中图分类号：S723.1文献标识码：A文章编号：1674-9944(2021)07-0065-041前言青钱柳(Cyclocarya y>aZiwr«5(Batal.)lljinsk.),别名铜钱树、发财树，属胡桃科，是我国第三纪古热带植物区系的工遗植物，也是中国特有珍稀树种。
青钱柳属落叶大乔木，树高可达30m、胸径3m,树冠宽幅庞大,枝叶茂盛，奇数羽状复叶，小叶7〜9枚，叶革质。
多生于海拔400-1500m的山坡阔叶林中，习惯于生长云雾弥漫的阴凉环境，是典型的中亚热带落叶树种。
花期4〜5月，果期8〜10月，髓部薄片状。
春天生出绿色花瓣，瓣呈圆形膜，瓣瓣相连，似一串串铜钱。
果序轴长25〜30cm,果实有革质水平圆盘状翅，顶端有4枚宿存花被片及花柱。
坚果具盘状圆翅，果实迎风摇曳，别具一格。
青钱柳是集经济用材、绿化观赏、茶饮保健、药用治疗于一身的珍稀保护树种。
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青钱柳种子无菌萌发的研究
【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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青钱柳种子无菌萌发的研究
【摘要】目的探讨不同处理方式对青钱柳种子无菌萌发的影响。
方法浓硫酸对种子进行预处理后，采用正交设计对影响其萌发的GA3浓度、浸种温度和浸种时间进行研究，再将外植体进行消毒，接种于不同激素组合的MS培养基中进行无菌培养。
结果青钱柳种子萌发的最佳处理为：浓硫酸酸蚀9.5h+1000mg/L的GA3溶液+浸种24h+浸种温度35℃;种子萌发的最优激素组合为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+ GA3 30 mg/L;对青钱柳幼苗进行离体培养，液体培养基比固体培养基更有利于青钱柳的离体培养。
结论对青钱柳种子进行了综合处理再进行无菌培养，可以提高青钱柳种子的发芽率。
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青钱柳种子无菌萌发研究 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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青钱柳种子无菌萌发研究 【摘要】目的探讨不同处理方式对青钱柳种子无菌萌发的影响。
方法浓硫酸对种子进行预处理后，采用正交设计对影响其萌发的GA3浓度、浸种温度和浸种时间进行研究，再将外植体进行消毒，接种于不同激素组合的MS培养基中进行无菌培养。
结果青钱柳种子萌发的最佳处理为：浓硫酸酸蚀9.5h+1000mg/L的GA3溶液+浸种24h+浸种温度35℃;种子萌发的最优激素组合为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+ GA3 30 mg/L;对青钱柳幼苗进行离体培养，液体培养基比固体培养基更有利于青钱柳的离体培养。
结论对青钱柳种子进行了综合处理再进行无菌培养，可以提高青钱柳种子的发芽率。
【关键词】青钱柳种子; 激素; 萌发; 无菌培养 青钱柳Cyclocarya paliurus (Batal.)Iljinskaja又名摇钱树、山沟树(浙江) 、麻柳(湖北)、青钱李等，系胡桃科青钱柳属植物，为我国特有的珍稀树种，是国家重点保护的濒危植物之一[1，2]，在广西桂林等地也有分布。
青钱柳有降血糖、降血压、降血脂等作用，被认为是治疗2型糖尿病的安全低毒的良药。
现有的青钱柳多零星分布于深山老林和一些自然保护区中，主要是天然林，青钱柳种子发育差，种子败育很严重且具有深休眠特性，人工育苗出苗率低，一般播种后需隔年甚至2年后才萌发[3]，坚硬种壳是阻碍种子萌发的因素之一[4]，这在一定程度上制约了青钱柳人工资源的培育和开发利用，严重影响了青钱柳的开发与产业化进程。
目前有关青钱柳种子萌发的研究报道并不多，本试验以青钱柳种子为外植体，采用浓硫酸软化种子种壳，结合赤霉素浸泡后进行无菌培养，探讨浓硫酸、赤霉素综合处理及培养基激素等因素对青钱柳种子萌发的影响，探讨提高青钱柳种子发芽率的方法。
一测多评法测定青钱柳中5种黄酮类成分含量
