4.3.3微生物学实验三微生物测微技术 南开大学
南开大学智慧树知到“药学”《微生物学》网课测试题答案4
南开大学智慧树知到“药学”《微生物学》网课测试题答案（图片大小可自由调整）第1卷一.综合考核(共15题)1.真核微生物的有性生殖()A.产生二倍体孢子B.产生单倍体孢子C.可发生染色体交换D.会发生减数分裂2.肽聚糖物质存在于()A.真核生物的核糖体B.细菌的细胞壁C.真核生物的染色体D.细菌的细胞膜3.霉菌菌丝体是一种繁殖孢子的类型。
()A.正确B.错误4.工业化发酵生产抗生素时，放线菌在液体培养基中，通常以形成大量的分生孢子来繁殖。
()A.正确B.错误5.发酵所需要的条件时()。
A.发酵需要无氧条件下发生B.发酵过程发生时需要DNAC.发酵的一个产物是淀粉分子D.发酵可在大多数微生物细胞中发生6.酵母菌细胞壁是由葡聚糖和甘露聚糖两种成分组成，不含蛋白质和纤维素。
()A.正确B.错误7.需要载体但不能进行逆浓度运输的是()。
A.主动运输B.扩散C.促进扩散D.基团转位8.生长需要氧气的那些菌称为好氧菌。
()A.正确B.错误9.次级代谢的特点是()。
A.次级代谢产物的合成受质粒控制B.某些催化次生代谢的酶专一性不高，次生代谢产物多组份C.次生代谢有明确的生理功能，可影响菌体生长D.次生代谢多为菌体终止生长后发生10.以下列的哪种微生物作为遗传规律的研究对象，提出了“一个基因一个酶”的学说?()A.粗糙脉孢霉B.E.coliC.青霉菌D.酵母11.微生物的稳定生长期()A.群体是在其最旺盛壮健的阶段B.群体是在其最少的阶段C.细胞分裂速率降低D.细胞分裂速率增加12.溶原性细菌是指()。
A.带有毒性噬菌体的细菌B.带有原噬菌体基因组的细菌C.带有R因子的细菌D.带有F因子的细菌13.T细胞表面特异性抗原受体不能直接特异性识别、结合天然抗原。
()A.正确B.错误14.补体可使细菌裂解。
()A.正确B.错误15.单独培养一种接合型的酵母菌过程中会自发产生其它接合型的酵母菌。
()A.正确B.错误第2卷一.综合考核(共15题)1.与细菌侵袭力无关的物质是()A.菌毛B.荚膜C.透明质酸酶D.胶原酶E.芽胞2.诱变剂可提高菌种的回复突变率。
微生物实验全
零件是否齐全，镜头是否清洁。
2.调节光亮度
3.低倍镜观察：粗调、细调
4.依次再进行中倍、高倍观察
5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象
后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴
香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，
细调至看清物象为止。
6.换片：另换新片，必须从第三条开始
操作。
7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，
先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再
用擦镜纸沾取少量洗液（无水乙醇∶
无水乙醚＝７∶３）擦去残留的
油，最后用擦镜纸擦去残留的洗液，
后将镜体全部复原。
显微镜保养和使用中的注意事项：
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。
2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或
粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高
2.油镜的使用
油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。
加入中间的介质是一层香柏油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。
3.单染色法
是用一种染料使细菌着色以显示其形态，不能辨别细菌细胞的构造，通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红等）使其着色。
片滋生霉菌而腐蚀镜片。
（二）、单染色的方法：
染色的流程图：
涂片干燥固定染色
水洗晾干镜检
1.先将载玻片洗净，擦干。
2.涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按无菌操作法取大肠杆菌涂片，做成浓菌液，注意取菌不要太多。
3.晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。
4.固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
