纤溶酶原激活剂抑制物_1检测及其对脑血栓的诊断价值_许福亮

纤溶酶是纤溶过程中关键的一步。在转变过程中，纤溶酶原 激
活剂（ＰＡ）具有重 要 作 用。ＰＡ 主 要 有 组 织 型 （ｔ－ＰＡ）和 尿 激 酶 型（ｕ－ＰＡ）两 大 类。 而 ＰＡＩ 是 ｔ－ＰＡ 的 快 速 抑 制 剂［１］，包 括 ＰＡＩ－１、ＰＡＩ－２、ＰＡＩ－３、Ｃ１－抑制物（Ｃ１－Ｉ）蛋 白 酶 连 接 素 （ＰＮ）等。 ＰＡＩ－１是一种 多 功 能 单 链 线 性 糖 蛋 白 ，是 丝 氨 酸 蛋 白 酶 抑 制 物，由 ３７９ 个 氨 基 酸 组 成，相 对 分 子 质 量 为 ５２×１０３，等 电 点 ４．５～５．０。ＰＡＩ－１ 主 要 来 源 于 血 管 内 皮 细 胞、肝 细 胞 及 血 小 板。ＰＡＩ－１是血浆中 的 内 源 性 纤 溶 酶 原 激 活 剂 主 要 的 生 理 抑 制物，主 要 灭 活ｔ－ＰＡ，从 而 具 有 抑 制 纤 维 蛋 白 降 解、促 进 纤 维 蛋 白 沉 积 于 血 管 壁 及 刺 激 平 滑 肌 增 生 的 作 用 ，是 血 栓 形 成 的 促 发 因 子［２］。
括 洗 板 机 、酶 标 仪 等 。
１．３ 方 法 １．３．１ 静脉采血 用１０９ｍｍ／Ｌ 枸橼酸钠抗凝剂１∶９ 抗 凝， ３ ０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，吸上层血浆放置在－３０ ℃，１个月 内 检测。
１．３．２ 检测方法 采用酶联免疫吸 附 双 抗 体 夹 心 法。在 不 同 包被孔内分别加入１００μＬ 待测血浆、不同浓度校准品，空白 对 照 孔中加入１００μＬ 稀释液，３７ ℃孵育１５０ｍｉｎ。洗板机洗涤４ 次，并拍干。每 孔 加 入 １００μＬ 酶 标 抗 体 应 用 液，３７ ℃ 孵 育 ６０ ｍｉｎ。同上述洗涤，配底物液，临 用 前 每 片 邻 苯 二 胺（ＯＰＤ）用 ５ ｍＬ 底 物 缓 冲 液 溶 解，每 孔 加 入 １００μＬ 新 配 制 的 底 物 液 １００ μＬ，３７ ℃ 孵 育 显 色 １５ ｍｉｎ。 每 孔 加 终 止 液 ５０μＬ 终 止 反 应。 用 酶标仪，以４９０ｎｍ，以空白对照孔调零，测定各孔吸光度（Ａ） 值。用 Ａ 值作为纵坐标，以 ＰＡＩ－１ 校 准 品 （ｎｇ／ｍＬ）为 横 坐 标， 在双对数 坐 标 纸 上 画 标 准 曲 线。 待 测 样 品 ＰＡＩ－１ 含 量 （ｎｇ／
检 验 医 学 与 临 床 ２０１２ 年 １ 月 第 ９ 卷 第 ２ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１２，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．２
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·论 著·
纤溶酶原激活剂抑制物－１检测及其对脑血栓的诊断价值
许 福 亮 ，王 云 海 ，张 霞 ，伊 鑫 （山 东 潍 坊 医 学 院 附 属 医 院 检 验 科 ２６１０３１）
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检 验 医 学 与 临 床 ２０１２ 年 １ 月 第 ９ 卷 第 ２ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１２，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．２
ｍＬ）可 从 标 准 曲 线 上 查 出 。 ２ 结 果
ＰＡＩ－１ 测 定 结 果 见 表 １。 表 １ ＰＡＩ－１ 测 定 结 果
脑血栓伴有其他症状的患者，血浆 ＰＡＩ－１水平会更高。动 态观察发现，随 着 治 疗 的 进 行、症 状 的 好 转，ＰＡＩ－１测 定 值 逐 渐 降低，说明血管内皮 得 到 修 复。 可 以 推 断，脑 血 栓 患 者 在 发 病 前 ＰＡＩ－１含量比健康人明显升高，及时检测、及时发现、及时治 疗可避免脑血栓发生。由此 看 来，ＰＡＩ－１是 脑 血 栓 诊 断、治 疗、 观察和预警的可靠指标。
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－１ ａｎｄ ｉｔｓ ｖａｌｕｅ ｔｏ ｄｉａｇｎｏｓｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ＸＵ Ｆｕ－ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｙｕｎ－ｈａｉ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａ，ＹＩ Ｘｉｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｗｅｉｆａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌ－ ｌｅｇｅ，Ｗｅｉｆａｎｇ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ２６１０３１，Ｃｈｉｎａ）
组别
治疗前
治疗后
ｎ
Ｐ
（ｘ±ｓ，ｎｇ／ｍＬ） （ｘ±ｓ，ｎｇ／ｍＬ）
混合组
３５ １８５．６±３１．６
血栓组
３３ １６３．５±３０．８
高血压组 ３０ ９６．２±２６．３
８７．２±２６．７ ８０．４±２３．６ ５４．８±２２．５
＜０．０１＊ ＊ ＜０．０１＊ ＊ ＜０．０５＊ ＊
栓 形 成［３］。 ３．３ 脑血栓患者血管内皮受损严重，致 ＰＡＩ－１释放增加，ＰＡＩ－ １血浆水平 较 对 照 组 或 健 康 人 明 显 升 高 ，纤 溶 相 对 或 绝 对 降 低 ，造 成 血 管 阻 塞 ，脑 血 栓 形 成 。 ［４－９］
【关 键 词 】 纤 溶 酶 原 激 活 剂 抑 制 物－１； 脑 血 栓 ； 酶 联 免 疫 吸 附 双 抗 体 夹 心 法 ； 内 皮 细 胞 损 伤 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１２．０２．０２６ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－９４５５（２０１２）０２－０１８１－０２
