HPLC中的手性固定相
高效液相色谱手性固定相法直接拆分4种吲哚类衍生物
高效液相色谱手性固定相法直接拆分4种吲哚类衍生物李秀娟1,2,3 赵亮2 明永飞2,3 彭先芝1 周永章31 陈立仁21(中国科学院广州地球化学研究所,广州510640)2(中国科学院兰州化学物理研究所,兰州730000) 3(中国科学院研究生院,北京100039)摘 要 将纤维素2三(3,52二甲基苯基氨基甲酸酯)(C DMPC )涂敷于自制的球形氨丙基硅胶上,制备成了纤维素2三(3,52二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相(C DMPC 2CSP )。
利用正相高效液相色谱,在该固定相上对新合成的4种吲哚类衍生物对映体进行了手性拆分。
通过选择不同结构和浓度的醇类改性剂,优化了色谱分离条件,同时探讨了醇的结构和浓度对于对映体拆分和保留的影响。
结果表明,适合Ⅱ～Ⅳ号样品拆分的醇类改性剂分别为正丁醇、乙醇和乙醇,而适合Ⅰ号样品的醇类改性剂为乙醇和正丙醇组成的混合体系。
在优化的各流动相体系下,4种吲哚类衍生物的对映体都得到了很好的分离。
在此基础上计算了它们的对映体过量值(e .e .值)。
实验结果令人满意,表明高效液相色谱手性固定相法是拆分这类化合物的一种理想方法。
关键词 高效液相色谱,手性拆分,吲哚类衍生物,纤维素2三(3,52二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相 2006208224收稿;2006210231接受本文系国家自然科学基金(No .20375045)、中国科学院“西部之光”(2003)和广东省自然科学基金(No .021428)资助项目3E 2mail:eeszhou@zsu .edu .cn1 引 言高效液相色谱手性固定相法拆分手性化合物,在近20年来得到了迅速的发展。
各种类型的手性固定相相继被合成,用于分离众多的手性化合物[1]。
其中多糖类手性固定相是应用最为广泛、手性拆分能力最强的一类[2]。
在所有的纤维素衍生物中,纤维素2三(3,52二甲基苯基氨基甲酸酯)(CDMPC )对众多类型的手性化合物都表现出了较高的手性识别性能[3,4]。
高效液相色谱手性固定相法分离酸性化合物对映体
1 36
分析化学
第 32 卷
π作用 、氢键作用增强 ; (5) 与 CDMPC 不同 ,环丙烷酸未获得基线分离 。综上所述 ,决定溶质保留和发生手 性识别的关键是溶质与固定相之间的吸引作用 ,主要是氢键作用和π2π作用。
表 2 流动相中异丙醇浓度对酸性手性化合物在 (S ,S)2Whelk2O1 上对映体分离的影响 Table 2 The influence of isopropanol concentration in mobile phase on the enantioseparation of acidic chiral compounds on
第 32 卷
分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告
第2期
2004 年 2 月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
134～138
高效液相色谱手性固定相法分离酸性化合物对映体
蔡小军 徐秀珠 3 张大同 何红梅 潘春秀
3 结果与讨论
3. 1 流动相中异丙醇浓度对手性分离的影响 3. 1. 1 在涂敷型 CDMPC 柱上的分离 改变流动相正己烷中异丙醇的浓度 (含 0. 1 %三氟乙酸) 对这 6 种酸性化合物进行手性分离 ,结果见表 1 。图 1 是它们在 CDMPC 柱上的对映体色谱分离图 。
2003204207 收稿 ;2003208225 接受 本文系浙江省分析测试基金资助项目
1. 10 1. 10 1. 10
1. 59 2. 54 3. 37 1. 38 1. 59 2. 71 0. 03 0. 21 0. 05 1. 25 1. 64 0. 46
1. 23 1. 56 1. 70
k′2. 后洗脱对映体的保留因子 (the retention factor of the second eluted enantiomer) ; 死时间 ( t0) 由 1 ,3 ,52三叔丁基苯测定 (the dead time was determined using 1 ,3 ,52tri2tert2butyl benzene) ;流速 (flow rate) : 0. 5 mL/ min ; 温度 (temperature) : 25 ℃
HPLC手性固定相色谱法拆分新型钙拮抗剂MN9201
第８ 卷
第２ ２期
２０ ０ ８年 １ １月
科
学
技
术
与
工
程
Ｖ０． Ｎｏ ２ ＮＯ ． １８ ．２ Ｖ
２ ０８ ０
１７ —８９ ２０ ）２６ ０ －４ ６ １１ １ （０ ８ ２ —０４ ０
Ｓ ｉｎｃ ｃ ｎ ｌ ｇ ｎｄ Ｅｎｇｎ ｅ ｉ ｇ ｃｅ ｅ Ｔｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ａ ｉｅ ｒｎ