南开大学微生物学课件 3-微生物的形态结构(二)
（一）菌丝的形态
1. 硬壁包围的管状结构 2.长度可无限生长 3.直径：1-30¦ m或更大
(一般5-10¦ m) 4．菌丝的顶端呈园锥形,称 为伸展区（extension zone） 5．伸展区后的细胞壁逐渐加 厚而不再生长。
β1，3－葡聚糖是第二大微纤维，特别是在酿酒酵母中； β1，6－葡聚糖在酵母的细胞壁中起着很重要的作用，它把 GPI－CWP（依赖糖基磷脂酰肌醇的细胞壁蛋白连接到 β1，3－葡聚糖骨架上；
α1，3－葡聚糖存在于裂殖酵母和子囊菌和担子菌细胞壁 中，而在芽殖酵母和两型真菌不含有α1，3－葡聚糖。
（2）蛋白质
数量 所有真菌细胞中至少有一个或几个线粒 体，随着菌龄的不同而变化
形状 线粒体的形态和外界条件有密切关系
圆形、椭圆形，有的可伸长至30微米，有时呈分支状。 圆形的线粒体普遍存在于菌丝顶端， 椭圆形的则常见于菌丝的成熟部分。
结构
线粒体具有双层膜， 外膜光滑并与质膜相似， 内膜较厚，常向内延伸成不同数量和形状的嵴， 嵴的外形是片层状还是管状，与真菌的类群有关。
外部形态
1
菌落（colony）：菌丝几乎沿 着它的长度的任何一点都能 发生分支，由于分支的不断 产生而形成一个特征性的园 形轮廓。
联结现象（anastomosis）：在菌落发育的后期，菌
丝之间互相接触，在菌丝接触点相近的壁局部降解 而发生菌丝的联结现象，使菌落形成一个完整的网 状结构。
菌落形状：疏松的、紧密的、平坦的、光滑的；同心园或 放射纹 质地：为毡状、絮状、毛发状、绳索状、皮革状； 颜色：多种多样， 大小：区别较大，扩展到整个培养皿；局限性生长，直径仅1-2cm
2022年南开大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年南开大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、原生动物是______色、无______，能______运动的单细胞真核生物。
2、用孔雀绿和复红作细菌芽孢染色时，可使菌体呈______色，使芽孢呈______色。
3、大肠杆菌基因组的主要特点是：遗传信息的______，功能相关的结构基因组成______，结构基因的单拷贝及rRNA基因的多拷贝，基因组的重复序列少而短。
4、生产中，为了长期维持对数生长期可采取______。
5、酵母菌有性繁殖一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过______、______和______形成四个或八个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这样一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。
6、病毒的存在范围是病毒能够感染并在其中复制的______。
7、海洋细菌有______、______、______和______等共同特征。
8、蓝细菌的培养可用______培养基。
9、呼吸作用与发酵作用的根本区别是呼吸作用中电子载体不是将电子直接传递给底物降解的中间产物，而是交给______系统，逐步释放出能量后再交给______。
10、巨噬细胞在非特异性和特异性免疫中主要有以下四个作用： ______，______，______和______。
二、判断题11、当死海鱼在10～20℃下保存1～2d后，就可在黑暗处看到鱼体表面长有成片发荧光的菌苔或大量菌落，这是因为长有大量海洋光合细菌之故。
（）12、氮素营养物质不仅用来合成细胞中的蛋白质，还可以为部分微生物提供能源。
（）13、EMP途径主要存在于厌氧生活的细菌中。
（）14、影响较大的生物五界学说是由Whittaker于1969年提出的。
（）15、在G＋细菌细胞膜上，是找不到磷脂酰胆碱的。
（）16、酿酒酵母的双倍体细胞，既可通过不断出芽进行无性繁殖，也可在一定条件下通过形成子囊孢子进行有性生殖。
南开大学微生物学2003年硕士研究生入学普通微生物学考试试题
南开大学微生物学2003年硕士研究生入学普通微生物学考试试题一．名词解释（英文或缩写先译成中文再作解释。
每个2分，共34分）1．异宗配合2．准性生殖3．弱化子4．SD序列5．ADCC6．Antigen presenting cell7．细胞因子8．Peptidoglycan9．Protoplast10．Auxotroph11．Chemolithoautotrophy12．Acidophilic microorganisms13．寡核苷酸印迹序列14．CPE15．病毒吸附蛋白16．负链核酸17．Campbell Model二．判断题：（答案正确以“+”表示，答案错误以“-”表示，共16分，每题1分）1．酵母细胞是真菌中的一个单细胞类群。
