疟原虫快速诊断试纸RDT检测方法
疟原虫的RDT检测及镜检技术 ppt课件
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取血部位和血量
采血部位和取血方法：
耳垂或无名指（婴幼儿母 趾或足跟），通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球消 毒取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒大米 （即火柴头）大小。
胞浆：环状，浅蓝色。 核：红色，一个，偶
有二个。 疟色素：无。
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31
薄血膜疟原虫形态
恶性疟环状体
感染的红细胞：大小正常,颜 色较深。
虫体大小：较小，约为红细 胞直径1/5-1/6。
胞浆：蓝色，环状纤细,有时 位于红细胞的边缘。常见 多个原虫同寄生于一红细 胞的现象。
核：红色一个,常有二个。 疟色素：无。
一般情况下，厚血膜四周（稍薄些）疟原虫数量较多， 且形态较清楚，镜检时不要忽略。每张厚血膜检查时 间最少不低于20分钟。
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薄血膜中常见的血液成分
嗜酸性粒细胞
中 性 粒 细 胞
血小板
单核细胞 ppt课件
淋巴细胞
红细胞 28
薄血膜疟原虫形态
间日疟 环状体
感染的红细胞：胀大 不明显，基本正常。
厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约4～5微升血量 （相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里 向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形 厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个自细胞 为宜)，③厚血膜的位置，位于玻片右1/3处[中央偏右（或6等 份中的与贴标签的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外 观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出 率的要求，以油镜视野5-10个WBC为宜。
疟原虫检查sop
4.7注意易与疟原虫混淆的其他杂物区别，特别是厚血片检查时，应在薄片上仔细寻找证实才能报告。
除上述3种疟原虫外，在我国云南曾发现过少数卵形疟原虫引起的病例。卵形疟原虫的形态基本上与三日疟原虫相似，但虫体稍大，受感染的红细胞略胀大，且红细胞边缘是不整齐锯齿状，滋养体后期及裂殖体前期的原虫呈圆形或卵圆形。
结实，深红色，位于一边
结实，深红色，位于中央
疟色素
沿边分布
沿边分布
黑褐色，集于中央
红细胞
胀大，色较淡
正常或缩小
正常，偶然缩小，色深
附图：镜下所见疟原虫形态：
间日疟原虫
三日疟原虫
恶性疟原虫
环
状
体
滋
养
体
——
——
裂
殖
体
——
配
子
体
很大
较小
在末梢血液中查不到
细胞浆
松散，比较不规则
坚实较圆
裂殖子数目
12-24个，平均16个
6-12个
裂殖子形态
排列不规则
排列不规则或呈花朵状
配 子 母 体
虫体大小
圆形，
约为红细胞1/2以上
圆形，
与红细胞等大或较小
半月形，两端钝圆（雄），两端较尖（雌）
细胞浆
深蓝色
深蓝色
蓝色
染色质
结实，深红色，位于一边
与间日疟原虫同
红色小点，1个环状体具有1-2个-或更多
晚 期 滋 养 体
虫体大小
可很大，甚至充满整个红细胞
较小
末梢血液中查不到
细胞浆
疟疾快速诊断技术
3、醛缩酶（aldolase）
醛缩酶是一种果糖二磷酸醛缩酶，可催化1，6-二磷 酸果糖，生成磷酸二羟丙酮及磷酸甘油醛，由疟原虫的 无性期和有性期产生。四种疟原虫都能检测到。一些研 究建议将此酶作为快速诊断的靶抗原，目前仅限于研究。
（三）快速诊断试剂
1、ParaSight-F。ParaSight-F法为世界卫生组织推荐的应用产品，检测
FIG. 5. OptiMAL immunochromatographic test device for the detection of pLDH.
