不同提取方法对类球红细菌超氧化物歧化酶抗氧化活性的影响
SOD(超氧化物歧化酶)活性测定
SOD(超氧化物歧化酶)活性测定氮蓝四唑法一、原理超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)普遍存在动、植物的体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它催化下面的反应：o 2.-+H O 222+O H ＋反应产物H 2O 2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。
在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易被氧化而产生超氧阴离子，超氧阴离子可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大吸收。
而SOD 可清除超氧阴离子，从而抑制了甲腙的形成。
于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶的活性愈低，反之酶的活性俞高。
据此可计算出酶活性的大小。
二、材料、仪器设备及试剂(一)材料植物器官(花瓣、叶片等)(二)仪器设备冰箱、低温高速离心机、微量加样器 (1mL 、20μL 、100μL)、移液管、精密电子天平、UV-752型紫外分光光度计、试管、研钵、剪刀、镊子、荧光灯(反应试管处照度为4000Lux 或Lx)(三)试剂(1) 0.05mol/L 磷酸缓冲液(PH7.8)。
(2) 130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液：称1.9399gMet 用磷酸缓冲液定溶至100mL 。
(3)750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT 用磷酸缓冲液定溶至100mL ，避光保存。
(4)100μmol/LEDTA -Na 2溶液：称取0.03721g EDTA-Na 2，用磷酸缓冲液定溶1000mL 。
(5)20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g 核黄素用蒸馏水定溶到1000mL ，避光保存。
三、试验步骤(一)酶液的提取(1)称取植物材料(去叶脉)0.2g ，加1ml 预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使体积为5mL。
取2mL于1000r/min下离心20min，上清液即为SOD粗提液。
超氧化物歧化酶SOD的分离纯化技术
超氧化物歧化酶SOD的分离纯化技术摘要通过对绿豆种子的研磨破碎获得SOD粗酶，经过硫酸铵分级分离、透析除盐和浓缩等过程，除去粗酶液中的杂质及干扰蛋白，采用葡聚糖（Sephadex G-100）凝胶层析得到纯化的SOD酶。
跟踪提纯过程活性的分布，并评价提取过程各步骤的效率。
实验结果证实随着不断的分离提纯，总活力不断减小，比活力不断上升，总纯化倍数为1.87，活性得率为0.3768%。
一、前言超氧化物歧化酶(superoxide dsdismutase，SOD)是需氧化物中以超氧阴离子为底物的一种酶，广泛存在于各种生物中。
SOD不仅在生物体内对抗氧化、解毒起重要作用，也有延缓机体衰老、抗肿瘤及抗免疫性疾病等功能，因而受到极大关注。
SOD属于金属酶，其理化性质不仅取决于蛋白质部分，而且还取决于结合到活性部位的金属离子。
按照结合的不同金属离子，生物体中SOD有Cu、Zn-SOD、Mn-SOD和Fe—sOD三种，但近几年发现低等生物中尚存在含Ni的SOD。
在已发现的酶中，超氧化物歧化酶(SOD)是需氧生物和耐氧生物的体内清除超氧化物自由基的酶超氧自由基在体内的过多积累将可能引发脂质过氧化损伤DNA，使脱水酶失活，使线粒体中的NADH脱氢酶NADH氧化酶磷酸腺苻酶(ATPase)失活，从而易引起生物体发疾病或衰老。
自从1968年McCord与Fridovich发现SOD及其催化超氧化物自由基歧化为O2与H2O以来，SOD一直以來被认为是生物体内最重要的抗氧化酶。
根据近10年的研究报告表明，SOD具有清除超氧化物自由基，防止其对机体直接或间接的损伤；使O2成为细胞内自由基的排污漕；调节机体内O 的水平；调节机体内NO水和催化反应产物H2O2等作用。
现在在日常生产应用中，多以动物血液中提取SOD。
但是动物血液中的疾病很多，价格也比较昂贵。
从植物中提取SOD就可以相应的解决上述问题，类似绿豆芽这种植物，其成本低廉，且SOD 的含量丰富，又无污染，将其大量应用于生产有着很好的发展前景。
《超氧化物歧化酶的研究》论文
超氧化物歧化酶的研究年级：大三专业：化学学号：189940012姓名：邢敏超氧化物歧化酶的研究超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，简称SOD)是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶。
它广泛存在于各类动物、植物、微生物中，是一种重要的抗氧化剂，保护暴露于氧气中的细胞，可清除生物体内超氧阴离子自由基,有效地抗御氧自由基对有机体的伤害。
氧化还原反应是生命体最重要的代谢途径，它不仅为生物提供能量，同时还决定着生命体的衰老和死亡。
氧对于生命活动极其重要，但氧参与的代谢经常产生一些对细胞有毒害作用的副产物———氧自由基，即通常所说的活性氧(reactiveoxygen species，ROS)。
细胞产生的活性氧包括:超氧根阴离子(O·－2)、氢氧根离子(OH－)、羟自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(·2)和过氧化物自由基(ROO·)。
它们都能通过氧化应激损伤细胞大分子，引起一系列有害的生化反应，造成蛋白质损伤、脂质过氧化、DNA突变和酶失活等。
为了防止氧自由基对细胞体的破坏，几乎所有细胞都有一套完整的保护体，来清除细胞新陈代谢产生的各种活性氧。
