氨基酸总量(氨态氮)的测定
项目十五 氨基酸态氮的测定
几种常用的酸碱指示剂及其变色范围
指示剂 变色范围（PH） 颜色 酸色 红 黄 红 红 红 红 黄 黄 黄 黄 无 无 碱色 黄 蓝 黄 黄 黄 橙黄 紫 蓝 蓝 红 红 蓝 浓度 0.1%乙醇（20%）溶液 0.1%乙醇（20%）溶液 0.1%乙醇（90%）溶液 0.1%水溶液 0.1%或0.2%乙醇（60%）溶液 0.1%乙醇（50%）溶液 0.1%乙醇（20%）溶液 0.1%乙醇（20%）溶液 0.1%乙醇（20%）溶液 0.1%乙醇（20%）溶液 0.1%乙醇（60%）溶液 0.1%乙醇（90%）溶液 用量/d/10ml 试液 1到3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1到2
任务三：成分分析
1、中和样品中游离酸
→吸20ml稀释样品→200ml烧杯→＋水60ml→插入酸度计→开 磁力搅拌→0.05mol/L NaOH滴定→至pH＝8.2→记录V（可计 算出总酸含量）
2、中和样品中氨基酸酸基
＋10ml甲醛→混匀→0.05mol/L NaOH滴定→至pH＝9.2→记录V 终
任务五：简单易行，在食品发酵中常用于测定发酵液中氨基 酸含量的变化，以此作为控制发酵生产的指标。 2、此法适合一般样品中的游离氨基酸含量的测定，如颜色 较深样品，可加适量的活性碳脱色后再测定，或用电位法进 行测定。 3、脯氨酸与甲醛作用时产生不稳定的化合物，使结果偏低。 4、酪氨酸含有酚酸基，滴定时也会消耗一部分碱而使结果 偏高。 5、溶液中若有铵存在时，也可以与甲醛反应，往往使结果 偏高
任务二：样品预处理
1、固体（溶解） 味精混匀→准确称量5g→1000ml容量瓶→取5ml（4 份）→250ml三角瓶 →各加50ml蒸馏水 2、液体 混合均匀→直接吸取
氨基酸总量的测定
氨基酸总量的测定(茚三酮比色法)一、方法原理：氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，可产生二酮茚一二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色深浅与氨基酸含量成正比，据此可以比色测定氨基酸含量。
二、试剂：1．2％茚三酮溶液：1g茚三酮(C9H403·2H2O)溶于25ml热水中，加入40mg氯化亚锡；(SnCl2·2H2O)，搅拌溶解，滤去残渣，滹液放在冷暗处过夜，用水定容为50ml，保存声冷暗处。
如茚三酮有微红色，配成的溶液也带红色，将影响比色测定，需将茚三酮重结晶后再用方法是：取5g茚三酮溶于20ml热水中，加入0.2g活性炭，轻轻摇动，放三十分钟后过滤，滤液置冰箱中过夜，次日过滤，用1ml冷水淋洗结晶，然后放在干燥器中干燥，装瓶保存。
2。
磷酸盐缓冲液(pH8.0)：①1／15mol/l磷酸二氢钾溶液：取KH2P04 0.9070g溶于lOOml水中。
②1／15mol/l磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠(Na2HP04·12H20)23.876g溶于水，加水至1000ml。
取①50ml与②95ml混匀即得。
3．10％醋酸：取lOml冰醋酸加水至lOOml。
4，氨基酸标准溶液(200ppm)：称取干燥的氨基酸(白氨酸，或其它的氨基酸)0.2000g溶解于水，定容为1000ml。
三、仪器：水浴，721分光光度计。
四、操作步骤：(一)标准曲线绘制：分别吸取氨基酸标准溶液(200ppm)0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml各置于25ml容量瓶中,加水补充至4.0ml，各加入缓冲液lml，加入茚三酮lml，摇匀。
置沸水浴中加热15分钟，取出迅速冷却至室温，—用水定容。
放置15分钟，在570nm波长下测定，绘制标准曲线。
氨基酸浓度分别为0，4.0，8.0，12.0，16.0，20.Oppm。
(二)样品测定：l提取样品：称取1.0 ~2.0g植物样品(新鲜样或干样)，加5m1 10％醋酸，在研钵中研碎，用水洗移入lOOml容量瓶，水定容，过滤到三角瓶中，取滤液测定。
氨基酸态氮的检验方法
氨基酸态氮的检验方法一﹑原理：根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用用氢氧化钠标准溶液滴定后依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
二﹑试剂：甲醛（36%）、氢氧化钠标准滴定溶液C=L仪器：酸度计﹑磁力搅拌器﹑10ml碱式滴定管三﹑分析步骤：1.准确称取5g（液体吸取5ml）样品，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取，置于200ml烧杯中，加60ml水（酵母类吸取5ml,加55ml水），开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液C（NaOH）=L滴定至PH=[注：滴定时应先快后慢,如果不小心滴过量可用玻璃棒蘸取少量L盐酸沿烧杯壁流入溶液；开磁力搅拌器时,转速要由慢变快,不要让转子碰到电极]2.加入10ml甲醛溶液,混匀。
