铵态氮和硝态氮测定方法!!! - 副本
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法
一、原理：过滤后的样品经过一个开放的镀铜镉还原器通道后，硝酸根被还原成亚硝酸根，亚硝酸根通过磺胺处理后，与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联，形成深红色的偶氮染料，然后在550nm或者520nm比色分析。
二、样品处理土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。
过筛后的土样，取出5g土样放入离心管，加入25ml 氯化钾提取液（2moL/L），震荡2小时后进行离心（8000 g ，15min），静置后过滤，取上清液测定。
若不能及时测定，放入4℃冰箱保存。
三、试剂配制：试剂用水：蒸馏水或去离子水。
（1）显色试剂：（棕色玻璃瓶，避光保存）150ml水，加入25ml浓磷酸▲，冷却至室温后，加入10g磺胺，再加入0.5g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解。
用水定容至250ml。
加入浓缩探针清洗液（表面活性剂）。
（2）氯化铵-EDTA缓冲液（ammonium chloride-EDTA）：把85g氯化铵和0.1g 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-Na2）溶解于水，定容至1L。
用浓氨水▲调节PH至。
（3）硝化组件缓冲液：{用来清洗OTCR(镀铜镉还原器通道)}取100ml的氯化铵-EDTA缓冲液，稀释至1L。
调节PH至。
（4）2%硫酸铜：10g 五水硫酸铜（）溶于水，定容至500ml。
（5）5mol/L盐酸：小心慢慢加入浓盐酸▲于水中，冷却后定容至100ml。
（6）硝酸盐存储溶液(1g/L)：（溶液6个月内有效）7.218g硝酸钾溶于水，定容至1L，加入1ml氯仿▲（防腐剂）。
（7）比色管清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存,两个月内有效）取50ml比色管清洗液，加水定容至1L。
（8）进样针清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存，两个月内有效。
）取进样针清洗液，加水定容至1L。
四、测定方法：土壤硝态氮测定采用SmartChem全自动间断化学分析仪。
一、样品处理土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。
实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
土壤硝态氮铵态氮的测定
（二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4-酚二磺酸6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL 纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。
（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。
4）操作步骤（1）浸提：称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4•2H2O 0.5g（注2）[凝聚剂的作用，使滤液不混浊而澄清]和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。
铵态氮硝态氮的测定
二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和CaSO4.2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO4 75mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。
（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。
4）操作步骤（1）浸提：称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4•2H2O 0.5g（注2）和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。
铵态氮的测试方法
氮的测试方法1.铵态氮采用靛酚蓝比色法测定硝态氮采用联氨铜还原比色法测定，亚硝态氮采用重氮化偶合分光光度法测定。
氨态氮测定:采用氯化钾浸提一氧化镁蒸馏法;亚硝态氮测定:N一(l一蔡基)乙二胺光度法;硝态氮测定:氯化钾浸提一还原蒸馏法;有机态氮测定:凯氏定氮法。
1.有机氮测定采用硫酸消化一蒸馏法(即凯氏定氮法):无菌移液管移取5mL细菌培养液，加入浓硫酸和催化剂(硫酸铜、硫酸钾)，400℃消化1小时后，凯氏定氮仪中加入40%氢氧化钠蒸馏，4%硼酸液吸收后，0.!m。
l/L盐酸滴定。
有机氮的计算公式为:X=(V，一VZ)xCx14.007x1000/5X—为样品中有机氮含量(m创L);v，—样品消耗盐酸标准液的体积(mL);vZ—空白试验消耗盐酸标准液的体积(mL);C一盐酸标准溶液通过标定后的摩尔浓度(Inol/L)。
2.按态氮测定采用蒸馏法:用无菌移液管移取5mL细菌培养液培养液，加IOmL40%氢氧化钠溶液凯氏定氮仪蒸馏，4%硼酸吸收后，用0.lmol/L盐酸滴定，计算含量。
钱态氮的计算公式为:A二(V，一VZ)xCx14.007x1000/5A—为样品中钱态氮含量(m叭);Vl—样品消耗盐酸标准液的体积(mL);vZ—空白试验消耗盐酸标准液的体积(mL);C一盐酸标准溶液通过标定后的摩尔浓度(mol/L)。
3.亚硝酸盐氮测定采用a一蔡胺分光光度法:弱酸条件下:对氨基苯磺酸与a一蔡胺偶合生成紫红色染料，其颜色深度与亚硝酸盐氮含量成正比。
可测定亚硝酸盐氮含量范围在0.05m叭之间，若超过该范围可稀释后测定。
取适量培养液稀释后，依次加入氯化按缓冲液、60%冰乙酸、对氨基苯磺酸和a一禁胺等体积混合液和蒸馏水，于550nm波长下进行比色测定，同时绘制标准曲线，计算含量。
4.硝酸盐氮测定采用磺基水杨酸消化法:在浓硫酸存在下，NO3“能与磺基水杨酸反应，生成硝基水杨酸。