其中，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)在保护细胞免受氧自由基的毒害中发挥着重要作用。
早在1969年，Mc Cord和Fridovich发现了一种血球铜蛋白能清除自由基(O·－2)，并且将这种血球铜蛋白命名为超氧化物歧化酶(SOD)。
SOD几乎存在于所有生物细胞中，通过把O·－2转化为H2O2，H2O2再被过氧化氢酶和氧化物酶转化为无害的水(H2O)，从而达到清除细胞内氧自由基，保护细胞的目的。
1.超氧化物歧化酶的作用机理SOD是一种重要的抗氧化剂，保护暴露于氧气中的细胞。
其能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢主要通过以下两步完成:这里M代表金属辅因子，M3+代表金属辅因子的最高价，M2+代表金属辅因子被氧化以后的价位。
食品中抗氧化酶的提取与鉴定研究
食品中抗氧化酶的提取与鉴定研究引言：随着现代生活节奏的加快，人们饮食习惯的改变和外在环境的污染，人体内自由基的产生量逐渐增多。
自由基的累积会引起氧化应激，导致细胞膜、酶及DNA 的损伤，并与多种慢性疾病的形成相关。
抗氧化酶作为一种重要的抗氧化物质，在食品中的提取和鉴定，对于人类健康具有重要的意义。
一、抗氧化酶的提取方法研究抗氧化酶主要存在于植物、微生物和动物中。
针对不同抗氧化酶的特性，研究者提出了多种提取方法。
例如，对于超氧化物歧化酶(SOD)，目前广泛采用超声波辅助提取的方法，利用超声波激发的高能量来破坏细胞壁，使超氧化物歧化酶能够更好地释放出来。
而对于过氧化物酶(catalase)的提取，则常使用超低温法，通过冷冻后快速破碎细胞，使过氧化物酶保持活性。
二、抗氧化酶的鉴定研究抗氧化酶的鉴定是确定提取物中是否存在抗氧化酶，并进一步确定其种类和活性水平的过程。
目前常用的鉴定分析手段主要包括酶活力测定、SDS-PAGE凝胶电泳、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等方法。
1. 酶活力测定：通过检测抗氧化酶对底物的催化反应速率来评估其活性。
以SOD为例，可以采用超氧阴离子自发光法和硝基蓝法来测定其活性水平。
2. SDS-PAGE凝胶电泳：通过电泳将样品中的蛋白质分开，并进一步采用染色等方法来观察抗氧化酶的存在和相对分子质量等特性。
3. RT-PCR：通过提取RNA，合成cDNA，再进行PCR扩增反应来检测抗氧化酶基因的存在与活性。
三、食品中抗氧化酶的应用前景抗氧化酶具有很强的抗氧化能力，对于减少自由基的损害具有重要的意义。
食品中的抗氧化酶提取和鉴定研究，不仅有助于开发具有抗氧化功能的食品添加剂，还可以为人们的健康饮食提供科学依据。
目前，抗氧化酶在食品工业中的应用已经取得了一些进展，比如将SOD添加到饮料中，延长其保质期，或将其添加到生肉制品中，减少氧化反应。
然而，需要注意的是，虽然抗氧化酶在食品中的应用前景广阔，但其稳定性和生物利用率等问题仍待解决。
超氧化物歧化酶SOD的分离纯化实验报告
超氧化物歧化酶SOD的分离纯化技术证明SOD提取过程工艺不同浓度的硫酸铵对纯化SOD蛋白酶的效果的综合影响一、摘要：通过对绿豆的研磨破碎获得SOD粗酶，经过(NH4)2SO4分级分离、透析除盐和浓缩等过程，除去粗酶中的杂质及干扰蛋白。
二、关键词：SOD 连苯三酚自氧化法SOD酶活性测量透析除盐三、前言：超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase），简称SOD，是一种新型酶制剂，属金属酶.它是一种源于生命体的活性物质，SOD是机体内危害最大的氧自由基专一清除剂，亦是其他自由基最有效的清除剂，它与体内的谷胱甘肽过氧酶、过氧化氢酶联手，把自由基转化为水和氧分子。
能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。
对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。
本实验以绿豆为原料提取SOD，通过各步的分离提纯，应测得酶总活力逐渐减小，比活逐渐升高.通过本实验掌握物质分离纯化的实验设计过程，以及硫酸铵分离、透析除盐、浓缩和葡聚糖凝胶层析等物质分离技术。
四、实验技术路线：我们的这次试验主要的路线是通过测定经过不同浓度的硫酸铵分离出来的不同的SOD蛋白的上清和沉淀，以此来确定硫酸铵沉淀SOD酶和其他杂蛋白的一个大致区间。
经过40%的硫酸铵和50%的硫酸铵作用过后的提取液，得到40%的上清和沉淀，50%的上清和沉淀。
然后分别测定这4份样品的SOD酶活力，来推理出硫酸铵沉淀区间。
五、材料和试剂：绿豆（实验使用前需先用蒸馏水浸泡20h）；连苯三酚（使用时需先稀释5倍）；硫酸铵（粉末）；Tris-HCL缓冲液；蒸馏水。
六、仪器：匀浆机；低温离心机；分光光度计；移液枪；500ml量筒；纱布；烧杯和试管若干。
七、实验步骤：1、取30g绿豆，并加入300ml蒸馏水，用匀浆机匀浆。
2、匀浆出来的豆液用二层纱布过滤，离心（5℃，3000rpm / 8min）取上清液，取1ml上清液测量其总活性（用连苯三酚自氧化测SOD活性法），其余量取150ml分装成两支各75ml。
超氧化物歧化酶测定原理
超氧化物歧化酶测定原理超氧化物歧化酶（SOD）是一种重要的抗氧化酶，它能够将超氧自由基（O2-）转化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2），从而保护细胞免受氧化损伤。
SOD的活性与许多疾病的发生和发展密切相关，因此，测定SOD活性已成为临床和科研领域中的重要课题。
一、SOD的分类SOD主要分为三种类型：Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和Fe-SOD。
其中，Cu/Zn-SOD广泛存在于细胞质和细胞外液中，Mn-SOD主要存在于线粒体中，而Fe-SOD则主要存在于细菌中。
二、SOD的测定方法目前，常用的SOD测定方法主要有四种：xanthine氧化法、nitroblue tetrazolium（NBT）还原法、cytochrome c氧化法和光谱法。