再用氢氧化钠标准溶液（L）继续滴定至PH=,记下样品PH从到消耗氢氧化钠标准溶液L)的毫升数。
3.空白试验：将80ml蒸馏水（酵母类为60ml）置于200ml烧杯中滴定，记录加入甲醛后消耗标液毫升数。
四﹑计算：()1230.014100%100V V CXVm-⨯⨯=⨯⨯式中：X——样品中氨基酸态氮的含量，g/100ml1V——样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 2V——试剂空白加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 3V——样品稀释液取用量，mlM——样品质量，gC——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、备注滴定空白时，由于PH=时的显示值极不稳定，可加一滴氢氧化钠标准液后直接加甲醛，不必待其稳定，然后先预滴，再逐滴滴定至PH=。
参照：GB/谷氨酸钠测定以上操作步骤不变，操作步骤2滴定终点改为滴定至PH=，计算公式系数改为进行计算参照SB/T 10371-2003 鸡精调味料。
氨基酸总量的测定
氨基酸总量的测定(茚三酮比色法)一、方法原理：氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，可产生二酮茚一二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色深浅与氨基酸含量成正比，据此可以比色测定氨基酸含量。
二、试剂：1．2％茚三酮溶液：1g茚三酮(C9H403·2H2O)溶于25ml热水中，加入40mg氯化亚锡；(SnCl2·2H2O)，搅拌溶解，滤去残渣，滹液放在冷暗处过夜，用水定容为50ml，保存声冷暗处。
如茚三酮有微红色，配成的溶液也带红色，将影响比色测定，需将茚三酮重结晶后再用方法是：取5g茚三酮溶于20ml热水中，加入0.2g活性炭，轻轻摇动，放三十分钟后过滤，滤液置冰箱中过夜，次日过滤，用1ml冷水淋洗结晶，然后放在干燥器中干燥，装瓶保存。
2。
磷酸盐缓冲液(pH8.0)：①1／15mol/l磷酸二氢钾溶液：取KH2P04 0.9070g溶于lOOml水中。
②1／15mol/l磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠(Na2HP04·12H20)23.876g溶于水，加水至1000ml。
取①50ml与②95ml混匀即得。
3．10％醋酸：取lOml冰醋酸加水至lOOml。
4，氨基酸标准溶液(200ppm)：称取干燥的氨基酸(白氨酸，或其它的氨基酸)0.2000g溶解于水，定容为1000ml。
三、仪器：水浴，721分光光度计。
四、操作步骤：(一)标准曲线绘制：分别吸取氨基酸标准溶液(200ppm)0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml各置于25ml容量瓶中,加水补充至4.0ml，各加入缓冲液lml，加入茚三酮lml，摇匀。
置沸水浴中加热15分钟，取出迅速冷却至室温，—用水定容。
放置15分钟，在570nm波长下测定，绘制标准曲线。
氨基酸浓度分别为0，4.0，8.0，12.0，16.0，20.Oppm。
(二)样品测定：l提取样品：称取1.0 ~2.0g植物样品(新鲜样或干样)，加5m1 10％醋酸，在研钵中研碎，用水洗移入lOOml容量瓶，水定容，过滤到三角瓶中，取滤液测定。
食品中氨基酸总量的测定实验报告
食品中氨基酸总量的测定实验报告一、实验目的本实验旨在测定食品中氨基酸的总量，了解食品中蛋白质的组成和营养价值，为食品质量控制和营养评估提供依据。
二、实验原理氨基酸是含有氨基和羧基的有机化合物，它们在一定条件下与某些试剂反应可以产生特定的颜色或荧光，通过比色或荧光检测可以定量测定氨基酸的含量。
本实验采用茚三酮显色法测定食品中氨基酸的总量。
茚三酮在弱酸性溶液中与氨基酸反应，生成蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成正比。
在一定波长下测定溶液的吸光度，通过与标准曲线对比，可以计算出样品中氨基酸的总量。
三、实验材料与设备1、实验材料标准氨基酸溶液（已知浓度）待测食品样品（如肉类、豆类、谷物等）茚三酮试剂缓冲溶液（pH 值 50）乙醇蒸馏水2、实验设备分光光度计分析天平容量瓶（100 mL、50 mL、25 mL 等）移液管（1 mL、2 mL、5 mL 等）具塞刻度试管（25 mL）水浴锅离心机四、实验步骤1、标准曲线的绘制分别吸取 000 mL、020 mL、040 mL、060 mL、080 mL、100 mL 标准氨基酸溶液于 25 mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 100 mL。
向各试管中加入 100 mL 缓冲溶液（pH 值 50）和 100 mL 茚三酮试剂，摇匀。
将试管置于沸水浴中加热 15 min，取出后立即用冷水冷却至室温。
向各试管中加入 500 mL 60%乙醇，摇匀。
使用分光光度计，在 570 nm 波长下，以蒸馏水为空白，测定各溶液的吸光度。