TABLE 1. Results of routine blood samples examined for malaria by microscopy compared to OptiMAL rapid dipstick testa
（二）优缺点：
- PCR方法也可用于研究原虫的种群差异、 突变和对药物的抗性
- 敏感性高。能够检测到感染率为0.00001% 的恶性疟原虫血样，以及感染率为 0.0000126%的间日疟血样。
- 利用套式和逆转录PCR方法能鉴定4种疟原 虫，
一般PCR方法也存在着产物的污染易致假 阳性，不能在一次检测中鉴别虫种，也不 能诊断混合感染。
103
•
72 with parasitemia of 0.01–0.09% (500 parasites/µl)
72
•
32 with parasitemia of 0.001–0.009% (50 parasites/µl)
23
•
11 with parasitemia of 0.0001–0.0009% (5 parasites/µl)
万孚RDT疟疾检测
四、异常情况--无效情况 1. 运输过程导致包装破损，试剂失效； 2. 操作失误，加样量少，或者加样位置出错； 3. 储存温度不当，导致试剂失效； 4. 标本处理不当； 5.试剂已过有效期。
谢谢
原虫密度
（parasites/μl）
数量
0～100
26
100～200
20
200～500
37
>500
30
阳性
3 18 35 30
阴性 灵敏度（%）
23
11.5
2
90.0
2
பைடு நூலகம்94.6
0
100
操作方法
样本收集 用全血来进行检测。 全血收集：采用抗凝管采血，或在采血管里先加
入抗凝剂（抗凝剂种类可为肝素、EDTA、柠檬 酸钠或草酸钾），将采集血样加入并摇匀备用。 指尖、耳垂末梢或静脉样本采集后立即使用；
二、异常情况--假阳性
对于个别情况导致的假阳性，可能为以下原因引 起。
1 血液样本为高血脂、高血红蛋白、高度乳糜血等 异常血样，可能会引起非特异性吸附，以致出现 细线或假阳。
2 操作时，加样后应能自然流过膜部分，如样本在 膜部位凝固，易导致误判假阳。
3 观察时间的延长，导致金标物质的持续释放，过 量的抗原抗体造成假阳情况。
疟疾(malaira PF/PAN) 快速检测试剂介绍
江苏省寄生虫病防治研究所 顾亚萍
一、疟疾检测方法学 二、万孚疟疾快速试剂介绍 三、注意事项及异常情况
疟疾相关检测方法
显微镜镜检
PCR检测仪
胶体金检测试剂
各检测方法优缺点比较
检测方法
优点
疟疾快速诊断试剂卡说明书
疟疾快速检测试卡使用说明书一、产品用途用于全血标本中恶性疟原虫抗原和四种疟原虫（恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫）共有抗原的鉴别性检测二、产品信息三、产品描述BinaxNOW®疟疾快速检测试剂是一种用来定性的检测全血标本中的疟原虫抗原的体外快速诊断试剂（RDT）。
它不仅可以在15分钟内检测人是否感染疟疾，而且可以判断所感染的是恶性疟（P.f.）还是其它3中疟原虫【间日疟（P.v.）、卵形疟（P.o.）、三日疟（P.m.）】或恶性疟与其它3种疟原虫的混合感染。
四、疟疾相关知识疟疾是一种可向各年龄的人传播的疾病。
它是由疟原虫种类的寄生虫引起的，通过受感染蚊虫的叮咬在人际传播。
如未及时进行治疗，疟疾可引起通常致命的严重疾病。
类型：恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫。
最常见的是恶性疟原虫和间日疟原虫。
恶性疟原虫是到目前为止最致命的一种疟疾感染。
危害：每30秒就有一名儿童死于疟疾。
每年有100多万人死于疟疾，主要是婴幼儿和孕妇。
易感人群：大多数病例和死亡发生在撒哈拉以南非洲。
但是，亚洲、拉丁美洲、中东以及欧洲部分地区也受到影响。
从无疟疾地区往有疟疾传播地区的旅行者极其脆弱。
他们免疫力很弱或没有免疫力，通常在回国之后面临延迟或错误的疟疾诊断。
五、作用原理产品应用免疫层析技术（ICT）。
一个试剂条中应用了2种不同单克隆抗体，分别来检验血样中是否有 HRPII抗原（恶性疟独有）及“泛疟疾抗原” （Pan-malaria）（四种疟原虫共有）。
两种不同的单克隆抗体以及另外一种质控抗体，被固定在膜支撑物上，形成了三条不同的线。