其中，光谱法是最常用的方法之一，其原理是利用SOD对自由基的清除作用，使得超氧自由基的产生量减少，从而使得还原型巴比妥酸（BBS）的吸收峰发生变化。
通过测定BBS吸收峰的变化，可以计算出SOD的活性。
三、SOD测定的注意事项在进行SOD测定时，需要注意以下几点：1. 样品的处理：样品的处理对SOD测定结果有很大的影响。
一般来说，样品需要在低温下保存，并且在测定前需要进行适当的处理，如去除蛋白质、离心等。
2. 反应体系的选择：不同的反应体系对SOD的测定结果也有影响。
一般来说，选择合适的反应体系可以提高测定的准确性和灵敏度。
3. 测定条件的控制：测定条件的控制也是SOD测定中非常重要的一点。
例如，温度、pH值、反应时间等都需要严格控制，以保证测定结果的准确性和可重复性。
四、SOD的应用SOD的应用非常广泛，主要包括以下几个方面：1. 临床诊断：SOD活性与许多疾病的发生和发展密切相关，如心血管疾病、肿瘤、糖尿病等。
因此，测定SOD活性可以作为这些疾病的诊断指标之一。
2. 药物研发：SOD活性的测定可以用于药物研发中的药效评价和毒性评价。
3. 食品保鲜：SOD可以作为一种天然的抗氧化剂，可以用于食品保鲜和防腐。
实验三超氧化物歧化酶(SOD)的提取及活性测定
七、思考题，完成实验报告
1 什么是分段盐析，为什么要分段盐析籽粒
2. 主要试剂 1、0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）,500mL 2、氯仿-乙醇混合液：氯仿:无水乙醇=3:5 3、丙酮：用前需预冷至4-10℃ 4、0.05mol/L碳酸盐缓冲液（pH10.2） 5、0.1mol/LEDTA溶液
2.3 仪器 恒温水浴锅、 冷冻高速离心机、 可见分光光度计、 研钵、玻棒、烧杯、量筒，等。
生物技术综合实验
实验三 超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活性测定
一、目的和要求 通过植物材料（玉米）超氧化物歧化 酶（SOD）的提取及活性测定，掌握硫 酸铵盐析沉淀蛋白质及超滤浓缩蛋白质的 方法和原理。
二、实验原理
超氧化物歧化酶（SOD）广泛存在于植物 体内，它是一种重要的自由基清除剂，对 生物体有多种保护作用。超滤是一种蛋白 质浓缩方法，只要选择适当的滤膜可将玉 米浆中的SOD与其他小分子杂蛋白、可溶 性糖等分离。
4、SOD的沉淀分离：粗酶液中加入等体积 的冷丙酮，搅拌15min，5000rpm离心 15min，得SOD沉淀。将SOD沉淀溶于 0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）中，于5560℃热处理15min，得到SOD酶液。
3.2 SOD活性测定 试剂（mL） 空白对照管 样品管 碳酸缓冲液 5.0 5.0 EDTA溶液 0.5 0.5 蒸馏水 0.5 — 样品液 — 0.5 混合均匀，在30℃水浴中预热5min，测定 OD480
四、操作步骤
4.1 SOD粗提液的制备
1、组织细胞破碎：称取5g大蒜蒜瓣或玉米 种子，置于研钵中研磨。 2、SOD的提取：破碎后的组织中加入2-3 倍体积的0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）， 继续研磨20min，使SOD充分溶解到缓冲液 中，然后在5000rpm下离心15min，取上清 液。 3、除杂蛋白：上清液加入0.25体积的氯仿乙醇混合液搅拌15min，5000rpm离心 15min，得到的上清液为粗酶液。
花青素的提取工艺与抗氧化性能研究
花青素的提取工艺与抗氧化性能研究花青素是一类具有抗氧化性能的天然色素，广泛存在于植物的花瓣、果实和根茎中。
近年来，随着人们对天然食品添加剂的需求增加，花青素的提取工艺和其抗氧化性能的研究引起了广泛关注。
1. 花青素的提取工艺花青素的提取工艺主要包括溶剂提取法、超声波辅助提取法和酶法提取等。
其中，溶剂提取法是最常用的方法之一。
该方法首先将植物材料粉碎成合适大小的颗粒，然后加入适量的溶剂进行浸提。
常用的溶剂有乙醇、乙酸乙酯和甲醇等。
超声波辅助提取法是在溶剂提取法的基础上，加入超声波的作用，提高提取效率。
酶法提取是在溶剂提取的基础上，加入合适的酶，通过酶的作用解聚细胞壁，促进花青素的释放。
2. 花青素的抗氧化性能花青素具有强大的抗氧化性能，可以清除自由基，抑制氧化反应的发生。
研究表明，花青素比维生素C和维生素E的抗氧化活性更强，对人体健康具有重要作用。
花青素抗氧化的机制主要通过两种方式实现：一是直接清除自由基，包括超氧离子自由基、羟自由基等；二是通过间接作用，促进人体内抗氧化酶的活性，如谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶等。
3. 花青素提取工艺对其抗氧化性能的影响花青素的抗氧化性能受到提取工艺的影响，不同的提取方法和条件会导致提取物中花青素含量和抗氧化活性的差异。
研究发现，超声波辅助提取法能够显著提高花青素的提取效率和抗氧化活性，这是由于超声波能够破坏细胞壁结构，释放更多的花青素。
酶法提取也能够提高花青素的提取效率和抗氧化活性，酶的作用能够有效分解细胞壁，加速花青素的释放。
4. 花青素在食品和医药领域的应用由于花青素具有良好的抗氧化性能和健康功效，它被广泛应用于食品和医药领域。
在食品领域，花青素可以用作天然色素，增加食品的色彩和吸引力。
在医药领域，花青素具有很好的抗炎、抗衰老和抗肿瘤活性，可以用于开发抗氧化剂和抗癌药物。
总之，花青素的提取工艺与其抗氧化性能密切相关。
通过选择合适的提取方法和条件，可以提高花青素的提取效率和抗氧化活性，为其在食品和医药领域的应用提供更好的基础。
不同提取方法对槐米多糖抗氧化活性的影响_范巧宁(1)
crude polysaccharides of extracts of different methods from Flos Sophora were promising free radical scavenger
and antibacterial activity.
