枯草芽孢杆菌的10L发酵罐分批发酵
发酵罐中补料分批发酵研究
发酵罐中补料分批发酵研究实验目的加深对培养方法的认识，了解补料分批续培养过程控制方法。
实验原理补料分批培养，是一种介于分批培养和连续培养之间的过渡培养方式，是在分批培养的过程中，间隙或连续地补加新鲜培养基的培养方法。
流加培养同时兼有间歇培养和连续培养的某些特点，其优点是，可使发酵系统中维持很低的底物浓度，减少底物的抑制或其分解代谢物的阻遏作用，不会出现当某种培养基成分的浓度高时影响菌体得率和代谢产物生成速率的现象。
菌种与培养基啤酒酵母培养基(g/L)葡萄糖20，酵母浸粉 5.0，KH2PO43.0，Na2HP041.0，MgSO41.0，pH 5.0。
流加的浓葡萄糖液质量浓度为25 g／100 ml。
保持培养基中糖的质量浓度在0.5 g/L，流加液的糖的质量浓度为25—30 g/100 m1。
实验方法流加培养前的准备工作在培养罐中加入去离子水，将温度传感器、除菌过滤器安装好，用硅橡胶管连接好取样口、流加液入口，不需要的接口全部封好。
橡胶管用弹簧夹夹住，排气口用一小段棉花塞好。
确认所有连接没有问题后，打开通风排气系统，检查是否有漏气、阻塞现象(轻轻堵住排气口，看其他地方是否漏气)，确认正常。
种子培养自斜面菌种挑起一环啤酒酵母菌体。
接入装有50ml 培养基的250 ml三角瓶中，摇匀后，置于24℃培养箱培养36 h。
将上述培养好的液体种子接入用250ml三角瓶装的灭过菌的100ml液体培养基中，接种量10％，在24℃下培养36h。
流加培养培养罐中加入已调配好的培养基后，放在灭菌锅中灭菌121℃，20－30 min，葡葡糖和消泡剂分别同时灭菌。
培养罐取出后，开通冷却水进行冷却，同时开动搅拌器，通入无菌压缩空气以防产生负压,冷却到发酵温度25 ℃。
利用硅皮管将25 g/100m1葡萄糖液贮瓶和0.1 mol/L氨液贮瓶分别连接蠕动泵和培养罐上的入口，再将两个贮瓶上的排气口塞上棉花用弹簧夹夹住。
消泡剂贮瓶排气口塞上锦花。
枯草芽孢杆菌酶在发酵工艺上的应用
枯草芽孢杆菌酶在发酵工艺上的应用王伟王上俞志敏丛丽娜*（大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034）摘要：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是当今工业酶的主要生产菌种之一，由于其产酶量高、种类多、安全性好、环保等优点在现代发酵工业生产中被广泛应用，其发酵生产的酶在工业、医学、食品、饲料、洗涤、纺织、皮革、造纸、水产养殖等领域均发挥着十分重要的作用。
关键词：枯草芽孢杆菌；发酵；酶B. subtilis enzyme used in the fermentation processWANG Wei WANG Shang YU Zhi-Min CONG Li-Na*(School of Biological Engineering,Dalian polytechnic University,Dalian,Liaoning 116034, China) Abstract:Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) is one of today's major producing strain of industrial enzymes,enzyme production because of its high volume,variety,safety, environmental protection,etc.are widely used in modern industrial production fermentation,fermentation enzymes produced in the fields of industry,medicine,food, feed,wash,textile,leather,paper,aquaculture and other have played a very important role. Keywords:Bacillus subtilis; fermentation; Enzyme长期以来，枯草芽孢杆菌一直是工业微生物的主力军之一，它的使用可追溯到一千多年前，早在日本平安时代（794～1192年）日本人就已经利用枯草芽孢杆菌在大豆中采用固态发酵的方法生产他们的传统食品——纳豆，开创了利用枯草芽孢杆菌的历史[1]。
发酵工程_华中科技大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年
发酵工程_华中科技大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.发酵工程的目标不包含（）答案:无污染2.下列哪项不是微生物本征动力学参数？答案:微生物比生长速率μ3.微生物发酵过程中底物消耗速率取决于多种因素，其中不包括（）答案:细胞得率4.下列发酵产物属于非生长相关型的是（）答案:抗生素5.下列不是分批发酵优点的是（）答案:发酵设备外的外围设备利用度高6.下列关于分批发酵的说法错误的是（）答案:分批发酵过程中碳源耗尽时需进行补料维持发酵7.连续发酵处于流动状态，不属于稳态过程。
答案:错误8.底物比消耗速率qs是指单位质量细胞在单位时间内的底物消耗量。
答案:正确9.乙醇发酵按照Ganden的分类方法属于非生长相关型。
答案:错误10.分批发酵过程中如果目的产物为初级代谢产物，则可设法延长稳定期获得更多的产物。
答案:错误11.发酵液pH的改变会对发酵体系产生很大影响，影响菌体生长和产物代谢方向。
答案:正确12.根据氧传递方程的推导，在氧传递过程中的主要阻力是（）答案:液膜阻力13.关于气体溶解过程双膜理论以下说法错误的是（）答案:气膜内气体分子和液膜内液体分子以对流状态流动14.发酵过程中的氧传递方程式OTR=KLa(C*-CL)中，C*-CL代表（）答案:氧浓度推动力15.以下不是通过影响氧饱和浓度来改变推动力的因素是（）答案:微生物的耗氧能力16.通气准数Na与搅拌转速、通气线速度以及搅拌桨直径相关。