一测多评法测定青钱柳中5种黄酮类成分含量蒋向辉;蒋天智;苑静;王翔【期刊名称】《华中师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(051)005【摘要】To establish a method for simultaneously determination for the content of five main flavonoids (luteolin,flavonoidglycoside,kaempferol,quercetin and isoquercitrin) in Cyclocarya paliurus by single marker,which is feasible and accurate.Taking luteolin as internal standard substance,to establish a method for quantitative analysis of multi-components with single marker.To determinate the content of luteolin,flavonoid glycoside,kaempferol,quercetin and isoquercitrin in Cyclocarya paliurus.The contents in 5 batches of samples came from 3 different regions were determined by both external standard method and quantitative analysis multi-components by single marker (QAMS).The scientificity and feasibility of the method were evaluated by comparison of the quantitative results between external standard method and QAMS.The results showed that the relative correction factor (RCF) was perfect.The results calculated with a single marker were consistent with the results by the external standard method.The method with a single marker is accurate and feasible to evaluate the quality of Cyclocarya paliuru.%建立青钱柳中5种主要的黄酮类成分的一测多评法,验证该方法在青钱梆质量评价中应用的准确性及可行性.以木犀草素为内标,分别建立木犀草素与黄酮苷、山奈酚、槲皮素、异槲皮苷的相对较正因子,计算青钱柳中黄酮苷、山奈酚、槲皮素与异槲皮苷的量,实现一测多评,对来自3个不同地方的5个批次的青钱柳样品,同时采用外标法与一测多评法测定青钱柳中5种黄酮类成分的含量,并两种方法测得结果的差异,对一测多评法进行含量测定的科学性与可行性进行评价.结果表明5种黄酮类成分的相对校正因子在不样品中重复性较好,对于同批次样品采用一测多评法与外标法测得的结果之间没有显著性差异.以木犀草素为内标同时测定黄酮苷、山奈酚、槲皮素与异槲皮萤的一测多评法可用于青钱柳的定量分析.【总页数】6页(P620-625)【作者】蒋向辉;蒋天智;苑静;王翔【作者单位】凯里学院化学与材料工程学院,贵州凯里556011;凯里学院化学与材料工程学院,贵州凯里556011;凯里学院化学与材料工程学院,贵州凯里556011;凯里学院化学与材料工程学院,贵州凯里556011【正文语种】中文【中图分类】O626.9【相关文献】1.HPLC法测定青钱柳中槲皮素和山柰素的含量 [J], 郦宏岩;朱惠芬;耿秋霞;杨琴;魏福荣2.一测多评法测定青钱柳中异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和阿福豆苷的含量 [J], 张丁文;刘悦;解生旭;司云珊;刘云雪;关欣;徐雅娟3.HPLC-一测多评法测定参芪延肾颗粒中淫羊藿药材中的6个黄酮类成分的含量[J], 沈洁; 王琴; 熊维建; 徐冲4.一测多评法测定枳术颗粒中四种黄酮类成分的含量 [J], 张一帆; 林志航; 汤秋华5.黔东南州产青钱柳黄酮类成分的含量测定研究 [J], 谭霖;杨鑫;龙滢;徐秋萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一测多评法测定青钱柳中异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和阿福豆苷的含量
一测多评法测定青钱柳中异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和阿福豆苷的含量张丁文;刘悦;解生旭;司云珊;刘云雪;关欣;徐雅娟【期刊名称】《长春中医药大学学报》【年(卷),期】2014(0)5【摘要】目的建立超高效液相色谱法测定青钱柳中异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和阿福豆苷含量的一测多评法.方法以阿福豆苷为内参物,建立阿福豆苷与异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷的相对校正因子,并用该校正因子进行异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷的含量计算(计算值),实现一测多评;同时采用外标法测定药材中3种黄酮含量(实测值),并比较计算值与实测值的差异.