所生成的硝基水杨酸在碱性条件(PH>12.0)条件下，于410nm处有最大吸收;并且，在一定范围内与N03’含量成线性关系。
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法六、氮含量（硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵态氮等）的测定：（2g）样品提取液的提取: 称取新鲜植物组织2g，加入15ml无离子水研磨成匀浆，置于45℃振荡机中摇动浸提（或超声波）lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。
备注（lg的经验）：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。
1硝态氮的测定：标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。
5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。
2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，加入重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。
操作方法标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次加入标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，则成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶加入无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别加入5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。
0.1ml滤液＋0.4ml 5％水杨酸一硫酸溶液，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液9.5ml，混匀。
氮素相关测定方法(精)
二.亚硝态氮、硝态氮、铵态氮、尿素测定1.硝态氮测定（紫外分光光度校正因数法）1.约测：吸取水样（土壤浸提液）注入1cm光径石英比色杯中，以浸提剂为参比，在210nm波长处约测吸收值。
根据约测结果，测定浸出液应予稀释的倍数，使吸收溶液吸收值在0.1~0.8之间。
2.测定：水样（浸出液）稀释一定倍数后，吸取25ml放入50ml三角瓶中，加入1.00ml 1：9硫酸溶液，摇匀。
装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275，以同样稀释酸化后的饱和硫酸钙溶液为参比溶液，调节仪器的零点。
3.工作曲线绘制：吸取10mg/LNO3—N标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00ml于50ml容量瓶中，（加一定体积浸提剂）定容。
即得0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60mg/LNO3—N标准溶液。
各取25.00mL于50ml三角瓶中，加1.00ml1：9硫酸溶液，摇匀。
装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275。
4.结果计算：ΔA= A210-A275f其中f为校正因数，在土壤有机质含量小于50g/kg时，f可取2.2，若大于土壤有机质含量大于50g/kg，需重新测定。
硝态氮含量（mg/kg）=c*V*D/m其中c为溶液中硝态氮浓度（mg/L），V为浸提液体积（mL），m为烘干土样质量（g），D为浸出液稀释倍数，不稀释时为1。
2.亚硝酸根的测定（重氮化耦合分光光度法）吸取50mL水样于100mL容量瓶中，加4mL对氨基苯磺酸显色剂及4mLa-萘胺显色剂，加蒸馏水至刻度摇匀。
放置20min后在分光光度计上用530nm波长进行比色，读取透光度。
绘制标准曲线：吸取亚硝酸盐标准溶液0、0.5、1、3、5mL，分别放入100mL容量瓶中，此标准系列含亚硝酸根分别为0、0.05、0.1、0.3、0.5mg/L，与待测水样同样条件进行比色，绘制标准曲线。
土壤硝态氮铵态氮的测定
（二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和 CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的 NO3－— N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4- 酚二磺酸6- 硝基酚 -2 ，4- 二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－— N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg?L-1 NO3－— N，测定范围为 0.1 ～2mg?L-1 。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g 置于 500mL三角瓶中，以 150mL 纯浓 H2SO4溶解，再加入发烟 H2SO475mL并置于沸水中加热 2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟 H2SO4，可用酚 25.0g ，加浓 H2SO4225mL，沸水加热 6h 配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10μg?mL-1 NO3－— N标准溶液：准确称取 KNO3（二级）0.7221g 溶于水，定容 1L，此为 100μg?mL-1 NO3 －— N溶液，将此液准确稀释 10 倍，即为 10μg?mL-1 NO3－—N 标准溶液。
（3）CaSO4?2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含 NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、 Ca(OH)2（分析纯、粉状）和 MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1 的干扰。