2．某些真菌自体能发生有性生殖现象，这类真菌必须是雌雄同体而且是自交亲和的。
3．在分支代谢途径中，几种末端产物同时过量时，才对途径中的第一个酶有抑制作用，某一种末端产物单独过量则无抑制作用，称为协同反馈抑制。
4．在可阻遏操纵子的负调控系统中，调节基因产物是激活蛋白，它和效应物结合时阻止结构基因转录。
5．一株假单胞菌能利用葡萄糖产生乙醇，说明此菌中存在1，6-二磷酸果糖醛缩酶。
6．木瓜蛋白酶的切割位点位于IgG铰链靠N端处，分解后将IgG分为两个片段。
7．B细胞介导体液免疫产生抗体，同一B细胞在不同的时期可以分泌IgG和IgM不同的抗体。
8．补体的经典激活途径由抗原抗体复合物活化C1开始，分为结合和活化两个阶段。
9．朊病毒是一种蛋白质侵染颗粒，能引起哺乳动物的亚急性海绵样脑病。
10．AAV是一种卫星病毒，只能在同时有腺病毒或疱疹病毒感染的细胞核内复制，并且它还可以干扰腺病毒的复制以及腺病毒引起的转化。
11．小RNA病毒基因组的复制在细胞质中进行，痘病毒基因组的复制在细胞核中进行，逆转录病毒基因组的复制在细胞质和细胞核中进行。
12．使半数试验宿主发生感染的剂量称作半数组织培养感染剂量（TCID50）。
2021年南开大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2021年南开大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、不同的放线菌有不同的典型形态，如______属的基内菌丝会断裂成大量的杆菌状体，______属等可在菌丝顶端形成少量孢子，______属具有孢囊并可产生孢囊孢子，而______属则具有孢囊，但产生的是游动孢子等。
2、病毒的非增殖性感染有______、______和______3种类型。
3、分解代谢又称异化作用，是指复杂的有机分子通过分解代谢酶系的催化产生______、______和______。
4、放线菌为7.5～8.@5、酵母菌菌为3.8～6.@0、霉菌为4.0～5.@8、藻类为6.0～7.@0、原生动物为6.0～8.0。
@43、培养基按所含成分可分为______、______和______；按物理状态可分为______、______、______和______；按用途可分为______和______。
5、真菌菌丝具有的功能是______和______。
6、第一个用自制显微镜观察到微生物的学者是______，被称为微生物学研究的先驱者，而法国学者______和德国学者______则是微生物生理学和病原菌学研究的开创者。
7、常用的防腐方法有______、______、______和______等。
8、无菌动物在生理上有几个特点：______，______，______等。
9、微生物菌种保藏有两个原则，一是在菌种方面必须选用______；二是设法创造一个优良的休眠条件，例如______、______、______、______、______和______等。
10、按照现代免疫概念，免疫的功能包括三方面，即______、______和______。
二、判断题11、蓝细菌是一类革兰氏染色为阳性的原核生物。
（）12、用白糖配制培养基能满足微生物对一般微量元素的需要。
（）13、呼吸链中的细胞色素系统只能传递电子而不能传递质子。
（）14、真病毒是一大类只含有核酸和蛋白质两种成分的病毒。
南开大学微生物学习题库
第1章绪论填空题：1．微生物与人类关系的重要性，你怎么强调都不过分，微生物是一把十分锋利的双刃剑，它们在给人类带来____的同时也带来______。
2．1347年的一场由________引起的瘟疫几乎摧毁了整个欧洲，有1／3的人(约2 500万人)死于这场灾难。
3．2003年SARS在我国一些地区迅速蔓延，正常的生活和工作节奏严重地被打乱，这是因为SARS有很强的传染性，它是由一种新型的________所引起。
4，微生物包括：_______细胞结构不能独立生活的病毒、亚病毒(类病毒、拟病毒、朊病毒)；具细胞结构的真细菌、古生菌；具_____ 细胞结构的真菌(酵母、霉菌、蕈菌等)、单细胞藻类、原生动物等。
5．著名的微生物学家Roger Stanier提出，确定微生物学领域不应只是根据微生物的大小，而且也应该根据有别于动、植物的____。
6．重点研究微生物与寄主细胞相互关系的新型学科领域，称为____。
7．公元6世纪(北魏时期)，我国贾思勰的巨著“____”详细地记载了制曲、酿酒、制酱和酿醋等工艺。
8．19世纪中期，以法国的____和德国的_____为代表的科学家，揭露了微生物是造成腐败发酵和人畜疾病的原因，并建立了分离、培养、接种和灭菌等一系列独特的微生物技术，从而奠定了微生物学的基础，同时开辟了医学和工业微生物学等分支学科。