通气搅拌功率和搅拌轴功率的比值PG/P=1-12.6Na与PG/P= 0.62-1.85Na成立时，要求Na分别满足（）答案:＜0.035；≥0.03517.下列关于表面活性剂对KLa的影响的说法中，错误的是（）答案:随着表面活性剂浓度的增加a上升至最大值后保持不变18.一般来说高产菌具备的特点是呼吸强、生长快、代谢旺盛、产物专一。
答案:错误19.对好氧微生物的发酵过程进行温度控制时，应该在保证最适酶活的温度范围内尽可能选择较低的温度，以提高氧传递的推动力。
《发酵工程实验》教案：发酵培养基的制备和实罐灭菌
发酵培养基的制备和实罐灭菌一、实验目的要求学生掌握通风发酵的基本原理及过程，掌握上罐操作技术，掌握流加补料控制技术。
（1）发酵罐及管路、空气过滤器灭菌操作及发酵罐系统管路的熟悉（2）实罐灭菌—培养基灭菌实验二、实验原理2.1 培养基组分的种类和作用：人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成各种代谢产物的营养物质。
主要包括：碳源、氮源、无机盐、生长因子、前体2.2 实罐灭菌原理保温温度（℃）加热保温冷却温度（℃）时间（min）三、实验仪器、设备和材料10升发酵罐（PH仪，培养液及酸碱液流加装置，蠕动泵），1台；淀粉水解糖液、尿素等原料。
四、实验内容与方法：酵母菌经扩大培养后，接入10升机械搅拌通风发酵罐培养，根据实际情况选用分批培养或分批补料培养，测定酵母浓度。
主要内容有：试管斜面培养基的配制、面包酵母种子扩大培养基配制、流加用培养基的配制及灭菌。
总流程：斜面培养基配制与灭菌所需仪器物品：灭菌锅、试管、棉塞、培养基原料、培养箱300毫升种子液、500ml三角瓶三只、装液100ml、培养基、培养摇瓶、纱布。
发酵培养基制备，灭菌。
面包酵母菌的培养基组成：酵母斜面培养基：10º麦芽汁固体斜面，PH5.0酵母摇瓶培养基：10º麦芽汁，PH5.0或葡萄糖10%，玉米浆1%，尿素0.2%，PH5.0酵母分批发酵培养基：玉米淀粉经液化、糖化，折合葡萄糖浓度为10%、玉米浆1%，尿素0.2%，PH5.5。
五、实验报告内容和数据处理实验设计原理；发酵系统的结构与操作方法；实罐灭菌工艺。
附：机械搅拌发酵系统介绍：1 技术指标1.1 概述具有温度、转速、氧气流量、空气流量、pH 、DO 、补料、消泡显示及控制功能，并配有机械消泡浆。
1.2指标1.2.1温度：自动控制范围：自来水温+5℃～ 50℃﹙±0.2 ℃﹚显示范围：0 ～150 ℃1.2.2搅拌转速：调速范围50 ～1000±5rpm1.2.3空气流量：显示控制范围0 ～ 10L/min1.2.4pH显示控制：2 ～12pH±0.05﹙酸碱双向﹚1.2.5溶解氧：0 ～150±2℅1.2.6补料、消泡蠕动泵各一台1.2.7 罐体总容积10L,设计压力2.0kg/c㎡、最高工作压力2.0kg/c ㎡,设计工作温度131 ℃1.2.8 灭菌方法:手动控制蒸汽消毒灭菌1.2.9 功率：主机：3kw, 单相220v1.2.10 气源：2 ～4kg/c㎡1.2.11 蒸汽： 2 ～4kg/c㎡2 管路说明该流程图中空气管路阀门的标号为“AXX”,蒸汽管路阀门的标号为“SXX”，冷却水管路阀门标号为“WXX”，冷凝水管路阀门标号为“VXX”，电磁阀标号为“CXX”，物料管路阀门标号为“PXX”,冷冻水管路标号为“CWX”，其它气体管路标号为“NXX”。
分批发酵、连续流加发酵和分批补料发酵优缺点比较
图表比较分批发酵、连续(流加)发酵与分批补料发酵优缺点? 表一:分批发酵、连续(流加)发酵与分批补料发酵简单比较呼吸作用与发酵的根本区别在于:电子受体不就是将电子直接传递给底物本身的中间产物,而就是交给电子传递系统,并逐步释放能量后再交给最终的电子受体。
4、发酵过程杂菌污染的途径有哪些？如出现杂菌污染,应如何处理？答:发酵过程杂菌污染的途径有1、种子带菌,2、培养基及设备消毒不够,3、设备破损,4、空气系统,5、操作不当(取样、补料、消泡、控制)等。
(2分)如出现杂菌污染,应对染菌时间、种类、染菌规模进行分析根据具体情况处理,(1分)如:1、种子带杂菌——灭菌,排掉。
(0、5分)2、发酵前期——严重:实消后补种、料。
不严重:运转并观察。
(0、5分)3、发酵中期——分析微生物数量、种类、物料性质,再做处理。
(0、5分)4、发酵后期——同中期,并考虑产率与成本关系,考虑放罐。
(0、5分)5、连续发酵有何优缺点？答:(1)、设备生产能力大、利用率高、没有中间清洗杀菌、没有发酵适应期。
(1分) (2)、连续化、自动化、人平生产率高、成本降低。
(1分)(3)、发酵稳定、便于管理。
(1分)缺点:营养利用率略低、控制要求高。
(2分)6、摇瓶提高溶氧方法有哪些？发酵罐提高溶氧方法有哪些？答:摇瓶提高溶氧可考虑减小装液比,增加摇床转速,不会造成染菌的情况下减少瓶口砂布层数等方法。
(3分)发酵罐提高溶氧的方法有选择合理罐型,增加高径比,适当提高通气量,适当提高搅拌速度(搅拌罐)等方法。
(3分)6、泡沫对发酵有何影响？常用的消泡方法有何优缺点？答:泡沫对发酵的影响有:(1)泡沫持久存在,妨碍CO2的排除,影响微生物对氧的吸收,破坏正常生理代谢,不利发酵与生物合成。
(2)泡沫大量产生,使发酵罐有效容积大大减少,影响设备利用率。
(3)泡沫过多,控制不好,会引起大量跑料,造成浪费与环境污染(4)泡沫升到灌顶,可能从轴封渗出,增加染菌机会(5)泡沫过多也会影响氧传递、通风与搅拌效果。
微生物的发酵方式有哪些
微生物发酵方式一般分为分批发酵、连续发酵和补料分批发酵。
一、分批发酵分批发酵是将发酵培养基一次性投入发酵罐中，经灭菌、接种和发酵，最后一次性地将发酵液放出的一种发酵操作。