尿素硝铵溶液中硝态氮和铵态氮不同测定方法的研究
氮是组 成植 物 体 内蛋 白质 、核 酸 、叶 绿 素 、酶 、 维生素 、生物碱 和一 些激 素 的重 要组 成 部 分 ，作 物
２０１６年 １月
化 肥 工 业
５
尿 素 硝 铵 溶 液 中硝 态 氮 和 铵 态 氮 不 同 测 定 方 法 的研 究
杨 一 ．段 路 路 （上 海４ｋｓ．ｒ－研 究 院 上 海 ２０００６２）
摘 要 尿素硝铵溶液是我 国农 业水肥 一体化 重点推广的新型肥料 ，其 中硝 态氮和铵 态氮的含量是检 测产
Ｙａｎｇ Ｙｉ， Ｄｕａｎ Ｌｕｌｕ
（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００６２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｕｒｅａ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉＳ ａ ｎｅｗ ｋｉｎｄ ｏｆ ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ。 ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｆｏｃｕｓｅｄ ｏｎ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｉｎ ａｇｒ ｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｉｎｔｅｇｒａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｉｎａ， ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｎｉｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ａｍ ｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｉｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａｌｉｔｙ ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｎｉｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｕｒｅａ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍ ａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍ ａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｍｍ ｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｕｒｅａ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉＳ ｄｅｔｅｒ ｍ ｉｎｅｄ ｂｙ ｔｉｔｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ａｆｔｅｒ ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｍｅｔｈｏｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｏｆ ｕｒｅａ ａｍ ｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｒｅ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ．Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｂｅｔｔｅｒ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｂｙ ｂｏｔｈ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｘｃｅｐｔ ｆｏｒ ＵＡＮ—ＩＩＩ ｓａｍｐｌｅ，ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｂｙ ２ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ； ｂｙ ｔｉｔｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ａ ｆｔｅｒ ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｄｅｔｅｒ ｍ ｉｎｅ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｒ ｍ ｉｎｅｄ ｖａｌｕｅ ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｖａｌｕｅ，ｏｎ ａｖｅｒａｇｅ，ｂｙ ０．４５％ ，ｂｕｔ ｍｏｒｅ ａｃｃｕｒａｔｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｃａｎ ｂｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｂｙ ｆｏｒｍ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｍｅｔｈｏｄ．
土壤硝态氮铵态氮的测定