_____和____是微生物学的奠基人。
9．20世纪中后期，由于微生物学的____、_____等技术的渗透和应用的拓宽及发展，动、植物细胞也可以像微生物一样在平板或三角瓶中分离、培养和在发酵罐中进行生产。
10．目前已经完成基因组测序的3大类微生物主要是____、_____及____。
而随着基因组作图测序方法的不断进步与完善，基因组研究将成为一种常规的研究方法，为从本质上认识微生物自身以及利用和改造微生物将产生质的飞跃。
11．微生物从发现到现在的短短的300年间，特别是20世纪中期以后，已在人类的生活和生产实践中得到广泛的应用，并形成了继动、植物两大生物产业后的____。
微生物生理学笔记(南开大学)
6
南开考研系列资料 微生物生理学
QQ：535075271
只是折叠、装配、转运的帮助者，不带有决定折叠的三维信息，而是 在蛋白折叠和装配过程中，通过识别与稳定折叠中间体，促进正确结 构 的 形 成 。 分 为 三 大 类 ： 核 质 素 （ nucleoplasmin ）、 伴 侣 蛋 白 （chaperones）、热激蛋白（heat shock protein）。 二十四、分子伴侣的功能？ （1）参与新生肽链的折叠与蛋白的装配；分子伴侣通过稳定新生肽 链未折叠构象而促进正确折叠。（2）蛋白质的转运：分子伴侣通过稳 定蛋白质的可转运构象，参与并促进其转运和分泌。（3）抗逆反应 （Stress Response）：分子伴侣通过抑制蛋白质的不正确相互作用， 从而抵抗恶劣的环境。 二十五、Dna K：热激蛋白 Hsp 70 在大肠杆菌中的称谓；在蛋白质 折叠中促进蛋白质转运，由 2 个结构域组成，N—端结构域保守。有 ATPase 活性，C—末端结构域可变性强，能结合伸展的肽链。有两 个协同因子 Dna J 和 Grp E 调节行使功能。 二十六、Gro EL：Hsp 60 在大肠杆菌中的称谓，其促进蛋白折叠的 作用，由 14 个亚基组成双层饼状，每层 7 个亚基，具有多个结合肽 链的位点。 二十七、Gro ES：Hsp 10 在大肠杆菌中的称谓，起促进蛋白折叠的 作用，由 7 个亚基组成形成单饼状，常与 Gro EL 以复合物形式存在。 二十八、信号肽（Signal Peptide）：是指专门负责新生肽链穿越内质 网，起信号作用的肽链，位于肽链的 N 端，一般长度为 15—35 个氨 基酸残基。
Gly，Ser，A 可以是上述氨基酸，也可以是 Leu，Val，Ile。
三十、SRP:信号肽识别颗粒；在新生肽链进入内质网膜的过程中，起
南开大学微生物-第二章纯培养和显微技术
第二章微生物的纯培养和显微技术微生物学特有的实验技术微生物如何纯培养？研究其群体如何分离微生物纯种？小！镜下微生物形态多样显微镜观察各种显微技术第一节微生物的纯种分离和纯培养菌种是宝贵的天然资源，生境中多种微生物混杂群居，以纯种进行研究、应用和繁衍。
因此，纯种分离、培养是最基础的工作。
一、纯种分离、培养“特有的实验技术”微生物的纯种分离将多种混杂的微生物，经某种技术或方法分离或纯化的过程。
纯培养（pure culture)：在适宜条件下培养纯化获得的培养物（群体）。
纯种分离、培养所用器具及操作要“严格无菌”（一）无菌技术（aseptic technique)在分离纯种、转接纯种、培养纯种过程中，为保持纯种的“纯洁”性而防止其它微生物污染的技术。
1、所用物品的灭菌技术A、玻璃或金属器皿灭菌干热灭菌：干燥箱（160－170 °C 干热空气2小时灭菌）B、培养基或溶液灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌器（121 °C 热蒸汽30分钟灭菌）干燥箱高压自动灭菌锅压力表C、血清或生长因子溶液灭菌过滤除菌：细菌滤器滤膜(孔径小于细菌细胞的大小)C、无菌室UV杀菌、超净工作台火焰区操作。
“树立无菌意识，规范无菌操作、保证纯种培养”B、超净工作台无菌操作----移液2、无菌操作A、火焰旁无菌操作----接种（二）固体培养基分离纯种菌落（colony) ---琼脂营养平板菌落单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见、有一定形态结构的子细胞生长群体。
一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单个微生物只在固体培养基上形成菌落，在液体培养基中不会形成菌落。
