LC_MS_MS法同时测定大鼠血浆中贝母素甲_贝母素乙的浓度及其在药代动力学中的

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LC_MS_MS同时测定人血浆中阿莫西林_氨溴索浓度及其药动学研究

作者简介：陈苏宁，女，药师研究方向：临床药学 *作者简介：文爱东，男，硕士生导师，主任药师研究方向：临床药学 Tel ：（029）84773636 E-mail: **************.cn 型比OATP1B1*1b/*1b 基因型的AUC 和ρmax 高2~3倍。

本试验第7号受试者可能是OATP1B1*15/*15基因型，需进一步实验证实。

3.4 本试验测定匹伐他汀血药浓度的HPLC- MS/MS 方法国内外未见报道，其准确性好，精密度高，可用于体内药物分析。

REFERENCES[1] SUNGHA P ，HYUN-JAE K ，SE-JOONG R ，et al . A randomized ，open-label study to evaluate the efficacy and safety of pitavastatin compared with simvastatin in korean patientswith hyper cholesterolemia[J]. Clin Ther ，2005，27(7)：1074-1082.[2] GUO D L ，ZHANG G X ，SUN H Y . A new superstatin——pitavastatin calcium[J].Qilu Pharmaceutical Affairs (齐鲁药事)，2004，23 (1)：61-62. [3] XIAO J ，YUAN H ，YANG G P ，et al. A summary on 48 cases ofhyperlipidemia treated by seed of romanet grape oil soft capsule [J].Hunan Journal of Traditional Chinese Medicine (湖南中医杂志)，2006，22(2)：5-6.[4] HE Y H ，XU M. A antilipemic agent——pitavastatin[J].WorldClinical Drugs （世界临床药物），2005，26(3)：187-187. [5] WANG J ，TOKORO T ，MATSUI K ，et al . Effect of OATP1B1(SLCO1B1) variant alleles on the pharmacokinetics of pitavastatinin healthy volunteers [J]. Life Sci （生命科学），2005，76：2257-2268. [6] CHUNG J Y ，CHO J Y ，YU K S ，et al . Effect of OATP1B1(SLCO1B1) variant alleles on the pharmacokinetics of pitavastatin in healthy volunteers[J].Clin Pharmacol Ther ，2005，78：342-350.（收稿日期：2008-08-20）LC-MS/MS 同时测定人血浆中阿莫西林-氨溴索浓度及其药动学研究陈苏宁1，文爱东1*，丁莉坤1，贾艳艳1，王志睿1，杭太俊2 (1.第四军医大学第一附属医院药剂科，西安 710032；2.中国药科大学药学院药物分析教研室，南京 210009)摘要：目的建立LC-MS/MS 同时测定人血浆中阿莫西林/氨溴索浓度。

LC_MS_MS同时检测大鼠血浆_省略_药内酯苷的浓度及其药代动力学研究_于双慧

诱导裂解（ CID）电压分别为 22 eV，15 eV，12 eV；扫描时间：
0． 5 s。正离子方式检测，扫描方式为选择反应监测
（ SＲM），用于定量分析的离子分别为（ m / z）： 498→179（芍
药苷），m / z 481→197（芍药内酯苷），m / z 389→209（内标，
（ albiflorin，Alb）的药动学特点研究仍是空白。本实验采用
第 33 卷第 3 期 2015 年3 月
中华中医药学刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 3 Mar． 2 0 1 5
LC － MS / MS 方法，研究大鼠白芍提取液灌胃给药后体内
温 25 ℃ ；进样量 20 μL。质谱条件： ESI 离子源；喷雾电压：
4000 V；离子源电压： 10 eV；毛细管温度： 350 ℃ ；鞘气： N2 （ 45 psi）；辅助气： N2 （ 15 psi）；碰撞气体压力： Ar 1． 0 mTorr （ 1 Torr = 133． 3 Pa）；芍药苷、芍药内酯苷、栀子苷的碰撞
YU Shanghui1 ，BI Kaishun2 ，TONG Ling3
（ 1． Shenyang Chemical Industry School，Shenyang 110122，China； 2． Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China； 3． Tianjin Tasly Pharmaceutical Co．，Ltd，Tianjin 300402，China）

LC_MS_MS法同时测定不同产地半枝莲中野黄芩苷和芹菜素含量

[ 2]
标准曲线 , 计算得野黄芩苷、芹菜素回归方程分别为 : Y = 3 567 X + 54 96! r = 0 9953 Y = 4 469 X + 34 54! r = 0 9951 结果表明 , 野黄芩苷进样浓度在 2 6 ~ 72 7 m g - 1 -1 L , 芹菜素进样浓度在 2 3~ 63 8 m g L 范围内线性关系良好。
药物分析杂志 Ch in J Phar m Ana l 2009, 29( 9)
1451
LC- M S/M S法同时测定不同产地半枝莲中野黄芩苷和芹菜素含量
焦燕, 王英锋 , 刘锁兰
( 首都师范大学分析测试中心 , 北京 100048) 摘要目的 : 采用液相色谱 - 二级质谱联用法 ( LC- M S /M S) 对不同产地半枝莲药材中的野黄芩苷和芹菜素进行含量测定。 4 6 mm, 5 m ) , 流动相为乙腈 - 0 1 % 醋酸 , 梯度洗脱 , 流速 1 mL m in- 1 , 测定波长 335 L- 1范围内线性关系良好 ; 所测 12 个产地半枝莲中 , 野黄芩苷和
*
方法 : 采用 D iscov ery C18 柱 ( 250 mm 苷浓度在 2 6~ 72 7 mg
nm, 采用电喷雾负模式电离 ( ES I ) , 选定的母离子和子离子分别为野黄芩苷 m / z 461 /285, 芹菜素 m /z 269/117。结果 : 野黄芩
L- 1, 芹菜素浓度在 2 3~ 63 8 mg
芹菜素的含量范围分别为 0 03 % ~ 0 39% 和 0 02 % ~ 0 30% ; 平均回收率 ( n = 5) 分别为 99 1% 和 97 3% , RSD 分别为 1 4 % 和 0 7% 。结论 : 本方法简单准确 , 适合于半枝莲中野黄芩苷和芹菜素的含量测定。关键词 : 半枝莲 ; 野黄芩苷 ; 芹菜素 ; 液相色谱 - 二级质谱联用法中图分类号 : R 917 文献标识码 : A 文章编号 : 0254- 1793( 2009) 09- 1451- 03

LC_MS研究炒白芍提取物中芍药苷在大鼠体内的药代动力学

[ 2 14]
[ 3]
罗焕敏 , 李晓光 , 肖飞 , 等刘东锋 , 张莉 , 陈婷
当归芍药散中阿魏酸和芍药苷的
药代动力学研究 [ J] 中药材 , 2003 , 26( 3) : 189 [ 4] 四逆散有效成分芍药苷药代动力学研究 [ J] 中国实验方剂学杂志 , 2005 , 11 ( 2) : 36 [ 5] 杨祖贻 , 裴瑾 , 刘荣敏 , 等温里药配伍提高赤芍效应成分芍药苷生物利用度的研究 [ J] 中国中西医结合杂志 , 2005 , 25 ( 9 ) : 822 [ 6 ] Chen L C , LeeM H, ChouM H, et al Phar m acok in et ic study of paeon iflorin in m ice after oral ad m in istration of Paeon iae R adix extract[ J] [ 7 ] J Chrom atogr B , 1999 , 735( 1 ): 33
V ol 35, Issu e 9 M ay, 2010
混标不同浓度溶液 , 使终浓度为 2 5 , 10 , 25, 50 , 100 , 200 , 500 检测。 g L ,按
-1
为炒白芍提取物大、中、小剂量组, 每组 3 只。炒白芍提取物分散于 0 5 % CMC Na 溶液中, 给药量 (以生药 -1 量计 )分别为 0 2 , 04 , 0 8 g kg , 按 100 g 体重 2 mL灌胃给予炒白芍提取物, 给药后 5 , 10 , 20 , 30 , 60 , 120 , 180 , 240 , 360 , 480 , 600 , 720 m in 眼眶后静脉丛取血 0 3 mL, 肝素抗凝, 4 % 下以 3 000 r m in 离心 15 m in , 分离血浆, 置 - 20 % 保存, 待用。 2 5 药动学参数的提取所得血药浓度数据由 W innon lin 5 1药动学软件 ( Pharsight 公司, 美国 )进行拟合求解药动学参数。 3 结果 3 1 方法学考察 3 1 1 专属性结果表明 , 在芍药苷色谱峰处内源性杂质无干扰 , 见图 1 。

液相色谱-串联质谱法分析贝母中异甾体生物碱成分

ＹＡＮＧＣｈｅｎｇ — ｌｉｎｇ，ＣＨＡＮＧＨｕｎｇ — ｃｈｉ。，ＣＨＥＮＣｈｕｎｇ — ｙｕ，ＬＥＥＭａｗ— ｒｏｎｇ
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＮａｔｉｏｎａｌＣｈｕｎｇＨｓｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｃｈｕｎｇ４０２，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｏｌｄｅｎ — ＡｇｅｒＩｎｄｕｓｔｒｙＭａｎａｇｅｍｅｎｔ，ＣｈａｏｙａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔａｉｃｈｕｎｇ４１３，Ｃｈｉｎａ）
醇水溶液定量至１ｍＬ，采用ＬＣ — ＭＳ／ＭＳ法在正离子扫描模式下检测。结果表明：川Ｉ贝母样品中贝母辛的线性范围为０．１～２０Ｆｇ／ｇ，贝母乙素和贝母甲素的线性范围为０．０５～１０Ｆｇ／ｇ；线性相关系数（Ｒ）大
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＢｕｌｂｕｓＦｒｉｔｉｌｌａｒｉａ（ＢＦ），ｏｎｅｏｆｔｈｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｆｒｏｍｔｈｅｐｌａｎｔｏｆｖａｒｉｏｕｓＦｒｉｔ — ｉｌｌａｒｉａｓｐｅｃｉｅｓ，ｈａｓｂｅｅｎｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄａｓｅｘｐｅｃｔｏｒａｎｔａｎｄａｎｔｉｔｕｓｓｉｖｅｈｅｒｂｉｎｔｒａｄｉｔｉｏｎ — ａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．ＴｈｅｖａｌｕｅｏｆＢＦｉｓｒｅｌａｔｉｖｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｉｔｓｑｕａｌｉｔｙ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅｉｓ

UPLC-MS-MS法测定注射自微乳大鼠体内熊果酸血药浓度及其药动学研究

UPLC-MS/MS法测定注射自微乳大鼠体内熊果酸血药浓度及其药动学研究陈海霞1，徐新刚2，韩媛媛2，刘瑾2，生立嵩2，孙丹丹2，赵许杰2，闫雪生2*（1.山东大学齐鲁医院，济南250012；2.山东省中医药研究院，济南250014）摘要：建立注射自微乳大鼠体内熊果酸血药浓度的超高效液相色谱—串联质谱测定方法，并研究其在大鼠体内的药动学。

血清中加入内标并经C18固相小柱萃取后进行测定分析。

采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱（1.7 μm，2.1×100 mm）分离；流动相：乙腈（A）：0.1%氨水（B），梯度洗脱；流速：0.2 mL·min-1，检测波长210 nm，柱温40 ℃；采用电喷雾离子源（ESI）以负离子方式检测；扫描方式：多反应离子监测方式（MRM）检测。

熊果酸血药浓度在1.19～3815.00 ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9990）；不同浓度的提取回收率在87.42~89.95%之间；日内、日间精密度均小于11%。

建立的方法灵敏度高、简单快速，可用于大鼠血清中熊果酸的药动学研究。

关键词自微乳；UA；UPLC-MS/MS；固相萃取；药代动力学中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：Determination of UA Plasma Concentration of SMEDDS in Rats and Pharmacokinetic Study by UPLC-MS/MSCHEN Hai-xia1,XU Xin-gang2,HAN Yuan-yuan2,SHENG Li-song2,SUNDan-dan2,ZHAO Xu-jie2,YAN Xue-sheng2*(1.Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012; 2.Shandong Academy of收稿日期：基金项目：山东省科技发展计划项目（2011GSF11902）*通讯作者：Tel：(0531)82948006；E-mail：tcmyxs@Chinese Medicine, Jinan 250014)Abstract :To establish an UPLC-MS/MS method for the determination of UA concentration of SMEDDS and to study its pharmacokinetics in rats. It was used for determination and analysis when serum with internal standard was extracted from C18 solid-phase column. Acquity UPLC BEH C18 column（1.7 μm，2.1×100 mm）was used to separate. The mobile phase was acetonitrile-0.1%ammonia with gradient elution at the flow rate of 0.2 mL·min-1; The column temperature was 40 ℃and the detection wave length was 210 nm. It was detected by negative ion using electrospray ionization source（ESI）and scanned by multiple reaction ion monitoring (MRM) mode. The liner relationship of UA was very good in range of 1.19～3815.00ng·mL-1(r=0.9990). Recovery rate of different concentrations were 87.42~89.95%.The precision of inter-day and intra-day were less than 11%. The method developed in our study was proved to be sensitive, rapid and simple which was suitable for the pharmacokinetic study of UA- SMEDDS in rats.Key words: SMEDDS；Ursolic Acid；UPLC-MS/MS；Solid-phase extraction；Pharmacokinetics熊果酸（Ursolic Acid，UA）为一种五环三萜类化合物，已发现存在于27科46属62种植物中[1]，在山楂、陆英、连翘、泡桐等植物中的含量比较高[2]。

HPLC—MS同时测定小鼠血浆中青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯的含量

HPLC—MS同时测定小鼠血浆中青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯的含量青蒿素是一种常用的抗疟药，但青蒿中其他组分的药效作用很少被考察。

研究发现，当青蒿中的青蒿乙素、青蒿酸、东莨菪内酯3种组分与青蒿素按照质量比为1∶1∶1∶1的比例在小鼠体内考察药效时，与等剂量青蒿素单用组相比可以起到显著的抗疟增效作用。

建立血浆中同时检测青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯4种组分含量的HPLC-MS方法，有助于这种增效现象在药动学层面研究的进一步开展。

采用Agilent公司1200-6130液质联用系统，电喷雾电离源，正离子和负离子检测方式，SIM模式；色谱分离采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（2.1 mm×150 mm，5 μm），流动相乙腈-0.5%乙酸水溶液（60∶40），流速0.3 mL·min-1 ，柱温为40.0 ℃，进样量5 μL。

结果显示，4组分血浆浓度在5～3 000 μg·L-1 呈现良好线性关系，方法专属性、准确度、精密度良好，无基质效应。

该方法适用于小鼠血浆中青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯的含量测定，可用于开展4组分小鼠体内药物动力学研究。

标签：青蒿素；青蒿乙素；青蒿酸；东莨菪内酯；液质联用世界卫生组织为了延缓疟原虫青蒿素类药物抗药性的产生，自2001年开始推荐使用基于青蒿素类抗疟药的联合治疗方案（artemisinin-based combination therapies，ACTs）。

ACTs目前在全球疟疾治疗中发挥着重要作用[1-2]。

为了更好利用我国的青蒿资源以及发展新型天然ACTs组合药物，我国学者开展了青蒿多组分配伍抗疟研究。

纪晓光等发现以青蒿素、青蒿酸、青蒿乙素和东莨菪内酯1∶1∶1∶1的比例配伍后，青蒿素用量仅为原剂量的1/4，抗疟药效与青蒿素单用组相当[3-4]。

为了进一步明确4组分配伍增效的机制，需要进一步开展药物相互作用研究。

LC-MS测定大鼠血浆中五味子的3个木脂素成分及其药动学研究

醇甲、五味子甲素、五昧子乙素的浓度，对其血药浓度一时问
采用ＤＡＳ１．０软件拟合，计算其药动学参数。结果大鼠血浆样品中，五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素的线性范围分别为０．１１４～３．６６ｍｇ・Ｌ（ｒ＝０．９９９４）、０．０２９９～
饮片购自安徽丰原铜陵中药饮片有限公司（批号
中国药理学通报
ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ２０１３Ｓｅｐ；２９（９）：１３１３～７
・ｌ３１３・
网络出版时间：２０１３—８—１４１８：１１网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０１３０８１４．１８１１．０３１．ｈｔｍｌ
ＳＤ大鼠６只，按５ｍｇ・ｇ。。剂量ｉｇ给
精、遗尿尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热消渴、心悸失眠等症 ¨ Ｊ。文献报道，五味
子的主要有效成分有木脂素、多糖和挥发油等Ｊ，且木脂素类成分与其抗肝脏损伤、抗肿瘤作用明显相关 ’ ，但对五味子中木脂素类成分的药动学研究多集中在五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素

LC—MS／MS法测定大鼠血浆中阿霉素的药物浓度及应用

LC—MS／MS法测定大鼠血浆中阿霉素的药物浓度及应用目的建立液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定大鼠血浆中阿霉素的血药浓度，并用于阿霉素载药纳米粒的体内药动学研究。

方法色谱柱采用Shim-pack XR-ODS柱（2.0 mm×100 mm，2.2 μm），仪器采用API 4000三重四极杆串联质谱仪，采用多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）定量离子对为m/z544.2→m/z396.9（阿霉素）和m/z357.3→m/z133.8（吡格列酮，内标）；甲醇沉淀蛋白法处理样品。

结果阿霉素在2.0～2000 μg/L范围内线性关系良好，定量下限为2.0 μg/L，血浆中的内源性物质不干扰阿霉素的测定；日内和日间精密度RSD均小于±15.0%；阿霉素低、中、高3个QC浓度的提取回收率分别为（92.1±5.9）%、（82.8±2.9）%和（80.1±9.7）%，基质效应分别为（91.1±2.4）%、（82.1±1.7）%和（81.2±2.5）%。

结论该方法适用于阿霉素纳米粒在大鼠体内的药物动力学研究。

标签：液相色谱-串联质谱；阿霉素；药动学研究；含量测定阿霉素主要通过嵌入DNA而抑制核酸的合成，产生细胞毒性作用，属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用[1]。

由于心脏毒性较大，在实体瘤内部渗透性差，临床应用受到极大的限制[2-3]。

由于纳米给药系统具有靶向性、缓释性、降低药物毒性和提高药物稳定性等特点，阿霉素的纳米靶向传递是当前研究的热点[4-5]。

由于纳米制剂给药量小，需要建立灵敏、高效的体内药物浓度测定方法进行药动学研究。

目前，阿霉素的体内测定方法主要有HPLC-UV[6]、荧光光度法[7-8]、HPLC-FLU[9-12]和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）[13-15]等方法，以荧光检测方法为主，液相-质谱联用法报道较少。

LC_MS_MS法测定人血清中石杉碱甲的浓度及应用

1016　[作者简介]　霍强,男,硕士,讲师,主要从事药物合成工艺和药动学研究。

联系电话:(0552)3175232,E 2mail:huoqiang3@s ohu .com 。

[通讯作者]　蒋志文,男,博士,教授,主要从事生化药理和药动学研究。

联系电话:(0552)3175228,E 2mail:zz wwjj51@yahoo 。

・临床研究・LC 2M S /M S 法测定人血清中石杉碱甲的浓度及应用霍　强1,李见春1,高　署2,蒋志文1(1蚌埠医学院药学系,安徽蚌埠233030;2合肥合源医药科技有限公司,合肥230088) [摘要]　目的:建立人血清中石杉碱甲浓度的高效液相色谱2质谱(LC 2MS/MS )测定方法,研究石杉碱甲在健康人体内的药动学行为,评价2种制剂的生物等效性。

方法:乙酸乙酯提取,LC 2MS/MS 内标法分析,检测离子为m /z 243.2→210.9,m /z 229.9→212.9。

20例健康志愿者交叉口服试验制剂或参比制剂石杉碱甲片剂200μg,血药浓度2时间数据经DAS 2.0统计软件处理,计算主要药动学参数,并对2种制剂进行等效性评价。

结果:石杉碱甲的线性范围为0.08～8ng ・mL -1,石杉碱甲片试验制剂与参比制剂的主要药动学参数分别是:C max 为(2.596±0.914)和(2.675±0.848)ng ・mL -1,T max 为(1.125±0.329)和(1.113±0.358)h,AUC 0～72h 为(31.275±6.889)和(30.476±7.051)ng ・h ・mL -1。