（二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HN→6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4- 酚二磺酸6-硝基酚-2 ，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg?L-1 NO3－—N，测定范围为0.1 ～2mg?L-1 。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5O，H分析纯）25.0g 置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4 溶解，再加入发烟H2SO475m并L 置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟H2SO，4 可用酚25.0g ，加浓H2SO4225m，L沸水加热6h 配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10μg?m-L1 NO3－—N标准溶液：准确称取KNO（3 二级）0.7221g 溶于水，定容1L，此为100μg?m-L1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10μg?m-L1 NO3－—N标准溶液。
（3）CaSO4?2H2（O分析纯、粉状）、（4）CaCO（3 分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca（OH）2（分析纯、粉状）和MgCO（3 分析纯、粉状），用以消除Cl-1 的干扰。
4）操作步骤（1）浸提：称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4?2H2O 0.5g （注2）［凝聚剂的作用，使滤液不混浊而澄清］和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。
氮素相关测定方法(精)
二.亚硝态氮、硝态氮、铵态氮、尿素测定1.硝态氮测定（紫外分光光度校正因数法）1.约测：吸取水样（土壤浸提液）注入1cm光径石英比色杯中，以浸提剂为参比，在210nm波长处约测吸收值。
根据约测结果，测定浸出液应予稀释的倍数，使吸收溶液吸收值在0.1~0.8之间。
2.测定：水样（浸出液）稀释一定倍数后，吸取25ml放入50ml三角瓶中，加入1.00ml 1：9硫酸溶液，摇匀。
装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275，以同样稀释酸化后的饱和硫酸钙溶液为参比溶液，调节仪器的零点。
3.工作曲线绘制：吸取10mg/LNO3—N标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00ml于50ml容量瓶中，（加一定体积浸提剂）定容。
即得0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60mg/LNO3—N标准溶液。
各取25.00mL于50ml三角瓶中，加1.00ml1：9硫酸溶液，摇匀。
装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275。
4.结果计算：ΔA= A210-A275f其中f为校正因数，在土壤有机质含量小于50g/kg时，f可取2.2，若大于土壤有机质含量大于50g/kg，需重新测定。
硝态氮含量（mg/kg）=c*V*D/m其中c为溶液中硝态氮浓度（mg/L），V为浸提液体积（mL），m为烘干土样质量（g），D为浸出液稀释倍数，不稀释时为1。
2.亚硝酸根的测定（重氮化耦合分光光度法）吸取50mL水样于100mL容量瓶中，加4mL对氨基苯磺酸显色剂及4mLa-萘胺显色剂，加蒸馏水至刻度摇匀。
放置20min后在分光光度计上用530nm波长进行比色，读取透光度。
绘制标准曲线：吸取亚硝酸盐标准溶液0、0.5、1、3、5mL，分别放入100mL容量瓶中，此标准系列含亚硝酸根分别为0、0.05、0.1、0.3、0.5mg/L，与待测水样同样条件进行比色，绘制标准曲线。
铵态氮硝态氮测量方法
铵态氮硝态氮测量方法铵态氮和硝态氮是土壤中两种重要的氮素形态，对于土壤的肥力状况和施肥管理具有重要意义。
因此，准确测量土壤中的铵态氮和硝态氮含量对于合理的施肥和农田管理具有重要的意义。
本文将介绍几种常用的测量土壤中铵态氮和硝态氮的方法。
1.常用的颜色反应法：该法通过将土壤样品与钠氢氧化或钾氢氧化的碱性溶液分离，使土壤中的铵态氮转化为氨气，再经过蒸馏和缩水，使氨气转化为氨溶液，进而用酸与碱反应形成氨盐，并通过比色法测定氨盐的含量来间接测定土壤中的铵态氮含量。
2.氨蒸馏法：该方法通过加热土壤样品和钠氢氧化之后，将产生的氨气蒸馏出来，然后通过捕捉装置和滴定方法来间接测定土壤中的铵态氮含量。
3.电导比浓度法：该方法通过测定土壤浆液中的电导率，根据土壤的铵态氮含量和电导率之间的关系，间接推算出土壤中的铵态氮含量。
1.亚硝态氮还原法（蓝色素法）：该方法通过将土壤样品与酸性溶液、硫酸亚铁和草酸反应，将硝态氮还原为亚硝态氮，并与硫酸胍反应生成蓝色化合物。
然后，通过比色法测定反应产物的吸光度，来间接测定土壤中的硝态氮含量。
2.钴硝酸法：该方法通过将土壤样品与硝酸钴反应，在酸性条件下，硝态氮与硝酸钴形成红色络合物。
然后，通过比色法测定络合物的吸光度，来间接测定土壤中的硝态氮含量。
3. 紫外分光光度法：该方法通过利用硝态氮的特征吸收峰（220-225nm），采用紫外分光光度计，直接测定土壤中硝态氮的含量。
综上所述，测量土壤中的铵态氮和硝态氮含量的常用方法包括常用的颜色反应法、氨蒸馏法、电导比浓度法、亚硝态氮还原法、钴硝酸法和紫外分光光度法等。
每种方法都有其特点和适用范围，使用时需根据实际需要选择合适的方法进行测量。
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法
一、原理：过滤后的样品经过一个开放的镀铜镉还原器通道后，硝酸根被还原成亚硝酸根，亚硝酸根通过磺胺处理后，与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联，形成深红色的偶氮染料，然后在550nm或者520nm比色分析。
二、样品处理土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。
过筛后的土样，取出5g土样放入离心管，加入25ml 氯化钾提取液（2moL/L），震荡2小时后进行离心（8000 g ，15min），静置后过滤，取上清液测定。
若不能及时测定，放入4℃冰箱保存。
三、试剂配制：试剂用水：蒸馏水或去离子水。
（1）显色试剂：（棕色玻璃瓶，避光保存）150ml水，加入25ml浓磷酸▲，冷却至室温后，加入10g磺胺，再加入0.5g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解。
