【CN109620849A】一种用于研究脊髓前角运动神经元轴突再生的小鼠模型【专利】
细胞轴突再生的研究进展及其临床意义
细胞轴突再生的研究进展及其临床意义在人类的身体中，神经系统起着至关重要的作用。
到目前为止还没有一种治疗方法可以真正有效地治愈神经损伤，损伤后的神经细胞不能自我修复是其治疗的巨大阻碍之一。
随着对细胞生物学的深入研究，人们发现神经系统细胞轴突再生的机理，并展开了一系列研究，旨在找到一种有效的治疗方法。
本文将讨论细胞轴突再生的最新研究进展以及其临床意义。
1.细胞轴突再生的机理细胞轴突再生是指细胞重新增长轴突，以恢复神经损伤区域功能。
然而，细胞轴突再生常常失败。
这是由于当轴突损伤时，轴突末端的微管网被中断，导致突触传递被阻塞。
在这种情况下，针对轴突再生的治疗方法需要重新启动微管网来恢复神经细胞的自修复能力。
2.细胞轴突再生的最新研究进展在最新的研究中，研究人员发现微管网的重新生成与蛋白质DeaD-box核酸蛋白（DDX3）有关。
DDX3是一种ATP酶，具有在微管网组装中的关键作用。
使用人工智能技术，研究人员发现DDX3能够增加轴突伸长率，并催化微管的新组装。
这些发现挑战了之前关于DDX3是如何进行微管网组装的假说，并向针对DDX3的治疗方法提供了希望。
另一个研究重点是神经元内吞作用的调节。
内吞被认为是神经细胞内轴突伸长的关键过程之一。
内吞在轴突再生中的作用被认为是通过介导内质网压力来增强轴突生长和再生。
因此，内吞的调节是轴突再生治疗的重点之一。
最新的研究表明，mTORC1信号途径在内吞中发挥重要作用。
此外，一些细胞外因子也可以影响mTORC1功能，从而改善内吞对轴突再生的促进作用。
3.细胞轴突再生的临床意义细胞轴突再生的新进展为治疗神经损伤提供了希望。
虽然完全治愈仍然是未来的目标，但现有的治疗方法却可以提升神经损伤的康复速度和质量。
其中，mTORC1信号途径和细胞外因子治疗是目前最为潜力的治疗方法之一。
mTORC1信号途径调节内吞过程，并能显著促进轴突再生。
根据最新研究，一些细胞外因子如神经生长因子和血小板衍生生长因子等，可以影响mTORC1信号途径，促进细胞内作用，从而促进轴突再生。
小鼠脊髓损伤模型的建立及神经干细胞移植后运动功能恢复情况的研究
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光定量 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 Ｎｅ ｓ ｔ ｉ ｎ的表 达 情 况 。结 果 所 有 脊 髓 打 击 后 小 鼠均 出现 双 后 肢 瘫 痪 ， 但 随 时 间延 长 运 动 功 能 可 有 不 同 程 度 恢复 ， ＮＳ Ｃ ｓ 移植 １ ４ ｄ后 治 疗 组 较 模 型组 及 对 照 组 Ｂ Ｂ Ｂ评 分 显 著 增 高 （ Ｐ＜ Ｏ ． ０ ５ ） ， 且 治 疗 组 Ｎｅ ｓ ｔ ｉ ｎ表 达 量 也 高 于 模 型 组 及 对 照组 。结 论 成 功 建 立 了小 鼠脊 髓 损 伤 打 击 模 型 ； 移 植 的 外 源 性 神 经 干 细 胞 在 脊 髓 损 伤 处 存 活 并 促 进 损 伤 后 小 鼠运 动 功 能
一种直接显示周围神经轴突再生的新方法
一种直接显示周围神经轴突再生的新方法来自中国桂林医学院附属医院王锐英研究组联合约翰霍普金斯大学医学院周峰泉研究组报道了一个极其新颖的发现，感觉轴突可在挤压部位再生，并随着时间的推移逐渐延长；而通过体内电穿孔表达增强型绿色荧光蛋白或荧光染料标记的微小RNA的背根神经节中的神经元胞体可在组织清除后成像。
啮齿动物的坐骨神经挤压伤已被广泛用作研究体内外周轴突再生的模型。
在这种模型中，轴突再生通常使用特异性轴突再生相关蛋白（例如生长相关蛋白43和神经生长相关蛋白10）免疫染色的纵向神经切片来量化。
因为神经切片的轴突再生只能通过测量距离损伤部位不同距离的轴突碎片的荧光强度来量化，因此它提供了再生轴突长度的间接测量。
此外，大多数神经挤压伤实验是在来自背根神经节神经元的感觉轴突和来自脊髓运动神经元的运动轴突混合的地方进行，并且在单个时间点处死动物以评估轴突再生。
因此，研究结果代表了2种不同神经元群体的平均轴突再生，这2个群体可能具有不同的轴突再生能力。
这种间接测量如何真实反映外周轴突再生率仍是一个悬而未决的问题。