柱， 以正 己烷 ． 异丙 醇 一 乙胺 （ １ ：９ ：０ １Ｖ ：Ｖ ：Ｖ） 流 动相 ， 速 为 ０ ５ｍ ／ ｉ ， 测 波 长 为 ２７ｎ Ｍ ９０ 对 映体 三 ９ ．， 为 流 ． Ｌ ｍ ｎ 检 ３ ｍ， Ｎ ２ １
可达到基 线分离。本研 究为 ＭＮ ２ １单一对映异构体的分离、 ９０ 制备及含量测定 等提供 了简单 、 快捷 的方法。 关键词 钙拮抗剂 手性拆分 手性 固定相 Ａ 高效液相色谱
图 １ ＭＮ ２ １的结 构 ９０
１ 材料与方法
１ １ 仪 器 ．
（ Ｎ ２ １ 结 构 如 图 １所 示 ） 本 实 验 室 设 计 、 Ｍ ９０ ， 是 合 成、 筛选 而得 的一 种新 的二 氢 毗 啶类 钙 拮抗 剂 。本
研 究采用 Ｄ ｉｅ Ｏ — ａ ｌ ＪＨ柱 ， ｃ— 实现 了 ＭＮ ２ １ 映体 的 ９０ 对 拆 分 ， 进一步 深 入 评 价 Ｍ ９ ０ 为 Ｎ ２ １单 一 异构 体 的手 性 药理学 研究奠 定 了基础 。
手性色谱柱知识介绍
手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。
低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。
因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。
迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
体内药物分析手性药物HPLC法
混 二氯甲烷:乙醚
匀
2:1
吹干后溶解进样
27
•色谱条件
色谱柱：Hypersil C18, 5 m, 1505.0 mm ID，
流动相：乙腈水-乙酸-三乙胺 (55 : 45 : 0.1 : 0.02，v/v)，
流速： 1 ml/min,
检测波长：254 nm
28
酮洛芬对映体衍生化物色谱图
S
mAu
30
提供手性环境，通过 手性识别进行分离
31
直接法
（一）手性流动相法 CMP
在流动相加入手性添加剂（CMPA），使 其与待测物形成非对映异构体复合物，根据 其形成复合物的稳定常数的不同而得以分离。
常用的手性添加剂
环糊精添加剂 手性离子对试剂
配基交换型手性添加剂
32
（一）手性流动相法 CMP
1.环糊精添加剂
反应停不良反应？ (S)-thalidomide 致畸
9
药效
手性药物的药理作用是通过与体内大分子之间的 严格手性匹配与分子识别而实现的，也就是在人体内 药物通过与具有特定物理形态的受体反应起作用。药 物的两种立体异构体中，只有一种更适合与受体或活 性部位结合，从而抑制（或激动）该大分子的生理活 性，达到治疗的目的。
在有机化学中，凡 是手性分子都具有旋光 性，而非手性分子则没 有旋光性。
4
不对称碳原子
不对称碳原子: (asymmetric carbon atom) 与四个互不相同的基 团相连的碳原子叫不 对称碳原子 C﹡.
饱和碳原子具有四面体结构. (sp3杂化)
C*
5
对映异构体
具有镜像与实物关系的一对旋光异构体。
R
200
150
HPLC中的手性固定相
经典手性固定相
• 配体交换型手性固定相：
经典手性固定相
• 配体交换型手性固定相：
– 配体结合型的手性固定相主要用于生物相关性 物质的手性分离，如氨基酸和羟基酸。只有那 些具有2个或以上可供螯合的基团的对映体， 才能在这一类固定相上分离。 – 常见的金属离子，有Cu（II）、Zn（II）、Ni （II）等，其中以Cu（II）为多用，Zn（II）分 离含羟基的氨基酸效果最好。 – 如分子结构中含有芳香基团或杂原子时，分离 情况会有所不同。
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
– 大多数环糊精手性固定相只适用于反相色谱， 分可以被用于正 相色谱，如Cyclobond I RN或SN，因其可作为 π电子供体，具有π电子接受能力的被分析物可 以正相色谱的方式保留在这种手性固定相上。
经典手性固定相
• 人工合成多聚体型手性固定相：
– 通过加聚反应制备的含手性基团的线性聚合单 螺旋聚丙烯酸酯和聚（甲基）丙烯酰胺，是这 类手性固定相的主要代表，最早的该类手性固 定相是1979年合成的单螺旋三苯甲基-甲基丙 烯酸酯。 – 螺旋形是该类固定相产生手性识别能力的主要 原因，碳水化合物、醚类、胺类、卤化物和有 机含磷化合物都有在该类固定相上分离的成功 例子。
经典手性固定相
• Pirkle型手性固定相：
– Pirkle型手性固定相最早于1970年代末由Pirkle课题组 研制。该类手性固定相是将小分子手性选择物质键合 到固体载体（如硅胶）上得到，通常被称作Pirkle型、 刷型或π电子给予或π电子接受型手性固定相。 – 刷型固定相的手性分子主要分布在惰性基质的表面， 容易接触到被分析物质。在被分离物与固定相间的主 要相互作用是π-π相互作用，同时也存在其他类型的相 互作用，如氢键、偶极-偶极作用、空间位阻等。 – 由于良好的载样能力，Pirkle型固定相非常适用于临床 前少量药物的HPLC手性分离制备。