用水定容至250ml。
加入2.0ml浓缩探针清洗液（表面活性剂）。
（2）氯化铵-EDTA缓冲液（ammonium chloride-EDTA）：把85g氯化铵和0.1g 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-Na2）溶解于水，定容至1L。
用浓氨水▲调节PH至8.5。
（3）硝化组件缓冲液：{用来清洗OTCR(镀铜镉还原器通道)}取100ml的氯化铵-EDTA缓冲液，稀释至1L。
调节PH至8.5。
（4）2%硫酸铜：10g 五水硫酸铜（CuSO4.5H2O）溶于水，定容至500ml。
（5）5mol/L盐酸：小心慢慢加入50.69ml浓盐酸▲于水中，冷却后定容至100ml。
（6）硝酸盐存储溶液(1g/L)：（溶液6个月内有效）7.218g硝酸钾溶于水，定容至1L，加入1ml氯仿▲（防腐剂）。
（7）比色管清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存,两个月内有效）取50ml比色管清洗液，加水定容至1L。
（8）进样针清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存，两个月内有效。
）取0.5ml进样针清洗液，加水定容至1L。
四、测定方法：土壤硝态氮测定采用SmartChem全自动间断化学分析仪。
土壤硝态氮铵态氮的测定
土壤硝态氮铵态氮的测定(二)土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1)方法原理土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
NO3,C6H3OH(HSO3)2+HNO3?C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3,—N含量在一定范围内成正相关，可在400,425nm处(或用蓝色滤光片)比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3,—N，测定范围为0.1,2mg•L-1。
2)主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3)试剂(1)酚二磺酸试剂:称取白色苯酚(C6H5OH，分析纯)25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
)10µg•mL-1 NO3,—N标准溶液: (2准确称取KNO3(二级)0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3,—N溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3,—N标准溶液。
(3)CaSO4•2H2O(分析纯、粉状)、(4)CaCO3(分析纯、粉状)、(5)1:1 NH4OH、(6)活性碳(不含NO3,)，用以除去有机质的颜色。
(7)Ag2SO4(分析纯、粉状)、Ca(OH)2(分析纯、粉状)和MgCO3(分析纯、粉状)，用以消除Cl-1的干扰。
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法
一、原理：过滤后的样品经过一个开放的镀铜镉还原器通道后，硝酸根被还原成亚硝酸根，亚硝酸根通过磺胺处理后，与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联，形成深红色的偶氮染料，然后在550nm或者520nm比色分析。
二、样品处理土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。
过筛后的土样，取出5g土样放入离心管，加入25ml 氯化钾提取液（2moL/L），震荡2小时后进行离心（8000 g ，15min），静置后过滤，取上清液测定。
若不能及时测定，放入4℃冰箱保存。
三、试剂配制：试剂用水：蒸馏水或去离子水。
（1）显色试剂：（棕色玻璃瓶，避光保存）150ml水，加入25ml浓磷酸▲，冷却至室温后，加入10g磺胺，再加入0.5g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解。
用水定容至250ml。
加入2.0ml浓缩探针清洗液（表面活性剂）。
（2）氯化铵-EDTA缓冲液（ammonium chloride-EDTA）：把85g氯化铵和0.1g 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-Na2）溶解于水，定容至1L。
用浓氨水▲调节PH至8.5。
（3）硝化组件缓冲液：{用来清洗OTCR(镀铜镉还原器通道)}取100ml的氯化铵-EDTA缓冲液，稀释至1L。
调节PH至8.5。
（4）2%硫酸铜：10g 五水硫酸铜（CuSO4.5H2O）溶于水，定容至500ml。
（5）5mol/L盐酸：小心慢慢加入50.69ml浓盐酸▲于水中，冷却后定容至100ml。
（6）硝酸盐存储溶液(1g/L)：（溶液6个月内有效）7.218g硝酸钾溶于水，定容至1L，加入1ml氯仿▲（防腐剂）。
（7）比色管清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存,两个月内有效）取50ml比色管清洗液，加水定容至1L。
（8）进样针清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存，两个月内有效。
）取0.5ml进样针清洗液，加水定容至1L。
四、测定方法：土壤硝态氮测定采用SmartChem全自动间断化学分析仪。
土壤硝态氮及铵态氮的取样测定
土壤硝态氮和铵态氮的取样测定1．田间取样与保存根据小区面积，随机选2～3个样点，采样地点应避开边行以及头尾。
在行间取样，以30cm为一层，取样深度可以是0-90cm或0-210cm或更深，分层取样，等层混合。
新鲜土样须田间将土壤样品立即放入冰盒，没有冰盒者应将土样放置阴凉处，避免阳光直接照射，并尽快带回室内处理。
2．土样的处理在田间采样后，立即将土样放置在冰盒中，低温保存。
返回实验室后，如果样品数量较多，则放置于冰箱中4℃保存。
也可以直接进行土样处理：土壤过3-5cm筛，测定土壤的水分含量，同时作浸提。