微生物样品多种混杂某种方法培养分散成单个微生物平板单菌落每个菌落为纯种（纯培）纯种（纯培养）单菌落转接培养1、微生物纯种分离的原理和方法2．纯种平板分离的不同方法99ml无菌水试管10倍稀释图从土壤中分离细菌纯种方法10倍稀释1：100 1克土壤（1）涂布平板法（spread plate method）（2）稀释倒平板法（pour plate method）涂布平板法稀释倒平板法稀释菌落在表面菌落在表面下含培养基（3）平板划线法（streak plate method ）蛇形线法操作图平行线法操作图“在平板表面长出的菌落是需氧菌”（4）厌氧细菌的纯种分离厌氧培养箱图平板放在厌氧罐内培养（三）液体培养基分离纯培养个别较大细菌原生动物、藻类固体平板不能长菌落如何分离纯培养？接种物液体培养基顺序稀释法分离。
南开大学微生物遗传精品课程
南开大学微生物遗传精品课程1．从遗传学角度谈谈你对朊病毒(Prion)的理解和看法。
2．在人类基因组计划的执行甲，为什么要进行以微生物为主体的模式生物的全基因组序列测定?哪几种生物分别是已完成全基因组测序的第一个独立生活的生物?第一个真核生物?第一个自养生活的生物?3．在细菌细胞中，均以环状形式存在的染色体DNA和质粒DNA，在质粒提取过程中发生了什么变化?这种变化对质粒的检测和分离有什么利用价值?4．根据你所学的关于诱发突变的知识，你认为能否找到一种仅对某一基因具有特异性诱变作用的化学诱变剂?为什么?5．根据突变的光复活修复作用、原理，你认为在进行紫外线诱变处理时，应注意什么?为了使被诱变的细胞能均匀地受到紫外线照射，你将如何做?6．请设计实验来决定在一种特定的细菌中发生的遗传转移过程是转化、转导还是接合?说明每一种的预期结果。
设想有下列条件和材料可以利用：(1)合适的突变株和选择培养基。
(2)DNase(一种降解裸露DNA分子的酶)。
(3)两种滤板：一种能够持留细菌和细菌病毒，但不能持留游离的DNA分子；另一种滤板只能持留细菌。
(4)一种可以插入滤板使其分隔成两个空间的玻璃容器(如u型管)。
7．在第(6)题的实验中，为什么用双重或三重营养缺陷型？8．Hfr × F-和F+× F-杂交得到的接合子都有性菌毛产生吗?它们是否都能被M13噬菌体感染呢?9．为什么导致蛋白质表面氨基酸变化的突变一般不会引起表型的变化?而蛋白质内部氨基酸的替换则会引起表型变化?10．DNA链上发生的损伤是否一定发生表型的改变?尽你所能说出理由．朊病毒(或朊粒)是不含核酸的蛋白质传染颗粒，但它不是传递遗传信息的载体，也不能自我复制而仍然是由基因编码的一种正常蛋白质(PrP)的两种异构体PrPC(存在正常组织中)和PrPSC(存在于病变组织中)，其氨基酸和线性排列顺序相同但是三维构象不同，因此，由PrPSC引起的疾病又称之为构象病。
南开大学 812《微生物学》考试大纲 考试内容 复习参考书 考研辅导
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第一个坚持： 公共课的真题要多选择几个版本的，以四个为佳。每个老师对真题的理解和分析是不同的， 通过对比，我们或许可以形成自己的技巧和方法，正所谓“兼听则明，偏信则暗”。
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1.考研复试，往往以时政为核心，来灵活的考察知识点的应用。因此，这个阶段应该多多收集 一些时政热点，并尝试用所学知识去解决。 2.寻找复习的资料。包括老师们最近的讲话、论文等等。 3.准备听力和口语。很多学校，例如北大、人大等复试时考察口语和听力的。
专业课复习要有计划的进行，这一阶段要开始有计划的进行知识点的记忆。争取完成第一 轮的复习。达到的效果是，对每个知识点做到能够基本记住。
第三阶段：坚持（10 月 1 日-12 月 1 日）
坚持原因： 这是一个考验毅力的阶段，无数前人的血泪经验告诉我们，谁坚持到了最后，谁就能够成
功。经过长达三个月的紧张准备，精力和体力都耗费很大，但是“革命尚未成功，同志仍需努 力”。加上周围的同学开始找工作，很多的机会都可能分散考研的经历和时间。这个时候要耐
的知识点记忆牢固，想不得高分都难。 其次，公共课在几年以内基本都是同一批人来出题，即使更换老师，也是循序渐进的；即
南开大学微生物学难点解析
活细胞及其内部结构的 观察
环境微生物的直接观察； 病灶或医学样品中特定 病原微生物的直接检测 （使用特定的荧光抗体）
共聚焦显微镜
激光作为光源，每次照 明样品的一个点，连续 扫描后经计算机处理获 得样品的二维和三维图 像。显微镜价格昂贵
对完整细胞的细微立体 结构进行观察和分析
电子显微镜
透射电镜
用电子束作为“光潭” 聚焦成像，分辨率较光 学显微镜大大提高。仪 器庞大、昂贵、对工作 环境和操作技术有较高 的要求
涂布平板法
均匀使某些部位的菌落不能分 厌氧手套箱技术结合，这
开，进行微生物计数时需对稀 3 种方法也可用于获 得
释和涂布过程的操作特别注意， 各种厌氧菌的纯培养
否则不易得到准确结果
平板划线法
操作简单，多用于对已有纯培
养的确认和再次分离
稀释倒平板的一种变通形式， 在缺乏专业的厌氧操作设
稀释摇管法