淀粉苯基氨基甲酸酯类手性固定相的制备及用于HPLC手性体分离性能的研究
淀粉衍 生物 （ ＭＰ 的手性 拆分 性能 。 ＡＤ Ｃ）
并作 为手 性 体 分 离材 料 涂 敷 在 氨 丙基 化 多孔 硅 胶 表 面， 制得 新 型 高效液相 色谱 （ Ｉ 用手性 固定 相 ； ＨＰ Ｃ） 通 过 核磁 共振 （Ｈ ＮＭＲ） Ｈ 和红 外光 谱 （Ｒ） 征 衍 生 Ｉ 表
物 结 构 ； 正 己烷 一 丙 醇 （ 以 异 ９：１ ／ 为 流 动 相 ， 多 ， ） 对
Ｒ。 Ｎ １ Ｈ
种手 性对 映体进 行 了拆 分 ； 结果表 明 ， Ｓ 一 Ｃ Ｐ ２综 合 了单
一
Ｒ １
Ｒ ＝
取 代 基 团 淀 粉 （ 基 氨 基 甲 酸 酯 ） 生 物 的 手 性 拆 分 苯 衍 图 １ 淀 粉 ３ ５二 氯一 ，一 甲 基 一苯 基 氨 基 甲酸 酯 ） ，一 ３ ５二 （
（ 尔滨 工程大 学 材料 科学 与化 学工 程学 院 ， 尔滨 黑龙 江 １ ０ ０ ） 哈 哈 ５０ １ 摘 要 ： 合成 了含 有 ３ ５二 甲基 和 ３ ５二 氯 取代 基 ，一 ，一
团的混合 型淀 粉 （ 基 氨 基 甲 酸 酯 ） 生 物 （ Ｐ２ ， 苯 衍 ＣＳ 一 ）
屈 海 涛 等 ： 粉 苯 基 氨 基 甲 酸 酯类 手 性 固定 相 的制 备 及 用 于 ＨＰ 淀 Ｉ Ｃ手 性 体 分 离性 能 的 研 究
淀 粉 苯 基 氨 基 甲酸 酯 类 手 性 固定 相 的制 备 及 用 于 ＨＰ Ｃ手 性体 分 离 性 能 的研 究 Ｌ
屈 海 涛 ， 峻 青 ， 光顺 ， 李 武 白建伟 ， 密林 张
基 氨基 甲酸酯 ） ＡＤ Ｃ ， 用其 作 为 ＨＰ Ｃ手 性 固 （ ＣＰ ） 并 Ｌ
定相 ， 正 己烷／ 以 异丙 醇 （ １ 为 流 动相 ， 多 种 手性 ９： ） 对
柱前衍生-手性固定相HPLC法拆分去甲乌药碱对映体
ｏ ｍｅ ｒ ｓ ａ ｒ ｅ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｄｉ — ｔ ｅ ｒ ｔ — ｂ ｕ ｔ ｙ ｌ ｄ ｉ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｎ ａ ｔ ｅ（ （ Ｂ ｏ ｃ ） ２ Ｏ）ａ ｔ ｒ ｏ ｏ ｍ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｉ ｎ ａ ｌ ｋ ａ ｌ ｉ ｎ ｅ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｎ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｏ ｎ ａ Ｃ ｈ ｉ ｒ ａ １ ＰＡＫＲ ＡＤ－ ＲＨ （ １ ５ ０ ｍｍ × ４ ． ６ ｍｍ ，５ ｕ ｍ）ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ． Ｔｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ
Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ３
文章编号 ： １ ０ ０ ４ — ４ ３ ５ ３ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ １ ２ ２ — ０ ３
柱 前衍 生一 手性 固定 相 ＨＰ Ｌ Ｃ法 拆分 去 甲乌 药碱 对 映体
边钰雅 ， 于 雷， 金东 日
（延 边 大 学 理 学 院 化 学 系 ， 吉林 延吉 １ ３ ３ ０ ０ ２）
中 图分 类 号 ：０ ６ ５ ７ ． ７ ２ 文 献 标 识 码 ：Ａ
Ｒｅ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈｉ ｇ ｅ ｎ ａ ｍｉ ｎｅ ｅ ｎ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｍｅ ｒ ｓ ｂ ｙ ｐｒ ｅ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ
ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ — ｃ ｈ ｉ ｒ ａ ｌ ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ Ｈ ＰＬＣ
ｏｍ ｅ ｒ ｓ ｏ ｆ ｄｅ ｓ ｉ ｒ ａ ｂｌ ｅ ｃ ｈｉ ｒ ａ １ ｄｒ ｕｇ ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄｓ ： Ｈ ＰＬＣ ； ｈ ｉ ｇ ｅ ｎａ ｍｉ ｎｅ；ｄｉ — ｔ ｅ ｒ ｔ — ｂｕ ｔ ｙｌ ｄｉ ｃ ａ ｒ ｂｏ ｎａ ｔ ｅ