膜支撑物与加样垫相连，加样垫浸渍了已经结合可视粒子的质控抗体与抗－疟原虫抗体。
结合在一起的膜支撑物与加样垫组成了完整的检测条。
该检测条与洗脱垫与吸收垫被一起置于一个书形、铰链状的检测卡中。
这就构成了一个完整的快速检测试剂卡。
检测时，将全血加到加样垫上，血样中存在的疟原虫抗原与抗疟原虫抗体结合物结合。
疟原虫检测标准操作程序
疟原虫检测标准操作程序疟原虫检测操作程序1.目的与原理1.1 目的：检查血液中是否有疟原虫。
1.2 原理：瑞氏染色原理。
瑞氏染料中含有美蓝和XXX两种染料，前者为碱性，后者为酸性。
它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。
根据瑞氏染色的酸碱物质染色性不同，可将疟原虫各期的形态进行清楚染色，便于观察。
高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫（如间日疟、三日疟、恶性疟），以及疟原虫的各期，如环状体（早期滋养体）、晚期滋养体、裂殖体、配子体等。
2.样本收集和贮存2.1 原始样本：全血。
2.2 标本类型：EDTA抗凝血2ml。
标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。
2.3 保存条件：EDTA抗凝血尽快即时检测。
2.4 病人要求：必须在发烧时采血。
3.试剂3.1 瑞氏染液：3.1.1 试剂成分：瑞氏染料1.0g、无水甲醇500ml、甘油10ml。
3.1.2 配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解。
将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水甲醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止。
配制好的染液放在37℃24小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。
3.2 磷酸盐缓冲液PH6.4：3.2.1 脱水Na2HPO4 1份：处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干燥（火燃烘烤）成粉末称量。
3.2.2 无水KH2PO4 2.6份：将脱水Na2HPO4 1份和无水KH2PO4 2.6份充分混合，边研磨边混匀。
3.2.3 将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中，混合均匀，方可使用。
3.3 器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器。
4.仪器显微镜OLYMPUS型号：CX21.4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。
4.2 日常维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁。
疟疾培训试题及答案
疟疾培训试题及答案一、选择题1. 疟疾是由以下哪种寄生虫引起的？A. 疟原虫B. 钩虫C. 丝虫D. 蛔虫答案：A2. 下列哪项不是疟疾的传播途径？A. 蚊子叮咬B. 食物传播C. 血液传播D. 母婴传播答案：B3. 疟疾的主要症状包括以下哪些？A. 发热B. 寒战C. 头痛D. 以上都是答案：D4. 疟疾的预防措施不包括以下哪项？A. 使用驱蚊剂B. 穿长袖长裤C. 吃生鱼片D. 睡觉时使用蚊帐答案：C二、填空题1. 疟疾的传播媒介是________。
答案：蚊子2. 疟疾的典型症状包括________和________。
答案：发热、寒战3. 预防疟疾的措施包括使用________和________。
答案：驱蚊剂、蚊帐三、简答题1. 简述疟疾的诊断方法。
答案：疟疾的诊断通常通过血液涂片检查来确定疟原虫的存在，也可以通过快速诊断测试（RDT）来检测疟原虫抗原。
2. 描述疟疾的治疗原则。
答案：疟疾的治疗原则是及时使用抗疟药物，如氯喹、青蒿素等。
治疗应根据疟疾的类型和患者的具体情况来确定。
四、判断题1. 疟疾仅在热带地区流行。
答案：错误。
疟疾虽然主要流行于热带和亚热带地区，但在温带地区也有传播。
2. 疟疾可以通过疫苗预防。