3．土样的浸提称取混匀好的新鲜土壤样品24.00g，放入振荡瓶，加100 ml 1mol/L 优级纯KCl浸提液，充分混匀后放入振荡机振荡1个小时，用定性滤纸过滤（注意：国内好多滤纸含有铵态氮，需选择那些无铵滤纸）到小烧杯或胶卷盒中，留滤液约20ml备用，每批样做3个空白。
若样品不能及时测定，应放入贮藏瓶中冷冻保存。
同时称取20-30 g鲜土放入铝盒中105℃下烘干测定土壤水分。
剩余土样自然风干后保存。
4．土壤硝态氮、铵态氮测定测定前先解冻贮藏瓶盒中的滤液，并保持滤液均匀（注意：解冻后的样品有时有KCl 析出，必须等KCl溶解后，液体完全均匀后再测定），上流动分析测定溶液中的铵态氮和硝态氮含量（专门的试验人员负责）。
所用标准溶液必须是用1mol/L KCl浸提液配制。
有时样品浓度超出了机器的测定范围，需对样品进行稀释（注意：应以最低稀释倍数把样品测定出来，且不可放大稀释倍数，这样会引起很大误差）。
流动分析测定的是溶液中的铵态氮和硝态氮浓度，单位是mg/L，必须根据土壤样品含水量和土壤干重换算成mg N/kg。
如果要换算成kg N/ha，可以通过下列公式：土壤硝态氮或铵态氮（kg N/ha）=土壤硝态氮或铵态氮（mg N/kg）* 采样层次（30cm或20cm）* 土壤容重/ 10。
铵态氮硝态氮的测定
二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和CaSO4.2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO4 75mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。
（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。
4）操作步骤（1）浸提：称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4•2H2O 0.5g（注2）和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。
铵态氮和硝态氮测定方法!!!-副本
铵态氮和硝态氮测定⽅法-副本铵态氮测量⽅法（2mol?L-1KCl浸提—靛酚蓝⽐⾊法）1）⽅法原理2mol?L-1KCl溶液浸提⼟壤，把吸附在⼟壤胶体上的NH4+及⽔溶性NH4+浸提出来。
⼟壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作⽤，⽣成⽔溶性染料靛酚蓝，溶液的颜⾊很稳定。
在含氮0.05～0.5mol?L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正⽐，可⽤⽐⾊法测定。
2）试剂（1）2mol?L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于⽔中，稀释⾄1L。
（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释⾄1L。
此试剂不稳定，须贮于棕⾊瓶中，在4℃冰箱中保存。
（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢⼆钠（Na2HPO4?7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4? 12H2O，化学纯）31.8g和52.5g?L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂⽩粉溶液)5mL溶于⽔中，稀释⾄1L，贮于棕⾊瓶中，在4℃冰箱中保存。
（4）掩蔽剂将400g?L-1的酒⽯酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O，化学纯）与100g?L-1的EDTA⼆钠盐溶液等体积混合。
每100mL 混合液中加⼊10 mol?L-1氢氧化钠0.5mL。
（5）2.5µg?mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取⼲燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于⽔中，洗⼊容量瓶后定容⾄1L，制备成含铵态氮（N）100µg?mL –1的贮存溶液；使⽤前将其加⽔稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg?mL –1的标准溶液备⽤。
3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。
4）分析步骤（1）浸提称取相当于10.00g⼲⼟的新鲜⼟样（若是风⼲⼟，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三⾓瓶中，加⼊氯化钾溶液100mL，塞紧塞⼦，在振荡机上振荡1h。
铵态氮和硝态氮实验操作方法
铵态氮---靛酚蓝比色法一、方法原理土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定，在NH4+-N浓度为0.05mg/L-0.5 mg/L范围内，其深浅与NH4+-N含量成正比。
反应体系PH应为10.5-11.7之间。
硝普钠{硝基铁氰化钠，或称亚硝酰基五氰合铁（ⅲ）酸钠，Na2Fe(CN)5NO.2H2O}是反应的催化剂，能加速显色，增强蓝色及其稳定性。
在20℃左右室温时一般须放置1h后比色，完全显色约需2h-3h。
生成的蓝色很稳定，24h内吸收值无显著变化。
比色时在625nm处测量吸收值。
待测液中如有干扰的金属离子，可用EDTA等螯合剂掩蔽。
二、主要仪器分光光度计三、试剂（1）酚溶液：10g苯酚和100mg硝普钠（Na2Fe(CN)5NO.2H2O）溶于1L蒸馏水中。
此溶剂不稳定，须贮存于暗色瓶中，存放于4℃冰箱中，同时需温热至室温。
注意硝普钠有剧毒！（2）次氯酸钠碱性溶液：10gNaOH，7.06gNa2HPO4.7H2O，31.8gNa3PO4.12H2O和10ml 次氯酸钠{w(NaClO)=5.25%（即有效氯5%的漂白剂溶液）溶于1L水中。
此试剂应与酚溶液同样保存}。
（3）掩蔽剂：酒石酸钾钠{p(KNaC4H4O6.4H2O)=400g/L}与EDTA二钠盐溶液N2Na{p(C10H14O8)=100g/L}等体积混合。
每100ml混合液加入0.5mlNaOH（C（NaOH）=10mol/L）溶液，即得清亮的掩蔽剂溶液。
