实验一量校关系曲线的测定

实验一量校关系曲线的测定

一目的

1 用宼氏法测定LD

50

和95%可信限。

2 计算LD

50

。

3 理解其药理学意义。

二原理

药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布，以对数剂量为横坐标、死亡率为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率的改变不易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂量稍有变动时，其死亡率变动最明显，即最灵敏，在技术上也最容易测得准确，所以人们常选用LD50值作为反映药物的指标。若将死亡率换算成机率单位，则对数剂量与机率单位呈直线关系，用数学方法可拟合其回归方程式，可精确地计算LD50及引起任何死亡率的剂量及相关数据。

三实验材料

1 实验动物 18～22g健康小白鼠50只（正式实验），雌雄各半（雌鼠应无孕），实验前禁食12h，不禁水。

2 器材与药品注射器（1ml）、电子天平、小鼠笼、苦味酸、品红、甲基紫、戊巴比妥钠。

四试验方法

1 预备试验用少量动物9～12只，分3～4组，逐步摸索出是全部动物死

亡的最小剂量LD

100和一个动物也不死亡的最大剂量LD

，至少应找出引起20%～

80%死亡率的剂量范围，以保证量-效曲线跨越足够的范围。一般选组数5~8组，组距i大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性，一般要求i应小于，多在~之间。戊巴比妥钠小鼠腹腔注射（ip）引起0%和100%动物死亡的剂量范围的参考值以测得：最小剂量（Dmin）kg，最大剂量（Dmax） kg。

2 正式实验

（1）小白鼠的选取与分组取小白鼠50只，将小鼠雌、雄分开。分别称重，标记小鼠（雌黄，雄红）。雌、雄小鼠分别按重量顺序分层随机分为5组，使不同性别和体重的小鼠能均匀分配于各组，每组10只。

（2）药液配制按等比稀释法配制药液

最高浓度药液（母液）的配制小鼠腹腔注射体积为10g= 20ml/kg，每组药液量为4ml左右，为留有余地，各组动物所需药液体积定为6ml。由预备实验可知，最大剂量（Dmax） kg，换算成质量体积比为 mg/ ml。故得母液所需药量M=V’* mg/ ml=。

药品加适量生理盐水，定容至30ml，混匀→第一组取6ml，剩余24 ml 再定容至30 ml，混匀→第二组取6ml。以次取至第五组。

（3）给药各组动物分别腹腔注射相应浓度的药液10g，开始15min内严密观察，以呼吸停止为指标，准确结果为24h内的死亡数。

五结果

组别动物数剂量对数剂量死亡数死亡率存活率（只）（ mg/kg ）（只）

1 10 8 80% 20%

2 10 10 100% 0%

3 10 5 50% 50%

4 10 0 0% 100%

5 10 0 0% 100%

确定组距i：把上下限的剂量换算成对数值，设上限剂量的对数值为 X

m

，

下限剂量的对数值为 X

n ，组数为n，则： i ＝（X

m

-X

n

） / （n-1）。得i=

确定各组剂量：由 X

n 逐次加 i （或由 X

m

逐次减 i），得出各组剂量的对

数值，再分别查反对数，即得出各组剂量（呈等比级数排列）。

由最高死亡率100%可确定LD

50

的计算公式（基本公式）：

LD

50=lg-1[X

m

-i(Σ] ΣP为各组死亡率之和。得LD

50

=kg

LD

50

的95%可信限的计算公式=lg-1(lgLD

50

±×S

x50

)

其中S

x50公式得S

x50

=。

得LD

50

的95%可信限为~ mg/kg 。

六讨论

1 数据处理：由于本实验课实验参与人数较多，存在较大的误差，尤其是1组

与2组的实验数据，因此，求LD

50

中的最大致死量剂量仍为1组的剂量。

2 随机性：实验中能控制的因素尽量使之均衡化，难以控制的因素也应力求严格随机化。分组时应先将不同性别分开，再将不同体重分开，然后随机分配，此法称为分层随机分组法。

（2）剂量按几何级数排列，转换为对数后，剂间为等距，便于计算结果，估计误差。相邻高低剂量之比一般为1:～1:，剂距小，结果较精确，但过小易出现反应率颠倒的情况。剂距的大小也与给药途径有关，静脉给药时，剂距可偏小，灌胃给药时可适当偏大。

（3）药物及给药途径应以静脉注射、腹腔注射和灌胃给药为主，选取的途径必须包括推荐临床给药途径。

（4）LD50受试验中多种因素的影响，如动物的品系、性别、年龄、饥饱以

及环境因素中室温、湿度、光照、时辰（上、下午）等。当进行两药的毒性比较时，应尽可能在相同条件下进行，以减少抽样误差。

（5）在试验过程中应详细记动物的中毒症状及可能致死原因，必要时解剖死亡动物肉眼观察，如发现有组织病变时，可进行组织学检查，通常动物死亡多出现在给药后1～2日内，但全部试验应观察7日以上，如遇有迟发性或进行性中毒反应时，需根据实际情况延长观察时间。若发现中毒反应和死亡率对不同动物性别有明显差别，则应选择比较敏感的性别进行试验。

（6）当药物毒性小，以最大浓度和最大体积给药后仍测不出致死毒性时，可测定最大耐受量：即用临床试验的给药途径，以动物能耐受的最高浓度、最大容积的剂量1次或1日内连续2～3次给予动物（小白鼠至少20只，雌雄各半），连续观察7天，详细记录动物反应情况，以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量。