结论:该方法操作简单、灵敏度高、专属性强;统计学分析结果显示2种制剂具有生物等效性。

[关键词]　石杉碱甲;液质联用法;生物等效性[中图分类号]R969.11;R978.11　[文献标识码]A [文章编号]1003-3734(2009)11-1016-05D eterm i n a ti on of huperz i n e A i n hu man seru m by LC 2M S /M S andits appli ca ti on to rel a ti ve b i oava il ab ilityHUO Q iang 1,L I J ian 2chun 1,G AO Shu 2,J I A NG Zhi 2wen1(1D epa rt m ent of Phar m acy,B engbu M ed ical College,B engbu 233030,China;2Hefei Con 2source M edicine Technology Corp,Hefei 230088,China )[Abstract]　O bjecti ve:T o devel op a LC /MS/MS method f or deter m ining the concentrati on of huperzine A in human seru m and t o investigate the phar macokinetics and bi oequivalence of t w o tablets in Chinese healthy volun 2teers .M ethods:LC /MS/MS was used t o deter m ine the concentrati on in the selected 2reacti on monit oring model af 2ter the sa mp les were extracted with ethyl acetate .Target i ons were at m /z 243.2→210.9f or huperzine A and m /z 229.9→212.9for the internal standard .T wenty volunteers were random ly divided int o t w o gr oup s (test and refer 2ence )in a double cr oss 2over design .Phar macokinetic para meters were calculated with DAS 2.0p r ogra m.Results:The calibrati on curve was linear over the range of 0.08～8ng ・mL -1.The main phar macokinetic para meters of hu 2perzine tablets were as foll ows:C max (2.596±0.914)and (2.675±0.848)ng ・mL -1,T max (1.125±0.329)and (1.113±0.358)h,AUC 0～72h (31.275±6.889)and (30.476±7.051)ng ・h ・mL -1.Conclusi on:The methodwas convenient,sensitive and s pecific .The statistical analysis showed that the test and reference p reparati on were bi oequivalent .[Key words]　huperzine;LC 2MS/MS;bi oequivalence 石杉碱甲(huperzine A ),化学名为(5R,9R,11E )52氨基2112乙叉基25,6,9,102四氢272甲基25,92甲撑环辛并(6)吡啶22(1H )酮,是从中国石杉科石杉属蛇足杉(俗称千层塔)中分离得到的一种天然1017 新型石松类生物碱有效单体,是强效可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂,原用于治疗重症肌无力,现主要用于治疗良性记忆障碍及老年性痴呆[1]。

海藻玉壶汤加减甘草海藻反药药对不同组方中11种活性成分在正常大鼠体内的药动学比较研究

海藻玉壶汤加减甘草海藻反药药对不同组方中11种活性成分在正常大鼠体内的药动学比较研究[摘要] 海藻玉壶汤是含有甘草海藻反药药对的古代名方之一，用于治疗各种甲状腺疾病，其临床应用较为广泛。

该文采用UPLCTQMS对大鼠灌胃给药不同组方海藻玉壶汤中血中11种生物活性成分进行测定，同时比较不同组方之间11种活性成分药动学差异，探讨了海藻玉壶汤与甘草海藻反药药对的相互影响。

首次建立了甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、贝母素甲、贝母素乙、甘草酸、甘草素、佛手柑内酯、川陈皮素、蛇床子素与甘草次酸同时测定的UPLCMS/MS含量测定方法。

结果发现，海藻可提高甘草酸的峰浓度，海藻玉壶汤中其他组分可能促进甘草中黄酮类成分在正常大鼠体内的吸收，却抑制了皂苷类成分的吸收，加快甘草中某些皂苷类成分的代谢；甘草与海藻反药药对可提高橙皮苷、佛手柑内酯、川陈皮素、蛇床子素与贝母素甲的生物利用度，减慢柚皮苷与贝母素甲的消除。

[关键词] 海藻玉壶汤；甘草海藻反药药对；UPLCMS/MS；多成分；药动学影响海藻玉壶汤（HYD）首载于明朝陈实功所著《外科正宗》，有化痰软坚、理气散结、滋阴泻火的功效，主要用来治疗“瘿瘤初起，或肿或硬，或赤或不赤，但未破者”。

现代研究表明，海藻玉壶汤可以调节桥本氏甲状腺炎模型大鼠与丙硫氧嘧啶造成甲状腺功能减退大鼠血浆中T3，T4水平，可能发挥免疫调节的作用[12]。

方中含有甘草海藻，为十八反配伍禁忌范畴，自古以来对于十八反反药能否联合使用仍然存在较大争议。

本研究采用UPLCTQMS对大鼠灌胃海藻玉壶汤全方、海藻玉壶汤减甘草方、海藻玉壶汤减海藻方、海藻玉壶汤减海藻甘草方、海藻甘草配伍方和甘草单味药后的分时血浆中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、贝母素甲、贝母素乙、甘草酸、甘草素、佛手柑内酯、川陈皮素、蛇床子素与甘草次酸进行测定，比较不同组方各物质之间药动学差异，阐明海藻玉壶汤组方与海藻甘草反药药对药动学行为的相互影响。

1材料ACQUITYTM UPLC超高效液相色谱系统（美国Waters公司）；XevoTM TQ质谱系统和Masslynx 4.1质谱工作站软件；LABCONCO Centri Vap离心浓缩仪（美国LABCONCO公司）；ML204，MS105分析天平（梅特勒托尼多仪器有限公司）；EPED 超纯水机（南京易普易达科技发展有限公司）；WH1微型涡旋混合仪（上海沪西分析仪器厂）。

LC_MS_MS测定人血浆中石杉碱甲的浓度及相对生物利用度

作者简介：李芸霞，女，博士研究生研究方向：药动学与生物药剂学 *通讯作者：蒋学华，教授，博士生导师研究方向：药动学与生物药剂学，临床药学教育 Tel ：（028）85501370 Fax ：（028）85503024 E-mail ：jxh1013@ 表2 单次及多次给药后的主要药动学参数. n =10，±x s Tab.2 Main pharmacokinetic parameters of 10 volunteers after single dose and multiple doses of intravenous infusion caderofloxacin hydrochloride and glucose injections. n =10，±x sParametersSingle doseMultiple dosesα/h -1 8.33±13.66 17.18±19.02 β/h -10.27±0.42 0.15±0.03t 1/2α/h 0.19±0.13 0.11±0.09 t 1/2β/h 5.3±1.34 4.95±0.98 MRT 0-24/h 6.8±0.82 7.39±1.05 MRT 0-∞/h 9.73±1.98 10.64±2.18 Vd/L 8.94±2.34 9.42±2.1 CL /L·h -1 1.82±1.51 1.37±0.42 ρmax /mg·L -1 7.33±1.67 7.91±1.85 AUC 0-24/mg·h·L -1 41.24±8.11 44.07±10.72 AUC 0-∞/mg·h·L -143.04±8.39 44.39±10.85经t 检验有显著性差异(P <0.05)。

LC—MS／MS同时测定大鼠血浆中瑞香素、西瑞香素和瑞香新素及其药代

LC—MS／MS同时测定大鼠血浆中瑞香素、西瑞香素和瑞香新素及其药代动力学研究建立同時测定大鼠灌胃祖师麻提取物后血浆中瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的HPLC-MS/MS分析方法，并用于计算3个成分在大鼠体内的药代动力学参数。

试验采用6只SD大鼠，口服给予祖师麻提取物（瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的给药量分别是88.40，3.24，4.28 mg·kg-1），以五味子醇甲为内标，用LC-MS/MS测定给药后血浆中药物浓度，绘制血药浓度-时间曲线，并用Kinetica 4.4软件计算相关药代动力学参数。

试验结果显示，瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的线性范围均为5～1 000 μg·L-1，方法学考察符合要求。

日内、日间变异系数（RSD）均小于15%，精密度和准确度符合生物样品分析要求。

瑞香素、西瑞香素和瑞香新素口服给药后的Tmax分别为4，2.92，2 h；Cmax分别为858.96，178.00，36.67 μg·L-1；AUC0-t分别为10 566.4，905.89，355.11 μg·L-1·h；半衰期t1/2分别为5.19，3.50，4.95 h；平均驻留时间MRT分别为9.43，6.95，8.27 h。

因此，该研究建立的LC-MS/MS分析方法准确灵敏，适于对SD大鼠口服祖师麻提取物后的瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的药代动力学研究。

标签：LC-MS/MS；祖师麻；瑞香素；西瑞香素；瑞香新素；药代动力学[Abstract] To establish HPLC-MS/MS method for simultaneous determination of daphnetin，daphnoretin，and daphneticin in rat plasma after oral and intravenous administration of Daphne giraldii extract，and then use them in the calculation of pharmacokinetic parameters. Six sprague-dawley rats received intragastric administration of D. giraldii extract （daphnetin，daphnoretin and daphneticin were 88.40，3.24 and 4.28 mg·kg，respectively）. Their drug plasma concentration was determined by LC-MS/MS with schisandrin as an internal standard to draw plasma concentration-time curve. The pharmacokinetic parameters were calculated by Kinetica 4.4. The results showed that the linear range was 5-1 000 μg·L-1 for daphnetin，daphnoretin and daphneticin，and the method ological test showed conformance to the requirements.The intraday and inter-day variable coefficients （RSD）were both less than 15.0%，indicating that both of legitimate precise and accuracy were consistent with the analysis requirements of biological samples. For daphnetin，the pharmacokinetic parameters Tmax，Cmax，AUC0–t，T1/2 and MRT were 4 h，858.96 μg·L-1，10 566.4 μg·L-1·h， 5.19 h and 9.43 h，respectively. For daphnoretin，the pharmacokinetic parameters Tmax，Cmax，AUC0–t，T1/2 and MRT were 2.92 h，178.00 μg·L-1，905.89 μg·L-1·h，3.50 h and 6.95 h，respectively. For daphneticin，the pharmacokinetic parameters Tmax，Cmax，AUC0–t，T1/2 and MRT were 2 h，36.67 μg·L-1，355.11 μg·L-1·h，4.95 h and 8.27 h，respectively. The LC-MS/MS analysis method established in this study was proved to be so accurate and sensitive that it can be applied to the pharmacokinetic study of daphnetin，daphnoretin and daphneticin.[Key words] LC-MS/MS；Daphne giraldii；daphnetin；daphnoretin；daphneticin；pharmacokinetic祖师麻为我国民间传统常用中药，长久以来一直用于治疗风寒湿邪侵袭而致的风湿性关节炎、类风湿性关节炎引起的疼痛等相关症状，并取得了良好的效果。

UPLC—MS／MS同时测定大鼠血浆中美沙酮、文拉法辛及其代谢物浓度与药动学研究

UPLC—MS／MS同时测定大鼠血浆中美沙酮、文拉法辛及其代谢物浓度与药动学研究目的：建立测定大鼠血浆中美沙酮和文拉法辛及其代谢产物浓度的方法并用于其药动学研究。

方法：大鼠血浆样品经乙腈沉淀蛋白后，以地西泮为内标，采用超高效液相色谱-串联质谱法测定。

色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18，流动相为乙腈-0.1%甲酸（梯度洗脱），流速为0.4 mL/min，柱温为40 ℃，进样量为2 μL。

采用电喷雾电离源，以多反应监测方式进行正离子扫描，用于定量分析的离子对分别为m/z 310.4→265.4（美沙酮）、m/z 278.2→234.1[2-亚乙基-1，5-二甲基-3，3-二苯基吡咯烷（EDDP）]、m/z 278.1→57.8（文拉法辛）、m/z 263.9→57.9（O-去甲文拉法辛）、m/z 285.1→193.1（内标）。