Key words： Flos Sophora； crude polysaccharides； antioxidant activity； free radical； scavenging rate
纯，美 国 Sigma 公 司 产 品； 三 羟 基 甲 基 氨 基 甲 烷
（ Tris） 、邻 苯 三 酚 （ 焦 性 没 食 子 酸 ） 、三 氯 化 铁
（ FeCl3 ） 、六 氰 合 铁 化 钾（ ［K3 Fe （ CN） 6 ］） 、三 氯 乙 酸 （ TCA） 、苯酚、浓硫酸、乙醇（ 95% ） 、抗坏血酸（ VC ） 、磷 酸二氢钠、磷酸氢二双氧水、硫酸亚铁、水杨酸、盐酸、
测多糖含量，考 查 超 声 功 率 对 槐 米 多 糖 得 率 的 影 响
情况。
1.2.3 多糖含量测定及得率计算 多糖含量的测定 采用苯 酚 － 硫 酸 法［10］。精 确 称 取 粗 多 糖 10.0mg 溶
解，定容至 100mL 容量瓶中，吸取该溶液 1.0mL 于试
管中，依次加入 5% 苯酚溶液 1.0、5.0mL 浓硫酸，静置
为 2.5mL 的磷酸盐缓冲液（ pH = 6.6） 和 2.5mL 的铁
氰化钾溶液（ 1% ） ，混匀，50℃ 水浴 20min 后，再加入
2.5mL、10% 的三氯乙酸溶液，然后以 3000r / min 离
心分离 10min，取上层清液 2.5mL，依次加 2.5mL 蒸馏
不同提取方法对食品中抗氧化物质提取率的影响
不同提取方法对食品中抗氧化物质提取率的影响随着人们对健康意识的提高，食品中的抗氧化物质越来越受到关注。
抗氧化物质可以帮助人体抵抗自由基的损害，预防多种疾病的发生。
然而，食物中的抗氧化物质通常存在于复杂的基质中，为了充分提取这些物质，研究者们开发了各种不同的提取方法。
本文将探讨不同提取方法对食品中抗氧化物质提取率的影响，并分析其优缺点。
常见的抗氧化物质提取方法包括溶剂提取法、超声波提取法、微波辅助提取法和酶解法等。
溶剂提取法是一种传统而常用的方法，它通过选择合适的溶剂将抗氧化物质从食品基质中提取出来。
溶剂提取法的优点在于简单易行，适用于多种食品样品。
然而，这种方法通常需要较长的提取时间，且溶剂的选择和溶剂比例的确定对提取效果有较大的影响。
超声波提取法是近年来发展起来的一种新兴的提取方法。
超声波的高频振动可以使溶剂在短时间内产生较大的压力和温度变化，促进抗氧化物质的释放和扩散。
相比于传统的溶剂提取法，超声波提取法具有提取速度快、效果好的特点。
不过，超声波提取法也有一些局限性，比如对仪器设备的要求较高，而且可能会引起样品的破坏。
微波辅助提取法是将微波辐射和溶剂提取相结合的一种方法。
微波辐射可以迅速加热溶剂和样品，促使溶剂中的抗氧化物质溶解和扩散。
相比于传统的提取方法，微波辅助提取法具有提取效率高、时间短的特点。
然而，微波辐射对样品的选择性加热可能导致抗氧化物质的分解或失活，因此在使用该方法时需要控制辐射的功率和时间。
酶解法是利用酶的特异性作用来分解食品中的抗氧化物质。
这种方法适用于含有多糖类物质的食品样品，通过选择合适的酶，可以将抗氧化物质从复杂基质中释放出来。
酶解法的优点在于选择性较好，不会引起样品的破坏。
但是，这种方法的操作相对复杂，酶的价格也较高。
综上所述，不同的提取方法对食品中抗氧化物质提取率有很大的影响。
根据实际需求和样品特性选择合适的提取方法是十分重要的。
此外，还可以通过改进提取条件和结合不同提取方法的优点来提高提取效率。
《酶类与非酶类天然提取物抗氧化性研究》范文
《酶类与非酶类天然提取物抗氧化性研究》篇一一、引言抗氧化性研究是近年来生物学和医药学领域的热点研究之一。
天然提取物中的抗氧化剂具有抗衰老、预防疾病和促进健康等重要作用。
在众多天然抗氧化物质中，酶类和非酶类天然提取物因其独特的生物活性和稳定性，备受关注。
本文旨在探讨酶类与非酶类天然提取物的抗氧化性，为进一步了解其作用机制和开发应用提供理论依据。
二、酶类天然提取物的抗氧化性研究酶类天然提取物主要包括蛋白酶、多酚氧化酶等，它们在植物、动物和微生物等生物体内广泛存在。
这些酶类具有较高的抗氧化活性，能够清除自由基，减缓氧化反应的进行。
研究表明，蛋白酶类天然提取物能够通过分解蛋白质产生具有抗氧化作用的肽类物质，从而发挥抗氧化作用。
此外，一些蛋白酶还具有直接清除自由基的能力，如超氧化物歧化酶（SOD）能够催化超氧阴离子自由基的歧化反应，生成氧气和过氧化氢，从而减轻氧化应激对机体的损害。
三、非酶类天然提取物的抗氧化性研究非酶类天然提取物主要包括多酚、黄酮、生物碱等化合物。
这些化合物在植物中广泛存在，具有较高的抗氧化活性。
多酚类化合物如茶多酚、葡萄籽多酚等，能够通过提供氢原子或电子与自由基结合，终止自由基的连锁反应，从而达到抗氧化效果。
黄酮类化合物如黄芩苷、芦丁等，具有清除自由基、抑制脂质过氧化等作用。
此外，一些生物碱如绿茶中的儿茶素也具有较好的抗氧化活性。
非酶类天然提取物的抗氧化作用不仅表现在其直接的清除自由基能力，还与其能够调节机体内的氧化还原平衡、提高机体的抗氧化能力有关。
四、酶类与非酶类天然提取物的比较研究酶类与非酶类天然提取物在抗氧化性方面各有优势。
酶类天然提取物通常具有较高的特异性和催化效率，能够在生物体内发挥较为复杂的生物调节作用。
然而，由于其分子结构较为复杂，提取纯化难度较大，成本较高。
相比之下，非酶类天然提取物的分子结构相对简单，提取纯化较为容易，成本较低。
此外，非酶类天然提取物在清除自由基、抑制脂质过氧化等方面也具有较好的效果。
《酶类与非酶类天然提取物抗氧化性研究》
《酶类与非酶类天然提取物抗氧化性研究》篇一一、引言抗氧化性研究是近年来生物学和医药学领域的热点研究之一。
天然提取物中的抗氧化剂具有对机体氧化应激反应的抑制作用，可以有效地保护细胞免受氧化损伤。
其中，酶类和非酶类天然提取物因其独特的生物活性和安全性，在抗氧化性研究中备受关注。
本文旨在探讨酶类与非酶类天然提取物的抗氧化性及其作用机制，为相关研究提供理论依据。
二、酶类天然提取物的抗氧化性研究酶类天然提取物主要包括植物酶、动物酶和微生物酶等。
这些酶类在生物体内具有催化作用，同时也具有抗氧化性。
首先，植物酶类如木瓜酶、菠萝酶等，因其含有丰富的多酚、黄酮等抗氧化成分，在抗氧化性研究中表现出良好的效果。