（4）NH4+-N标准溶液：0.4717g烘干的(NH4)2SO4（二级）溶于蒸馏水中，定容至1L。
此p （NH4+-N）=100mg/L贮存液。
测定当天将此溶液用蒸馏水准确稀释20倍（取5ml稀释至100ml），即为5mg/L NH4+-N标准溶液（p(N)= 5mg/L）。
（5）KCl溶液（2mol/L）：称取149.1g分析纯KCl，加水定容至1L的容量瓶中。
土壤硝态氮铵态氮的测定
（二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和 CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的 NO3－— N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4- 酚二磺酸6- 硝基酚 -2 ，4- 二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－— N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg?L-1 NO3－— N，测定范围为 0.1 ～2mg?L-1 。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g 置于 500mL三角瓶中，以 150mL 纯浓 H2SO4溶解，再加入发烟 H2SO475mL并置于沸水中加热 2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟 H2SO4，可用酚 25.0g ，加浓 H2SO4225mL，沸水加热 6h 配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10μg?mL-1 NO3－— N标准溶液：准确称取 KNO3（二级）0.7221g 溶于水，定容 1L，此为 100μg?mL-1 NO3 －— N溶液，将此液准确稀释 10 倍，即为 10μg?mL-1 NO3－—N 标准溶液。
（3）CaSO4?2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含 NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、 Ca(OH)2（分析纯、粉状）和 MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1 的干扰。
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铵态氮测量方法（2mol•L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法）1）方法原理2mol•L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。
土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。
在含氮0.05～0.5mol•L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。
2）试剂（1）2mol•L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。
（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4•12H2O，化学纯）31.8g和52.5g•L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（4）掩蔽剂将400g•L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O，化学纯）与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。
每100mL 混合液中加入10 mol•L-1氢氧化钠0.5mL。
（5）2.5µg•mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µg•mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg•mL –1的标准溶液备用。
3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。
4）分析步骤（1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。
取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。
如果不能在24h内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。
（2）比色吸取土壤浸出液5mL(含NH4+—N2µg～25µg)放入50mL容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。
在20℃左右的室温下放置1h后（注1），加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。
用1cm比色槽在625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。
（3）工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL NH4+—N标准液于50mL容量瓶中，各加10mL氯化钠溶液，同（2）步骤进行比色测定。
5）结果计算土壤中NH4+—（N）含量（mg•kg-1）=式中：ρ——显色液铵态氮的质量浓度(µg•mL –1)；V——显色液的体积(mL)；ts——分取倍数；m——样品质量（g）。
6）注释注1. 显色后在20℃左右放置1h，再加入掩蔽剂.过早加入会使显色反应很慢，蓝色偏弱；加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解.硝态氮测定方法（双波长紫外分光光度法）实验原理：利用硝酸根离子在220 nm处有较强的紫外吸收这一特性，定量分析了土壤浸提液中的NO3-. 溶解的有机物在210 nm和275 nm处均有吸收，而NO3-在275 nm处没有吸收，因此在275 nm 波长处做另一测量，以校正硝酸盐值. 最低检出浓度0.004 mg/ kg ，测定上限为4.000 mg/ kg ，适合高浓度土样浸提液的高倍稀释.试剂：CaSO4 (分析纯) ，量浓度为1 mol/ L的盐酸(优级纯) 溶液，质量浓度为100μg/ mL的硝酸盐氮标准贮备液，质量浓度为25μg/ mL的硝酸盐氮标准使用液。