答案：错误。
目前还没有针对疟疾的疫苗被批准用于大规模使用。
3. 疟疾患者需要隔离治疗。
答案：错误。
疟疾不是通过空气传播的疾病，不需要隔离治疗。
五、论述题1. 论述疟疾对全球公共卫生的影响。
答案：疟疾对全球公共卫生构成了重大威胁，特别是在非洲、亚洲和南美洲的部分地区。
它不仅导致了大量的死亡和疾病，还对经济发展、教育和社会稳定产生了负面影响。
因此，全球范围内的疟疾控制和预防工作至关重要。
疟疾快速检测试剂盒使用说明书
疟疾快速检测试剂盒(胶体金法)使用说明书【产品名称】通用名称：疟疾快速检测试剂盒（胶体金法）英文名称： Malaria Test【包装规格】25人份/盒。
【预期用途】疟原虫抗原检测试剂盒（胶体金法）是体外免疫层析试验，用于定性检测具有疟疾症状和体征人群EDTA抗凝静脉血或毛细血管血中的恶性疟原虫抗原和间日疟原虫抗原，可对恶性疟原虫、间日疟原虫做出辅助诊断，并可对恶性疟原虫和间日疟原虫做出鉴别诊断。
该试验不用于无症状人群的筛查。
【检验原理】疟原虫抗原检测试剂盒（胶体金法）使用的是薄膜免疫层析技术，该技术用单克隆抗体检测静脉血和末梢血中的恶性疟原虫抗原和间日疟原虫抗原，这两种抗体与对照抗体固定到膜支持物上形成三条不同的线，膜支持物与样品垫相连，结合有可视粒子的对照抗体和抗疟原虫抗体浸渗在样品垫上，组成检测条。
检测条位于一块书形铰链状的检测卡中，与冲洗垫和吸收垫一道参与检测板闭合后薄膜的清洗。
检测时，将全血加到样品垫上，标本中存在的疟原虫抗原与抗疟原虫抗体结合物结合。
将A试剂液加到检测条的底部，使抗原结合物复合物沿检测条流动，在固定抗体处被捕获，形成检测线，固定的对照抗体捕获对照结合物，形成对照线。
一旦血标本流过检测条，就将检测板闭合，使加到冲洗垫中的A试剂把检测条上多余的血液冲去。
检验结果可用紫红色线的存在与否来解释。
15分钟读数时，阳性结果将包括一条检测线（或两条检测线）和一条对照线，阴性结果只产生一条对照线，阴性表明标本中未检出疟原虫抗原。
如果不出现对照线，不管检测线出现与否，结果都为无效。
【主要组成成份】1.2．A试剂：含去污剂和叠氮钠的Tris缓冲液。
3．毛细管：EDTA抗凝毛细管，用于将末梢全血加入到检测卡中。
自备材料采血针、灭菌拭子或棉球、时钟、秒表或跑表注：加样时，要使用能加样15μl体积的经过校准的加样器。
【储存条件及有效期】试剂盒在2-37℃贮藏。
试剂有效期为自生产之日起24个月。
疟疾试纸使用方法与步骤
疟疾试纸使用方法与步骤
物品介绍：
POWER SWAB四份，手指消毒用；
BLOOD LANCET四份，扎手指取血用；
PARACHECK DEVICE四份，检测用；
小瓶子试液一瓶，四人共用。
1、
2、
3、
4、
5、把所有的包装都打开；
用POWER SWAB对任意一只手指进行消毒；
用BLOOD LANCET扎破手指；
将血液二至三滴滴入PARACHECK DEVICE一侧的B孔中；将瓶子（只有一个瓶子，足够四个人检测）中的试液滴四滴（不要多滴）到B孔；
6、
7、等15分钟左右；
观察：若只有C区显示一条线证明无事，若C区和T区各有一条线证明体内有疟原虫，需到疾控中心进一步检测，若C区和T区无任何显示，则证明试纸无效，需重新检测。
希望一切安好。
1/ 1。
包5.疟疾快速诊断试条
1．技术要求
*检测疟疾病人体内的循环抗原，同时能检测恶性疟和泛疟原虫（间日疟、卵型疟、三日疟），操作简便，检测过程中不需要特殊的仪器设备，适合基层疾控机构使用。
2．疟原虫pf/pan检测试剂(胶体金法)参数及要求
序号
技术和性能参数名称
技术和性能参数要求
1
检测方法
胶体金法
2
包装
卡型；每人份独立装，内有干燥剂
产品通过CE认证
13
试剂检验
产品性能经过广泛检验，具有国内外使用的记录及实验评价，附业绩名单说明
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试剂用量及评价
货物在国内市场有批量使用，用户评价良好
3
检测样本
全血，检测量5微升
4
检测类型
可检测恶性疟原虫乳酸脱氢酶（Pf）与疟原虫乳酸脱氢酶（pan）
*5
敏感度
﹥97%
*6
特异性
﹥98%
7
快速性
15分钟经营许可证
9
产品效期
产品有效期24个月
10
保存条件
室温保存
*11
注册批准
国家食品药品监督管理局药品注册批准
12
资质认证