但由于菌落形成在琼脂柱的中 备的情况下对严格厌氧菌
挑取
的微生物单细胞 或孢子需
经固体或液体培养基培养后才
能获得其纯培养物
从样品中直接分离所需的 微生物细胞或孢子，获得 其纯培养
12 第 2 章 微生物的纯培养和显微镜技术
3．保证所用菌种性状的稳定是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正 常进行。而目前使用的各种微生物保藏技术归纳起来不外乎生活态或休眠态两种。下面所 列的是目前较为常用的一些微生物保藏方法。
对病毒颗粒或超薄切片 处理后对细胞的内部结 构进行观察
扫描电镜
电子束在样品表面扫描， 一般用于观察样品的表 收集形成的二次电子形 面立体结构 成物像。分辨率远高于 光学显微镜。仪器庞大、 昂贵、对工作环境和操 作技术有较高要求
微生物学实验
微生物学实验引言微生物学实验是研究微生物的种类、特性和功能的重要手段。
通过实验可以深入了解微生物的生长、代谢、分化和遗传等方面的现象，为研究微生物的应用和控制提供理论和实践依据。
本文将介绍微生物学实验的基本步骤和常用实验方法，并结合具体案例展示实验的设计和分析方法。
实验步骤样品采集与处理首先，需要选择合适的样品。
可以从环境中采集，如土壤、水源等，或者从生物体中获取，比如人体、动物或植物组织。
采集样品时要注意卫生和无菌操作，以避免污染。
采集到样品后，需要进行处理。
常见的处理方法包括稀释、均质和过滤。
稀释可以使样品中的微生物浓度适合进行后续操作，均质可以使样品中的微生物均匀分布，过滤可以去除较大的颗粒和杂质。
培养微生物接下来，需要将样品中的微生物进行培养。
培养微生物的方法有多种，常见的包括固体培养和液体培养。
固体培养常用琼脂（Agar）作为培养基，液体培养则需要选取合适的培养液，并提供适当的温度、湿度和氧气条件。
在培养微生物的过程中，需要注意消毒操作，以防止其他微生物的污染。
此外，还需要定期观察和记录微生物的生长情况，包括菌落形态、颜色和大小等。
鉴定与分离当微生物培养达到一定程度后，可以进行鉴定和分离。
鉴定微生物的方法有多种，包括形态学观察、生理生化检测和分子生物学技术。
通过这些方法可以确定微生物的种类和相关特性。
分离微生物时，可以使用稀释涂布法、均匀涂布法或罩盖涂布法。
将培养物均匀地涂布在琼脂平板上，然后进行孔明法或拭子转接法进行分离。
分离出来的单个菌落可以进行单菌种的培养和纯化。
实验分析最后，可以对微生物进行实验分析。
根据研究目的，可以选择适当的实验方法进行。
常见的实验分析包括微生物生长曲线分析、代谢产物检测、抗生素敏感性测试等。
微生物生长曲线分析是研究微生物生长规律的重要方法。
可以通过测量菌落数量、菌落直径或光密度等参数，绘制生长曲线，并分析生长速率、生长周期等指标。
代谢产物检测可以了解微生物在不同条件下产生的代谢产物。
环境微生物实验-南开大学环境科学与工程学院TheCol
8)塞管塞 取出接种环，灼烧试管口，并在火 焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞， 以免试管在移动时纳入不洁空气。
9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉 花塞旋紧。
2、液体接种技术
(1)用斜面菌种接种液体培养基时，有下面两种情 况：如接种量小，可用接种环取少量菌体移入培养 基容器(试管或三角瓶等)中，将接种环在液体表面 振荡或在器壁上轻轻摩擦把菌苔散开，抽出接种环， 塞好棉塞，再将液体摇动，菌体即均匀分布在液体 中。如接种量大，可先在斜面菌种管中注入定量无 菌水．接种环把菌苔刮下研开，再把菌悬液倒入液 体培养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。
3．恒温 当温度ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ到所需温度后，维持此温 度2h。
4．降温 切断电源，自然降温。
5.取出灭菌物品 待电烘箱内温度降到70℃以 下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。
(三)过滤除菌法
有些物质，如抗生素、血清、维生素等易受 热分解，因而要采用过滤除菌法。
1．过滤器的种类
(1)滤膜过滤器：由醋酸纤维素、硝酸纤维素 等制成，有孔径大小不同的多种规格(如 0.1μm、0. 22μm、0.3μm、0. 45μm等)， 过滤细菌常用0.45μm孔径。其优点是吸附 性小，即溶液中的物质损耗少，滤速快， 每张滤膜只使用1次，不用清洗。
六、问题和思考
1．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中 应注意些什么问题?为什么?