结果经测定异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和阿福豆苷在药材中的含量分别为1.403,1.314,1.633 mg/g;5批青钱柳药材中3种异黄酮的含量计算值与实测值间无统计学意义.结论以外标法测定阿福豆苷,利用相对校正因子实现对异槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量进行质量评价准确、可行.【总页数】3页(P810-812)【作者】张丁文;刘悦;解生旭;司云珊;刘云雪;关欣;徐雅娟【作者单位】长春中医药大学,长春130117;吉林省中医药科学院,长春130012;吉林省中医药科学院,长春130012;吉林省中医药科学院,长春130012;长春中医药大学,长春130117;长春中医药大学,长春130117;吉林省中医药科学院,长春130012【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.HPLC法测定不同产地黄蜀葵花中金丝桃苷异槲皮苷及槲皮素-3'-葡萄糖苷含量[J], 杨志芳;王维娜;杨坤;王先荣;杨新波;黄正明2.一测多评法测定青钱柳中5种黄酮类成分含量 [J], 蒋向辉;蒋天智;苑静;王翔3.HPLC同时测定鸭跖草提取物中咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素的含量 [J], 曹旭;史培培;童圣灵;梁鹏飞;蔡芳;胡杨4.HPLC同时测定鸭跖草提取物中咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素的含量 [J], 曹旭;史培培;童圣灵;梁鹏飞;蔡芳;胡杨;5.一测多评法测定金沙藤中异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、山奈素的含量 [J], 张道英;孙湘婷;陈树群;陶济明;刘海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青钱柳种子不同贮藏方法发芽
青钱柳种子不同贮藏方法发芽选取纯净饱满青钱柳种子5份，每份900粒。
分别以常温干藏、室内沙藏、室外沙藏、低温贮藏和地栽秋播种方法进行试验。
因青钱柳种子外果壳坚硬致密，正常播种发芽不整齐，为了使种子发芽整齐，播种前需对种子进行人工被迫催芽，可以用粗河沙与种子混合后反复揉搓，直至种子外果壳粗糙为止。
并且用温水浸种，最后再用硫酸铜水溶液，浸种消毒处理，取出阴干后，再进行播种。
常温种子干藏将纯净的青钱柳种子白天日晒，夜间收至干燥通风处，待种子的含水量降至时，是种子的安全含水量，再用与种子容积大倍的透明密封罐内贮藏，并放置在阴凉干燥处。
每隔观察一次，始终保持种子干燥室内种子沙藏室内沙藏的种子，先选中粗沙过筛，用：高锰酸钾水溶液喷洒消毒，再将纯净种子混合于中粗沙中，装入无盖的陶钵罐中，放在4以下的室内贮藏，沙子的含水量约在为宜，以后要经常保持沙子的适合湿度，不能中途失水干燥，要每隔检查沙子的湿度，种子贮藏期间，每隔上下翻动种子次，直至播种室外种子沙藏室外种子沙藏，在室外阴凉处挖深的贮藏穴，先在穴的底部铺一层厚的粗沙石，再铺一层厚的过筛中粗沙，中粗沙上均匀撒上青钱柳种子，周放好通气稻草把个，稻草把要高于地面，最后盖上中粗沙，中粗沙要高过地面左右。
所用中粗沙必须用高锰酸钾水溶液喷洒消毒后再使用。
距离贮藏穴四周处，开一条排水沟，深度在播种前在取出种子。
低温贮藏低温贮藏的种子，是先将纯净的青钱柳种子白天日晒，夜间收至干燥通风处，待种子的含水量降至时，装入布袋中，用纸箱装好密闭后，再放入恒温的冷库中贮藏。
播种前取出种子即可。
地栽秋播秋播和春播在同一块地中进行。
播入的是经过外果壳处理的种子，种子和土壤都已经用药剂处理过，分3次重复，每次重复粒种子。
种子播下后，待到第年土壤解冻后，于晴天喷一次透水，至种子发芽前，都要保持苗床土壤湿润，这可以帮助种子正常萌发。
不同贮藏方法相比较，常温干藏得种子发芽率，未发芽率和霉烂率最高，室内沙藏其次。
青钱柳种子休眠解除方法实验研究
青钱柳种子休眠解除方法实验研究
李柱存
【期刊名称】《林业调查规划》
【年(卷),期】2015(040)004
【摘要】青钱柳种子属于综合性深休眠类型,在自然条件下需要隔年甚至经过2年才能萌发.文章主要研究酸蚀时间、GA3浸种浓度、GA3拌沙浓度、层积温度4个因素对打破青钱柳种子休眠的影响.结果表明:青钱柳种子经过适当的酸蚀处理后,用适度的GA3浸种、适度的GA3拌沙后在先低温后暖温或昼夜变温下层积最有利于提高发芽率.酸蚀时间和层积温度对青钱柳种子的萌发起关键作用,GA3浸种浓度和GA3拌沙浓度对青钱柳种子萌发的影响相对较小.不同的种源、品种,其最优的处理方案也不相同.云南种源的最高发芽率是89.67％,庐山种源的最高发芽率是87.11％.