分批发酵过程中，除不断通气和加入酸碱溶液以维持发酵环境外，与外界没有物料交换，减少了污染机会。
其主要特征是所有工艺变量都随发酵时间的变化而变化。
分批发酵过程中的代谢变化一般可分为菌体生长，产物合成和菌体自溶3个阶段: （1）菌体生长阶段菌体生长阶段处于发酵前期，这一阶段主要是菌体适应新环境，开始生长繁殖，增加细胞数量，直至达到菌体临界浓度。
为减少种子液转入发酵培养基后，对新环境的适应时间，种子培养基的主要成分应尽可能与发酵培养基的成分一致。
此阶段的代谢变化，主要是培养基中碳源、氮源等的分解代谢和细胞内物质的合成代谢，即营养物质不断被消耗，新菌体不断合成，溶解氧水平不断下降。
当其中某一因素成为限制因素时，菌体生长速度会减慢至一临界值，菌体由生长阶段转入产物合成阶段。
（2）产物合成阶段产物生成阶段处于发酵中期，此时菌体量增加趋于稳定，代谢以合成产物为主，产物生成速率达到最大。
发酵液pH、温度和溶氧等参数都会影响发酵过程中的代谢变化，增加副产物的生成，影响产量。
保兴赛斯的生物反应系统可对一系列参数进行检测并反馈，以了解菌体生长状态，调整最佳发酵环境。
（3）菌体自溶阶段菌体自溶阶段处于发酵后期，此阶段的代谢特征主要表现为菌体开始衰老、自溶，产物合成能力衰退，氨基氮含量增加，pH逐渐回升。
此时发酵必须结束，否则不仅可能会使产物受到破坏，还会加大发酵后处理的困难。
保兴赛斯生物反应器在配置相应硬件后，其高级监控软件可根据氨基氮、菌浓、发酵单位等检测数据，生成相应代谢曲线。
对代谢曲线进行研究分析，能掌握代谢变化的规律，发现工艺操作中存在的问题，有助于改进工艺，提高产量。
二、连续发酵连续发酵是当微生物培养到对数生长期时，一方面以一定速度连续不断地向发酵罐中流加新鲜液体培养基，另一方面又以同样的速度连续不断地将发酵液排出。
枯草芽孢杆菌生产工艺
枯草芽孢杆菌生产工艺枯草芽孢杆菌是一种重要的微生物资源，在农业生产和环境保护中有着广泛的应用价值。
枯草芽孢杆菌能够分解有机物质，产生一系列生物活性物质，具有杀菌和促进植物生长的作用。
下面将介绍枯草芽孢杆菌的生产工艺。
1. 菌种培养首先要获得高质量的菌种，一般选择枯草芽孢杆菌的自然菌株或者已经纯化的菌株作为菌种。
然后将菌种接种到适合生长的培养基中，通过搅拌培养，保持适宜的培养条件（温度、pH 值、氧气含量等），使得菌种能够迅速繁殖。
2. 发酵培养将菌种转入发酵罐中进行发酵培养。
发酵罐中应该具备良好的通气性和温度控制系统，以确保菌种的正常生长和代谢。
在发酵过程中，要控制培养液的pH值，保持在适宜的范围内（一般为6-8），并添加适量的碳源和氮源，加速菌种的生长速度。
3. 发酵液分离发酵液中的细胞和液体部分需要进行分离，以获取纯净的发酵液。
可以通过离心和过滤等方法进行分离，将液体部分收集下来。
4. 提取和纯化将收集到的发酵液进行进一步处理，以得到所需要的活性成分。
可以采用溶剂提取、蒸馏浓缩、纯化柱层析等多种方法进行处理，去除无关化合物，得到目标物质。
5. 成品包装对纯化得到的目标物质进行检测和质量评估，确保其符合标准要求。
然后将成品进行包装，以便储存和使用。
需要注意的是，枯草芽孢杆菌的生产是一个复杂的过程，需要细致的操作和科学的控制。
在每个环节都要注意卫生和安全，防止外界的污染和菌株的变异。
同时，还需要对每个步骤进行合理设计和优化，以提高生产效率和产量。
枯草芽孢杆菌的生产工艺是一个有挑战性的任务，但通过不断的研究和改进，相信可以进一步提高该菌株的产量和质量，推动其在农业和环境领域的应用。
枯草芽孢杆菌发酵方法
枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于自然环境中的益生菌，具有很强的生物防治能力，能够有效地对抗多种有害微生物，促进植物生长和提高产量。
而枯草芽孢杆菌的发酵方法对于生产和应用起着至关重要的作用。
枯草芽孢杆菌的发酵方法的核心步骤包括种子培养、发酵过程和发酵液收获。
下面我将按照从简到繁的顺序，逐步探讨这些步骤。
1. 种子培养种子培养是整个枯草芽孢杆菌发酵过程的起点。
选择一株活力强、菌液浓度高的枯草芽孢杆菌菌株。
将该菌株接种到适宜的培养基上进行预培养，以增加菌株数量。
预培养的时间和温度要根据具体情况而定，但通常在30-37摄氏度下静置培养24-48小时。
培养基的选择也很重要，常见的有蔗糖蛋白胨培养基和复合液体培养基。
2. 发酵过程发酵过程是枯草芽孢杆菌大规模生产的关键步骤。
将预培养好的种子菌液接种到大型发酵罐中，酒精发酵罐是一种常见的选择。
接种量的大小要根据发酵罐的容积和发酵需求进行合理调整，通常在5-10%左右。
接种后，利用适宜的培养基和培养条件（如温度、pH值、氧气供应等），进行连续或分批发酵。
在发酵过程中，菌株会迅速繁殖和产生代谢产物，如抗生素、激素、酶等。
这些代谢产物对枯草芽孢杆菌自身和植物都具有促进作用。
在发酵过程中，需要注意对发酵液的搅拌、通气和温度的控制，以保证菌株的良好生长和代谢产物的高效产生。
3. 发酵液收获在发酵过程结束后，需要对发酵液进行收获和提取。
停止菌液的搅拌和加热，然后通过过滤或离心等方法将菌体和固体物分离。
接下来，可以通过浓缩、纯化和干燥等工艺对发酵液进行加工处理，以获得高纯度和高活性的枯草芽孢杆菌制品。
除了基本的发酵方法外，还有一些优化的发酵技术值得关注。
可以通过添加生物碳源来促进枯草芽孢杆菌的生长和代谢产物的产生。
适当的控制发酵液中的pH值，可以提高菌株的生长速度和产量，同时减少杂质的形成。
还可以利用发酵代谢过程中产生的热能，实现能源的再利用，提高发酵过程的能效。
枯草芽孢杆菌的发酵方法是一个复杂的过程，需要精细的操作和严格的控制。
上海百仑发酵罐操作说明
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第一章 概述
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发酵设备中最重要、应用最广的设备，是发酵 工业的心脏，是连接原料和产物的桥梁。