手性药物拆分技术及分析
手性药物拆分技术及分析在药物研究和开发中，手性药物是一个非常重要的领域。
手性药物指的是分子结构中含有手性中心（手性碳原子）的化合物，左旋和右旋两种异构体具有不同的生物活性和体内代谢途径。
因此，正确地分析和分离手性药物对于药物研究和有效性的评估至关重要。
手性药物分析技术主要包括色谱法、光学活性法和核磁共振（NMR）法。
色谱法是一种常用的手性药物分析方法。
它基于手性药物的两种对映异构体在手性固定相上的不同吸附能力进行分离。
常见的色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和毛细管电泳法。
HPLC通常使用手性固定相柱，通过选择性地吸附左旋或右旋手性分子，实现对手性药物的分离。
毛细管电泳是一种高效的手性药物分析方法，基于对映异构体在电场中的迁移速率不同，通过毛细管中背景电解质的浓度和pH值调节来分离手性药物。
光学活性法是一种基于光学活性性质来分析和测定手性药物的方法。
光学活性手性药物由于具有旋光性，可以引起光的偏振方向发生旋转。
常用的光学活性法包括旋光仪法和圆二色光谱法。
旋光仪法是通过测定手性分子对光的旋转角度来判断手性药物的对映异构体的含量和比例。
圆二色光谱法则是测量手性分子对不同波长光的吸收性质，通过对波长的差异来判断手性药物的对映异构体。
核磁共振（NMR）是一种基于核磁共振现象来分析手性药物的方法。
NMR技术通过检测手性碳原子或核自旋的信号来确定手性药物的结构和对映异构体的比例。
通过对样品进行核磁共振实验后，通过解释谱图的峰位和峰形等信息，可以得到手性药物的分析结果。
此外，还有一些其他的手性药物分析方法，如质谱法、X射线衍射法和环光谱法等。
这些方法在手性药物分析中各有优劣，适用于不同类别和性质的手性药物。
总之，手性药物分析技术对于药物研究和评估的重要性不可忽视。
科学家们通过不断研究和发展新的手性分析技术，为新药开发和治疗提供了更可靠和准确的手性药物分析方法。
高效液相色谱法在手性药物拆分中应用
高效液相色谱法在手性药物拆分中的应用纲要：外消旋化合物的手性分别是获取单调对映体的方法之一。
跟着人们对纯光学药物的需求日趋增添，各样手性分别技术得以快速发展。
近几十年来，在这些手性分别技术中，高效液相色谱法( HPLC ) 被公以为是一种强盛、快速、高效的分别技术，它已成功应用于对映体药物的分别剖析和制备中。
HPLC 用于敌手性药物分别的研究已获得很大进展，而且研发了大批可应用于手性小分子和聚合物分别的手性固定相，大大提升HPLC 的手性辨别能力。
本文以HPLC 的手性药物分别为焦点，介绍了近几年高效液相色谱法手性固定相的新发展和应用。
重点词：高效液相色谱法手性药物手性拆分Application of High Performance Liquid Chromatography in Chiral Separation of PharmaceuticalsAbstract：Resolution of racemic compounds is one of the potential ways of obtaining both enantiomers. The increasing demand for enantiopure drugs has led to the development of a variety of stereoselective separation technologies. Among several resolution techniques in the past few decades, high performance liquid chromatography ( HPLC ) is well recognized as a powerful, fast and efficient technique, which has been successfully employed for analysis and preparation of enantiomers of drugs. Enantioseparation by HPLC has significantly advanced, and a large number of chiral stationary phases ( CSPs ) for HPLC have been developed using both chiral small molecules and polymers with chiral recognition abilities. This review focuses on various HPLC methods for chiral separation of pharmaceuticals, many new developments and applications are introduced in chiral stationary phase of HPLC in recent years.Keywords：HPLC; Chiral drug; Chiral separation;引言手性药物是指药物分子构造中引下手性中心后，获取的一对互为实物与镜像的对映异构体，是当前药物研究领域的热门之一。