研究表明，这些植物酶类能够清除自由基，抑制脂质过氧化，从而保护细胞免受氧化损伤。
此外，动物酶类如超氧化物歧化酶（SOD）等也具有显著的抗氧化作用，能够有效地清除体内的活性氧自由基，减轻氧化应激反应。
三、非酶类天然提取物的抗氧化性研究非酶类天然提取物主要包括各种植物提取物、水果提取物和海洋生物提取物等。
这些提取物中富含多种抗氧化成分，如多酚、黄酮、维生素C等。
以茶多酚为例，它是一种常见的植物提取物，具有显著的抗氧化作用。
研究表明，茶多酚能够有效地清除自由基，抑制脂质过氧化，同时还具有抗炎、抗肿瘤等作用。
此外，其他植物提取物如葡萄籽提取物、红枣提取物等也具有较好的抗氧化性能。
这些非酶类天然提取物通过不同的作用机制，共同维护机体的氧化平衡。
四、抗氧化作用机制无论是酶类还是非酶类天然提取物，其抗氧化作用机制主要包括以下几个方面：1. 清除自由基：通过与自由基发生反应，使其转化为稳定的物质，从而减少自由基对机体的损害。
2. 抑制脂质过氧化：通过抑制脂质过氧化反应，减少过氧化产物的生成，从而保护细胞膜的完整性。
3. 促进抗氧化酶的合成：通过调节机体内抗氧化酶的合成和分泌，提高机体的抗氧化能力。
4. 抗炎、抗肿瘤等作用：通过抑制炎症反应和肿瘤细胞的生长，间接地保护机体免受氧化损伤。
《酶类与非酶类天然提取物抗氧化性研究》
《酶类与非酶类天然提取物抗氧化性研究》篇一一、引言抗氧化性研究在生物学、医学和食品科学等领域具有重要地位。
抗氧化剂能有效抵抗氧化应激对细胞和组织造成的损害，对维持生物体健康至关重要。
在众多的抗氧化剂中，酶类与非酶类天然提取物因来源广泛、天然无毒、效果显著而备受关注。
本文将就酶类与非酶类天然提取物的抗氧化性进行深入研究，以期为相关研究与应用提供理论支持。
二、酶类天然提取物的抗氧化性研究酶类天然提取物具有独特的生物活性，对生物体抗氧化有着显著作用。
在众多的酶类中，抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）等备受关注。
（一）研究方法通过体外实验和动物实验，对不同来源的酶类天然提取物进行抗氧化性能的评估。
采用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法等实验方法，测定其抗氧化能力。
（二）实验结果实验结果表明，酶类天然提取物在清除自由基、抑制脂质过氧化等方面具有显著效果。
不同来源的酶类天然提取物抗氧化性能存在差异，可能与其成分、结构、活性等有关。
三、非酶类天然提取物的抗氧化性研究非酶类天然提取物主要包括植物提取物、动物提取物等。
这些物质因富含多酚、黄酮、维生素等抗氧化成分而具有显著的抗氧化作用。
（一）研究方法通过分析不同非酶类天然提取物的化学成分，结合体外实验和动物实验，评估其抗氧化性能。
采用与酶类天然提取物相同的实验方法，如DPPH自由基清除法等。
（二）实验结果研究结果表明，非酶类天然提取物具有强大的抗氧化能力，能显著清除自由基、抑制脂质过氧化。
其中，某些特定成分如多酚、黄酮等在抗氧化方面表现出色。
不同来源的非酶类天然提取物在抗氧化性能上存在差异，可能与化学成分的种类和含量有关。
四、讨论与展望（一）讨论本研究表明，无论是酶类还是非酶类天然提取物，均具有显著的抗氧化性能。
这些天然抗氧化剂来源广泛、天然无毒，对维护生物体健康具有重要意义。
然而，不同来源的天然抗氧化剂在成分、结构、活性等方面存在差异，这可能影响其在实际应用中的效果。
提取方法对类球红细菌辅酶Q10抗氧化活性的影响
提取方法对类球红细菌辅酶Q10抗氧化活性的影响李祖明;安君;常平;白志辉【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2015(046)004【摘要】为研究不同提取方法和菌体浓度对类球红细菌辅酶Q10抗氧化活性的影响,测试了酶法辅助超声波法、超声波法、研磨法和纳米磨法对类球红细菌辅酶Q10的收率的影响.结果表明:同酶法辅助超声波法、超声波法和研磨法相比,纳米磨法提取类球红细菌辅酶Q10的收率最高.类球红细菌辅酶Q10具有一定的抗氧化能力,且与菌体浓度呈量效关系.纳米磨法、酶法辅助超声波法、超声波法和研磨法从类球红细菌提取的辅酶Q10均具有清除DPPH自由能力、抗脂质过氧化能力和还原能力,纳米磨法最好.固液比为1:10时,纳米磨法提取的辅酶Q10对DPPH自由基的清除率为(0.160±0.006) μmol Trolox· g-1,对脂质过氧化作用的抑制率为(56.4±2.4)％,还原力为0.563±0.020.【总页数】7页(P433-439)【作者】李祖明;安君;常平;白志辉【作者单位】北京联合大学应用文理学院,北京100191;北京联合大学应用文理学院,北京100191;北京联合大学应用文理学院,北京100191;中国科学院生态环境研究中心,北京100085【正文语种】中文【中图分类】S432.4【相关文献】1.氩离子激光照射对类球红细菌的诱变效应及对辅酶Q10产生量的影响 [J], 武标;张千;李辉;武威2.类球红细菌辅酶Q10高产菌株选育及发酵工艺研究 [J], 丁亚莲; 李春玲; 牛春; 张萍3.56Fe17+重离子诱变选育高产辅酶Q10类球红细菌 [J], 高维东; 马项英; 弥超; 秦云; 刘恭; 谢小冬4.重离子诱变类球红细菌提高辅酶Q10产量 [J], 张龙;王乐义;韩祎君;李永丽;胡建华;刘占英5.过量表达dxsA提高类球红细菌辅酶Q10产量研究 [J], 赵志平;陈泓帆;杜佳慧;张佳敏;王卫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酶法辅助超声波法提取类球红细菌SOD工艺研究