以氨基酸的含量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品处理称取适量待测食品样品，精确至 0001 g，放入研钵中研碎。
将研碎的样品转移至离心管中，加入适量蒸馏水，在沸水浴中加热30 min，以提取氨基酸。
冷却后，离心（3000 rpm，10 min），取上清液备用。
3、样品测定吸取 100 mL 样品上清液于 25 mL 具塞刻度试管中，按照标准曲线绘制的步骤进行操作，测定样品溶液的吸光度。
食品中氨基酸总量的测定实验报告
食品中氨基酸总量的测定实验报告一、实验目的本实验旨在测定食品中氨基酸的总量，了解食品中蛋白质的营养价值，并掌握氨基酸总量测定的基本原理和方法。
二、实验原理氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。
食品中的氨基酸可以通过与某些试剂反应，产生可检测的物质，从而进行定量分析。
本实验采用茚三酮比色法测定氨基酸总量。
茚三酮在弱酸性溶液中与氨基酸加热反应，生成蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成正比。
通过比色测定吸光度，与标准曲线对照，即可计算出样品中氨基酸的总量。
三、实验材料与设备1、实验材料待测食品样品（如鸡蛋、牛奶、肉类等）标准氨基酸溶液（已知浓度）茚三酮试剂磷酸缓冲液（pH 54）乙醇蒸馏水2、实验设备分光光度计恒温水浴锅容量瓶（100 mL、50 mL、25 mL 等）移液管（1 mL、2 mL、5 mL 等）具塞刻度试管（25 mL）漏斗滤纸四、实验步骤1、样品处理称取适量的待测食品样品，精确至 0001 g，置于研钵中研磨成匀浆。
将匀浆转移至容量瓶中，用蒸馏水多次冲洗研钵，洗液并入容量瓶中，定容至刻度，摇匀。
用滤纸过滤上述溶液，滤液备用。
2、标准曲线的绘制分别吸取 00 mL、02 mL、04 mL、06 mL、08 mL、10 mL 标准氨基酸溶液于 25 mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补充至 10 mL。
向各试管中加入 10 mL 磷酸缓冲液（pH 54）和 10 mL 茚三酮试剂，摇匀。
将试管置于沸水浴中加热 15 min，取出后迅速冷却至室温。
用蒸馏水定容至 25 mL，摇匀。
以蒸馏水为空白对照，在 570 nm 波长处测定各溶液的吸光度。
以氨基酸的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、样品测定吸取 10 mL 样品滤液于 25 mL 具塞刻度试管中，按照绘制标准曲线的步骤进行操作，测定样品溶液的吸光度。
五、实验结果与计算1、实验结果记录标准曲线各点的浓度和吸光度。
氨基酸态氮含量
氨基酸态氮含量氨基酸是生命体内的基本组分之一，它们能够通过不同途径加入体内，包括蛋白质降解的氨基酸、蛋白质合成的氨基酸以及其他来源的氨基酸。
氨基酸中含有氨基（-NH2）和羧基（-COOH）基团，其中氨基经氧化可以形成尿素输出体外，因此氨基酸态氮含量可以反映氮代谢的情况。
目前，测定氨基酸态氮含量的方法主要有三种，包括总氮测定、氨基酸组分分析和同位素稳定性指标测定，下面将其逐一介绍。
（1）总氮测定总氮测定是最常用的测定氨基酸态氮的方法之一。
该方法是通过测定样品中总氮的含量，再减去非氨基酸态氮的含量（如无机氮、尿素等），得到氨基酸态氮的含量。
这种方法简单易行，但是在一些情况下可能有一定的误差。
（2）氨基酸组分分析氨基酸组分分析是测定各种氨基酸的含量，然后计算总氮中氨基酸态氮的含量。
该方法比较准确，但需要采用比较精密的仪器和技术。
（3）同位素稳定性指标测定同位素稳定性指标测定是一种新兴的测定氨基酸态氮的方法。
同位素稳定性指标是指不同同位素比例的物质之间氢、碳、氮同位素比例的差异，这些物质随着生物体内环境的变化而变化。
该方法可以比较精确地测定氨基酸态氮的含量，但需要使用高级仪器和技术，成本较高。
氨基酸态氮含量是反映氮代谢情况的一个重要指标。
氨基酸态氮的含量的高低可以反映生物体内蛋白质的合成和降解的平衡情况，也可以用于评估生物体的营养状态和代谢能力，以及肝脏和肾脏的功能状态。
氨基酸态氮含量的变化还可以提示患者的病情和预后情况，如肝肾功能不全、癌症等。
氨基酸态氮含量受多种因素的影响，包括饮食、肝肾功能、代谢状态、营养状态等。
（1）饮食饮食中特定氨基酸含量的增加或减少会改变氨基酸态氮含量，如含有较多氨基酸的食物或膳食补充剂可以增加氨基酸态氮含量。
（2）肝肾功能肝肾功能不良导致氮代谢障碍，从而影响氨基酸态氮含量。
（3）代谢状态肝糖原缺乏、严重热量限制或长时间的运动训练等均可能导致氨基酸代谢异常，进而影响氨基酸态氮含量。
氨基酸态氮的测定
❖ 试剂：
①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂， 用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。 ②0.1%百里酚酞乙醇溶液 ③0.1%中性红50%乙醇溶液 ④0.1%mol/L氢氧化钠标准溶液
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❖ 操作方法