手性药物对映体的环糊精手性流动相_手性固定相HPLC法拆分
光学异构体药物具有不同的生理作用早已 为人们所熟知 ,例如震惊世界的沙立度胺致畸 事件 ,据研究认为完全由于其 ( S ) 2( - ) 异构体 所致 。目 前 医 药 生 产 中 , 手 性 药 物 已 超 过 50 % ,然而有近 85 %～90 %的手性药物仍以外 消旋体生产出售和使用 。因此建立高专属性 、 高灵敏度 、高分离度的对映体拆分和测定方法 , 对提高药物的活性 、减小副作用 ,深入研究药物 的作用机理等具有重要的理论和实际意义 。
由表 1 可见 ,3 个对映体药物均形成 1 ∶1 的环糊精手性包络物 ,在 8018 两对对映体中 , 对映体 (1) 和对映体 (2) 之间的包络常数是非常 一致的 ,因此表明在β2环糊精对 8018 对映体拆 分过程中 ,只有一个手性中心在起作用 ,而与另 一个手性中心无关 。 3 β2环糊精手性流动相 HPLC 法拆分 8018 , 8021 和 1113 对映体
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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1998 ,33 (2) ∶143～147
(A T3) ,99 % ,毒物药物研究所合成并提供 ; 硫 酸阿托品 ,B P ,美国 T &HS 公司 ; 氢溴酸东莨 菪碱 ,Merck 公司 ;去甲基安定 ,对照品 ,中国药 品生物制品检定所 ; 1 , 1’222联萘酚 , Sigma 公 司。
β2环糊精 ,分析纯 ,上海试剂采购供应站 , 经重蒸水 3 次重结晶 、P2O5 真空干燥提纯 。其 他试剂均为国产优级或色谱纯 ,实验用水为二 次石英亚沸蒸馏水 。
药物研究中手性分离分析方法及技巧
药物研究中手性分离分析方法及技巧药物研究中手性分离分析是指将手性药物中的手性异构体（也称为对映体）分离出来，并进行定量分析。
由于手性异构体具有不对称的结构，其物理化学性质和药理活性可能差异巨大，因此手性分离分析对于药物研究具有重要意义。
以下将介绍几种常用的手性分离分析方法及技巧。
1.气相色谱法（GC法）：GC法是通过在手性固定相柱上进行气相色谱分析，分离手性异构体。
该方法基于手性碳氢化合物在手性固定相上的不同吸附能力来实现手性分离。
同时，通过合适的手性底物和手性固定相的选择，还可以更好地提高手性分离的选择性和灵敏度。
2.液相色谱法（HPLC法）：HPLC法是手性分离分析中最常用的方法之一、常见的手性固定相有手性液相、手性离子对和手性硅胶等。
通过在手性固定相上进行液相色谱分析，利用手性化合物在固定相上的差异相互作用，实现手性分离。
此外，还可以结合负载式手性液相色谱法、手性离子对液相色谱法等技术，提高手性分离效果。
3.毛细管电泳法（CE法）：CE法是一种高效、快速的分离技术，特别适用于分析手性药物。
通过在毛细管中施加电场，利用手性化合物在毛细管中的迁移速率差异实现分离。
此外，还可以通过改变运行缓冲液的组成、pH值等条件，调节手性分离的选择性和分离效果。
除了上述主要的手性分离分析方法外，还存在一些辅助技巧和方法，可以进一步提高手性分离的效果：1.共处理：将两个手性化合物混合在一起进行共处理，通过比较混合物中手性峰的相对峰度等信息，来判断手性分离的效果。
2.离子对调整：通过调整分析液中离子对的浓度和种类，来改变手性分离的效果。
一般来说，手性离子对可以提高手性分离的分辨率和选择性。
3.pH调控：通过改变液相色谱系统中溶液的pH值，可以影响毛细管电泳法和液相色谱法中手性分离效果。
pH值的改变可以调节化合物分子的电荷状态，从而影响手性分离的选择性。
总之，手性分离分析方法及技巧在药物研究中起着重要的作用。
通过合理选择合适的手性分离方法，并结合辅助技巧和方法，可以实现对手性异构体的高效、准确的分离和定量分析，从而为药物研究提供有价值的数据。
手性药物的分离在色谱法中的应用
手性药物的分离在色谱法中的应用手性药物是指具有手性结构的药物。
它们可以分为左旋和右旋两种类型，两者化学性质相同，但左右旋异构体对生物系统的影响却截然不同，这种现象被称为手性诱导失活效应。
因此，在制药过程中需要对手性药物进行分离，以确保药效和安全性。
色谱法是分离手性化合物的主要方法之一，其基本原理是利用不同化合物的物理、化学性质差异，通过分离柱将混合物中的目标物分离出来。
以下是一些色谱法在手性药物分离中的应用。
手性高效液相色谱法（HPLC）手性HPLC是目前最常用于手性药物分离的方法之一，它是利用手性固定相在悬浊液中对手性化合物进行分离。
具有手性结构的固定相与目标分子相互作用，从而实现分离。
手性HPLC可以分别采用手性固定相或手性混合物来进行分离。