实验方法标准曲线的绘制：分别取硝酸盐氮标准使用液0.0 ，0.5 ，1.0 ，2.0 ，3.0 ，4.0μg/ mL 置于50 mL 比色管中，各管中加入1.0 mL 1 mol的盐酸溶液，摇匀，用紫外分光光度计在210 nm和275 nm处，用1 cm 石英比色皿测定吸光度. 以ΔA= A210-kA275的计算方法求得校正吸光度. （系数k的确定方法分别准确移取10μg/ mL 硝酸盐氮使用液2.00mL 、土壤浸提液2.00 mL 置于各自的50 mL 比色管中，用二次蒸馏水定容，摇匀，用1 cm 的石英比色皿，以二次蒸馏水作参比，在紫外- 可见分光光度计上测定吸光值。
土壤样品、硝酸盐氮在210 nm 处有最大吸收，在275 nm 处吸收较弱，选取210 nm、275 nm 为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮，根据A210 - KA275 =0 的公式进行计算，求得K的平均值。
土壤样品测定：称取10.00 g新鲜土样，分别置于150 mL具塞三角瓶，在三角瓶内加0.2gCaSO4，加100 mL二次蒸馏水，于振荡器上振荡15 min，放置30 min后，倾出上清液，用中速或慢速无氮定量滤纸过滤. 吸取滤液50.00 mL (视NO3 - N 的浓度而定) 置于50 mL比色管中，用水准确稀释至刻度，加1.0 mL 1 mol的盐酸溶液，测量吸光度. 结果计算:C =C0×V总×D×1000/M×103式中: c 为NO3-N 浓度(mg/ kg) ; c0 为由曲线查得测定液质量浓度(μg/ mL) ; v总为比色测定液总体积(mL)此处为50ml ;D 为浸提液分取倍数，若不稀释D=1 ;M 为试样质量(g) .1000与103为单位换算数量级。
根据氮肥中氮素化合物的形态将氮肥分为铵态氮肥、硝态氮肥、酰胺态氮肥和氰氨态氮肥。
随着人们对硝态氮肥施用效果的肯定，近两年，肥料市场上掀起了一股硝基复合（混）肥的热潮，许多肥料厂家及商家对硝态氮肥发展前景十分看好。
事实上，无论是铵态氮还是硝态氮都可以作为植物生长和高产的良好氮源，究竟哪种肥料施用效果好，有发展前景，需要根据作物、土壤、肥料的性状来确定，更需要深入解读植物吸收铵态、硝态两种形态氮素营养的生理性质。
一、植物中氮素的主要来源植物可以利用的氮素形态主要是铵态氮、硝态氮，也能少量吸收一些简单的有机含氮化合物如氨基酸、酰胺（如尿素）等。
空气中含有近79%的氮气，只有某些微生物（包括与高等植物共生的固氮微生物）才能利用，大多数植物没有这一本领。
而植物吸收的氮素主要来自它们生存的介质——土壤。
土壤本身存在的氮素并不多，而且土壤中的氮素并不能被植物全部利用，植物能利用的仅是其中一小部分，即土壤中存在的铵态、硝态氮，而一些有机氮素，如简单的氨基酸、酰胺等也能被作物吸收利用，但其数量很少，又会被微生物转化成其他形态，难以在土壤长期存留；植物对其吸收也远不如无机氮容易，这些有机氮只能使植物存活，而不能使其丰产。
二、形态不同，会产生不同的效应植物在吸收和代谢两种形态的氮素上存在不同。
首先，铵态氮进入植物细胞后必须尽快与有机酸结合，形成氨基酸或酰胺，铵在植物体内的积累对植物毒害作用较大。
硝态氮在进入植物体后一部分还原成铵态氮，并在细胞质中进行代谢，其余部分可“贮备”在细胞的液泡中，有时达到较高的浓度也不会对植物产生不良影响。
因此单纯施用硝态氮肥一般不会产生不良效果，而单纯施用铵态氮则会发生铵盐毒害，在水培条件下更易发生。
植物为什么不按其需要有计划地吸收，而要奢侈地吸收硝态氮，并“贮备”于液泡中呢？研究表明，硝态氮在营养器官生长时期大量累积是一切植物的共性，随着植物不断生长，体内的硝态氮含量越来越少。
据了解，植物在营养生长阶段大量地吸收营养物质，一方面是为了满足当前生长的需要，另一方面是为了供给后期生长的需要。
硝态氮在植物体中累积是植物的“贮备”措施，也是适应逆境的表现。
营养生长期累积的硝态氮多，即使后期土壤供应养分不足，植物仍能很好地生长和发育；累积的硝态氮越多，后期生长发育越良好。
另外，NO3-在液泡内还是重要的渗透调节物质，在植物体内碳水化合物合成减少，液泡内有机物含量下降时，NO3-可替代它们起渗透调节作用，这种调节需要的能量也低。
虽然铵、硝态氮都是植物根系吸收的主要无机氮，但由于形态不同，也会对植物产生不同效应。
硝态氮促进植物吸收阳离子，促进有机阴离子合成；而铵态氮则促进吸收阴离子，消耗有机酸。
一般而言，旱地植物具有喜硝性，而水生植物或强酸性土壤上生长的植物则表现为喜铵性，这是作物适应土壤环境的结果。
如玉米、小麦，对硝态氮偏好；在等氮量供应情况下，硝态氮的增产效果要更突出些。
例如，蔬菜是一类对硝态氮非常偏爱的作物，在水培条件下表现更为明显。
在水培试验中，只要营养液中加入硝态氮，没有铵态氮、尿素态氮，蔬菜正常生长。
相反，没有硝态氮而加入尿素或任何铵态氮，蔬菜就生长不正常，甚至绝收。
同时，烟草也是一种对硝态氮反应良好的作物，施用硝态氮不但能提高其产量，也能改善其品质。
水稻终生以水为家，铵态氮一直被认为是其最好氮源。
但最近的试验结果表明，水稻也喜欢硝态氮，后期补施一些硝态氮肥会有锦上添花之效，获得更高的产量。
随着外界浓度升高，硝态氮作氮源的优势明显增加，铵态氮抑制植物生长的效应也更明显。
三、硝态氮肥前景广阔氮肥按其中所含氮素养分的形态，可分为铵态氮肥（如碳酸氢铵）、硝态氮肥（如硝酸钾）、酰胺态氮肥（如尿素）和氰氨态氮肥（如石灰氮）。
硝酸铵含有硝态氮和铵态氮各半，称为硝铵态氮肥。
硝酸磷肥和硝酸磷钾肥等复合（混）肥料，其中的氮素养分也有硝态氮和铵态氮，连同硝酸铵在内，可统称为含硝态氮肥料。
一般情况下，同时施用铵态氮和硝态氮肥，往往能获得作物较高的生长速率和产量。
同时施用两种形态氮，植物更易调节细胞内pH值和通过消耗少量能量来贮存一部分氮。
两者合适的比例取决于施用的总浓度：浓度低时，不同比例对植物生长影响不大，浓度高时，硝态氮作为主要氮源显示出优越性。
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