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广义的发酵罐是指为一个特定生物化学过程的 操作提供良好而满意的环境的容器。工业发酵 中一般指进行微生物深层培养的设备。
第二章 发酵罐基本类型
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1. 按微生物生长代谢分类： 1）非通风发酵罐：酒精发酵罐、啤酒发酵罐 2）通风发酵罐：机械搅拌、气升式、伍式、自吸式等
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2. 按发酵罐设备特点分类： 1）机械搅拌通风发酵罐：伍式、文式、自吸式等 2）非机械搅拌通风发酵罐：气提式、液提式等
3. 按操作方式分类： 1）分批发酵——在一个培养体积中接种细胞和添加培养基后，中途 不添加也不更换培养基的方式。
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优点：污染杂菌比例小，操作灵活，可进行不同产品的生产。 缺点：效率低，非稳态工艺过程设计和操作困难（培养过程中细 胞生长、产物积累、以及培养基的物理状态常常随时间变化而变 化） 。
第七节 参数校正
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在设备出厂时，这些参数都是经过多次校正 的，但是 PH和DO这两项需重新校正。 校正方法请看附录1. 因其参数直接影响设备的反馈，请谨慎操作！ 在设备使用一定时间后PH和DO的采样值会有 所偏高，请不要担心，这不会妨碍机器的正常 运算。
第八节 历史曲线
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在曲线图中，我们可以观查菌种在发酵时设备 所记录的数据，默认显示DO PH 温度 搅拌 罐 压。当罐体增加其他项时，可以点击 弹出对话框
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PH设定：
周期控制在 此无用
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在本设定中可通过给入设定值来达到自动控制 酸碱值的效果
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设定值输入的方式同温度一样，在设定好后点击自动 即可。如图：
枯草芽孢杆菌发酵培养基配方
枯草芽孢杆菌发酵培养基配方1. 引言大家好，今天咱们聊聊一个很有意思的话题，那就是枯草芽孢杆菌的发酵培养基配方。
听起来好像有点高大上，其实就是让小细菌们在一个舒适的环境里茁壮成长嘛！说到这里，你可能会问：“这枯草芽孢杆菌到底是个啥？”别急，咱慢慢来。
枯草芽孢杆菌，顾名思义，跟“枯草”有点关系，它能在各种环境下生存。
说白了，就是个“生存达人”。
咱们用它来做发酵，能够帮助咱们在农业、医药等领域有更好的应用，比如促进植物生长、提高土壤肥力等。
这可是个大忙人，嘿嘿！2. 培养基的组成2.1 基本成分那咱们要怎么调配这个培养基呢？其实挺简单的，先来看看基本成分都有哪些。
主要的配方有：1. 水：这是培养基的灵魂，少了水可不行，细菌可是“水中精灵”。
2. 营养琼脂：这个东西就像细菌的“营养快线”，能给它们提供成长所需的各种营养素。
3. 葡萄糖：别小看这糖，细菌可是特别喜欢这个，吃了能让它们“嗨”起来，分分钟活力四射。
4. 氮源：比如蛋白胨，帮助细菌合成蛋白质，细菌们得有营养才行啊。
这几个成分调配好，就像调制一杯完美的鸡尾酒，嘿嘿！2.2 其他成分除了基本成分，咱们还可以加入一些“调味剂”。
比如：1. 磷酸盐：帮助细菌更好地利用能量，别小看这个，重要得很呢。
2. 微量元素：铁、锰这些，虽然含量不多，但对细菌来说可是大补品，简直是“细菌的维生素”。
3. pH调节剂：有时候环境酸碱度不对，咱们得调调，保证细菌在最佳状态下发酵。
配方就像是做饭，想要味道好，就得多尝试，多调整，找到那个完美的平衡点！3. 制备步骤3.1 具体步骤好啦，现在咱们来聊聊怎么把这些成分变成培养基吧。
其实步骤很简单：1. 准备好所有材料：一切准备就绪，像个小厨师一样。
2. 称量成分：按比例把营养琼脂、葡萄糖、氮源等称好，别马虎，量要准。
3. 溶解：把称好的成分放进水里搅拌，直到完全溶解，就像搅拌奶茶一样，直到没有颗粒。
4. 灭菌：这一点特别重要，得把细菌们的“敌人”消灭干净，才能让咱的枯草芽孢杆菌尽情生长。
枯草芽孢杆菌的发酵
枯草芽孢杆菌的发酵学院：化工学院专业：生物工程班级：生物10-2 ：霞摘要枯草芽孢杆菌是我国农业部允许作为饲料添加剂的15 种菌种之一, 其已被越来越多地制成饲用微生态制剂。
因其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色” 添加剂，故具有广阔的发展前景，并已在畜牧业、饲料业广泛应用，显示巨大的社会效益和生态效益。
通过摇床培养筛选出较适宜于枯草芽孢杆菌发酵的培养基配方，发酵培养基配方确定后，在摇床条件下，通过对温度、初始ｐＨ值、初始接种量、装液量、摇床转速等发酵条件的摸索，确定最佳发酵条件。
在摇瓶条件下优化发酵培养基和发酵工艺后，采用发酵罐进行发酵培养，对枯草芽孢杆菌在液体发酵过程中的菌体数量、ｐＨ值、总糖含量和总氮含量四个因素随时间的变化进行了观察。
枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。
单个细胞0.7 ～0.8×2～3 微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6 ～0.9 ×1.0 ～1.5 微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。
枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些物质对致病菌或源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。
枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道pH 值，间接抑制其它致病菌生长。
枯草芽孢杆菌菌体自身合成α- 淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体的消化酶类一同发挥作用，能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B 族维生素，提高动物体干扰素和巨噬细胞的活性，在饲料中应用广泛。
它还可以用来改善水质，应用在污水处理和环境保护中。
和其它微生物混合使用，还可以用于生物肥料和土地改良等关键词：枯草芽孢杆菌生长发酵活菌数第一章材料与方法1.1材料1.1.1菌种枯草芽孢杆菌1.1.2培养基（1）LB培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl10g，蒸馏水1000ml，pH 为7，（可溶性淀粉20g）琼脂20g。
枯草芽孢杆菌发酵方法
枯草芽孢杆菌发酵方法
一、前言
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的细菌，在生物学、食品工业、医药行业等领域有着广泛的应用。
其中，枯草芽孢杆菌的发酵技术在生产中起到了至关重要的作用。
本文将详细介绍枯草芽孢杆菌发酵方法。
二、实验室条件
1. 发酵罐：体积为5L或10L，顶部设有气体进出口和搅拌器。
2. 培养基：含有适量碳源、氮源和微量元素的培养基，如汤姆森培养基或液体发酵培养基。
3. 发酵条件：
（1）温度：30-37℃；
（2）pH值：6.5-7.5；
（3）转速：100-200rpm；
（4）通气量：0.5-1vvm。
三、步骤
1. 预处理种子菌株
将枯草芽孢杆菌种子菌株接种到含有合适培养基的试管中，在恒温摇床上摇晃培养12-18小时，直至细胞密度达到一定值。
2. 发酵罐中的发酵
将预处理好的种子菌株转移到发酵罐中，加入适量的培养基，并控制好发酵条件。
在发酵过程中，要注意监测细胞密度、pH值和溶氧量等参数，并根据需要进行调整。
3. 发酵结束
当细胞密度达到最高峰时，即为发酵结束。
此时可通过离心、过滤等方式将菌体和培养液分离，得到所需的产品。
四、注意事项
1. 在实验室操作过程中，要注意消毒和无菌操作，避免杂菌污染。
2. 在预处理种子菌株时，要选择新鲜的菌落，并控制好摇床速度和温度等条件。
3. 在发酵过程中，要严格控制各项参数，并及时进行调整，以保证最佳的生长条件。
4. 在收获产品时，要注意采用合适的分离方法，并保持产品的纯度和活性。
枯草生产工艺
枯草芽孢杆菌生产工艺规程（5000L发酵）一．产品简介品名：枯草芽孢杆菌（来源：市微所检测中心）拉丁学名Bacillus subtilis性状：浅黄色粉末二．工艺流程图试管斜面↓三角瓶摇瓶↓一级种子培养（50L罐）↓二级种子培养（500L罐）↓发酵培养（5000L罐）↓离心↓冷冻干燥↓粉碎→芽孢计数↓保存↓包装三．生产工艺的操作过程及要求1.摇瓶培养（1）50L、500L、5000L罐的清洗，过滤器检查，保压检漏。
空消。
（2）检查培养基原料、柴油是否够用。
（1）准备补碱瓶三个，消泡剂瓶两个，补料管一根（用于补糖）。
灭菌条件：121℃，30分钟。
（2）移种前镜检正常后，开始配制5000L罐的培养基。
4.发酵培养（5000L罐）5.补料（200L或500L罐）6.放罐离心放料速度：检测离心上清液OD600值。
拆卸频率：每台离心机装菌泥约5kg，根据发酵液湿重推出每次离心的发酵液体积。
放罐完毕取出pH电极，清洗后放到指定点。
7.菌泥添加冻干保护剂保护剂配方（每10kg菌泥）：麦芽糊精1kg，淀粉2kg，海藻糖300g，抗结块剂200g，水8L。
保护剂充分溶解后，与菌泥混合，搅拌混匀。
8.真空冷冻干燥（具体操作参见冷冻干燥SOP）装盘：每盘体积为1L。
预冷时间：-40℃左右维持4h。
抽真空：点动开循环泵加热。
出柜：产品贴上标签，注明生产批号、重量、出柜日期。
取样：出柜时抽取样品约20g，用于检测计数。
10.保存冷冻干燥后的菌体置于-20℃冰箱保存，填写冰箱物品保存记录。
11.粉碎使用60-100目筛网过筛，粉碎的器具应在粉碎间清洗干净，避免跟其它物品交叉污染。
12. 包装称重，用锡纸包装后，进行封口。
四．生产过程的质量控制1. 发酵前期pH值控制在6.5左右，6.00-7.00之间。
2. 发酵过程产生大量泡沫，需要流加消泡剂，不能跑料。
3. 摇瓶菌种、移种前的种子液和培养基、放罐后的菌液，均用显微镜检测是否正常。
枯草芽孢杆菌固态发酵工艺流程
枯草芽孢杆菌固态发酵工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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枯草芽孢杆菌发酵起泡严重，求高人指点
枯草芽孢杆菌发酵起泡严重，求高人指点最近在做枯草芽孢杆菌的10L发酵试验，具体参数如下：0-4h转速150,通气量1:0.5；4-20h转速200，通气量1:1.2；20-24h转速100，通气量1:0.5.培养基主要配方如下：泡叶藻浸泡液（常温浸泡8小时过滤后离心）1L，玉米淀粉10g，玉米蛋白粉5g，还有就是发酵枯草的常用无机盐类等。