此外，在手性HPLC中，主要可以采用簇列技术或化学反应转化手性方法来提高分离效率和选择性。
毛细管电泳（CE）毛细管电泳是一种基于电化学原理的分离技术，它利用电场将样品中的分子分离。
在毛细管电泳中，可以采用手性高分辨涂层来进行手性药物的分离。
在此基础上，还可以采用手性化合物作为毛细管填充剂，进一步提高分离效率和分离度。
气相色谱法（GC）气相色谱法是一种利用气体作为流动相的色谱法。
在处理手性药物时，通常需要使用手性柱和手性混合物。
与HPLC不同，该方法的分离依赖于分子间的“挤压”力。
因此，手性柱具有不同的式样，以保证灵敏度和选择性。
超临界流体色谱法（SFC）SFC是一种介于HPLC和GC之间的色谱法。
它使用超临界流体作为移动相，可以在温度和压力条件下实现高效率的手性药物分离。
通常使用手性柱和手性对映异构体混合物进行分离。
此外，还可以应用具有特定分子功能的催化剂来提高分离效率。
总之，手性药物分离是一项非常复杂的任务，需要使用不同的色谱技术和方法来实现。
无论是HPLC、CE、GC还是SFC，它们都有各自的优缺点和适用范围，因此在选择分离方法时需要综合考虑样品特性，实验设备和分离效率与成本等因素。
色谱技术在手性药物拆分中的应用分析
色谱技术在手性药物拆分中的应用分析色谱技术是一种广泛应用于化学分析领域的分离和鉴定方法。
在手性药物的研究和开发过程中，色谱技术起着重要的作用。
本文将从手性药物的定义开始，介绍色谱技术在手性药物拆分中的应用分析。
手性药物是指分子结构中存在非对称中心，其分子构型可以存在两个立体异构体，即对映异构体。
这两种立体异构体被称为手性对，分别是左旋异构体和右旋异构体。
右旋异构体通常被称为R体，左旋异构体被称为S体。
在生物体内，由于手性药物与蛋白质、酶等分子的立体选择性相互作用，两个手性异构体的药效、药代动力学和毒理学性质可能存在差异。
拆分手性药物的目的是将其两个手性异构体分离出来，以便对它们进行独立的研究和评价。
色谱技术由于其高效、灵敏、准确和可靠的特点，成为了拆分手性药物的首选方法。
液相色谱技术（HPLC）是最常用的手性药物拆分方法之一。
HPLC通过对手性分子与手性固定相之间的相互作用进行分离。
手性固定相通常是由手性区分聚合物或小分子手性配体涂覆在硅胶微球上形成的。
选择合适的手性固定相和流动相，可以实现对手性药物的定量和定性分离。
气相色谱技术（GC）也可以用于手性药物的拆分。
在GC中，手性药物通常通过在毛细管柱上涂覆手性化合物实现分离。
毛细管柱上的手性化合物会与手性药物产生手性识别作用，从而使两个手性异构体分离。
超高效液相色谱技术（UHPLC）、离子色谱技术（IC）和凝胶渗透色谱技术（GPC）等也可以应用于手性药物的拆分分析。
这些技术可以进一步提高分离效率和灵敏度，并增加对手性药物性质的了解。
色谱技术是一种在手性药物拆分中广泛应用的分析方法。
通过选择合适的手性固定相和流动相，液相色谱和气相色谱都能有效地分离手性药物的两个手性异构体。
超高效液相色谱、离子色谱和凝胶渗透色谱等技术的应用，可以进一步提高分离效率和灵敏度。
这些研究为合理设计和开发手性药物提供了有力的支持。
手性药物的分离在色谱法中的应用
手性药物的分离在色谱法中的应用手性药物是由手性分子组成的药物，它们的各种生物活性和药效是与它们的绝对构型直接相关的。
在许多情况下，手性药物的两种异构体（左手和右手）的活性和毒性可能截然不同。
因此，对这些药物分子的分离和纯化成为了化学、药物研究领域的一个重要问题。
高效液相色谱法（HPLC）是一种优秀的手性药物分离和纯化的方法，其领先的分辨能力和分离效率使其在药物研究领域崭露头角。
1. 手性药物分离的基本原理手性药物分离的基本原理是结合拥有不同手性的分离柱，例如手性固定相柱和手性选择相柱。
手性固定相柱的分离机理，与分子中原子的手性不同，能产生化学和物理相互作用，因此在不同的分离相互作用下，左手和右手异构体会被分离。
手性选择相柱的分离机理与样品和手性配体的互作用有关，通过配体的稳定性和与样品的选择性作用，达到左右异构体的选择级别不同的以分离目的。
（1）手性固定相柱分离法手性固定相柱分离法是一种基于手性固定相柱的手性药物分离方法，有机合成手法制备的手性固定相柱通常包括手性多醇、手性脂肪酸、手性聚醚和手性多肽等，选择手性固定相柱进行手性分离具有选择性强、效果稳定等特点。
此外，其中含有胆固醇和环糊精等手性结构的化合物也可以应用于该方法。
手性选择相柱从手性配体分离药物，它与手性固定相柱的分离原理有所不同。
手性选择相柱通常包括带有手性标识化合物的蛋白质和不带手性标识的蛋白质。
在hand选择相柱分离中，手性标识的配体与药物分子的性质相似，可以通过配体特异性识别挑选出最终形成单独的物质。
总之，手性药物分离是药物研究和生产中的重要问题。
色谱法是一种优秀的手性药物分离和纯化技术，因其分辨率和分离效率高，在手性药物的制备和应用中具有广泛的应用前景。
高效液相色谱法及其在药物分析中的应用(最新整理)
高效液相色谱法及其在药物分析中的应用以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法。