2．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌? 若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培
养基进行无菌检查？
3．牛肉膏蛋白胨培养基属何种培养基？它除 了培养细菌外，能培养真菌和放线菌吗？ 高氏培养基属何种培养基?除培养放线菌外 高氏培养基还能培养细菌和真菌吗?为什么?
环境微生物实验-南开大学环境 科学与工程学院TheCol
第9章 微生物生态 南开大学微生物学课件
（ 三 ） 自然 界中的微生物
微生物的自然生境：广泛性、非均质性、快变性。
1、 环 境 与 微 环境 特定小生境 （niche） 微生物在自然界生长最好的主要小生态环境。 如： E.coli 在人的肠道 微 环 境 （microenviroment) 微 生 物 实 际 生 活并 进行代 谢所 在的生 境。
1
紫硫细菌
绿硫细菌
真菌
土壤各种微生物
自 然 环 境 中 的微 生物
自然生态环境
（ 四 ） 在土 壤颗粒中微生物的微 环境分析
空 气 中 氧 为 21％
15％ 10％ 5％
外 层 2－ 3mm
专性好氧微生物 微需氧微生物
中间部位
厌氧微生物
12mm土 壤 颗 粒 氧 浓 度 测 定 （ 含 氧 百 分 数） ： 微电 极 穿透 土 壤颗 粒 测定
高 群 落 (communities)： 能 生 长 在 一 起 的 所 有 种 群 。
1 、 群 落的 重要性
群 落 ： 一 定 区 域 和 一 定生 境 中各 微 生物 种 群松 散 结合 成 的一 种
结构单位和生态功能单位。 生 态 环 境 的 生 态 特 征 主 要 是 由 群落 决 定， 由 群落 当 中的
最适生长温度 最低生长温度
专性嗜热菌 多 是 真 细菌
极端嗜热菌
超 级 嗜 热 菌 （ 古生 菌 ）
65－ 70℃ 高于70℃
40℃ 高于40℃
8 0 － 1 10℃
55℃
蛋白质多二硫键
嗜 热 机 理 ： 生物 大分子耐高温 核 酸 多 GC
或抗热质粒
热 稳 定 因 子 ： 钙 或镁离子小分子有机物
最适 pH3－ 4以下生长，中性pH不生长， 胞内环境中性 ，胞外环境酸性。
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5
¾实验原理
1个噬菌体形成 1个噬菌斑（plaque），故噬 菌体的浓度单位（效价）－噬斑形成单位， 表示：PFU/mL。 噬菌斑，双层平板法，菌苔（lawn），Top agar （Soft agar）
¾实验方法
(一)噬菌体T4裂解液的制备(E.coli C) 1．双层平板法制备裂解液 2．液体法制备裂解液
镜台测微尺是中央刻有精 确等分线的一块载玻片，一 般 将 1mm 等 分为 100格， 每格 长0.01mm( 即 10微米)。
目镜测微尺 镜台测微尺
目镜测微尺的标定
操作步骤
¾ 目镜测微尺的标定：
（1）将目镜测微尺刻度朝下，置入目镜内。 （2）将镜台测微尺置于载物台上。 （3）先用低倍镜观察，找到镜台测微尺。 （4）旋转目镜测微尺并移动镜台测微尺，使
教学内容
1. 低倍镜下,高倍镜和油镜下:
目镜测微尺(?)格数等于镜台测微尺(?)格数
2. 低倍镜下,高倍镜和油镜下,目镜 测微尺每格所代表的长度。
3. 球菌、杆菌、酵母菌大小的测定
二）微生物计数
目的要求：
1.了解血球计数板计数的原理。
2.掌握使用血球计数板进行微生 物计数的方法。
2
实验原理
测定微生物数量方法很多，通 常采用的有显微镜直接计数法、平板 计数法和光电比浊计数法。
显微镜下的细胞物象是经过了
物镜、目镜两次放大成象后才进入 视野的。即目镜测微尺上刻度的放 大比例与显微镜下细胞的放大比例 不同，只是代表相对长度，所以使 用前须用置于镜台上的镜台测微尺 校正，以求得在一定放大倍数下实 际测量时的每格长度。
目镜测微尺
目 镜 测 微 尺 及 其 安 装 方 法
1
镜台测微尺
血球计数板上刻有一长宽各为1 毫米的方形大格，其体积为0.1mm3。 计数板有两种刻度，一种是每大格分 为16个中格，而每中格又分25个小 格，每大格为16×25小格=400小格， 而另一种，则是每大格分为25个中 格，而每中格又分为16个小格，则每 大格为25×16=400小格（计数板上的 标识为XB·K25）.