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电位滴定法
❖ 原理 根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性， 使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时 插入被测液中构成电池，用ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ氧化钠标准溶液滴定，依据 酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
❖ 操作方法
①吸取含氨基酸约20mg的样品溶液，置于100mL容量瓶中，加水至刻度 混匀后吸取20.0mL烧杯中，加60mL水，开动磁力搅拌器，用0.05mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2（记下消耗0.05mol/L氢氧 化钠标准溶液的毫升数，可计算总酸含量）。
②加入0.1mL甲醛溶液，混匀。再用0.05mol/L氢氧化钠标准的溶液继续 滴定至pH9.2，记下消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数。
❖ 仪器 酸度计（附磁力搅拦器）
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磁力搅拌器
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❖ 试剂
①酚酞乙醇指示液：1% ②硼砂（标准物质）缓冲液：PH9.22 称取3.8克Na2B4O7 溶解后，定容至1000mL ③甲醛：36%-----38% ④0.0500mol/l氢氧化钠标准溶液
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③同时取80mL水，先用0.05mol/L氢氧化钠溶液调节至pH为8.2，再加入 10.0mL甲醛溶液，用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至pH9.2，做试 剂空白试验。
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氨基酸态氮的测定
氨基酸态氮的测定测定氨基酸态氮（Total Amino Nitrogen，TAN）是用来衡量溶液中氨基酸的氮量的常用指标，它主要用来检测和控制工业水体的性质以及底物、中和剂的浓度。
一、氨基酸态氮的作用1、评价溶液的性质氨基酸态氮（TAN）能够反映溶液中氨基酸的总氮量，从而能够用来判定溶液的性质。
TAN测试值能反映氨基酸在溶液中的浓度，从而可以更准确地了解氨基酸在溶液中的结构和性质，为进一步优化溶液的性质提供参考。
2、控制底物、中和剂的浓度氨基酸态氮的测定还可以用来控制底物和中和剂的浓度，这有助于工业水体的净化和修复。
TAN的测定结果能够提供有关底物和中和剂的信息，这些信息可以指导技术人员如何调节和控制底物和中和剂的浓度，从而达到良好的清洁度水平。
二、氨基酸态氮的测定1、样品准备要测定氨基酸态氮，首先要使用精确滴定量筒准备样品。
样品中氨基酸的浓度应大于1mg/50ml，并需要经过自由基四分法得到准确的样品浓度。
2、试剂配制对要进行TAN测定的溶液，可以使用0.02mol/L硫酸铵配制试剂，当然，这里也可以采用其他试剂，比如氢氟酸或者硝酸。
3、测试方法一般来说，TAN的测试可以采用两种方法，即固体高效液相色谱法（HPLC/GC）和氰化-分光光度法（CN-spectrophotometry）。
除此之外，还可以采用其他的测试方法，比如汞分析、离子色谱法等，并根据实际情况进行选择。
4、结果分析测定完氨基酸态氮后，根据测试结果来分析该溶液的性质，从而确定是否需要调整或者控制底物和中和剂的浓度。
处理过程中要确保参数保持稳定，以达到良好的结果。
三、总结氨基酸态氮（TAN）是用来衡量溶液中氨基酸的氮量的一个重要指标，它主要用来检测和控制工业水体的性质以及底物、中和剂的浓度。
在测定TAN时，需要正确地准备样品，及时准确地分析数据，以期达到良好的结果。
氨基酸总量的测定
一、单指示剂甲醛滴定法
3.操作步骤
（1）样品称量：称取一定量样品(约含20mg的氨基酸)于烧杯 中(如为固体加水50mL)； （2）滴加指示剂：加2-3滴0.1%百里酚酞乙醇溶液 （3）NaOH标准溶液滴定：用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定至 淡蓝色。 （4）加入甲醛生成羟甲基衍生物：加入中性甲醛20mL，摇匀 ，静置1分钟，此时蓝色应消失。 （5）NaOH标准溶液再次滴定：再用0.1mol/L NaOH溶液滴定 至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液体积mL。
7.思考题 ■ 甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么? ■ 为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—NH+3基上的H+，
不能用一般的酸碱指示剂？