取8只SD大鼠分别灌胃盐酸美沙酮6 mg/kg、盐酸文拉法辛10 mg/kg（每个药物各4只大鼠），分别于给药前及给药后0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24 h经尾静脉取血0.3 mL进样测定，采用DAS 3.0软件计算药动学参数。

结果：美沙酮、EDDP、文拉法辛和O-去甲文拉法辛的质量浓度线性范围分别为0.5～250 ng/mL（r=0.999 7）、0.5～250 ng/mL（r=0.999 2）、0.4～200 ng/mL （r=0.999 9）、0.4～200 ng/mL（r=0.999 9），定量下限分别为0.5、0.5、0.4、0.4 ng/mL；日内、日间RSD均小于9.0%（n=6）；方法回收率分别为94.20%～102.87%、90.93%～102.94%、92.95%～101.61%、90.33%～101.97%（RSD均≤5.5%，n=6）；提取回收率分别为85.90%～94.45%、85.97%～91.66%、87.97%～93.58%、88.53～94.54%（RSD均≤5.9%，n=6）；基质效应分别为95.96%～97.78%、92.33%～97.40%、95.28%～97.71%、95.33%～95.74%（RSD均≤4.9%，n=3）；t1/2分别为（1.42±1.02）、（2.59±0.76）、（0.63±0.08）、（1.29±0.14）h；cmax分别为（52.21±5.42）、（25.68±3.45）、（52.64±2.29）、（47.63±13.09）?g/L；MRT0-24 h 分别为（3.55±0.21）、（3.98±0.41）、（1.44±0.21）、（2.01±0.17）h；AUC0-24 h 分别为（201.95±51.14）、（86.09±15.95）、（75.38±23.95）、（82.90±23.44）?g·h/L。

浊点萃取结合UPLC—MS／MS法测定气道炎症模型豚鼠灌胃射干提取物后血浆中LTB4的浓度

浊点萃取结合UPLC—MS／MS法测定气道炎症模型豚鼠灌胃射干提取物后血浆中LTB4的浓度目的：建立測定气道炎症豚鼠血浆中白三烯B4（LTB4）浓度的方法，考察给予射干提取物后其对豚鼠血浆中LTB4浓度的影响，为阐明射干提取物抗炎止咳的作用机制提供参考。

方法：将30只豚鼠随机分为空白组、模型组和射干提取物组，每组10只。

除空白组外，其余2组豚鼠采用烟熏+合胞病毒滴鼻法制造气道炎症模型。

造模结束后次日，射干提取物组豚鼠灌胃给药（10 mg/kg射干提取物，以野鸢尾黄素计），空白组和模型组豚鼠灌胃等体积生理盐水，每天给药1次，连续给药7 d，末次给药后收集血浆样品。

分别考察表面活性剂Triton X-114浓度、盐酸浓度、盐酸加入量、平衡温度和平衡时间对LTB4提取回收率的影响（以44.5 g/L的牛血清白蛋白生理盐水溶液替代空白血浆），确定最优浊点萃取工艺进行生物样品处理。

然后以吲哚美辛为内标，采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法测定血浆中LTB4浓度。

色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18，流动相为0.2%甲酸水-乙腈（40 ∶60，V/V），流速为0.4 mL/min，柱温为40 ℃，进样量为5 μL；MS条件：电喷雾离子源，正离子模式下扫描，LTB4用于定量的离子为[M+H]+质荷比（m/z）335.219 4→195.099 8，吲哚美辛为[M+H]+ m/z 356.083 6→312.084 2。

结果：浊点萃取最优条件为Triton X-114浓度5%，加入0.3 mol/L盐酸50 μL调至酸性、平衡温度50 ℃，平衡时间20 min。

在该含量测定条件下方法学验证结果均符合相关要求。

与空白组比较，模型组豚鼠血浆中LTB4浓度显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，射干提取物组豚鼠血浆中LTB4浓度显著降低（P＜0.05）。

结论：本研究中样品处理方法绿色环保，含量检测方法灵敏度高、准确性好，适用于血浆中LTB4浓度的测定；射干提取物可使气道炎症豚鼠血浆中升高的LTB4浓度得到显著回调。