王锐英等首先利用体内电穿孔技术分析了神经挤压伤后不同时间点体内再生感觉轴突的长度。
研究结果可为今后的外周轴突再生研究提供了重要的参考。
另外，通过荧光染料标记运动轴突，能进一步研究运动神经元和感觉神经元在类似的周围神经环境中是否具有不同的轴突再生率。
接下来采用一种快速组织清除法成功清除背根神经节和坐骨神经。
清除的背根神经节的三维成像提供了表达增强型绿色荧光蛋白或荧光染料标记的微小RNA寡聚体的感觉神经元的高质量图像。
未来，通过直接追踪感觉神经元的中心分支，结合脊髓组织清除，可以研究更多、更高分辨率的脊髓再生。
将这项成果撰写的文章发表在《中国神经再生研究（英文版）》杂志2020年6期。
文章摘要：目前大多数研究通过免疫染色再生相关蛋白来检测轴突再生，这种方法可以间接地测量背根神经节中感觉神经元和脊髓中运动神经元的轴突长度。
神经元的轴突再生机制及其临床意义
神经元的轴突再生机制及其临床意义神经元是构成神经系统的重要组成部分，它们可传递情感和控制身体运动。
然而，如果神经元受损或死亡，将会导致一系列的神经系统疾病，例如帕金森病，阿尔茨海默病等。
因此，研究如何恢复受损的神经元是一个重要的研究方向。
神经元的轴突再生机制，作为神经元损伤后恢复的重要途径，成为研究的热点。
轴突再生的基础神经元轴突的再生是指在神经元轴突损伤后通过再生途径来恢复其功能。
轴突是神经元的延伸部分，负责传递神经冲动，是神经元最长的部分。
轴突损伤很难恢复，因为它们缺乏足够的细胞质和分泌物质以进行再生。
出于这个原因，轴突再生需要一个复杂的生物化学过程，需要神经元本身的努力以及外来因素的支持。
在神经元轴突损伤后，许多因素影响再生能力。
第一，成年神经元较难再生，因为它们很难重新建立轴突-热毛细管联系，失去了再生必须的支撑和营养。
第二，轴突再生受到伤害部位的影响。
在空气中，伤口脱水并且紧张关系不畅通，会阻碍长出新的轴突。
在静脉内输注盐水可帮助贫血、血管含氧量低及糖过高的患者轴突再生。
第三，外部仪器如适当的手术刀和高清显微镜可以促进神经元再生。
细胞因子和胶原蛋白等可以促进细胞增殖和母细胞作用，以及休息和营养。
因此，神经元轴突再生的成功与否取决于复杂的因素。
神经元轴突再生机制神经元轴突损伤后，再生的生物化学过程可分为三个阶段。
第一阶段是快速清除伤口，移除神经元碎片和其他细胞的残余物。
这是再生开始的第一个重要步骤；第二阶段是神经元生长锥的形成，这是由未损伤的轴突生长出一段碎混q的神经纤维；最后是轴突再生。
这些吉饼慢慢地增长，与受损的轴突重新连接，最终恢复了功能。
神经元再生的生物化学过程涉及许多分子机制。
这些分子包括球磷酸酶，PKA和Ephrin等生化信号分子。
这些分子在神经元轴突再生过程中扮演关键角色，其中有许多尚需要更深入的研究以确定它们在再生机制中的确切作用。
最近的研究表明，miRNA和非编码RNA基因在神经元再生及其驱动因子中起着重要作用。
一种多发性骨髓瘤髓外浆细胞瘤的小鼠模型[发明专利]
![一种多发性骨髓瘤髓外浆细胞瘤的小鼠模型[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/39ec70618762caaedc33d449.png)
专利名称：一种多发性骨髓瘤髓外浆细胞瘤的小鼠模型专利类型：发明专利
发明人：史湘君,杜心如,廖学斌,杜博冉
申请号：CN201810468838.1
申请日：20180516
公开号：CN110495419A
公开日：
20191126
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种多发性骨髓瘤髓外浆细胞瘤的小鼠模型。
本发明将离体的多发性骨髓瘤患者的骨髓瘤组织(多发性骨髓瘤浸润到骨髓及髓外组织的实体瘤)，取出后通过穿刺针移植到严重免疫缺陷小鼠身上，无需人类胚胎骨骼即可成瘤，操作方便简单易行，保留有骨髓微环境和肿瘤的异质性，适于大规模的药物筛选和临床前评价。
申请人：首都医科大学附属北京朝阳医院
地址：100020 北京市朝阳区工体南路8号
国籍：CN
代理机构：北京纪凯知识产权代理有限公司
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一种小鼠脑部注射用辅助定位装置[发明专利]