10L的发酵罐一般按7L量配制培养基，经空消和实消后蒸汽水和浸泡液培养基一共体积大约7L左右，消泡剂用的乳化硅油，加料时提前加3大滴左右，发现8小时左右后起泡开始严重，继续流加灭菌后的消泡剂也不太管用，因为消泡剂太粘稠，不太容易流进去，罐压最高调到0.05MPa，个人认为是有机营养成分太多，而且浸泡液本身有点粘度，也容易起泡，请高人分析下主要的原因是什么，该如何改进？？回复换消泡剂啊，我们用的是有机硅的，还不错，消泡剂粘度大可以稀释后再用。
另外你的转速也不高，消泡效果应该不错的回复换消泡剂啊，我们用的是有机硅的，还不错，消泡剂粘度大可以稀释后再用。
另外你的转速也不高，消泡效果应该不错的我们用泡叶藻浸泡液配培养基，本身就有粘度，而且配方有机成分很多，消泡很难，这种成分的培养基用哪种消泡剂比较好？？回复没办法，你的蛋白类培养基太丰富了。
另外，枯草杆菌开始分泌胞外蛋白酶，同样造成大量起泡。
回复没办法，你的蛋白类培养基太丰富了。
另外，枯草杆菌开始分泌胞外蛋白酶，同样造成大量起泡。
那玉米蛋白粉用什么替代比较好呢，起泡是不是受氮源的影响稍大点回复那玉米蛋白粉用什么替代比较好呢，起泡是不是受氮源的影响稍大点当然是氮源，主要是因为容易消耗的氮源利用完了，菌体开始分泌蛋白酶等，消化大分子的蛋白物质了。
回复肯定是分泌蛋白酶了。
应该还伴随有臭味产生回复当然是氮源，主要是因为容易消耗的氮源利用完了，菌体开始分泌蛋白酶等，消化大分子的蛋白物质了。
有什么好办法可以控制后期的起泡量呢，我做的时候最严重的时候能通过泡沫喷出1L培养基。
10L发酵罐操作规程-简明
10JS发酵罐操作规程1.空罐准备工作1）清洗发酵罐后，盖紧罐盖，旋紧罐盖上压紧螺栓。
2）标定pH、DO电极，将电极插入罐体侧面的传感器接口内并及时的锁紧螺母，确保安装妥当，防止高压下传感器弹出伤人。
3）关闭发酵罐所有与外界相连接口的阀门。
4）装培养基，盖紧进料口。
2.灭菌1）预热（1）预先开启蒸汽发生器、空压机及水源开关（2）开搅拌器，调转速为200—300rpm，温度设为手动，进气三通阀抬到S档。
（3）开排气阀，开排夹套冷凝水阀。
其它所有阀门均为关闭（4）打开总蒸汽阀，打开夹套蒸汽阀，夹套进蒸汽，至培养基温度到98℃。
2）实罐灭菌：温度至98℃时进入实罐灭菌阶段。
（1）停搅拌，微开空气过滤器前的冷凝水阀，开二路蒸汽阀，待冷凝水排尽后，关闭冷凝水阀，三通阀换到F档，蒸汽进罐。
（2）当罐温达到100℃两分钟后，关闭排尾气阀，调节蒸汽阀，维持过滤器前压力为0.12—0.16Mpa，同时必须保证蒸汽阀有一定的开度，不得关死。
（3）达到预定温度时，打开排尾气阀，至有一定量蒸汽排出，关紧或微开夹套蒸汽阀，微开罐底阀（至视镜处培养基翻动有少量变化为宜），根据罐压和罐温变化的趋势，及时调节蒸汽阀和罐底阀。
罐压和罐温维持在预定范围内开始计时。
旋松接种口盖至有少量蒸汽冒出。
此阶段也可灭菌取样管。
3）灭菌完成及降温（1）保温结束后，旋紧接种口，旋紧罐底阀，关小排气阀，关紧取样器蒸汽阀。
（2）关闭一路、二路蒸汽阀，过滤器三通阀置于S档。
缓缓开启空气阀，开启排冷凝水阀。
利用空气吹干空气过滤器膜。
（3）关闭夹套排气阀，打开夹套进水阀和循环管线切断阀。
设定发酵温度，温度控制方式为“自动”，发酵罐进入自动降温。
100℃时可以开搅拌。
（4）打开尾气冷凝器水阀。
当罐压接近0.05Mpa时，过滤器冷凝水排尽后，关闭过滤器冷凝水阀，将三通阀放回F挡，空气进罐。
注意：在降温过程中，始终监视罐压，严禁压力掉零。
3.发酵当温度降至发酵所需温度时进入发酵阶段1）设置各发酵参数为发酵工艺值，此时标定溶氧电极为100%。
分批发酵、连续流加发酵和分批补料发酵优缺点比较
图表比较分批发酵、连续（流加）发酵和分批补料发酵优缺点呼吸作用与发酵的根本区别在于：电子受体不是将电子直接传递给底物本身的中间产物，而是交给电子传递系统，并逐步释放能量后再交给最终的电子受体。
4、发酵过程杂菌污染的途径有哪些？如出现杂菌污染，应如何处理？答：发酵过程杂菌污染的途径有1.种子带菌，2.培养基及设备消毒不够，3.设备破损，4.空气系统，5.操作不当（取样、补料、消泡、控制）等。
（2分）如出现杂菌污染，应对染菌时间、种类、染菌规模进行分析根据具体情况处理，（1分）如：1.种子带杂菌——灭菌，排掉。
（0.5分）2.发酵前期——严重：实消后补种、料。
不严重：运转并观察。
（0.5分）3.发酵中期——分析微生物数量、种类、物料性质，再做处理。
（0.5分）4.发酵后期——同中期，并考虑产率与成本关系，考虑放罐。
（0.5分）5、连续发酵有何优缺点？答：（1）、设备生产能力大、利用率高、没有中间清洗杀菌、没有发酵适应期。
（1分）（2）、连续化、自动化、人平生产率高、成本降低。
（1分）（3）、发酵稳定、便于管理。
（1分）缺点：营养利用率略低、控制要求高。
（2分）6、摇瓶提高溶氧方法有哪些？发酵罐提高溶氧方法有哪些？答：摇瓶提高溶氧可考虑减小装液比，增加摇床转速，不会造成染菌的情况下减少瓶口砂布层数等方法。
（3分）发酵罐提高溶氧的方法有选择合理罐型，增加高径比，适当提高通气量，适当提高搅拌速度（搅拌罐）等方法。
（3分）6、泡沫对发酵有何影响？常用的消泡方法有何优缺点？答：泡沫对发酵的影响有：（1）泡沫持久存在，妨碍CO2的排除，影响微生物对氧的吸收，破坏正常生理代谢，不利发酵和生物合成。
（2）泡沫大量产生，使发酵罐有效容积大大减少，影响设备利用率。
（3）泡沫过多，控制不好，会引起大量跑料，造成浪费和环境污染（4）泡沫升到灌顶，可能从轴封渗出，增加染菌机会（5）泡沫过多也会影响氧传递、通风与搅拌效果。
（3分，答出3点以上即可）化学消泡优点：化学消泡剂来源广泛，消泡效果好作用迅速可靠，用量少，不需改造设备，大小规模适用，易实现自动控制。
枯草芽孢杆菌的发酵
枯草芽孢杆菌的发酵枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然环境中的厌氧菌，其代谢能力强，能够在不同的温度和pH值下生长并在发酵产生多种有益的代谢产物。
枯草芽孢杆菌的发酵技术具有操作简单、生长迅速、有益代谢产物多等优点，成为目前工业上比较常用的微生物发酵技术之一。