LC－MS MS 法测定麻黄－桂枝药对中11 个

㊀基金项目:深圳市科技计划项目基础研究面上项目(Ｎｏ.ＪＣＹＪ２０２１０３２４１４０２０４０１１)ꎻ深圳市医疗卫生三名工程项目(Ｎｏ.ＳＺＺＹＳＭ２０２１１１００２)ꎻ深圳市坪山区卫生系统科研项目资助(Ｎｏ.２０１９６５)作者简介:卫平ꎬ女ꎬ博士研究生ꎬ副主任中药师ꎬ研究方向:药物分析及中药药代动力学研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｗｅｉｐｉｎｇ１２３８＠１２６.ｃｏｍ通信作者:李一圣ꎬ男ꎬ副主任中药师ꎬ研究方向:中药新药研究ꎬＴｅｌ:０７５５－２８９８９９９９ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｙｓ６０７＠ｓｏｈｕ.ｃｏｍＬＣ－ＭＳ/ＭＳ法测定麻黄－桂枝药对中１１个成分及其溶出影响的探讨卫平１ꎬ邓小玉１ꎬ黄蓓１ꎬ陈剑平２ꎬ李一圣３(１.深圳市坪山区妇幼保健院<南方医科大学坪山总医院>ꎬ广东深圳５１８１１８ꎻ２.深圳市中医院ꎬ深圳市医院中药制剂研究重点实验室ꎬ广州中医药大学第四临床医学院ꎬ广东深圳５１８０３３ꎻ３.深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院<深圳市耳鼻咽喉研究所>ꎬ广东深圳５１８１７２)摘要:目的㊀建立麻黄－桂枝药对中原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸㊁桂皮醛㊁麻黄碱㊁伪麻黄碱和甲基麻黄碱１１个成分的液相色谱－串联质谱(ＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)含量测定方法ꎬ并探讨单煎共煎对１１个成分溶出的影响ꎮ方法㊀分别以麻黄桂枝共煎液㊁单煎液㊁单煎合并液为样品ꎬ采用液相色谱－串联质谱法测定８个苯丙素类成分和３个麻黄类生物碱的含量ꎮ结果㊀１１个成分在各自范围内均呈良好的线性关系(ｒȡ０.９９４８)ꎻ平均加样回收率为９８.３０％~１００.９２％ꎬＲＳＤɤ５.８５％(ｎ＝９)ꎻ精密度㊁重复性和稳定性均良好ꎬ符合方法学考察要求ꎮ麻黄与桂枝共煎时ꎬ８个苯丙素类成分煎出量均有不同程度的降低ꎬ而３个麻黄类生物碱均有不同程度升高ꎮ结论㊀该方法简便快速㊁准确可靠ꎬ可用于１１个成分的含量测定ꎬ共煎对麻黄桂枝各自成分的溶出均具有一定的影响ꎮ关键词:麻黄－桂枝药对ꎻ苯丙素类成分ꎻ麻黄类生物碱ꎻ液相色谱－串联质谱ꎻ共煎ꎻ单煎中图分类号:Ｒ９２７.２㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２２)１２－０７９１－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２２.１２.００５ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｌｅｖｅｎａｎａｌｙｔｅｓａｎｄｉｔｓｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｓｉｎｄｒｕｇｐａｉｒｏｆＥｐｈｅｄｒａｅＨｅｒｂａａｎｄＣｉｎｎａｍｏｍｉＲａｍｕｌｕｓｂｙＬＣ－ＭＳ/ＭＳＷＥＩＰｉｎｇ１ꎬＤＥＮＧＸｉａｏｙｕ１ꎬＨＵＡＮＧＢｅｉ１ꎬＣＨＥＮＪｉａｎｐｉｎｇ２ꎬＬＩＹｉｓｈｅｎｇ３(１.ＰｉｎｇｓｈａｎＤｉｓｔｒｉｃｔＭａｔｅｒｎａｌ＆ＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈｃａｒｅＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈｅｎｚｈｅｎꎬＰｉｎｇｓｈａｎＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｈｅｎｚｈｅｎ５１８１１８ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｈｅｎｚｈｅｎＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＨｏｓｐｉｔａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎꎬＴｈｅＦｏｕｒｔｈＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈｅｎｚｈｅｎＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＨｏｓｐｉｔａｌꎬＳｈｅｎｚｈｅｎ５１８０３３ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＬｏｎｇｇａｎｇＥ.Ｎ.ＴＨｏｓｐｉｔａｌ＆ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥ.Ｎ.ＴＳｈｅｎｚｈｅｎꎬＳｈｅｎｚｈｅｎ５１８１７２ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＬＣ－ＭＳ/ＭＳｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃａｃｉｄꎬｃａｔｅｃｈｉｎꎬｅｐｉｃａｔｅ￣ｃｈｉｎꎬｅｕｇｅｎｏｌꎬｃｏｕｍａｒｉｎꎬｃｉｎｎａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌꎬｃｉｎｎａｍｉｃａｃｉｄꎬｃｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅꎬｅｐｈｅｄｒｉｎｅꎬｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄｒｉｎｅａｎｄｍｅｔｈｙｌｅｐｈｅｄｒｉｎｅｉｎＥｐｈｅｄｒａｅ－Ｃｉｎｎａｍｏｍｉｈｅｒｂｐａｉｒꎬａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｎｇｌｅ－ｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄｃｏｍｂｉｎｅｄ－ｄｅｃｏｃｔｉｏｎｏｎｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｅ￣ｌｅｖｅｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｕｓｉｎｇｔｈｅｅｐｈｅｄｒａｅ－ｃｉｎｎａｍｏｍｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎꎬｃｉｎｎａｍｏｍｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎꎬｅｐｈｅｄｒａｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎꎬｅｐｈｅｄｒａｅａｎｄｃｉｎｎａｍｏｍｉｃｏｍｂｉｎｅｄｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｓｔｈｅｔｅｓｔｓａｍｐｌｅｓꎬｔｈｅｅｉｇｈｔｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｃｏｍｐｏｕｎｄｓａｎｄｔｈｒｅｅｅｐｈｅｄｒａａｌｋａｌｏｉｄｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＬＣ－ＭＳ/ＭＳ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅ１１ｉｎｄｉｃａｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｈａｄｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙ(ｒȡ０.９９４８).Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖ￣ｅｒｉｅｓｗｅｒｅ９８.３０％~１００.９２％ꎬＲＳＤɤ５.８５％(ｎ＝９).Ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎꎬｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙａｒｅａｌｌｇｏｏｄꎬｍｅｅｔｉｎｇｔｈｅｍｅｔｈｏｄ￣ｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ.ＷｈｅｎＥｐｈｅｄｒａａｎｄＣｉｎｎａｍｏｍｉｗｅｒｅｄｅｃｏｃｔｅｄｔｏｇｅｔｈｅｒꎬｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｅｉｇｈｔｋｉｎｄｓｏｆｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｓꎬｗｈｉｌｅｔｈｅａｌｋａｌｏｉｄｓｏｆｔｈｒｅｅｋｉｎｄｓｏｆｅｐｈｅｄｒａｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｓ.Ｃｏｎｃｌｕ￣ｓｉｏｎ㊀Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅꎬｒａｐｉｄꎬａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅꎬｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｌｅｖｅｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ.Ｔｈｅｃｏ－ｄｅｃｏｃｔｉｏｎｈａｄａｃｅｒｔａｉｎｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＥｐｈｅｄｒａａｎｄＣｉｎｎａｍｏｍｉ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＥｐｈｅｄｒａｅＨｅｒｂａ－ＣｉｎｎａｍｏｍｉＲａｍｕｌｕｓＨｅｒｂＰａｉｒꎻＰｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｃｏｍｐｏｕｎｄｓꎻＥｐｈｅｄｒａａｌｋａｌｏｉｄｓꎻＬＣ－ＭＳ/ＭＳꎻＣｏ－ｄｅｃｏｃｔｉｏｎꎻＳｉｎｇｌｅ－ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ㊀㊀麻黄为麻黄科植物草麻黄(ＥｐｈｅｄｒａｓｉｎｉｃａＳｔａｐｆ)㊁中麻黄(ＥｐｈｅｄｒａｉｎｔｅｒｍｅｄｉａＳｃｈｒｅｎｋｅｔＣ.Ａ.Ｍｅｙ.)或木贼麻黄(ＥｐｈｅｄｒａｅｑｕｉｓｅｔｉｎａＢｇｅ.)的干燥草质茎ꎬ具有发汗散寒㊁宣肺平喘㊁利水消肿的功效[１]ꎮ桂枝为樟科植物肉桂(ＣｉｎｎａｍｏｍｕｍｃａｓｓｉａＰｒｅｓｌ.)的干燥嫩枝ꎬ具有散寒解表㊁温通经脉㊁促阳化气之功[１]ꎮ麻黄－桂枝药对出自«伤寒论»ꎬ在麻黄汤㊁大青龙汤等诸多经典方剂中常作为君药㊁臣药应用ꎮ现代研究表明[２－５]ꎬ麻黄中生物碱类㊁苯丙素类等成分对感冒㊁咳嗽㊁心血管和免疫系统疾病等具有治疗作用ꎻ桂枝中苯丙素类具有解热镇痛㊁抗菌㊁抗炎㊁抗病毒㊁抗肿瘤㊁抗血小板聚集等作用ꎮ桂枝与麻黄配伍后ꎬ解热镇痛㊁抗炎作用增强ꎬ不仅如此ꎬ桂枝㊁麻黄配伍后能提高生物利用度ꎬ桂枝能拮抗麻黄引起的兴奋性中枢神经毒性ꎬ降低了麻黄生物碱的蓄积ꎬ起到减毒的作用[６－８]ꎮ药对是中药配伍应用的重要模式ꎬ常作为药物组成方剂的核心ꎬ具备复方的基本功能主治和疗效[９]ꎮ中药配伍使用后产生助溶㊁沉淀㊁化学反应等现象ꎬ以及煎煮等因素的影响ꎬ有效成分溶出率发生变化ꎬ对临床疗效也可产生影响[１０－１１]ꎮ近年来ꎬ关于中药配方颗粒(以单味中药饮片为原料精制而成) 单煎合同与传统汤剂群药合煎的物质基础一致性一直是大众比较关注的问题[１２－１３]ꎮ本试验建立液相色谱－串联质谱(ＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)法测定８个苯丙素类成分(原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸㊁桂皮醛)和３个麻黄类生物碱(麻黄碱㊁伪麻黄碱㊁甲基麻黄碱)的含量ꎬ考察麻黄桂枝共煎㊁单煎及单煎合并液中１１个成分的变化ꎬ以期探索共煎及单煎合并对其主要成分的溶出影响ꎬ为该药对的配伍物质基础及临床应用研究提供试验数据ꎮ１㊀材料１.