白血病淋巴瘤讲义免疫分型
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2
散射光信号和荧光信号
前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性
荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞 抗原结合越多，产生的荧光信号越强。
CD7+ and/or CD2+
CD19+
28
初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
CD7+ and/orCD2+
CD19+
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal
15
细胞类型鉴定
Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.
16
Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280
CD45/SS示意图
正常骨髓细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
血液肿瘤细胞
早幼—成熟粒细胞 单核细胞
淋巴细胞
M3、CML M4、M5
maturation
CD34+/CD117+/-
HLADR+
CD56+
CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
LGL CLL、ALL、CLD
正常前体细胞 嗜碱性粒细胞
M0、M1、M2、 M4、M5、ALL
成熟红细胞、血小板 细胞碎片
M6、M7、MM Pre-B-ALL 非血液来源细胞
17
B淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
白血病淋巴瘤免疫分 型
流式细胞术的基本概念
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒 （通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对 特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
• 根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
26
EGIL，1998年白血病积分系统
• 分值
B系
T系
髓系
•2
CD79a
CD3
MPO
•
(cyt)CD22 TCRα/β
•
(cyt)IgM TCRγ/δ
•1
CD19
CD2
CD117
•
CD20
CD5
CD13
•
CD10
CD8
+
Cytokines
+
DNA
8
设门
9
08-03307
设门
全部 细胞
门内细胞
10
08-03307
11
实验室数目(个)
ASCP(美国临床病理学家协会)流式临床应用调查
140 120 100 80 60 40 20
0
流式临床应用
12
CD4 Leuk Lymph CD34 DNA MDS
Ret B27 Mito NF Plat
18
T淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic1in9e
粒细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic2in0e
单核细胞分化与抗原表达关系图
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CFra Baidu bibliotek41、CD61
29
AML-M1
30
AML-M1
31
AML-M2 32
AML-M2 33
AML-M3 34
AML-M4
35
AML-M4
36
AML-M5
37
AML-M6
38
初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
血液肿瘤分类进程
13
目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献
14
白血病免疫分型的理论基础
白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标 志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶 段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但 仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而 仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤 进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴 瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的 表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细 胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴 瘤细胞的存在。
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic2in1e
非肿瘤T淋巴 细胞表型
22
非肿瘤B淋巴 细胞表型
23
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
24
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
25
白血病免疫分型
• 根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
CD33
•
CD10
CD65
• 0.5
TdT
TdT
CD14
CD24
CD7
CD15
CD1a
CD64
• *当髓系和一个淋系积分均>2分时，则诊断为急性混合细胞型白 血病。
27
急性白血病的四大免疫类型
• 单表型急性白血病 • 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 • 双表型/双克隆急性白血病 • 未分化型急性白血病
CD4 CD3
CD8
CD3
7
抗原分布
• 表面,胞浆,核内
• 是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
DNA
Cytokines
+
DNA
CD3,4,8, tetramer
3
CD45/SS示意图
4
实验对照的设计
• 空白对照：ALL • 阴性对照：常用同型抗体对照
单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校正）
• 阳性对照：检测阴性时
5
空白对照和阴性对照的比较：
6
抗原表达
• 需要用多少的标志来确证感兴趣的细 胞群?
• 它们在细胞上的分布是不是很近? • 它们是否在不同的细胞上表达不同? • 他们表达强还是弱?
散射光信号和荧光信号
前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性
荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞 抗原结合越多，产生的荧光信号越强。
CD7+ and/or CD2+
CD19+
28
初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
CD7+ and/orCD2+
CD19+
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal
15
细胞类型鉴定
Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.
16
Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280
CD45/SS示意图
正常骨髓细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
血液肿瘤细胞
早幼—成熟粒细胞 单核细胞
淋巴细胞
M3、CML M4、M5
maturation
CD34+/CD117+/-
HLADR+
CD56+
CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
LGL CLL、ALL、CLD
正常前体细胞 嗜碱性粒细胞
M0、M1、M2、 M4、M5、ALL
成熟红细胞、血小板 细胞碎片
M6、M7、MM Pre-B-ALL 非血液来源细胞
17
B淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
白血病淋巴瘤免疫分 型
流式细胞术的基本概念
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒 （通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对 特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
• 根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
26
EGIL，1998年白血病积分系统
• 分值
B系
T系
髓系
•2
CD79a
CD3
MPO
•
(cyt)CD22 TCRα/β
•
(cyt)IgM TCRγ/δ
•1
CD19
CD2
CD117
•
CD20
CD5
CD13
•
CD10
CD8
+
Cytokines
+
DNA
8
设门
9
08-03307
设门
全部 细胞
门内细胞
10
08-03307
11
实验室数目(个)
ASCP(美国临床病理学家协会)流式临床应用调查
140 120 100 80 60 40 20
0
流式临床应用
12
CD4 Leuk Lymph CD34 DNA MDS
Ret B27 Mito NF Plat
18
T淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic1in9e
粒细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic2in0e
单核细胞分化与抗原表达关系图
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CFra Baidu bibliotek41、CD61
29
AML-M1
30
AML-M1
31
AML-M2 32
AML-M2 33
AML-M3 34
AML-M4
35
AML-M4
36
AML-M5
37
AML-M6
38
初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
血液肿瘤分类进程
13
目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献
14
白血病免疫分型的理论基础
白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标 志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶 段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但 仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而 仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤 进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴 瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的 表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细 胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴 瘤细胞的存在。
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic2in1e
非肿瘤T淋巴 细胞表型
22
非肿瘤B淋巴 细胞表型
23
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
24
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
25
白血病免疫分型
• 根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
CD33
•
CD10
CD65
• 0.5
TdT
TdT
CD14
CD24
CD7
CD15
CD1a
CD64
• *当髓系和一个淋系积分均>2分时，则诊断为急性混合细胞型白 血病。
27
急性白血病的四大免疫类型
• 单表型急性白血病 • 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 • 双表型/双克隆急性白血病 • 未分化型急性白血病
CD4 CD3
CD8
CD3
7
抗原分布
• 表面,胞浆,核内
• 是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
DNA
Cytokines
+
DNA
CD3,4,8, tetramer
3
CD45/SS示意图
4
实验对照的设计
• 空白对照：ALL • 阴性对照：常用同型抗体对照
单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校正）
• 阳性对照：检测阴性时
5
空白对照和阴性对照的比较：
6
抗原表达
• 需要用多少的标志来确证感兴趣的细 胞群?
• 它们在细胞上的分布是不是很近? • 它们是否在不同的细胞上表达不同? • 他们表达强还是弱?