下面将介绍枯草芽孢杆菌的发酵及其应用方面的情况。
枯草芽孢杆菌的发酵过程需要一种含有能量、有机物质和无机盐等基本的营养物质的培养基。
其中碳源可为糖类、醇类、油脂以及淀粉等，氮源可为氨基酸、蛋白质等，而微量元素例如镁、钾、钙、铁、锌、硫等的添加也十分重要。
根据细胞生长的需要，在培养基中添加不同的诱导剂，如硫酸亚铁、纤维素、海藻酸等，可促进枯草芽孢杆菌发酵产生酶和多糖等有益代谢产物。
同时添加辅助营养因子如维生素、核酸、脂类和氨基酸等也有利于菌体的生长。
枯草芽孢杆菌的发酵过程一般可分为以下几个步骤：1. 发酵菌种的制备：从保存好的枯草芽孢杆菌菌株中挑选一株适宜的为发酵菌种，通过预培养、扩大培养等步骤得到高活力的发酵菌种。
2. 发酵罐内的生长：高活力的发酵菌种被接种到发酵罐内的含有营养物质的培养基中，通过连续搅拌和恒温等方式进行发酵罐内的生长。
在此过程中，要注意控制罐内的氧气和水分等因素，并根据菌株的特性选择适宜的温度和pH值等条件，确保菌体的生长和代谢过程可以连续持续。
3. 代谢产物的制备：随着菌体的生长，枯草芽孢杆菌将产生一系列的代谢产物，包括酶类、多糖、抗生素、代谢物以及酸等。
其中酶类和多糖等有益代谢产物有广泛的应用前景，因此在发酵过程中需要采用适当的条件刺激和引导，以更好地促进糖基化、多糖生成等反应。
4. 收获和处理：发酵过程通常需要持续数日至数周不等，当代谢产物达到预期质量和产量后，需要将发酵罐内的培养液收获出来，通过中和、破细胞、浓缩等方式进行处理，得到纯净的有益代谢产物。
枯草芽孢杆菌具有多种的应用前景，如在食品、饲料、医药、环境保护等诸多领域中均有广泛的应用。
产枯草芽孢杆菌实训报告
一、种子的制备
➢ 种子的制备
➢ 培养基
➢ 牛肉膏 0.5g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g
蒸
馏水
➢ 将配置好的培养基放入250ml的三角瓶中装液 量为100ml，数量11个 。装液后进行高温灭菌。
➢ 一级种子的制备
➢ 选取长势良好的菌种，挑取菌落2~3环接种 导液体摇瓶中。
行升温，当温度达到120摄氏度、压强时，保持温度和 压力20min。 ➢ 灭菌后，关闭蒸汽进气阀，开大放气阀，当压强下降 到时开启通气阀。使罐内压力保持在左右。 ➢ 开启冷水阀门，对发酵罐进行降温。
五、接种
➢ 当罐温降到37摄氏度后，关闭冷水。用酒精将 接种口处仔细擦洗，并放上接种火圈。
➢ 减少进气，使罐压保持在，点燃接种火圈。 ➢ 拧下进料口螺盖，放入酒精中,以免染菌。 ➢ 按接种瓶的瓶口在火焰上灼烧一下，并在火焰
罐体经行升温，当温度达到120摄氏度、压强 时，保持温度和压力20min。 ➢ 灭菌后，关闭蒸汽进气阀，开大放气阀，进行 泄压。
四、实罐灭菌
➢ 泄压后，从进料口开始添加培养基，并开始搅拌（转 速130r/min）
➢ 进料完毕后开始调节PH值 ➢ 调好PH后，对罐体进行夹套预热85摄氏度以上。 ➢ 温度到达后，关闭夹套进气开关。通热蒸汽对罐体经
➢ 取上述溶液1ml，加入DNS试剂于沸水浴中加热2min进行显色，取出后 用水迅速冷却 ，加去9ml蒸馏水，摇匀，在540nm波长处测定吸光值。
➢ 2）空白液的处理： ➢ 发酵液离心处理：8000rpm，5min ➢ 1ml离心后的发酵液+5ml 1%淀粉溶液直接加热煮沸5min，取1ml，加入
发酵工程名词解释
发酵工程名词解释关于《发酵工程》课程复习中名词解释、简答题、问答题内容要求如下：四、名词解释1.葡萄糖效应：葡萄糖对微生物利用其他碳源的阻遏2.分批发酵：将发酵培养基一次性投入发酵罐，接种发酵后再一次性地将发酵液放出的一种间歇式发酵操作方式。
3.发酵工业用玉米浆：制造玉米淀粉须将玉米粒先用亚硫酸浸泡，浸泡液浓缩即制成黄褐色的液体4.微孔接种法：（孢子悬浮液一般）利用注射器在罐的接种口橡皮膜上注入种子罐内。
5.接种量：＝移入种子液的体积/接种后培养液的体积6.合适种龄：指处于对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培养时间。
7.初级代谢：初级代谢产物是指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质8.发酵级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数9.巴斯德效应：酵母菌呼吸抑制发酵酒精的现象10.补料分批发酵：在分批发酵过程中，间歇或连续地补加营养物质，是介于分批发酵和连续发酵之间的一种发酵方法11.DE值（葡萄糖值）：表示淀粉水解程度及糖化程度，指葡萄糖（所有测定的还原糖都当作葡萄糖来计算）12.实罐灭菌：（即分批灭菌）将配制好的培养基放入发酵罐或其他装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备加热至灭菌温度后维持一定时间，在冷却到接种温度，这一工艺过程称为实罐灭菌，也叫间歇灭菌。
13.种龄：开始培养到可移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。
14.通风比：是1m3发酵液1min通入无菌空气m3量15.发酵热：引起发酵过程温度变化的原因是发酵过程所产生的热量，称为发酵热。
发酵热包括生物热、搅拌热、蒸发(汽化)热和辐射热等。
16.染菌：是指在发酵培养中侵入了有碍生产的其他微生物。
17.黄酒的定义：以稻米、黍米、黑米、玉米、小麦等为原料，经过蒸料，拌以麦曲、米曲或酒药，进行糖化和发酵酿制而成的各类黄酒。
五、简答题（5×4，20%）1.生产菌种的衰退及原因：（菌种经过长期人工培养或保藏），由于自发突变的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象，导致衰退的原因有：保藏方法不妥、保藏操作不当、传代不当、培养基不适、回复突变2.满足发酵工业原料选择的三个要求是什么？①满足菌体生长的营养要求，有利于大量积累产物；②原料来源丰富、价格便宜；③发酵周期短和对产物提取无妨碍等。