（计数室不得有气泡），高倍镜观察。 3．计数时，25个中格的取计数板四角和中
间位置的五个中方格计菌数，重复计两 次，取其平均值，按公式计算每毫升酵母 菌液中菌体的个数。 4．计数完毕，将计数板用水冲洗，勿刷， 自然风干。
血 球 计 数 板 计 数 网 的 分 区 和 分 格
（16×25）
血球计数板的计算方法
(二) 效价测定
（1）将E.coli C 接种 3mL HB中， 37℃震荡培养5小时。
（2）制备HA平板，待凝固后置50℃ 烘30分钟备用。
（3）将T4裂解液依次稀释至10-8 。 (100µL 1mL)
(二) 效价测定
（4）取一只小试管，加入0.2mL E.coli C，加入T4裂解液0.1mL（10-7，108），每个稀释度两只试管，再加入 3.0mL HAS（50℃左右）， 混合均 匀后迅速倒在HA平板上层，凝固 后，37℃倒置培养。
用于测量微生物细胞大小的工具 有目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测 微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精 确等分的刻度，有刻成为50等分的， 或刻成100等分的。
测量时，将其放在接目镜中
的隔板上来测量经显微镜放大后 的细胞物象。由于不同的显微镜 放大倍数不同，同一显微镜在不 同的目镜和物镜组合下，其放大 倍数也不相同，而目镜测微尺是 处在目镜中，每格实际表示的长 度不随显微镜的总放大倍数的放 大而放大，仅与目镜的放大倍数 有关，只要目镜不变，它就是定 值。
T4噬菌体的效价测定 （演示实验）
T4噬菌体
1. 大肠杆菌的烈性噬菌体,专性寄生的原核生物。 2. 基因组是双链线性DNA分子, 高度螺旋、紧密折叠地装配在
头部中。
3. 繁殖速度比细菌 快
30min内, 1个T4 噬菌体形成100个左 右的子代噬菌体。 2h 后, ?个。
¾实验目的
1. 了解噬菌体裂解液效价的测定方法。
4
¾液Байду номын сангаас法制备裂解液
（1）将E.coli C接种3mLHB中，37 ℃振荡 培养2～3h。
（2）加入1％体积达T4储存液（或单菌斑1 个），继续振荡培养5h，一般应测OD600 值，OD值下降到基本不变时停止培养。
（3）加2～3滴氯仿，振荡0.5min，取上清 液加几滴氯仿，置4 ℃冰箱保存，备 用。
(三) 微生物测微技术和计数 及T4噬菌体的效价测定
（实验6，10）
一）微生物测微技术
目的要求:
1. 掌握目镜测微尺和镜台测微尺 的使用方法。
2. 学习在显微镜下测量微生物细 胞的大小。
实验原理
微生物细胞的大小，是微生物重 要的形态特征之一，也是分类鉴定的 依据之一。由于菌体很小、只能在显 微镜下来测量。
教学内容
1. 血球计数板的使用和计算方法 2. 计算每毫升酵母菌液中菌体的
个数
3
实验报告及思考题
1. 分别求出 : 在 低倍镜下,高倍镜和油镜下, 目镜测微尺( )格数等于镜台测微尺( )格数.
2. 分别求出 : 在 低倍镜下,高倍镜和油镜下, 目镜测微尺每格所代表的长度。
3. 测定: 球菌、杆菌、酵母菌的大小。 4. 计算每毫升酵母菌液中菌体的个数。 5. 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺校正? 6. 使用血球计数板应注意什么问题?
两者的刻度平行，并使其中一垂线重 合，然后由这条线向右观察，直到找到 另一重合垂线，并数出两重合垂线间目 镜测微尺和镜台测微尺的格数。 （5）用同样的方法求出在高倍镜和油镜下目 镜测微尺每格所代表的长度。
例如目镜测微尺10小格等于镜 台测微尺4小格，已知镜台测微尺 每小格为10微米则4小格的长度为 4×10微米＝40微米，那么相应地 在目镜测微尺上每小格长度为： 4×10微米/10 ＝4微米
显微镜直接计数法
将小量待测样品的悬浮液置于 一种特别的具有确定面积和容积的载 玻片上，又称血球计数板，于显微镜 下直接计数的一种简便、快速、直观 的方法。
左上
计数时 左下
中央格
右上
右 下 、
25 × 16
操作步骤
¾ 微生物的计数
1．在血球计数板的计数室上加盖玻片。 2．摇匀菌液，从盖玻片边缘滴一小滴菌液