１㊀仪器㊀岛津ＬＣ－ＭＳ８０４５型液质联用仪(岛津公司ꎬ配备ＤＧＵ－２０Ａ３Ｒ在线脱气机ꎬＬＣ－２０ＡＤＸＲ梯度泵㊁ＳＩＬ－２０ＡＸＲ自动进样器ꎬＣＴＯ－２０Ａ柱温箱ꎬＬＣＭＳ－８０４５检测器ꎬＣＢＭ－２０Ａ系统控制器ꎬＦＣＶ－２０ＡＨ２高压切换阀ꎬＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓ色谱工作站)ꎻＥＰ２２５ＳＭ－ＤＲ型十万分之一分析天平(瑞士普利塞斯公司)ꎻＡ３Ｓ－１０－１０－ＣＥ型超纯水机(美国艾科浦公司)ꎻＬＤ５－２Ａ型离心机(北京京立离心机有限公司)ꎻＫＱ５２００ＤＥ数控超声波清洗器(昆山市超室仪器有限公司)ꎻ手动移液器(Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司)ꎮ１.２㊀药物与试剂㊀麻黄饮片(康美药业股份有限公司ꎬ批号:２０１００００５１)ꎻ桂枝饮片(中山市正德香中药饮片有限公司ꎬ批号:２０２０１１０６８)ꎬ经深圳市医院中药制剂研究重点实验室陈剑平副主任中药师鉴定ꎬ分别为麻黄科草本状小灌木草麻黄(ＥｐｈｅｄｒａｓｉｎｉｃａＳｔａｐｆ.)的草质茎和樟科植物肉桂(ＣｉｎｎａｍｏｍｕｍｃａｓｓｉａＰｒｅｓｌ.)的干燥嫩枝ꎬ符合«中国药典»２０２０年版(一部)项下规定ꎻ其中麻黄产自内蒙古ꎬ桂枝产自广东ꎮ肉桂酸(批号:１１０７８６－２０１６０４ꎬ９８.８％)㊁桂皮醛(批号:１１０７１０－２０２０２２ꎬ９９.５％)㊁儿茶素(批号:１１０８７７－２０１６４ꎬ９９.２％)㊁表儿茶素(批号:１１０８７８－２０１７０３ꎬ９９.７％)㊁原儿茶酸(批号:１１０８０９－２０１９０６ꎬ９７.７％)㊁盐酸麻黄碱(批号:１７１２４１－２０１８０９ꎬ１００.０％)㊁盐酸伪麻黄碱(批号:１７１２３７－２０１５１０ꎬ９９.８％)和盐酸甲基麻黄碱(批号:１７１２４７－２０１５０２ꎬ９９.６％)购自中国食品药品检定研究院ꎻ肉桂醇(批号:ｗｋｑ２１０３０５０３ꎬＨＰＬＣȡ９８％)和香豆素(批号:ｗｋｑ２１０３０２０７ꎬＨＰＬＣȡ９８％)购自四川省维克奇生物科技有限公司ꎻ丁香醛(广州市齐云生物科技有限公司ꎬ批号:２００９１０ꎬＨＰＬＣȡ９８％)ꎻ乙腈和甲醇(质谱级ꎬＭｅｒｃｋ公司)ꎻ甲酸(质谱级ꎬ赛默飞公司)ꎻ超纯水(由Ｍｉｌｌｉ－Ｑ超纯水系统制得)ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀溶液的制备２.１.１㊀对照品溶液制备㊀苯丙素类成分:精密称取原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸㊁桂皮醛对照品适量ꎬ加入乙腈超声溶解ꎬ制成质量浓度分别为０.７８６５㊁１.３１９４㊁１.５３２１㊁０.６２５３㊁１.３９５０㊁１.７４６３㊁０.８９４１㊁５.３９２８ｍｇｍＬ－１的单一对照品储备液ꎬ备用ꎮ分别精密量取上述对照品溶液适量ꎬ置同一容量瓶中ꎬ加入乙腈至刻度ꎬ即得原儿茶酸(０.７０７４μｇｍＬ－１)㊁儿茶素(１８.４７１６μｇｍＬ－１)㊁表儿茶素(１５.３２１０μｇｍＬ－１)㊁丁香醛(０.３１３０μｇｍＬ－１)㊁香豆素(３.９０６０μｇｍＬ－１)㊁肉桂醇(８.７３２０μｇｍＬ－１)㊁肉桂酸(１４.３０５６μｇｍＬ－１)㊁桂皮醛(６４.７１３６μｇｍＬ－１)的混合对照品溶液ꎮ麻黄生物碱类:精密称取盐酸麻黄碱㊁盐酸伪麻黄碱㊁盐酸甲基麻黄碱对照品适量ꎬ加入甲醇超声溶解ꎬ制成质量浓度分别为２.０７５０㊁１.３７９７㊁１.６８３２ｍｇｍＬ－１的单一对照品储备液ꎬ备用ꎮ分别精密量取上述对照品溶液适量ꎬ置同一容量瓶中ꎬ加入甲醇至刻度ꎬ即得麻黄碱(１７.９２８０μｇｍＬ－１)㊁伪麻黄碱(８.８２８８μｇｍＬ－１)㊁甲基麻黄碱(２.１５５５μｇｍＬ－１)的混合对照品溶液ꎮ２.１.２㊀供试品溶液制备㊀麻黄－桂枝共煎液称取麻黄９０ｇꎬ加水２４００ｍＬꎬ浸泡３０ｍｉｎꎬ先煎煮２０ｍｉｎꎬ放入桂枝６０ｇꎬ继续煎煮３０ｍｉｎꎬ保持微沸ꎬ过滤ꎬ放冷ꎬ定容至２０００ｍＬꎬ即得ꎮ麻黄单煎液:称取麻黄９０ｇꎬ加水２４００ｍＬꎬ浸泡３０ｍｉｎꎬ煎煮５０ｍｉｎꎬ保持微沸ꎬ过滤ꎬ放冷ꎬ定容至２０００ｍＬꎬ即得ꎮ桂枝单煎液:量取水２４００ｍＬꎬ煮沸ꎬ放入桂枝６０ｇꎬ继续煎煮３０ｍｉｎꎬ保持微沸ꎬ过滤ꎬ放冷ꎬ定容至２０００ｍＬꎬ即得ꎮ单煎合并液:分别量取麻黄㊁桂枝单煎液各１０００ｍＬꎬ混匀ꎬ即得ꎮ供试品溶液:精密量取各煎液１ｍＬꎬ置于２ｍＬ容量瓶中ꎬ加入甲醇至刻度线ꎬ摇匀ꎬ０.２２μｍ微孔滤膜滤过ꎬ即得以上各供试品溶液ꎮ２.２㊀色谱条件２.２.１㊀苯丙素类成分㊀色谱柱:ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢＣ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ３μｍ)ꎻ流动相:乙腈(Ａ)－０.０１％甲酸水溶液(Ｂ)ꎬ０~２０ｍｉｎꎬ５％ң５５％(Ａ)ꎻ流速:１.０ｍＬｍｉｎ－１ꎬ分流比为０.４ꎻ柱温:３０ħꎻ进样量:２μＬꎮ２.２.２㊀麻黄类生物碱㊀色谱柱:ＷａｔｅｒｓＸｓｅｌｅｃｔＨＳＳＴ３柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎻ流动相:乙腈(Ａ)－０.１％甲酸(Ｂ)ꎬ０~２０ｍｉｎꎬ３％ң８％(Ａ)ꎻ２０~２５ｍｉｎꎬ８％ң２０％(Ａ)ꎻ流速:１.０ｍＬｍｉｎ－１ꎬ分流比为０.４ꎻ柱温:３５ħꎻ进样量:２μＬꎮ２.３㊀质谱条件㊀电喷雾离子源(ＥＳＩ)ꎬ多反应监测(ＭＲＭ)模式ꎬ正负离子(苯丙素类生物碱)㊁正离子(麻黄生物碱类)ꎬ雾化气流量为３.０Ｌｍｉｎ－１ꎬ干燥气流量为１０.０Ｌｍｉｎ－１ꎬ加热气流量为１０.０Ｌｍｉｎ－１ꎬ检测器电压为１.８８ｋＶꎬ检测离子及主要参数见表１ꎮ２.４㊀方法学考察２.４.１㊀专属性试验㊀分别精密吸取２.１项下混合对照品溶液ꎬ供试品溶液各２μＬꎬ按２.２和２.３项下色谱及质谱条件进样测定ꎬ记录色谱图ꎮ结果ꎬ各待测成分色谱峰峰形良好且实现基线分离ꎮ２.４.２㊀线性关系考察㊀取２.１.１项下各单一对照品储备液ꎬ用甲醇(麻黄生物碱类)或乙腈(苯丙素类)稀释配制为梯度浓度的混合溶液ꎬ按照２.２和２.３项下条件进行测定ꎬ以质量浓度(ＸꎬμｇｍＬ－１)为横坐标ꎬ峰面积(Ｙ)为纵坐标ꎬ分别绘制标准曲线ꎬ得回归方程ꎬ结果见表２ꎮ２.４.３㊀精密度试验㊀取２.１.２项下的供试品溶液ꎬ按２.２和２.３项下条件进样测定ꎬ记录峰面积并计算ＲＳＤꎮ结果ꎬ原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸㊁桂皮醛㊁麻黄碱㊁伪麻黄碱㊁甲基麻黄碱的ＲＳＤ(ｎ＝６)分别为２.２４％㊁３.１５％㊁２.５０％㊁３.２７％㊁１.６８％㊁２.４２％㊁２.２１％㊁１.５０％㊁２.５１％㊁２.６４％㊁０.８０％ꎬ均小于５.０％ꎬ表明本方法的精密度良好ꎮ表１　各成分质谱检测参数序号成分ｔ/ｍｉｎ母离子(ｍ/ｚ)子离子(ｍ/ｚ)加和方式碰撞能量/ｅＶ１原儿茶酸４.０３１５３.１０１０９.１５Ｍ－Ｈ１８２儿茶素５.５６２９０.９０１６５.１０Ｍ＋Ｈ－１２３表儿茶素６.６３２９０.９０１６５.１０Ｍ＋Ｈ－１２４丁香醛８.５０１８２.９５１５５.１５Ｍ＋Ｈ－１０５香豆素１１.７３１４７.２０９１.１５Ｍ＋Ｈ－２４６肉桂醇１２.６４１１７.３０９１.００Ｍ＋Ｈ－Ｈ２Ｏ－２６７肉桂酸１３.４８１４７.１５１０３.１０Ｍ－Ｈ１６８桂皮醛１４.９６１３３.１５１１５.１０Ｍ＋Ｈ－１５９麻黄碱１７.８６１６６.３０１４８.２０Ｍ＋Ｈ－１４１０伪麻黄碱１８.８９１６６.３０１４８.２０Ｍ＋Ｈ－１４１１甲基麻黄碱２０.４３１８０.３０１６２.１０Ｍ＋Ｈ－１５２.４.４㊀稳定性试验㊀取２.１.２项下的供试品溶液ꎬ按２.２和２.３项下条件分别于０㊁４㊁８㊁１２㊁１６㊁２４ｈ进样测定ꎬ记录峰面积并计算ＲＳＤꎮ结果ꎬ原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸㊁桂皮醛㊁麻黄碱㊁伪麻黄碱㊁甲基麻黄碱的ＲＳＤ(ｎ＝５)分别为㊁６.７８％㊁４.６９％㊁６.２４％㊁３.３５％㊁３.１９％㊁５.７５％㊁１.６３％㊁４.２８％㊁３.３３％㊁２.９９％㊁４.６０％ꎬ均小于５.０％ꎬ表明供试品溶液在室温放置２４ｈ内稳定性良好ꎮ２.４.５㊀重复性试验㊀按２.１.２项下方法平行制备６份供试品溶液ꎬ并按２.２和２.３项下条件进样测定ꎬ测定含量并计算ＲＳＤꎮ结果ꎬ原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸㊁桂皮醛㊁麻黄碱㊁伪麻黄碱㊁甲基麻黄碱的平均含量分别为１.１２５１㊁３８.３７５５㊁２５.１３１１㊁０.７１１０㊁９.１１２０㊁１７.８７３８㊁２３.３２７１㊁１１１.０２５４㊁１６５.６１６０㊁７６.０８２５㊁１８.１６３０μｇｍＬ－１ꎬＲＳＤ(ｎ＝６)分别为３.８９％㊁３.５４％㊁２.７９％㊁４.６４％㊁１.４４％㊁１.９２％㊁１.６１％㊁１.８１％㊁０.８３％㊁１.３２％㊁１.４２％ꎬ均小于５.０％ꎬ表明本方法的重复性良好ꎮ２.４.６㊀加样回收试验㊀取９份已知含量的样品０.５ｍＬꎬ按质量比０.５ʒ１㊁１ʒ１㊁１.５ʒ１加入各对照品适量ꎬ平行３份ꎬ按２.１.２项下方法制得供试品溶液ꎬ并按２.２和２.３项下条件进样测定ꎬ计算加样回收率ꎮ结果ꎬ原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸㊁桂皮醛㊁麻黄碱㊁伪麻黄碱和甲基麻黄碱的加样回收率分别为９９.０３％㊁１００.３８％㊁９８.２７％㊁１００.９２％㊁１００.１２％㊁９６.７６％㊁９８.６０％㊁１０２.１８％㊁９９.５７％㊁１０１.７７％㊁１００.８６％ꎬＲＳＤ(ｎ＝９)分别为５.１９％㊁２.５５％㊁４.８１％㊁４.６５％㊁３.３８％㊁１.４０％㊁３.６５％㊁１.９７％㊁５.１９％㊁２.５５％㊁４.８１％ꎮ表２㊀１１个成分的标准曲线方程和线性范围成分回归方程ｒ线性范围/μｇｍＬ－１定量限/μｇｍＬ－１检测限/μｇｍＬ－１原儿茶酸Ｙ＝４３９１０６Ｘ－４９９６３.００.９９４９０.１１７９~１.８０７８０.０３０.０１儿茶素Ｙ＝１４０９４２Ｘ－３０７５９４０.９９６８２.６３８８~５２.７７６００.２００.０７表儿茶素Ｙ＝１９０３３４Ｘ－２５１９７００.９９８４３.０６４２~４５.９６３００.１３０.０４丁香醛Ｙ＝４８３１８０Ｘ－２４４７.１７０.９９９００.０６２６~０.９３９００.０６０.０２香豆素Ｙ＝１.０５７６４ˑ１０６Ｘ－８３１７６.６０.９９９９０.５５８０~１１.１６０００.０６０.０２肉桂醇Ｙ＝２９０２３０Ｘ＋１３６６３８０.９９９６１.７４６４~２２.７０３２０.１００.０３肉桂酸Ｙ＝４０７１９.４Ｘ－４８２５８.２０.９９８３１.７５００~４４.７０５００.３３０.１１桂皮醛Ｙ＝８６６６６.６Ｘ＋１３２８３１０.９９９８１０.７８５６~１９４.１４０８２.０４０.６７麻黄碱Ｙ＝２.２５８８３ˑ１０６Ｘ＋６.６６３５０ˑ１０６０.９９４８２.２４１０~２９.２５７５１.０７０.３５伪麻黄碱Ｙ＝２.７０４０９ˑ１０６Ｘ＋４.１８１３１ˑ１０６０.９９９０１.１０３６~１６.５５４００.０３０.０１甲基麻黄碱Ｙ＝２.２８２９１ˑ１０６Ｘ＋１５０４３３０.９９９１０.２６９４~４.０４１６０.０５０.０２２.５㊀含量测定㊀按２.１.２项下方法制得各批次供试品溶液(平行５份)ꎬ按２.２和２.