【总页数】7页(P23-29)
【作者】李柱存
【作者单位】云南省林业调查规划院,云南昆明650051
【正文语种】中文
【中图分类】S792.12;S722.14
【相关文献】
1.综合处理措施对解除青钱柳种子休眠的影响 [J], 尚旭岚;方升佐;徐锡增
2.青钱柳种子休眠与萌发的研究 [J], 史晓华;徐本美;黎念林;孙运涛
3.青钱柳种子休眠机制 [J], 尚旭岚;徐锡增;方升佐
4.富硒青钱柳虫草片降血糖、免疫调节的实验研究 [J], 李东山;吕萌;谭开祥;向极钎;刘卫
5.富硒青钱柳-蛹虫草复方小鼠免疫调节及抗氧化实验研究 [J], 罗丹;陈丹;白曦晨;向极钎;樊建元;刘卫
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青钱柳种子休眠机理及其解除休眠方法的研究的开题报告
青钱柳种子休眠机理及其解除休眠方法的研究的开
题报告
【开题报告】
一、研究背景
青钱柳是一种常见的植物，具有较强的草本性和生长力，但在实际种植中，很容易出现休眠现象，影响青钱柳的正常生长和发育，降低其经济效益。
因此，研究青钱柳种子休眠机理以及解除休眠方法，对于促进青钱柳的生长和发展、提高经济效益具有重要意义。
二、研究目的
本研究旨在深入探究青钱柳种子的休眠机理，分析影响种子休眠的因素，寻找解除种子休眠的科学方法，为青钱柳的生产种植提供有效的理论指导。
三、研究内容
1. 青钱柳种子休眠机理的研究
通过观察种子发育期的形态结构、比较不同发育阶段种子萌发能力等方法，探究青钱柳种子休眠机理，并分析其原因。
2. 影响种子休眠的因素分析
通过多种方法和技术手段，深入分析影响青钱柳种子休眠的因素，包括环境因素、内源性因素等，为解除青钱柳种子休眠提供科学依据。
3. 解除休眠方法的研究
通过试验和实践，探究解除青钱柳种子休眠的最佳方法，包括生理处理、物理处理等，可以为青钱柳种植生产提供解决方案。
四、研究方法
本研究采用综合方法论，包括实验室试验和田间实践，结合调查研究等多种研究手段，全面深入研究青钱柳种子休眠机理及其解除休眠的最佳方法。
五、研究意义
通过本研究，深入探究青钱柳种子休眠机理及其解除休眠的方法，可以为青钱柳种植业提供有效的技术支持，促进青钱柳的生长和发展，提高其经济效益，同时为我国植物学科研提供新的理论和实践基础。
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doi:10.3969/j.issn.1000-8101.2011.05.007青钱柳种子不同部位发芽抑制物质的测定尚旭岚1,孙容2,徐锡增1,方升佐1*(1.南京林业大学森林资源与环境学院,南京210037;2.重庆金佛山国家级自然保护区管理局)摘 要:对青钱柳种子不同部位乙醚提取液进行了生物测定并对果皮和种皮提取液进行GC-M S 鉴定,结果表明:青钱柳种子不同部位乙醚提取液的抑制强度为果皮>种皮>种胚;果皮和种皮乙醚提取液的GC-M S 鉴定结果显示,青钱柳种子中存在庚酸、辛酸、棕榈酸和邻苯二甲酸二乙酯等发芽抑制物质。
对邻苯二甲酸二乙酯和棕榈酸标准品进行生物测定,确定其半抑制浓度(IC 50)分别为478.63 L/L 和602.56mg/L 。
关键词:青钱柳种子;发芽抑制物质;邻苯二甲酸二乙酯;棕榈酸Evalu ation on germination inhibitors in different fractions of Cyclocarya pal iu ru s see ds SHANG Xu lan,SUN Rong,XU Xi zeng,FANG Sheng zuoAbstract:T he inhibito ry effects of ether ext racts f rom different fractions of Cy clocar y a p aliur us seeds w ere evalua ted using the metho d of bioassay,and then the inhibitor s of pericar p and seed co at w ere identified by gas chr omato g r aphy mass spectr oscopy (GC-M S).T