用常压输送流动相的方法为经典液相色谱法，这种色谱法的柱效能低、分离周期长。
高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，简称HPLC）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。
与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10µm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。
目前，已经发展了多种不同的固定相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大。
下面介绍高效液相色谱法的有关知识，新的方法和技术以及在药物分析中的应用。
一、分类高效液相色谱法按分离机理的不同可分为以下几类：（一）吸附色谱法（adsorptionchromatography）以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。
使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。
在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。
组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。
流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。
（二）液-液分配色谱法（liquid-liquidchromatography)液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。
目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。
键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。
按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。
高效液相色谱柱的分类
高效液相色谱柱根据固定相材料的不同可以分为以下几种类型：
反相柱（Reversed-Phase Column）：反相柱是最常见的HPLC柱，其固定相材料通常是碳链长烷基硅烷（C18、C8等）或苯基硅烷等。
在反相柱中，样品中的极性化合物会被固定相中的非极性区域所吸附，从而实现化合物的分离。
正相柱（Normal-Phase Column）：正相柱的固定相材料通常是含有亲水官能团的硅烷材料，如氨基硅烷、硅氧烷等。
在正相柱中，极性化合物会被固定相中的亲水区域所吸附，从而实现化合物的分离。
离子交换柱（Ion Exchange Column）：离子交换柱是一种根据化合物带电性质来分离化合物的柱。
其固定相材料通常是含有带正或负电的功能团的树脂，如弱阴离子交换树脂、强阳离子交换树脂等。
手性柱（Chiral Column）：手性柱是根据化合物手性性质来分离化合物的柱。
其固定相材料通常是手性的有机小分子或手性官能团修饰的硅烷材料等。
大孔柱（Size-Exclusion Column）：大孔柱也称为凝胶过滤柱，其固定相材料通常是一种多孔材料，如凝胶、聚合物微球等。
大孔柱可以通过样品分子的大小来实现化合物的分离，从而广泛应用于生物大分子的分离和纯化。
亲和柱（Affinity Column）：亲和柱是一种利用化合物之间特异性相互作用来分离化合物的柱。
其固定相材料通常是一种高度选择性的生物大分子或生物小分子，如抗体、蛋白质、核酸等。
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经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
– 环糊精从1970年代开始被尝试用于手性分离。
– 环糊精是一类由环形低聚糖构成的杯状化合物， 通常由淀粉经环糊精转糖基酶催化得来，含有 6（α-环糊精）、7（β-环糊精）或8（γ-环糊精） 个经α-（1,4）-糖苷键连接而得到的吡喃型葡 萄糖单位。
概述
• 手性识别与对映体的分离是自然界及技术领域的 基本现象。手性固定相的分子识别机理与对应的 选择性结构，一直受到研究者的关注。但是，其 内在的分子机理至今仍未得到阐明。
• 三点作用模型，仍然是解释分子识别机理时使用 最多的理论。
概述
• 三点作用原理在理论和应用上也有了一些 新的观念，如：具有类似于受体选择性的 手性固定相，可提供更为有力的分子水平 上的主-客体联合相互作用；对来源于自然 界的手性选择固定相，其手性识别能力大 多来源于氢键，不仅涉及到分子结构的问 题，相关氢键的能量信息也起重要作用。
– β-环糊精是HPLC中使用最多的手性分离物质。