氨基酸总量的测定
氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的统称， 氨基酸不是单纯的一种物质，有时多种氨基酸可以共存。 所以不能以氨基酸百分率来表示氨基酸含量，而需要测定 总的氨基酸量，以氨基酸中所含的氮(氨基酸态氮)的百分 率表示。
基衍生物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液 的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0 左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液 滴定放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
任务一 氨基酸总量的测 定
一、单指示剂甲醛滴定法
R-CH-COONH3+
R-CH-COO+ H+ NaOH
若样品中只含有一种氨基酸，就可以从含氮量计算出 氨基酸的含量。
■ 氨基酸总量测定方法主要有单指示剂甲醛 滴定法、双指示剂甲醛滴定法和茚三酮比色法。
氨基酸总量的测定 二、双指示剂甲醛滴定法测定
氨基酸总量测定方法
氨基酸总量测定方法咱今儿就来讲讲氨基酸总量测定方法，这可是个很有意思的事儿呢！你想想啊，氨基酸就像是我们身体里的小宝贝，它们的数量和状态对我们可重要啦！要说测定氨基酸总量，那方法可不少呢。
就好像我们要去一个地方，有好多条路可以走。
比如说茚三酮比色法，这就像是走一条大家都比较熟悉的大道，可靠又实用。
把样品和茚三酮试剂一混合，经过一系列反应，就能通过颜色的变化来大致知道氨基酸的量啦。
这多神奇呀！还有甲醛滴定法，这就好比是找到了一个特别的窍门。
利用甲醛和氨基酸的反应，然后通过滴定来确定数量。
是不是感觉很有意思呢？就像解开一个小小的谜题。
再说说电位滴定法吧，这就像是有个特别精准的仪器在帮我们把关，能非常准确地测量出氨基酸的量呢。
那我们在实际操作的时候可得注意一些小细节哦！就像做饭要掌握好火候一样，不能马虎。
比如试剂的选择，一定要挑质量好的呀，不然怎么能得出准确的结果呢？还有操作步骤，一步都不能错哦，不然就像走在路上迷路了一样。
你说，要是我们不认真对待这些方法，那不是就像闭着眼睛走路吗？能走到目的地才怪呢！所以呀，我们得好好琢磨这些方法，就像对待宝贝一样。
在测定的过程中，每一个环节都很关键呢。
从样品的处理到最后的数据分析，都需要我们细心再细心。
这可不是闹着玩的事儿呀！而且呀，不同的样品可能需要不同的方法来测定氨基酸总量呢。
这就好像不同的人穿不同的衣服才合适一样。
你总不能给一个大人穿小孩的衣服吧？总之呢，氨基酸总量测定方法是个很有学问的事儿，我们可得好好研究研究。
只有这样，我们才能真正了解氨基酸的奥秘，才能更好地为我们的健康服务呀！这可不是开玩笑的哦！。
氨基酸态氮检测方法及标准
氨基酸态氮检测方法及标准
氨基酸态氮检测到底咋整呢？其实啊，有特定的方法。
一般常用的是酸度计法。
先取适量样品，加入无二氧化碳的水，搅拌均匀后进行滴定。
这过程就像一场精准的化学大战，滴定剂缓缓加入，看着酸度计上的数值变化，那叫一个紧张刺激！注意事项可不少呢！样品一定要搅拌均匀，不然结果可就不准确啦。
滴定的速度也得把握好，太快或太慢都不行，这就跟开车似的，速度得适中才安全。
那检测过程安全不？稳定性咋样呢？放心吧！只要操作规范，那是相当安全稳定。
整个过程就像搭积木，一步一步稳稳当当，不会有啥危险。
这氨基酸态氮检测的应用场景可多啦！在食品行业，那可是大显身手。
可以检测酱油、醋等调味品的品质。
为啥这么牛呢？因为它能直接反映出产品中氨基酸的含量，这就好比是产品的“健康指标”。
优势也很明显啊！检测快速、准确，能让厂家和消费者都心里有数。
咱来看看实际案例哈。
有个酱油厂，通过氨基酸态氮检测，及时调整了生产工艺，生产出的酱油品质那叫一个棒！味道鲜美，深受消费者喜爱。
这效果，杠杠的！
所以啊，氨基酸态氮检测方法靠谱，能为食品行业保驾护航。
检测过程安全稳定，应用场景广泛，优势突出。
大家可得重视起来，让我们的食
品更安全、更美味！。
氨基酸态氮测定方法
氨基酸态氮测定方法
咱今儿就来唠唠氨基酸态氮测定方法。
你说这氨基酸态氮啊，就像是菜肴里的那一味独特调料，看不见摸不着，可又特别重要。
那要怎么测定它呢？
有一种方法就像是侦探在找线索一样，那就是电位滴定法。
想象一下，把样品放进去，就好像是把一个神秘的盒子交给了电位滴定仪这个“小侦探”，它通过一点点的试探和分析，最终找出氨基酸态氮的含量。
这个过程可不简单呢，需要仪器精准的“嗅觉”和“判断力”。
还有比色法，这就好比是给氨基酸态氮穿上了一件特别的“衣服”，让它在特定的条件下显现出独特的颜色，然后我们根据颜色的深浅来判断它的多少。
是不是挺神奇的呀？
再有呢，就是茚三酮显色法。
这个呀，就好像是一场奇妙的化学反应派对！茚三酮就像是派对的主持人，和氨基酸态氮一相遇，就会产生奇妙的变化，让我们能清楚地看到结果。
你可别小瞧了这些测定方法，它们就像是一个个神奇的魔法棒，能把看不见的氨基酸态氮给变出来，让我们知道它到底有多少。
在实际操作中，那可得仔细着点儿呢！稍微不注意，可能就会得出不准确的结果。
就好像做饭的时候，盐放多了或者放少了，味道可就差远了。