he bioassa y results indicated that the inhibit ors wer e distr ibuted in all the fractio ns of t he seeds,and t he follo wing act ivit y series was obtained:per icarp >seed coat >embryo.T he GC -M S identif ication r esults show ed that there exist ed sev eral inhibit ors such as heptano ic acid,o ctano ic acid,hexadecano ic acid and diethyl phthalate.T he IC 50(Inhibitor y concentr ation 50%)of tw o standar d substances including diethyl phthalate and hex adecanoic acid wer e 478.63 l/L and 602.56mg /L respect ively.Key words:Cy clocar y a p aliur us seeds;g ermination inhibitor s;diethyl phthalate;hex adecanoic acidFirst author s address:Co llege of Fo rest R eso ur ces and Env iro nment,N anjing F orestr y U niver sity,Nanjing 210037,China收稿日期:2011-05-10 修回日期:2011-06-24基金项目:国家林业公益性行业科研专项(编号:200904046);江苏省高等学校创新团队科研计划(编号:苏教科[2009]10号);江苏省!六大人才高峰∀高层次人才项目。
第一作者简介:尚旭岚(1978-),女,讲师,主要从事林木种苗的研究工作。
通讯作者:方升佐,男,教授。
E mail:fangsz @青钱柳(Cy clocar y a p aliur us ),又名青钱李、摇钱树等,系胡桃科青钱柳属植物,是我国特有的单种属植物。
青钱柳广泛分布于江西、浙江、江苏、安徽、福建、湖北、湖南、四川等地的海拔420~2500m 的山区、溪谷或石灰岩山地。
青钱柳是集药用、材用和观赏等多种价值于一身的珍贵树种[1-2],具有极高的保护和开发应用价值。
但其种子具深休眠习性[3],严重影响了青钱柳的开发利用和产业化进程。
杨万霞等[4]通过对青钱柳果皮甲醇浸提液进行生物测定,认为种皮中所含的内源抑制成分可能是导致青钱柳种子休眠的原因之一。
笔者通过对青钱柳种子不同部位的乙醚提取液进行生物测定并进一步通过GC-MS 鉴定,鉴定出青钱柳果皮和种皮中的发芽抑制物质种类和相对含量,同时进行了邻苯二甲酸二乙酯(DEP)和棕榈酸两种标准品的生物测定并确定其半抑制浓度,以期为进一步研究青钱柳种子的休眠机理和加快青钱柳的人工繁育提供理论基础。
1 材料与方法1.1 材 料青钱柳种子于2005年12月采自贵州黎平,千粒质量为149.81g ,饱满率为55%。
种子去翅后采用15%盐水分选,取下沉种子晾干后备用。
1.2 方 法1.2.1 发芽抑制物质的提取将饱满种子解剖分离,分别取果皮、种皮和种胚,在33~35#条件下干燥65h 至恒定质量后置索氏提取器内(果皮先用1mm 筛粉碎机进行粉碎),乙醚冷浸12h,40#回流提取24h,无水硫酸钠脱水干燥后真空减压浓缩得黄色油状物。
1.2.2 发芽抑制物质的生物测定所用生物测定材料为白菜种子。
分别取1.2.1不同部位的提取液,加到铺有滤纸的培养皿中,待乙醚挥干后加入等体积蒸馏水,由此得到相当于0.5g/mL 的抑制物质。
以乙醚挥干后加入等体积蒸馏水作为对照。
进行生物测定时,将白菜籽在45~50#温水中浸泡10m in,不时搅拌。
取白菜种子各25粒均匀摆放在滤纸中上部,培养皿放置时倾斜45∃,(28%1)#恒温黑暗培养。
72h 后测量苗高和胚根长,并计算其对白菜苗高和胚根生长的抑制率:I =(C -T )/C &100%。