酶法辅助超声波法提取类球红细菌SOD工艺研究李祖明;霍笑靓;高丽萍;惠伯棣;杨卫东;王栋;白志辉【摘要】Extraction technique of SOD from Rhodobacter sphaeroides was studied by ultrasonic assisted with zymolysis. By comparision with grinding, ultrasonic and ultrasonic assisted with freezing-thawing, ultrasonic assisted with zymolysis was the optimum extraction method for superoxide dismutase (SOD) from Rhodobacter sphaeroides 3757. Results of both single factor experiment and orthogonal test showed that the optimum ultrasonic assisted with zymolysis extraction conditions of SOD were as follows: ultrasonic power 500W, ultrasonic total working time 15min, material/liquid ratio 1:15, amount of enzyme 300 μL, temperature of zymoIysis 40℃, pH of zymoIysis 7, time of zymoIysis 60 min. Under these optimum con ditions, activities of SOD was 385.7 U·mL-1, and the extraction rate would be improved by 40%.%为了研究类球红细菌SOD的提取工艺，采用研磨法、超声波法、冻融辅助超声波法和酶法辅助超声波法提取类球红细菌超氧化物歧化酶，结果表明：酶法辅助超声波法是较优的提取方法。
超氧化物歧化酶的分离、纯化和活性测定
综合实验超氧化物歧化酶的分离、纯化实验背景超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称SOD) 广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶，生物体内重要的自由基清除剂，防御生物体氧化损伤。
按金属辅基成分的不同可分成3种类型：铜锌金属辅基(CuZn-SOD) ，蓝绿色，存在于真核细胞的细胞质中，在高等植物的叶绿体基质、类囊体内以及线粒体膜间隙；锰离子(Mn-SOD)，粉红色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞中，以及植物的叶绿体基质和类囊体膜上；Fe-S0D，黄色或黄褐色，存在于原核细胞中，近来发现有一些真核藻类甚至某些高等植物中也有存在。
实验一超氧化物歧化酶的活性测定一、实验原理SOD的活力测定方法：化学法：黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚法，化学发光法，肾上腺素法，N BT-还原法，光化学扩增法，Cyte还原法等；免疫法；等电点聚焦法；本实验采用邻苯三酚自氧化法邻苯三酚自氧化法：邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物，反应开始后反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。
这里测定的是邻苯三酚自氧化过程中的初始阶段，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长出有强烈光吸收。
当有SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过计算即可求出SOD的酶活性。
酶活力单位定义：在25℃恒温条件下，每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯酚自氧化率达50%的酶量定义为1个酶活力单位。
二、试剂和器材1、试剂（1）pH8.2、50mmol/L Tris-HCl称取Tris 0.61g，EDTA-2Na 0.037g，用双蒸水溶解至80mL左右，用HCl调节pH =8.20（用pH计校正），最后定容至100mL。
实验八、植物组织中超氧物歧化酶的提取及酶活性测定
酶活单位定义： 每毫克鲜重在1ml反应液中SOD抑制率达50% 时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。
六、注意事项
冰上充分碾磨，使细胞壁破碎
七、思考题
1、在SOD测定中为什么设暗中和照光两个对 照管？ 2、影响本实验准确性的主要因素是什么？应 如何克服？
在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被
还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生
O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在
560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑
制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液
蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。
据此可以计算出酶活性大小。
本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT） 在光照下的还原作用来确定酶活性大小。
四、 实验步骤
2.SOD酶活力的测定
取10mL试管4支，2支为测定管，另2支为对 照管，按表1加入各溶液。
表1
各溶液加入量
用量(ml) 3 2.4
试 剂（酶） 0.05mol/L磷酸缓冲液 NBT反应液
酶液（实验管）/缓冲液（对照管） 0.1 蒸馏水 总体积 0.4 6.0
混匀后，给1支对照管罩上比试管稍长的双 层黑色硬纸套遮光，与其他各管同时置于 4000lx日光灯下反应10min(要求各管照光 情况一致，反应温度控制在25～35℃之间， 使酶活性高低适当调整反应时间)。
四、 实验步骤