３项下条件进样测定ꎮ记录峰面积根据标准曲线方程及定容体积折算等计算出麻黄－桂枝共煎液㊁麻黄单煎液㊁桂枝单煎液和单煎合并液中原儿茶酸㊁儿茶素㊁表儿茶素㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂酸㊁肉桂醇㊁肉桂醛㊁麻黄碱㊁伪麻黄碱和甲基麻黄碱的含量ꎬ结果见表３ꎮ表３㊀含量测定结果成分含量(μｇｍＬ－１ꎬｎ＝５)麻黄－桂枝共煎麻黄单煎桂枝单煎单煎合并原儿茶酸１.０４８９ʃ０.０３４５∗∗０.４９１２ʃ０.０１０７∗∗０.８８６６ʃ０.０３１８∗∗１.３２６９ʃ０.０５８２儿茶素３３.８２３１ʃ１.１１１８３２.０６２３ʃ０.８３６２１９.６０１５ʃ１.５１７９∗∗２４.５１９９ʃ０.６６２３∗∗表儿茶素２０.８０８５ʃ０.５７７６７.５４５６ʃ０.１４５１∗∗１８.９４２８ʃ１.２５２２∗∗２２.０２３８ʃ０.６５９８丁香醛０.６１８１ʃ０.０３７２∗∗０.２４０７ʃ０.００８６∗∗０.５２１７ʃ０.０３５０∗∗０.６９９９ʃ０.０２９０∗∗香豆素８.３６０４ʃ０.４０３１∗∗０.４３０４ʃ０.０２７０∗∗１１.１６３０ʃ０.６４３１１１.３７２５ʃ０.６１６６肉桂酸１７.５７８７ʃ０.６１５７∗∗９.７７５７ʃ０.０９１５∗∗１２.５３４５ʃ０.９０６５∗∗２１.９０８０ʃ１.２５７２肉桂醇１６.２８８０ʃ１.１７３４∗∗－１９.７４５２ʃ０.９６５９２２.４７９５ʃ５.４４９０桂皮醛１０５.４０７５ʃ７.８５２０∗∗－１６９.８０４０ʃ１２.２８３０１７１.７７７９ʃ２０.０５５５麻黄碱１９１.５２３７ʃ８.７４１２∗∗１６４.４６１７ʃ８.２６９２∗∗－１３８.２２７６ʃ４.３８９５∗∗伪麻黄碱７２.８９４５ʃ１.２５３９∗∗６３.７６１８ʃ３.０８７２∗∗－４２.９３７７ʃ１.９０６５∗∗甲基麻黄碱１９.３０９８ʃ０.５７０６∗∗１７.７９４９ʃ０.３７９９∗∗－１５.６７１２ʃ０.４２３０∗∗㊀注:各组间相比ꎬ∗∗Ｐ<０.０１㊀㊀由表３可知ꎬ与单煎合并液相比ꎬ麻黄与桂枝共煎后ꎬ原儿茶酸㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸和桂皮醛的含量均有不同程度的下降ꎬ降幅为１１.６９％~３８.６３％ꎻ另原儿茶酸㊁肉桂酸单煎合并后与各自单煎液测定结果的和无显著性差异ꎬ香豆素㊁肉桂醇和桂皮醛单煎合并后与各自单煎液测定结果的和以及桂枝单煎液无显著性差异ꎮ说明以上溶液在混合时ꎬ温度对以上成分的溶出存在一定的影响作用ꎮ与单煎合并液相比ꎬ麻黄与桂枝共煎后ꎬ儿茶素的含量有很大程度的增高ꎬ增幅为３７.９４％ꎬ而表儿茶素的含量则无明显的变化ꎮ不管是单煎合并还是共煎ꎬ丁香醛㊁儿茶素和表儿茶素的含量比麻黄桂枝各自单煎液测定值的和均有所下降ꎬ表明麻黄与桂枝合并使用均降低该３种成分的含量ꎮ与单煎合并液相比ꎬ麻黄与桂枝共煎后ꎬ麻黄碱㊁伪麻黄碱和甲基麻黄碱的含量均有不同程度的增高ꎬ增幅为１８.８４％~４１.１０％ꎮ３　讨论３.１㊀色谱条件的优化㊀本研究曾尝试同时测定苯丙素类和麻黄生物碱类成分ꎬ但由于麻黄碱类成分的检测条件为正离子扫描模式ꎬ在流动相为乙腈－０.１％甲酸水溶液时ꎬ各色谱峰的分离度㊁峰形均较好ꎬ将流动相改为乙腈－水㊁乙腈－０.０１％甲酸水溶液后ꎬ各色谱峰均不成峰形ꎬ分离度也不理想ꎻ而苯丙素类成分中肉桂酸的检测条件为负离子扫描模式ꎬ且对流动相体系的ｐＨ值敏感ꎬ在流动相为乙腈－０.１％甲酸水溶液时ꎬ色谱峰检测不到ꎬ未有响应值ꎮ当流动相更换为乙腈－水溶液时ꎬ原儿茶酸㊁肉桂酸和丁香醛的色谱峰的峰形均不理想ꎻ流动相更换为乙腈－１ｍｍｏｌＬ－１乙酸铵水溶液时ꎬ桂皮醛的响应值偏低ꎮ另外本研究还分别考察了ＷａｔｅｒｓＸｓｅｌｅｃｔＨＳＳＴ３(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)和ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢＣ１８(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ３μｍ)２种规格色谱柱ꎬ采用ＷａｔｅｒｓＸｓｅｌｅｃｔＨＳＳＴ３色谱柱时ꎬ原儿茶酸㊁肉桂酸２个色谱峰的峰形不理想ꎬ采用ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢＣ１８色谱柱时ꎬ各色谱峰的分离度㊁峰形均较好ꎬ故最终分别建立了苯丙素类成分和麻黄生物碱类成分的测定方法ꎮ由于桂皮醛不稳定ꎬ暴露于空气中易发生氧化ꎬ本研究曾用甲醇溶解桂皮醛对照品ꎬ于常温和４ħ条件放置一段时间后ꎬ纯度均降低ꎬ在ＬＣ－ＭＳ/ＭＳ中可明显检出肉桂酸和其他杂质峰ꎮ当采用乙腈溶解时ꎬ其稳定性较好ꎬ２４ｈ内未见有分解现象ꎬ因此最终选用乙腈溶解ꎮ本课题组前期建立苯丙素类成分的含量测定方法时ꎬ分别采用乙腈－水㊁乙腈－０.０１％甲酸水溶液为流动相ꎬ丁香醛㊁原儿茶酸和肉桂酸在乙腈－０.０１％甲酸水溶液为流动相时ꎬ峰形较好ꎬ基线平稳ꎬ分离度好ꎬ故最终选择乙腈－０.０１％甲酸水溶液作为苯丙素类成分测定的流动相ꎮ３.２㊀溶出影响探讨㊀与麻黄单煎和桂枝单煎测定结果的加和相比ꎬ共煎条件下８种苯丙素类成分的溶出均呈现不同程度的降低ꎬ而在单煎合并条件下ꎬ除儿茶素㊁表儿茶素和丁香醛的溶出有降低外ꎬ其余５种成分的含量变化无显著性差异ꎮ推测在两药煎煮后混合的过程中ꎬ温度对８种苯丙素成分的溶出存在一定的影响ꎮ与共同煎煮相比ꎬ单煎后合并有利于原儿茶酸㊁丁香醛㊁香豆素㊁肉桂醇㊁肉桂酸和桂皮醛的溶出ꎬ抑制了儿茶素的溶出ꎬ对表儿茶素的溶出则无显著性影响ꎮ麻黄桂枝单煎合并液中麻黄碱㊁伪麻黄碱㊁甲基麻黄碱的含量相较于单煎液而言ꎬ含量下降ꎬ推测简单的合并后ꎬ麻黄生物碱与苯丙素类酸性成分酸碱反应形成复盐ꎬ导致含量降低[１４]ꎬ而共煎后的麻黄生物碱等含量较麻黄单煎液中的含量有了升高ꎬ升幅在８.５１％~１６.４５％ꎻ另本研究还对去甲基麻黄碱和去甲基伪麻黄碱进行了测定ꎬ测定的色谱条件同其他麻黄生物碱ꎬ由于未购买到该两种成分的对照品ꎬ暂未进行定量ꎬ峰面积结果显示ꎬ该两种生物碱的含量变化趋势与以上检测的３种麻黄生物基本一致ꎮ推测与桂枝共煎时ꎬ虽然与苯丙素类成分形成复盐ꎬ但桂枝中的某些成分可能促进生物碱类等成分更多溶出ꎬ具体反应途径亟待研究ꎮ麻黄和桂枝配伍共煎使用ꎬ对苯丙素类成分的溶出有一定的抑制作用ꎬ推断可能两者成分中的生物碱类与苯丙素类之间发生化学反应生成了复盐ꎬ导致含量降低ꎮ中医不传之密在于量ꎬ因此配伍后效应成分的变化对其主治病症有很重要的影响ꎮ本研究建立的８种苯丙类成分和３种麻黄生物碱的ＬＣ－ＭＳ/ＭＳ含量检测方法ꎬ简便快速ꎬ结果准确可靠ꎬ重复性好ꎬ为其临床应用和开发研究提供参考ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０.[２]ＭＩＡＯＳＭꎬＺＨＡＮＧＱꎬＢＩＸＢꎬｅｔａｌ.Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｐｈｙ￣ｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＥｐｈｅｄｒａｈｅｒｂ[Ｊ].ＣｈｉｎＪＮａｔＭｅｄꎬ２０２０ꎬ１８(５):３２１－３４４. [３]ＬＩＵＪꎬＺＨＡＮＧＱꎬＬＩＲＬꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｕｓｅｓꎬｐｈｙｔｏ￣ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙｏｆＣｉｎｎａｍｏｍｉｒａｍｕ￣ｌｕｓ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０２０ꎬ７２(３):３１９－３４２. [４]ＧÜＲＥＲＢꎬＫＥＲＴＭＥＮＨＲꎬＢＥＫＴＡŞＯＧ㊅ＬＵＰＫꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＣｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅｏｎｅａｒｌｙｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙａｎｄｃｅｒｅｂｒａｌｖａｓｏｓｐａｓｍｆｏｌｌｏｗｉｎｇｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｕｂａｒａｃｈｎｏｉｄｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｉｎｒａｂｂｉｔｓ[Ｊ].ＭｅｔａｂＢｒａｉｎＤｉｓꎬ２０１９ꎬ３４(６):１７３７－１７４６.[５]ＨＵＡＮＧＹꎬＣＨＥＮＪꎬＹＡＮＧＳꎬｅｔａｌ.ＣｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅＩｎ￣ｈｉｂｉｔｓｔｈｅＦｕｎｃｔｉｏｎｏｆＯｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｂｙＳｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅＷｎｔ/β－ＣａｔｅｎｉｎａｎｄＰＩ３Ｋ/ＡｋｔＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙｓ[Ｊ].ＤｒｕｇＤｅｓＤｅｖＴｈｅｒꎬ２０２０(１４):４６２５－４６３７.[６]王晓明ꎬ许良葵ꎬ罗佳波.麻黄－桂枝药对抗炎㊁镇痛作用研究[Ｊ].中药新药与临床药理ꎬ２０２０ꎬ３１(２):１７９－１８４.[７]郑芳昊.麻黄－桂枝药对配伍对麻黄碱引起的大鼠中枢神经系统毒副作用的保护机制研究[Ｄ].广州:南方医科大学ꎬ２０１５.[８]ＷＥＩＰꎬＴＡＮＧＱＦꎬＨＵＯＨＬꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｐｈａｒｍａ￣ｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｔｈｒｅｅｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｓｉｎｒａｔｐｌａｓｍａａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＲａｍｕｌｕｓＣｉｎｎａｍｏｍｉａｎｄＲａｍｕｌｕｓＣｉｎｎａｍｏｍｉ－ＥｐｈｅｄｒａｅＨｅｒｂａｈｅｒｂ－ｃｏｕｐｌｅｅｘｔｒａｃｔ[Ｊ].ＣｈｉｎＪＩｎｔｅｇｒＭｅｄꎬ２０１７.ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.１００７/ｓ１１６５５－０１７－２７９９－８.[９]王嘉俊ꎬ李双蕾ꎬ李梦瑶.中药药对的现代认识与研究[Ｊ].中医杂志ꎬ２０１６ꎬ５７(８):７０１－７０４.[１０]田学浩ꎬ张昊ꎬ李桐ꎬ等.中药配伍理论科学内涵的外在表象－复方水煎自沉淀[Ｊ].中草药ꎬ２０１７ꎬ４８(２２):４７７８－４７８３.[１１]张聪聪ꎬ刘瀚泽ꎬ王永丽ꎬ等.ＵＨＰＬＣ－Ｑ－ＥｘａｃｔｉｖｅＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ法同时测定大黄－桃仁药对中１６种成分及其溶出规律探究[Ｊ].中成药ꎬ２０２２ꎬ４４(４):１１７７－１１８３.[１２]李睿ꎬ翟华强ꎬ田伟兰ꎬ等.中药煮散的历史源流及其与现代配方颗粒的对比性分析[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１６ꎬ４１(５):９６５－９６９.[１３]鲁云ꎬ刘佩仪ꎬ徐杰ꎬ等.不同配伍比例麻黄－桂枝药对单煎与合煎化学成分对比分析[Ｊ].现代中药研究与实践ꎬ２０２１ꎬ３５(６):４０－４４.[１４]徐文杰ꎬ陈飞龙ꎬ谢颖ꎬ等.不同配伍配比对麻黄－桂枝药对有效成分含量的影响[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２０１２ꎬ１８(１０):８４－８８.。