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枯草芽孢杆菌的10L发酵罐分批发酵
一、实验目的：
通过实验加深对发酵罐结构和分批发酵原理的认识，了解工业发酵的基本原理和方法。
二、实验原理：
（一）发酵罐的结构组成原理
（二）分批发酵的原理
分批发酵是一种准封闭式系统，种子接种到培养基后除了气体流通外发酵液始终留在生物反应器内，在此简单系统内所有液体的流量等于零。
分批发酵过程一般可以粗分为四期：停滞期、对数生长期、稳定期和衰退期。
停滞期，即刚接种后的一段时间，细胞数目和菌量不变，因菌对新的生长环境又一适应过程，其长短主要取决于种子的活性、接种量和培养基的可利用性和浓度。
当细菌已经适应新的环境，养料充足而又无抑制生长的物质，便进入对数生长期，其比生长速率达到最大。
随着养料的减少，有害代谢产物的积累，生长不可能再无限制地继续。
此时比生长速率为养分、代谢产物和时间的函数，其细胞量仍在增加，但其比生长速率不断下降，细胞在代谢与形态方面逐渐退化，经短时间的减速后进入稳定期，此时净生长速率为零。
当养分耗竭，对生长有害代谢物在发酵液中大量积累便进入死亡期，此时生长呈负增长。
工业发酵一般不会等到菌体开始自溶时结束培养。
三、实验材料与设备
（一）材料
1、菌种：枯草芽孢杆菌
2、培养基
种子培养基：液态LB培养基
发酵培养基：糖蜜10g/L，鱼粉10g/L，Nacl2.5g/L，CaCl21g/L，MgSO4·7H2O1.25g/L，KH2PO4为0.38g/L，K2HPO40.74g，麦麸为5.20 g/L，玉米粉为6.49 g/L。
（二）设备：镇江东方生工10L发酵罐
四、实验步骤
1.菌种的准备：取冷冻甘油种接种到平皿中，在平皿中挑取单菌落接到试管斜面。
三角瓶
液体培养基摇床振荡培养。
2.发酵液的准备：
先取鱼粉40g，麦麸20.8g, 玉米粉25.96g 加热至沸腾然后加入糖蜜40g 过滤培养基然后加入Nacl 10g，CaCl2 4g，MgSO4·7H2O 5g，KH2PO4为1.52g，K2HPO40.74g为2.96g。
定容至3400ml(实消时会产生15%的冷凝水)
3.启动发酵罐
打开空气压缩机电源，按start键；检查蒸汽发生器水箱水位，打开电源开关；检查发
酵罐水箱水位。
4.发酵罐空消及空气管道消毒
待压缩空气压力和蒸汽压力不再上升时，进行过滤器及管道消毒、空消。
⑴关V134、V135、开V137、V125，排出夹套中的冷凝水，关V125。
⑵开V126、V152，排尽蒸汽管中冷凝水后将V152转为微开；开V151，微开V106，调
节使罐内升压至0.11MPa。
⑶关V101，开V121，开V104，排尽冷凝水，将V104调为微开，开V103，关V151，维
持罐压0.11MPa 30min。
注意V101一定要关死，防止蒸汽进入流量计使其损坏。
⑷关V121，待罐压和过滤器压力降到0.05左右打开V101，开V104排出冷凝水。
微开
V104，调节V103和V106使空气流量保持在6-9之间，罐压保持在0.05MPa。
⑸关V137，开V135、V134，冷却夹套。
注意，冷却过程中一定要随时注意调节V103
使罐内压力保持在0.05MPa。
防止温度突降造成罐内负压损坏设备。
⑹待温度降到50摄氏度时，关V134、V135。
5.发酵罐加培养基实消
⑴关V103，开V106，待罐内压力降为零，安装校正好的溶氧电极和pH电极，从加料
口加入培养基。
⑵关V134、V135、开V137、V125，排出夹套中的冷凝水，将罐内温度加热至80-90摄
氏度（整个过程中要搅拌），关V125、V137。
⑶开V126、V152，排尽蒸汽管中冷凝水后将V152转为V152转为微开；开V151，微开
V106，调节使罐内升压至0.11MPa，保持30min。
⑷关V151、V152、V126、V106。
⑸关V137，开V135、V134，冷却夹套。
待温度降至80摄氏度，开V103、V106，调节
使使空气流量保持在6-9之间，罐压保持在0.05MPa，
6.接种培养
待温度降到37摄氏度时接种。
⑴用酒精棉擦洗接种口，并在接种口四周围上酒精棉。
⑵调节V103和V106是罐压保持在0以上（注意不能为0，防止污染）。
点燃酒精棉，
拧开接种口，接种（注意无菌操作），盖上接种口，用湿毛巾灭火。
⑶调节V103、V106，达到工艺要求的通气量并保持罐压，打开控制柜设置各种参数培
养。
7.取样检测
⑴开V126，微开V152，保持15min，关V126、V152。
⑵开V151、V152放出少量培养液，关V152、V151。
注意无菌操作，在酒精棉的火焰下
进行。
测培养液的还原糖含量、总糖含量，氨氮含量，菌体数量。
⑶取样口灭菌，同⑴条。
8.出料
培养完毕，打开V151、V152放出培养液。
9.发酵罐的清洗
⑴加入自来水，通气搅拌，放净罐内水。
⑵如很脏，则关闭电源，旋下电机及各传感器的连线插头。
对称拧下罐盖螺母，移走罐
盖，加入适量水，用软毛刷刷洗，放净罐内水。
再装上罐盖。
四、撰写实验报告，根据发酵数据绘出发酵曲线图并分析（温度、PH值、OD值、DO值四个曲线图并分析原因）。
附：发酵罐使用注意事项
一、开蒸汽发生器时首先检查有没有水；另外要等到有压力时才能
使用蒸汽、
二、空气精过滤器消毒时，蒸汽阀门上方的空气阀门一定要关死，
防止蒸汽进入流量计使其损坏。
三、打开罐子上任意一个接口时压力需要降到零；罐子降温时一定
要保持内部正压。
四、发酵罐的水箱确保有水。
五、过滤器消完毒后压力不能降为零。
六、控制柜的温度校正和电机转速比不能更改；电脑软件上的串口
不能改。
七、温度降到50摄氏度以下才能向里面投料。
八、左边供给发酵罐的自来水龙头在确保有水的情况下应开的尽
量小。