式中:I 为抑制率,C 为72h 后对照组平均苗高或胚根长度,T 为72h 后处理组平均苗高或胚根长度。
3次重复并进行差异显著性检验。
1.2.3 发芽抑制物质的分离与鉴定取1.2.1黄色油状物用乙醚溶解后定容,果皮乙醚提取液浓度为10g/m L,种皮乙醚提取液浓度为2g/mL 。
测定在中国林科院林产化工研究所仪器分析室进行。
仪器型号:美国Agelient 6890N/5973N 气谱-质谱(GC-MS )联用仪。
气谱条件为PEG-20M 石英毛细管柱 0.32m m &25m ;柱温为50~160#;程序升温5#/m in;载气为氦气;气化室温度为260#。
质谱条件:离子源EI;源温200#;电离电压70eV;收集电流300 A;发射电流1mA;仪器分离率600;质量范围10~500。
由计算机控制的库存信号检查各个成分的质谱图并与标准谱图核对。
以总离子流图全部峰面积的总和为100%,每个峰面积与总面积的比值代表该成分在乙醚提取液中的相对含量。
1.2.4 标准品的IC 50测定根据GC-M S 鉴定结果找到邻苯二甲酸二乙酯(DEP)和棕榈酸(十六酸)标准品,将标准品用乙醚按下列浓度稀释:10000 L/L (mg /L),1000 L/L,100 L/L,10 L/L,1 L/L ;CK 为乙醚挥干后加等体积蒸馏水。
测定各处理浓度的生物活性,并计算其对白菜种子胚根生长的抑制率。
以各处理中标准品浓度的对数值为X ,以对白菜种子胚根生长的抑制率为Y 作图并计算拟合方程,利用拟合方程经反对数求出中等抑制浓度IC 50,即胚根生长抑制率达到50%时的标准品浓度。
1.2.5 数据处理采用SPSS 软件进行单因素方差分析,并用Dun can 法检验其差异显著性。
2 结果与分析2.1 青钱柳种子不同部位乙醚提取液的生物测定从图1可知,青钱柳种子不同部位的乙醚提取液对白菜种子的苗高和根长都有较强的抑制作用,各部位的抑制强度依次为果皮>种皮>种胚,其对胚根的生长的抑制作用尤为明显,果皮和种皮提取液对根长的抑制率均在85%以上,约为种胚提取液抑制率的2.2倍。
方差分析结果表明,果皮和种皮提取液对白菜种子苗高和根长的抑制率与种胚提取液相比差异均达到极显著水平。
由此说明青钱柳种子果皮和种皮乙醚提取液中可能含有强烈抑制白菜种子胚根生长的物质。
图1 青钱柳种子不同部位乙醚提取液生物测定2.2 果皮中可能有发芽抑制作用的有机化合物的种类及相对含量对青钱柳果皮乙醚提取液作进一步的GC-M S 鉴定,总离子流图见图2。
经分析,列出果皮中可能具有发芽抑制作用的有机化合物的种类及相对含量见表1。
表1 青钱柳果皮乙醚提取液的GC M S 分析结果保留时间/min分子式分子量 中文名相对含量/%15.75C 7H 14O 2130.10庚酸 2.0120.25C 8H 16O 2144.12辛酸3.3820.76C 8H 10O 122.072,4-二甲基苯酚 1.9122.08C 18H 20236.162,3-二羟基-1,1,3-三甲基-3-苯基-1H-茚13.4722.75C 12H 14O 4222.095,6,7-三甲氧基-1-茚满酮 6.1827.75C 18H 20236.162,4-二苯基-4-甲基-1-戊烯 3.7728.11C 14H 22O206.173,5-二(1,1-二甲基乙基)苯酚16.1428.505C 12H 14O 4222.09邻苯二甲酸二乙酯21.8928.84C 18H 20236.162,4-二苯基-4-甲基-2-戊烯3.17从图2和表1可知,从青钱柳种子果皮乙醚提取液中鉴定峰面积较大的主要化合物9种,其中峰面积最大的为邻苯二甲酸二乙酯。
有机酸类物质有庚酸和辛酸,这两种物质已被确定具有抑制作用。
其他可能有发芽抑制活性的物质有酚类物质,如2,4-二甲基苯酚和3,5-二(1,1-二甲基乙基)苯酚。
2.3 种皮中可能有发芽抑制作用的有机化合物的种类及相对含量青钱柳种皮乙醚提取液GC -M S 总离子流图见图3。
种皮中可能具有发芽抑制作用的有机化合物的种类及相对含量见表2。
从图3和表2可知,从青钱柳种子种皮乙醚提取液中鉴定峰面积较大的主要化合物8种,这些可能有发芽抑制活性的物质可分为有机酸类物质及其衍生物,如9,12,15-十八碳三烯酸、十五(烷)酸、十六(烷)酸(棕榈酸)和十七(烷)酸等。