1. SOD酶的粗提 取新鲜植物叶片，冲洗干净，吸干表面水 分，去掉叶脉，称取1.0~2.0g于预冷的研钵 中， 加入1ml预冷的0.05mol／L磷酸缓冲液 (pH7.8) ，进行组织细胞破碎，使SOD充分 溶解到缓冲液中，然后加缓冲液使终体积 为5ml，在5000r／min下离心15min，得到 的上清液为粗酶液。
【免费下载】猪血中提取SOD并在不同温度测定其活性
班级：13 生技 学号：2013081611 姓名：兰态树
摘 要：超氧化歧化酶（SOD)是一种重要的氧自由基清除剂，与人类健康又
密切的关系，现已被应用在食品、化妆品及药品领域。本文通过从猪血中分离 纤维连接蛋白、免疫球蛋白和血红素后,提取 SOD，研究温度对邻苯三酚氧化 反应速度的影响。以选定实验中最佳的 PH，然后对实验材料进行不同温度处 理。通过实验得到数据，根据公式计算出 SOD 的活性，结果表明随着温度的升 高 SOD 的活性先升高后降低。 关键词：SOD、温度、pH、活性
红血球用 3 倍体积生理盐水洗涤，4 000r/min 离心 20min，重复三次，然后 向洗净的红血球加入 1～1.1 倍体积去离子水，搅拌溶血 30min，再向溶血液中 分别缓慢加入 0.25 倍体积的预冷 95%乙醇和 0.15 倍体积的预冷氯仿，剧烈搅 拌 15min 左右，静置 1h，然后 4 000r/min 离心 20min 除去变性血红蛋白沉淀， 取清液，过滤，收集滤液（记录体积，测酶活性和蛋白浓度）。 1.3.3 热变性
上清液加热到 65℃，保温 10min，然后迅速冷却到室温，3000r/min 离心 20min，弃去沉淀物，收集上清液（记录体积，测酶活性和蛋白浓度）。 1.4 邻苯三酚自氧化速率的测定
取四支试管按下表加入 25℃预热过的缓冲液,然后加入预热过的邻苯三酚 （空白管用 10mmol/L HCl 代替邻苯三酚 ），迅速摇匀，立即倾入 1cm 比色杯 中，在 325nm 波长处测定光吸收值，每隔 30s 读数一次，测定 4min 内每分钟光 吸收值的变化。要求自氧化速率控制在每分钟的光吸收值为 0.07（可增减邻苯 三酚的加入量，以控制光吸收值）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
K2HPO4 0.09%，KH2PO4 0.06%，MgSO4 0.02%，CaCl2 0.0075%，FeSO4 0.0012%，EDTA 0.002%，pH7.5，生 长因子溶液 1%，微量元素溶液 1%，微量元素溶液配
具有量子尺寸效应、小尺寸效应、表面效应和宏观量 子隧道效应，可以有效提高其生物利用度和靶向性； 近年来，纳米材料已在食品等诸多领域引起了广泛重
L3 发酵生产 SOD，但至今未有大规模利用微生物发 酵生产 SOD。Liu 等[3]纯化了 Thermus thermophilus
科教仪器厂；FD-1A-50 冷冻干燥机，北京博医康实验 仪器有限公司；CJM-SY-A 高能纳米冲击磨，秦皇岛
HB27 所产 SOD，并研究了性质。当前在国外，光合 市太极环纳米制品有限公司；VCX 130 PB-VCX 130
细菌已在保健食品中应用，在国内光合细菌沼泽红假 FSJ 超声波破碎仪，美国 SONICS & MATERIALS
单胞菌已获准用于饲料添加剂；可见光合细菌在保健 食品和药品中应用已具有一定基础[4,5]。类球红细菌 （Rhodobacter Sphaeroides）是一种光合成细菌，属于
INC ； J2-HS Centrifuge 高 速 低 温 离 心 机 ， 美 国 BECKMAN 等。
现代食品科技
Modern Food S cience and Technology
2015, Vol.31, No.7
不同提取方法对类球红细菌超氧化物歧化酶 抗氧化活，高丽萍 1，白志辉 2，杨卫东 3，王栋 3
（1.北京联合大学应用文理学院，北京 100191）（2.中国科学院生态环境研究中心,北京 100085）
表明，该菌已成为一种极具工业化开发潜力的微生物 [5-7]。
粉 1%，NaCl 0.5%，pH 7.2。 发酵培养基：苹果酸 0.3%，胰蛋白胨 0.4%，
纳米技术被认为是 21 世纪的革命性技术，纳米 粒子是从零到几百纳米的超细粒子[8]。纳米粒子处于 原子簇和宏观物体交界的过渡区域，比表面积较高，
其对 ABTS+·、·OH 和 O2-·的清除率分别为 92.1±3.32%、76.90±2.67%和 36.90±1.22%，还原力为 11.30±0.35。纳米磨法干菌的 SOD 抗 氧化活性优于超声波法，固液比 1:20 时，其对·OH 和 O2-·的清除率分别为 57.10±1.96%和 79.40±2.71%。类球红细菌 SOD 具有较强 的抗氧化能力，且与菌体浓度呈量效关系，纳米磨法是较优的提取方法。
Key words: Rhodobacter sphaeroides; nanotechnology; superfine grinding; superoxide dismutase; antioxidant activity
收稿日期：2014-08-03 基金项目：国家科技部“十二五” 国家科技支撑计划项目(2012BAK17B11)，北京市教育委员会科技计划面上项目(KM201311417007)；北京市教育委员会科技成 果转化和产业化项目(PXM2013_014209_07-000082)；作者简介：李祖明（1968-），男，博士，副教授，研究方向：食品科学与安全
关键词：类球红细菌；纳米技术；超微粉碎；超氧化物歧化酶；抗氧化活性
文章篇号：1673-9078(2015)7-205-210
DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.7.032
Effect of Various Extraction Methods on the Antioxidant Activity of Superoxide
Dismutase from Rhodobacter sphaeroides
LI Zu-ming1, AN Jun1, HUI Bo-di1, GAO Li-ping1, BAI Zhi-hui2, YANG Wei-dong3, WANG dong3 (1.College of Arts and Sciences, Beijing Union University, Beijing 100191, China)