而且不同的样品，可能需要选择不同的测定方法，这就跟穿衣服一样，得根据场合和自身情况来选合适的。
咱平时吃的那些美味食物，说不定背后就有这些测定方法的功劳呢。
知道了氨基酸态氮的含量，才能保证食物的品质和口感呀！
总之呢，氨基酸态氮测定方法是个很重要的东西，它能帮助我们更
好地了解和掌握食物的特性。
大家可得好好了解了解这些方法，说不
定哪天自己也能成为一个小小的“测定专家”呢！这可不是开玩笑哦！。
氨基酸总量(氨态氮)的测定
氨基酸总量(氨态氮)的测定一、目的与原理：1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：二、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。
(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。
(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.1OON NaOH 溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH 值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1)三种试剂同单指示剂法(2)0.1％中性红(50％乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100NNaOH 准溶液滴定至淡蓝色。
实验电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量
实验电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量一、实验目的1. 掌握滴定法测定氨基酸总量的原理2. 了解电位滴定法确定酸碱滴定终点原理3. 熟练使用酸度计。
二、实验原理氨基酸含有酸性的一COOH,也含有碱性的一NH2。
它们互相作用使氨基酸成为中性的内盐。
加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失。
这样就可以用碱来滴定一COOH，并用间接的方法测定氨基酸的含量。
将酸度计的玻璃电极及甘汞电极（或复合电极）插入被测液中构成电池，用碱液滴定，根据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点.三、仪器与试剂1. 仪器酸度计、复合玻璃电极、磁力搅拌器烧杯（200mL）微量滴定管（10ml）2•试剂①20%中性甲醛②0.05mol/L氢氧化钠标准溶液③pH=6.18标准缓冲溶液四、实验步骤1. 仪器校正：开启酸度计电源，预热30分钟，连接复合电极。
选择适当pH的缓冲溶液, 测量缓冲溶液的温度，调节温度补偿旋钮至实际温度。
将电极浸入缓冲溶液中，调节定位旋钮，使酸度计显示的pH值与缓冲溶液的pH值相符。
校正完后定位调节旋钮不可再旋动，否则必须重新校正。
2. 样品处理准确称取约5.0g酱油试样，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0mL，置于200mL烧杯中，加60mL水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液［c（NaOH）=0.050 mol/L］滴定至酸度计指示pH8.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液（0.05 mol/L ）的毫升数，可计算总酸含量。
3. 氨基酸的滴定在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.0mL甲醛溶液，混匀。
再用氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L）继续滴定至PH9.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L）的毫升数（V i）。
4. 空白实验同时取80mL蒸馏水置于另一200mL烧杯中，先用0.05mo1/L氢氧化钠标准溶液滴至pH8.2（此时不记碱消耗量），再加入10.0mL中性甲醛溶液，混匀。
氨基酸态氮的测定
氨基酸态氮的测定1概述2氨基酸态氮的测定一、概述蛋白质可以被酶、酸或碱水解，其水解的最终产物为氨基酸。
氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，虽然从各种天然源中分离得到的氨基酸已达175种以上，但是构成蛋白质的氨基酸主要是其中的20种，而在构成的氨基酸中，亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨算、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，必须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病或通过补充而增强了新陈代谢作用。
随着食品科学的发展和营养知识的普及，食物蛋白质中必需氨基酸含量的高低及氨基酸的构成，愈来愈得到人们的重视。