![一种小鼠脑部注射用辅助定位装置[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3db21b4ef524ccbff0218497.png)
专利名称：一种小鼠脑部注射用辅助定位装置专利类型：发明专利
发明人：缪进,王旭,景瑾,蒋荧梅,邵义祥
申请号：CN201910834907.0
申请日：20190905
公开号：CN110478079A
公开日：
20191122
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种小鼠脑部注射用辅助定位装置，包括恒温底板、纵轴移动标尺和夹持组件，所述恒温底板的下表面四角螺纹连接有防滑支脚，且恒温底板的内部安装有恒温加热组件，所述恒温底板的上表面后侧固定有固定组件，所述纵轴移动标尺安装于恒温底板的左表面，且纵轴移动标尺的上端固定有立板，所述立板的内部中间位置安装有螺杆，且螺杆的顶端焊接有调节手柄，所述螺杆的外壁螺纹连接有滚珠滑台，且滚珠滑台的右侧安装有横轴移动标尺，所述夹持组件安装于横轴移动标尺的下方。
本发明通过采用定位精准度达到0.01mm的移动标尺，大大提高了整个定位装置的精准度，从而解决了现有技术中，由于小鼠海马部较小而无法精准定位的问题。
申请人：南通大学
地址：226500 江苏省南通市崇川区啬园路9号
国籍：CN
代理机构：北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：汤东凤
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一种促进神经元轴突再生的药物组合物及其应用[发明专利]
![一种促进神经元轴突再生的药物组合物及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/13e0732e6137ee06eef918d2.png)
专利名称：一种促进神经元轴突再生的药物组合物及其应用专利类型：发明专利
发明人：王利胜,余爱明,张艳,王圣鑫,钟倪俊
申请号：CN202011010385.1
申请日：20200923
公开号：CN112107587A
公开日：
20201222
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种促进神经元轴突再生的药物组合物及其应用。
所述组合物由质量比为1～4：2～8的毛蕊异黄酮苷和芍药苷组成，通过将毛蕊异黄酮苷与芍药苷以特定的配比组合联用，充分发挥了各有效成分的优势，能够减轻缺血性脑中风大鼠的脑梗死和脑水肿程度，减少脑损伤，提高受损神经元的存活率，减少神经元轴突变性并促进轴突再生延长，有效促进中风后神经功能的康复，且本发明中的药物组合简单有效，无其他组分的干扰，便于临床应用中各种有效制剂的开发。
申请人：广州中医药大学(广州中医药研究院)
地址：510410 广东省广州市白云区机场路12号大院
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：赵崇杨
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神经元轴突再生及重建的分子机制研究
神经元轴突再生及重建的分子机制研究神经元的传递是依靠轴突传递信号的，而且现今无数研究表明，神经元的轴突结构不可逆损伤是不可恢复的。
这限制了神经系统的康复疗法和创伤修复方面的研究。
近年来，神经元轴突再生及重建的分子机制研究逐渐备受关注，成为神经学领域中一个热门的话题。
轴突的再生涉及了多个领域，包括生物学、化学、物理学等。
在神经元的一次重建过程中，细胞主动增强轴突的兴趣，以迈向新的方向发展。
与此同时，轴突向生长锥释放生长锥成分，与周围环境分子进行交互，推进轴突生长，并形成特定的神经系统。
神经系统的维护和修复分子机制研究烷基化鸟苷三磷酸酯酶（Rap1）是一种小GTP酶，被广泛研究作为神经系统的维护和修复分子机制的一部分。
Rap1的活性水平不能够准确地反映出其在神经系统中的作用，因此研究人员们通过利用阶段性过度表达注射并创建了一个可感知并分析Rap1的生命信号的标志性基因 RAGQB1-Rap1-GFP。
一个Rap1的输入额外的神经元钨丝到成年(zpr1^+)和成熟（zpr1^-）生物鱼，其结果是轴突的延伸被削弱。