1.1.3 培养基和试剂
细菌域中紫色细菌群的 α 亚群，具有广泛的代谢方式，
固体培养基：葡萄糖 2%，胰蛋白胨 1%，酵母浸
可在多种条件下生长。它可以经发酵生产辅酶 Q10、 粉 1%，NaCl 0.5%，琼脂 2%，pH 8.5。
类胡萝卜素和 SOD 等生物活性物质；大量研究文献
种子培养基：葡萄糖 2%，胰蛋白胨 1%，酵母浸
Abstract: Superoxide dismutase (SOD) activity levels were determined for the samples extracted from the biomass of Rhodobacter sphaeroides by grinding, ultrasonic extraction, enzyme assisted ultrasonicextraction, and nanomilling. The in vitro antioxidant activity of SODs extracted by the four methods from R. sphaeroides 3757 wet biomass were evaluated via evaluating their reducing power and scavenging capacity against ABTS+·, ·OH, and O2-·. The in vitro antioxidant activity of SODs extracted by ultrasonic approach and nanomilling from R. sphaeroides 3757 dry biomass were compared based on scavenging capacity against ·OH and O2-·. SODs extracted from wet and dry biomass of R. sphaeroides 3757 by nanomilling exhibited activities of 36.90 ±1.25 U/g and 214.20 ±7.72 U/g, respectively, which were higher than those of any other extraction method. The SOD antioxidant activity observed for nanomilling from wet biomass of R. sphaeroides 3757 was higher than that of grinding, ultrasonic extraction, and enzyme assisted ultrasonic extraction . For nanomilling, the reducingpower was 11.3 ±0.35 and the scavenging capacities against ABTS+·, ·OH, and O2-·were 92.1 ±3.32%, 76.90 ± 2.67%, and 36.90 ± 1.22%, respectively, when the solid/liquid ratio was 1:15. The antioxidant activity of SOD extracted by nanomilling from dry biomass of R. sphaeroides 3757 was higher than the counterpart extracted by the ultrasonic method. For nanomilling, when solid/liquid ratio was 1:20, the scavenging capacities against ·OH and O2-·were 57.10 ± 1.96% and 79.40 ± 2.71, respectively. The SODs extracted by different methods from both wet and dry biomass of R. sphaeroides 3757 exhibited significant antioxidant activity in vitro in a concentration-dependent manner. These results showed that SODs from R. sphaeroides 3757 exhibit potent in vitro antioxidant activity, and that nanomilling is the optimal extraction method.
205
现代食品科技
Modern Food S cience and Technology
2015, Vol.31, No.7
超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)，是 一种广泛存在于动物、植物及微生物中的金属酸性蛋
1.1 材料、设备、培养基和试剂
白酶，能够催化超氧阴离子发生歧化反应，具有抗氧 1.1.1 材料
(2.The Research Center for Eco-EnviromentalSciences, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100085, China) (3.Beijing Tianweixintan Biotechnology Company Ltd., Beijing 100176, China)
方：H3BO3 0.28%，MnSO4 0.16%，Na2MoO4 0.076%， ZnSO4 0.024%，CuSO4 0.004%；其中生长因子溶液配 方：维生素 B1 0.1%，烟酰胺(VPP) 0.1%，生物素