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
– 大多数环糊精手性固定相只适用于反相色谱， 分析极性有机化合物。
– 部分改性后的环糊精手性固定相可以被用于正 相色谱，如Cyclobond I RN或SN，因其可作为 π电子供体，具有π电子接受能力的被分析物可 以正相色谱的方式保留在这种手性固定相上。
• 色谱手性分离技术的合理设计，以及基于高通量 筛选与计算化学的新技术在HPLC手性固定相研 制中，极有可能成为未来发展的方向。
经典手性固定相
• 现有的经典手性固定相，已可满足小分子 药物分析领域内的多数手性分离的需要， 主要包括药物分析与对映体拆分制备等。
• 根据手性固定相的不同来源，可以分为自 然来源的、半合成的、全合成等3大类。
– 刷型固定相的手性分子主要分布在惰性基质的表面， 容易接触到被分析物质。在被分离物与固定相间的主 要相互作用是π-π相互作用，同时也存在其他类型的相 互作用，如氢键、偶极-偶极作用、空间位阻等。
经典手性固定相
• Pirkle型手性固定相：
– Pirkle型手性固定相最早于1970年代末由Pirkle课题组 研制。该类手性固定相是将小分子手性选择物质键合 到固体载体（如硅胶）上得到，通常被称作Pirkle型、 刷型或π电子给予或π电子接受型手性固定相。
– 氨基甲酰化或二醇化的环糊精固定相，用于分离环己 烯巴比妥、氯苯吡胺（扑尔敏）等
经典手性固定相
• Pirkle型手性固定相：
– Pirkle型手性固定相最早于1970年代末由Pirkle课题组 研制。
– 该类手性固定相是将小分子手性选择物质键合到固体 载体（如硅胶）上得到，通常被称作Pirkle型、刷型或 π电子给予或π电子接受型手性固定相。
– 环糊精杯状结构的腔内部，不含有羟基，呈疏 水性，而杯状的外沿则是亲水性的。
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
– 环糊精类的手性识别能力，不仅与外沿的亲水 性基团有关，而且与被分析物的疏水性基团 （尤其是芳香疏水基团）被杯腔包含有关。
– 在环糊精杯腔外沿的C-2、C-3上的羟基，差异 性产生氢键、偶极-偶极作用，也是手性识别的 因素。通过对羟基进行化学改性，可以增强环 糊精的手性分离能力。
概述
• 常见商业来源的HPLC中手性固定相的主要结构、 识别机理、限制与应用，将是本节主要内容。
• 经典的手性固定相通常被分为配基交换、环糊精、 Pirkle型、合成多聚物、多糖、蛋白质、大环抗生 素和冠醚类。除此之外，还有许多其他的具有潜 在发展前景的手性固定相，但还未达到前述的商 业化程度，如环果聚糖、金属复合物、硼包含物 等。
– 通过对该手性分离现象的研究，后来陆续研制出基于 硅胶载体的固定相，以及连接其他类型手性固定相的 多聚物类型的色谱柱。由环氧树脂作用的（L）脯氨酸 结合硅胶是最早上市的手性键合固定相（Chiral Procu， Serva，Heidelberg，Germany）。
Байду номын сангаас
经典手性固定相
• 配体交换型手性固定相：
– 刷型固定相的手性分子主要分布在惰性基质的表面， 容易接触到被分析物质。在被分离物与固定相间的主 要相互作用是π-π相互作用，同时也存在其他类型的相 互作用，如氢键、偶极-偶极作用、空间位阻等。
经典手性固定相
• 配体交换型手性固定相：
– 配体结合型的手性固定相主要用于生物相关性 物质的手性分离，如氨基酸和羟基酸。只有那 些具有2个或以上可供螯合的基团的对映体， 才能在这一类固定相上分离。
– 常见的金属离子，有Cu（II）、Zn（II）、Ni （II）等，其中以Cu（II）为多用，Zn（II）分 离含羟基的氨基酸效果最好。
经典手性固定相
• 配体交换型手性固定相：
– 1960年代末，最早采用色谱方法对消旋体进行拆分， 即为使用一种配体交换型的手性固定相分离氨基酸对 映体。
– 将脯氨酸固定化在聚苯乙烯载体上，在流动相中加入 Cu（II），由于脯氨酸、金属离子及被分析的氨基酸间 非对映的三重复合结构，被分析氨基酸被吸附在中心 离子的配位层。
HPLC中的手性固定相
概述
• 较之GC、SFC、TLC、CE、CEC，HPLC 是最为重要的手段，尤其是在制备级别。
• 过去20年，是HPLC手性固定相快速发展的 时期。迄今，已经商品化的HPLC手性固定 相约有110余种。
• 通常，手性固定相的制备都较为一致，即 选择一个单一对映体固定化在色谱基质上， 当被分析物通过时，因为结合后的稳定性 或保留性的差异，而实现分离。
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
– 多类化合物通过环糊精得以成功完成手性分离，如β-阻 断剂、生物碱、羧酸及其他中性分子等。
– β-阻断剂类药物，可以直接在天然β-环糊精或γ-环糊精 固定相上分离。
– 将环糊精进行磺基化后，可以利用其多重相互作用 （如疏水性或静电力），分离中性物质、阴离子或阳 离子，该类手性固定相在生物医药领域的应用非常广 泛。