另外实验还发现，适当改变轴突活性与循环速度的神经系统信号，可以こ专注这些信号的功能，以有目的地控制放大轴突组成的骨干，促进神经元轴突的再生和重建。
Ras谷氨酸酰基转移酶（Ras）是一个另一个在神经元轴突重建中所发挥作用的GTP酶。
近年来，一系列关于Ras勒芬细胞的研究表明，Ras在轴突的肥大化和分叉阶段发挥作用。
Ras是通过N-Methyl-D-aspartic acid（NMDA）遗传项目来激活的，NMDAR是一种兴奋的胞浆性离子通道，是轴突分支的转移信号。
这里补充说一下，NMDAR是促进脑神经发育的另一个关键分子机制。
它是神经系统中的最重要兴奋蛋白的一种，并通过mTORC1通道来诱导轴突的发育。
研究表明，NMDAR和Ras的信号途径是轴突膜重建和再生中的核心路径，在维持神经圆柱形态和功能这一方面具有主导地位。
小鼠脊髓前角运动神经元的分离、培养和鉴定
小鼠脊髓前角运动神经元的分离、培养和鉴定吕辉;刘路路;付婷婷;孔庆霞;乔保俊;王玉忠【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2016(039)003【摘要】目的:探讨一种分离小鼠脊髓前角运动神经元的方法,为运动神经元相关的研究提供依据.方法:分离13 d的C57BL/6胎鼠脊髓,利用Optiprep分离液经密度梯度离心获得脊髓前角运动神经元,培养后观察神经元细胞形态的变化,免疫荧光双标法对分离运动神经元的纯度进行判定.结果:将分离到的运动神经元进行培养,能够观察到典型的神经元细胞形态及轴突生长.免疫荧光双标证明培养的细胞为运动神经元细胞,纯度约95％.结论:Optiprep分离液用于小鼠运动神经元的分离,可获得良好的分选效果.Optiprep分离液可用于运动神经元相关的研究.【总页数】3页(P305-307)【作者】吕辉;刘路路;付婷婷;孔庆霞;乔保俊;王玉忠【作者单位】天津医科大学研究生院,天津300070;济宁医学院附属医院神经内科,济宁272000;济宁医学院附属医院中心实验室,济宁272000;天津医科大学研究生院,天津300070;济宁医学院附属医院神经内科,济宁272000;济宁医学院附属医院神经内科,济宁272000;济宁医学院附属医院神经内科,济宁272000;济宁医学院附属医院神经内科,济宁272000;济宁医学院附属医院中心实验室,济宁272000【正文语种】中文【相关文献】1.小鼠肝实质细胞的分离、鉴定及原代培养 [J], 陈阳洁;高柯欣;王智豪;李峰;张琳琳;刘娇;陈晓光2.小鼠子宫内膜间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 李红霞; 李瑞娇; 张汝月; 张引红; 郭兴萍3.小鼠支气管肺泡干细胞的分离、鉴定与三维培养体系的构建 [J], 王淑艳; 陈以文; 于雪; 刘丹彤; 盛春瑞; 畅洪昇; 李丽娜4.小鼠肺间充质干细胞的分离、培养和鉴定 [J], 石桂英;黄艺滢;雷雪裴;路亚岚;白琳5.小鼠羊水间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 吴航飞;王康淳;潘崎;程颖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脊髓损伤后神经元轴突内在再生能力调控策略的 研究进展
脊髓损伤后神经元轴突内在再生能力调控策略的研究进展王淑影;王莹;李艺;邹宇航;刘东明;李文媛
【期刊名称】《医学综述》
【年(卷),期】2024(30)8
【摘要】脊髓损伤(SCI)是一种严重的神经损伤且不可逆转,其全球发病率较高,但治疗方法十分有限。
SCI后神经元轴突再生乏力及神经环路阻断使其功能恢复受到严重影响。
神经元轴突再生在SCI后传递上、下行感觉和运动信号及其功能恢复中发挥重要作用,目前对促进SCI后轴突再生的研究主要聚焦于以下3个方面:外源性抑制、神经元内在再生能力、生长因子,其中通过增强神经元轴突内在再生能力促进脊髓神经环路重塑成为研究热点。
近年来,探究如何激活神经元轴突内在再生能力在SCI治疗中取得一些进展,并且发现了许多影响SCI轴突再生能力的分子。
未来,对SCI轴突内在再生能力进行深入探讨有助于开发更好的SCI治疗方法。
【总页数】6页(P897-901)
【作者】王淑影;王莹;李艺;邹宇航;刘东明;李文媛