LC—MS研究白芷中香豆素成分对多烯紫杉醇药代动力学的影响

LC—MS研究白芷中香豆素成分对多烯紫杉醇药代动力学的影响建立测定大鼠血浆中多烯紫杉醇LC-MS方法，并分别研究白芷中3个香豆素成分（欧前胡素、异欧前胡素及氧化前胡素）对多烯紫杉醇药代动力学的影响。

以紫杉醇为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白，LC-MS测定，方法经特异性、线性范围、准确度、精密度、稳定性等确证适合用于血浆中多烯紫杉醇的测定。

试验采用每组6只大鼠，分别口服灌胃给予多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组、氧化前胡素（8 mg·kg-1）配伍多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组；欧前胡素（15 mg·kg-1）配伍多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组、异欧前胡素（15 mg·kg-1）配伍多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组。

LC-MS测定给药后血浆中多烯紫杉醇浓度，绘制血药浓度-时间曲线，并用DAS 2.0软件计算相关药代动力学参数。

结果显示多烯紫杉醇与3个香豆素成分配伍前后其药代动力学参数有了明显的变化。

血药浓度-时间曲线下面积（AUC）显著性增加，药峰浓度（Cmax）显著提高。

表明白芷香豆素类化合物能促进多烯紫杉醇的口服生物利用度，三者对多烯紫杉醇口服生物利用度的影响作用氧化前胡素最强、异欧前胡素次之、欧前胡素最弱。

标签：多烯紫杉醇；欧前胡素；异欧前胡素；氧化前胡素；药代动力学[Abstract] The study was aimed to establish a liquid chromatography-tandem mass spectrometric method for the determination of the docetaxel concentration in rat plasma，and study the effect of coumarin constituents （imperatorin，isoimperatorin and oxypeucedanin）in Angelica dahurica on pharmacokinetics of docetaxel.Plasma was precipitated with acetonitrile and determined by LC-MS method with Paclitaxel as an internal standard. The specificity，linearity，range，accuracy，precision and stability of the method were suitable for the determination of docetaxel in plasma.Six sprague-dawley rats in each group received intragastric administration of docetaxel （50 mg·kg-1），oxypeucedanin （8 mg·kg-1）combined with docetaxel （50 mg·kg-1），imperatorin （15 mg·kg-1）combined with docetaxel （50 mg·kg-1），and isoimperatorin（15 mg·kg-1）combined with docetaxel （50 mg·kg-1）.Their drug plasma concentration was determined by LC-MS with Paclitaxel as an internal standard to draw plasma concentration-time curve，and the phamacokinetic parameters were calculated by DAS 2.0. The results showed that the phamacokinetic parameters of docetaxel all had notable changes when combined with imperatorin，isoimperatorin，and oxypeucedanin，respectively. The phamacokinetic parameters AUC and Cmax were significantly increased，indicating that coumarin constituents in Angelica dahurica could promote the oral bioavailability of docetaxel，and their effects were in the following order：oxypeucedanin>isoimperatorin>imperatorin.[Key words] docetaxel；imperatorin；isoimperatorin；oxypeucedanin；phamacokinetic白芷為我国大宗常用中药材品种之一，其收载于2015年版《中国药典》一部[1]，具有祛风散寒、燥湿排脓、止痛等功效[2]，其活性组份主要为白芷香豆素和挥发油，前期研究结果表明白芷香豆素可促进配伍对药活性成分如葛根素、黄苓苷等的肠道转运[3-4]，同时发现白芷香豆素有规律的促进P-gp介导的药物的肠道转运，而且对P-gp的表达具有一定的抑制作用[5]。

中药贝母提取物中贝母素甲和贝母素乙的检测方法[发明专利]

专利名称：中药贝母提取物中贝母素甲和贝母素乙的检测方法专利类型：发明专利
发明人：高英,向前,马戈,郑春,吴仙花
申请号：CN200910067193.1
申请日：20090630
公开号：CN101601805A
公开日：
20091216
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了中药贝母提取物中贝母素甲和贝母素乙的检测方法，采用毛细管电泳电化学发光的方法。

对贝母素甲和贝母素乙的检测限分别为1.25×10mol/L和1.0×10mol/L，线性范围分别为是1.0×10－1.0×10mol/L和5.0×10－1.0×10mol/L；比常用的蒸发光检测方法检测限低4个数量级，比质谱检测技术检测限低2个数量级，线性范围跨越二个数量级；运行缓冲溶液中离子液体BMImBF实现贝母素甲和贝母素乙的高效分离；纳升级的进样量且不需要对待测样品进行柱前、柱后衍生，中药贝母提取液直接用于检测；整个电泳过程在12min以内。

申请人：长春工程学院
地址：130012 吉林省长春市宽平大路395号
国籍：CN
代理机构：长春科宇专利代理有限责任公司
代理人：马守忠
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采用LC-ESI/MS方法同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分含量

采用LC-ESI/MS方法同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分含量冯雪1，高玉乔1，范琼瑛3，苏军华2*，赵宝华1（1.河北师范大学生命科学学院，石家庄050024；2.河北医科大学第二医院，石家庄050000；3.河北省石家庄市第一医院，石家庄050011）摘要　目的：建立同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分（升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A）含量的LC-ESI/MS方法。

方法：通过优化，建立了如下方法同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分（升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A）：采用ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），柱温为30 ℃，以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0~10 min，90%A→0%A；10~11 min，0%A→90%A；11~13 min，90%A），流速0.2 mL·min-1，分析时间为13 min，进样量1 μL；采用ESI正负离子模式，多反应监测（MRM），应用Masslynx V4.1软件进行数据分析。

结果：升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A能够在13 min内完全分离，质量浓度在一定范围内与峰面积呈良好的线性关系（r2>0.998），日内精密度RSD为0.19%~0.68%，日间精密度RSD为0.74%~1.9%，重复性RSD为0.11%~1.9%，稳定性RSD为3.3%~8.6%，加样回收率在97.7%~102.3%（RSD为0.50%~2.7%）；测得的4批样品中升麻素苷、二氢欧山芹醇当归酸酯、紫花前胡苷和欧当归内酯A的含量范围分别为2.27~2.52、6.35~7.06、143.14~180.534和0.076~0.186 μg·mL-1。

结论：该方法可以用于荆防败毒口服液中4个有效成分的含量测定和质量控制。

LC-MS法测定大鼠脑部海马区中苯巴比妥的含量

LC-MS法测定大鼠脑部海马区中苯巴比妥的含量杨志宏;刘晓东;谢林;梁艳;杨慧文【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2006(37)2【摘要】目的：建立大鼠脑部海马区中苯巴比妥的LC-MS测定方法。

方法：海马匀浆液中加入内标茶碱。

用乙醚／环己烷混合系统提取、挥干，用甲醇复溶，高速离心后，取上清液进行LC-MS测定。

色谱柱为Shim-pack ODSC18（150mm×2．0mm ID，5．0μm），离子源为ESI，检测离子为[M-H]^-：苯巴比妥（m／z）：231；茶碱（m／z）：179，流动相A为超纯水＋0．03％甲酸＋0．004％三乙胺，流动相B为甲醇，以0．2mL／min的流速进行梯度洗脱。

结果：此条件下苯巴比妥与内标茶碱显示良好分离；方法回收率大于87％；批内批间变异系数均小于10％；线性范围为10～2000ng／mL；可定量下限为10ng/mL。

在相应的生物样品中标准曲线的相关系数r大于0．9997，质控样本、冻融试验及基质效应均符合要求。

结论：该方法经考查符合生物样品测定要求，可用于海马中苯巴比妥的含量测定。

【总页数】4页(P142-145)【关键词】苯巴比妥;LC-MS法;海马;含量测定【作者】杨志宏;刘晓东;谢林;梁艳;杨慧文【作者单位】中国药科大学药物代谢与动力学研究中心【正文语种】中文【中图分类】TQ460.7【相关文献】1.LC-MS/MS法测定大鼠血浆中齐留通的含量及其药动学研究 [J], 唐俏欣;许俊鹏;潘超;汤明海;万丽2.LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的叶黄素含量 [J], 于建;张莉华;孙伟;洪毅敏;马金萍3.LC-MS/MS法测定东北黄精灌胃后大鼠血浆中3种皂苷类化合物含量及其药代动力学研究 [J], 崔芙岩;黄金月;姜佳欣;唐檬;马鹰;郑时嘉;于纯淼;王志刚;杨波4.衍生化LC-MS/MS法测定大鼠血浆中内源性谷胱甘肽的含量 [J], 徐鹏遥;杨漾;苏梦翔;狄斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。