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－１； ｃｅｒｅｂｒａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ； ｄｏｕｂｌｅ－ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｅｎｚｙｍｅ－ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ； ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｉｎｊｕｒｙ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｐｌａｓｍａ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－１（ＰＡＩ－１）ａｎｄ ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｉｔｓ ｃｈａｎｇｅ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｏｕｂｌｅ－ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｅｎｚｙｍｅ－ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＰＡＩ－１ｌｅｖｅｌ ｉｎ ３５ｃａｓｅｓ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ｃｏｍｐｌｉｃａ－ ｔｉｎｇ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ（ｍｉｘｅｄ ｇｒｏｕｐ），３３ｃａｓｅｓ ｏｆ ｓｉｍｐｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ（ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ），３０ｃａｓｅｓ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ （ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｇｒｏｕｐ）３０ｃｏｎｔｒｏｌ ｃａｓｅｓ（ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ３０ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｓ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＰＡＩ－１ｌｅｖｅｌ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ（１８５．６ ± ３１．６）ｎｇ／ｍＬ ａｎｄ （８７．２ ± ２６．７）ｎｇ／ｍＬ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｘｅｄ ｇｒｏｕｐ，（１６３．５ ± ３０．８）ｎｇ／ｍＬ ａｎｄ（８０．４ ± ２３．６）ｎｇ／ｍＬ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ，（９６．２ ± ２６．３）ｎｇ／ｍＬ ａｎｄ （５４．８ ± ２２．５）ｎｇ／ｍＬ ｉｎ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，（４５．５±１５．４）ｎｇ／ｍＬ ａｎｄ（４０．２±１２．８）ｎｇ／ｍＬ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＰＡＩ－１ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ （２５．２±８．３）ｎｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＰＡＩ－１ｌｅｖｅｌ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｘｅｄ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｍ－ ｐａｒｉｎｇ ｔｈｅ ｆｏｒｍｅｒ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ （Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＰＡＩ－１ｌｅｖｅｌ ｒｅｆｌｅｃｔｓ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔ′ｓ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｉｓ ｃｌｏｓｅｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｉｎｊｕｒｙ，ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎｄｅｘ ｆｏｒ ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．
对照组
３０ ４５．５±１５．４
４０．２±１２．８ ＞０．０５＊＊
健康组
３０ ２５．２±８．３
－
Байду номын сангаас
＜０．０１＊
注：前三组与 健 康 组 比 较，＊Ｐ＜０．０１。＊＊ 同 组 间 治 疗 前 后 比 较 。 －表示无数据。
３ 讨 论 ３．１ 在血液内，纤溶酶原转化成纤溶酶，纤溶酶使纤维蛋白 溶 解，清除血栓。在这一 过 程 中，纤 溶 酶 原 转 变 成 有 纤 溶 活 性 的
【摘要】 目的 检测血浆纤 溶 酶 原 激 活 剂 抑 制 物－１（ＰＡＩ－１），了 解 脑 血 栓 患 者 ＰＡＩ－１ 在 治 疗 前 后 的 变 化。 方 法 采用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测３５例脑血栓伴高血压患者（混合组）、３３ 例 单 纯 脑 血 栓 患 者（血 栓 组）、３０ 例高血压患者 （高 血 压 组 ）和 ３０ 例 对 照 者 （对 照 组 ）治 疗 前 后 以 及 ３０ 例 健 康 人 （健 康 组 ）血 浆 ＰＡＩ－１ 水 平。 结果 ＰＡＩ－１治疗前后分别为：混合组（１８５．６±３１．６）ｎｇ／ｍＬ 和 （８７．２±２６．７）ｎｇ／ｍＬ，脑 血 栓 组 （１６３．５±３０．８）ｎｇ／ ｍＬ 和（８０．４±２３．６）ｎｇ／ｍＬ，高血压组（９６．２±２６．３）ｎｇ／ｍＬ 和（５４．８±２２．５）ｎｇ／ｍＬ，对照 组（４５．５±１５．４）ｎｇ／ｍＬ 和 （４０．２±１２．８）ｎｇ／ｍＬ，健康组（２５．２±８．３）ｎｇ／ｍＬ。前二组治疗前后血浆 ＰＡＩ－１差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），前 三 组与健康组比较，差异有统 计 学 意 义（Ｐ＜０．０１）。结 论 血 浆 ＰＡＩ－１水 平 反 映 患 者 的 凝 血 纤 溶 改 变 情 况 ，与 内 皮 细 胞 损 伤 密 切 相 关 ，是 观 察 脑 血 栓 患 者 病 情 和 疗 效 的 有 效 实 验 指 标 。