【作者单位】牡丹江医学院神经组织工程研究所;牡丹江医学院临床医学院;牡丹江市北药资源开发与应用协同创新中心
【正文语种】中文
【中图分类】R651.2
【相关文献】
1.Rho/ROCK通路在脊髓损伤后神经轴突再生中的研究进展
2.大鼠臂丛神经损伤后脊髓运动神经元再生轴突的路径
3.转基因细胞分泌的神经营养因子可诱导成年脊髓损伤后其不同感觉．运动和去甲肾上腺素能神经元轴突的超常生长
4.血清反应因子(SRF)促进脊髓损伤后神经元轴突再生机制研究
5.漆黄素调控星形胶质细胞活化促进脊髓损伤后神经元轴突再生的研究
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中枢神经系统髓鞘再生的生物学机制
髓鞘再生是机体应对轴突脱髓鞘而导致的神经系统损伤的 一 种 自 发 的 再 生 机 制 。 中 枢 神 经 系 统 （central nervous system， CNS） 的 髓 鞘 再 生 是 通 过 少 突 胶 质 细 胞 合 成 新 的 髓 鞘 以 覆 盖 暴 露的轴突而实现。 在多发性硬化中， 阴影斑块的出现证明髓鞘 再生活动是在髓鞘受到炎性攻击后的一种修复机制。 髓鞘再生 过程与脱髓鞘的神经元功能恢复密切相关。 认识髓鞘再生的生 物学特点， 有助于我们思考治疗多发性硬化的新策略。 现就中 枢神经系统髓鞘再生的生物学机制进行简要综述。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910127084.8
(22)申请日 2019.02.20
(71)申请人 苏州大学
地址 215000 江苏省苏州市相城区济学路8
号
(72)发明人 赛吉拉夫 马艳霞 王丰 张鸿程
齐士斌 马进进 张浩楠 徐金辉
秦绪祯
(74)专利代理机构 苏州市中南伟业知识产权代
理事务所(普通合伙) 32257
代理人 杨慧林
(51)Int.Cl.
A61K 35/76(2015.01)
(54)发明名称
一种用于研究脊髓前角运动神经元轴突再
生的小鼠模型
(57)摘要
本发明公开了一种用于研究脊髓前角运动
神经元轴突再生的小鼠模型，属于动物模型技术
领域。
本发明首次使用AAV -cre病毒和Rosa -
tdTomato flox条件性基因敲除小鼠进行小鼠模
型构建，并提供了在脊髓前角立体定位注射的方
法和坐标，标记了脊髓前角运动神经元。
本发明
构建的小鼠模型模型为脊髓前角运动神经元轴
突再生的研究提供了动物模型。
权利要求书1页 说明书4页 附图4页CN 109620849 A 2019.04.16
C N 109620849
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109620849 A
1.一种用于研究脊髓前角运动神经元轴突再生的小鼠模型的构建方法，其特征在于，在Rosa-tdTomato flox条件性基因敲除小鼠脊柱L1的前角部位注射AAV-Cre病毒。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的AAV-Cre病毒的滴度为1×1012～14。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的AAV-Cre病毒的注射量为0.5～1.5ul。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的脊柱L1的前角部位为以小鼠脊髓中央管为中线，向左或向右0.4～0.6mm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的注射的方式为将针尾向小鼠头部倾斜25～35o向下进针0.8～1.2mm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的注射的时间为5～6min，停针5min，退针2～3min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的Rosa-tdTomato flox条件性基因敲除小鼠培养至6～8周。
8.一种权利要求1～7任一项所述的方法构建得到的小鼠模型。
9.权利要求8所述的小鼠模型在脊髓前角运动神经元轴突损伤后再生研究中的应用。
2。