为提高蛋白质的生理效价而进行食品氨基酸互补和强化的理论，对食品加工工艺的改革，对保健食品的开发及合理配膳等工作都具有积极的指导作用。
因此，食品及其原料中氨基酸的分离、鉴定和定量也就具有极其重要的意义。
二、氨基酸态氮的测定（1）双指示剂甲醛滴定法：原理、试剂、测定方法、结果计算（2）电位滴定法：原理、试剂、仪器、测定方法、结果计算1、双指示甲醛滴定法（1）原理氨基酸具有酸性的-COOH基和碱性的-NH2基。
它们相互租用而使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2基与甲醛结合，从而使其碱性消失。
这样就可以用强碱标准溶液来滴定-COOH基，并用间接的方法测定氨基酸的总量。
（2）方法特点及应用此法简单易行、快速方便，与亚硝酸氮气容量法分析结果相近。
在发酵工业中常用此法测定发酵液中氨基酸含量的变化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情况，并以此作为控制发酵生产的指标之一。
普氨酸与甲醛作用时产生不稳定的化合物，使结果偏高;溶液中若有存在也可与甲醛反应，往往使结果高。
（3）试剂①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。
②0.1%百里酚酞乙醇溶液③0.1%中性红50%乙醇溶液④0.1%mol/L氢氧化钠标准溶液（4）操作步骤1）含氨基酸溶液20-30mg→250ml锥形瓶中→中性红指示剂2-3滴，滴0.01mol/lNAOH 滴定终点（红→琥珀色）2）含氨基酸溶液20-30mg→250ml锥形瓶中→百里红酚酞3滴/中性甲醛20ml→摇匀，滴0.01mol/lNAOH滴定终点（淡蓝色）3）分别记录两次消耗碱液的用量（5）结果计算氨基酸态氮% ＝式中:c----氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/LV1----中性红指示剂滴定时消耗NaOH 标准溶液体积，mLV2----百里酚酞知己滴定是消耗NaOH 标准溶液体积，mLm-----测定用试样溶液相当于试样的质量，g0.014----氮的毫摩尔质量，g/mmol2、电位滴定法（1）原理根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用氢氧化钠标准溶液滴定，依据酸度计指示的pH 值判断和控制滴定终点。
氨基酸态氮的检验方法
氨基酸态氮的检验方法一﹑原理：根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用用氢氧化钠标准溶液滴定后依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
二﹑试剂：甲醛（36%）、氢氧化钠标准滴定溶液 C=0.050mol/L仪器：酸度计﹑磁力搅拌器﹑10ml碱式滴定管三﹑分析步骤：1.准确称取5g（液体吸取5ml）样品，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0ml，置于200ml烧杯中，加60ml水（酵母类吸取5ml,加55ml水），开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液C（NaOH）=0.050mol/L滴定至PH=8.2[注：滴定时应先快后慢,如果不小心滴过量可用玻璃棒蘸取少量0.1mol/L盐酸沿烧杯壁流入溶液；开磁力搅拌器时,转速要由慢变快,不要让转子碰到电极]2.加入10ml甲醛溶液,混匀。
再用氢氧化钠标准溶液（0.05ml/L）继续滴定至PH=9.2,记下样品PH从8.2到9.2消耗氢氧化钠标准溶液(0.05mol/L)的毫升数。
3.空白试验：将80ml蒸馏水（酵母类为60ml）置于200ml烧杯中滴定，记录加入甲醛后消耗标液毫升数。
四﹑计算：()1230.014100%100V V CXVm-⨯⨯=⨯⨯式中：X——样品中氨基酸态氮的含量，g/100ml1V——样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 2V——试剂空白加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 3V——样品稀释液取用量，mlM——样品质量，gC——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、备注滴定空白时，由于PH=8.2时的显示值极不稳定，可加一滴氢氧化钠标准液后直接加甲醛，不必待其稳定，然后先预滴1.2ml，再逐滴滴定至PH=9.2。
参照：GB/T5009.39谷氨酸钠测定以上操作步骤不变，操作步骤2滴定终点改为滴定至PH=9.6，计算公式系数0.014改为0.187进行计算参照SB/T 10371-2003 鸡精调味料。
KJ 茚三酮法测定氨基酸总量(“氨基酸”相关文档)共8张
试剂配制：讲义P32 （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04的磷酸缓冲液 （3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮
氨酸标准溶液。
（2）标准曲线的绘制及样品测定
单位：mL
1 2 3 4 5 6 7、8、9
水 1.6 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 1.0 （3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮氨酸标准溶液。
实验七：茚三酮法测定氨基酸总量
1．实验原理 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨
基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三酮共热 时，产生紫色化合物，最大吸收波长在570nm处，在 一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可 用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤：
2. 实验材料、仪器与试剂
氨基酸含量为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
氨基酸与加茚三水酮的至反1应0分m两L个刻步骤度： 线，静置15min后，在570nm处测定吸光值，以氨基酸含量
为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
Hale Waihona Puke 570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进行测定。 氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤： 实验材料、仪器与试剂
管，具塞刻度试管。 实验材料、仪器与试剂
仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管。 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在
试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢 570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进行测定。
（3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮氨酸标准溶液。 实验七：茚三酮法测定氨基酸总量 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。
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氨基酸总量(氨态氮)的测定
一、目的与原理：
1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：
二、单指示剂甲醛滴定法：
(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂
(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。
(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。
(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：
称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.1OON NaOH 溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算
计算：
氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W
式中：
N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)
W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：
(一)原理：
与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH 值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：
(1)三种试剂同单指示剂法
(2)0.1％中性红(50％乙醇溶液)
(三)操作步骤：
取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100NNaOH准溶液滴定至淡蓝色。
按下述公式计算。
计算：
氨基酸态氮(％)=( N(V2-V1)×0.014)/W×100
式中：
V2：用麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消耗量(毫升)
V1：用中性红作指示剂时碱液的消耗量(m1)。
N：标准碱液当量浓度。
W：样品的重量(克)。
．
0.014：氮的毫克当量。
注意事项：
测定时样品的颜色较深，应加活性炭脱色之后再滴定．。