细胞培养液
各种培养液的配方
各种培养液的配方培养液是一种专门设计用于细胞培养的营养基质，它提供了细胞所需的营养物质和生长因子，以支持细胞的生长和增殖。
不同类型的细胞和细胞培养的特定目的可能需要不同的培养液配方。
以下是几种常见的细胞培养液配方：1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：配方：- Glucose: 4.5g/L- L-Glutamine: 4mM- Sodium Bicarbonate: 3.7g/L- Sodium Pyruvate: 110mg/L- Phenol Red: 0.1%备注：DMEM是一种基础培养液，广泛用于多种哺乳动物细胞的培养，提供了细胞所需的基本营养物质，如糖、氨基酸和盐类。
2. RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute Medium）：配方：- Glucose: 2g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 2g/L-HEPES:10mM- Phenol Red: 0.1%备注：RPMI 1640是一种适用于多种动物和人类细胞培养的基础培养液，具有类似DMEM的配方，但Glucose和L-Glutamine的浓度较低，适合一些特定的细胞类型。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：配方：- Glucose: 1g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 2.2g/L-HEPES:15mM- Phenol Red: 0.1%备注：MEM也是一种通用基础培养液，适用于多种细胞类型的培养，其配方与DMEM相似，但含有更低浓度的糖。
4. F-12（Ham's F-12 Nutrient Mixture）：配方：- Glucose: 3.15g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 1.17g/L- Phenol Red: 0.03%备注：F-12是一种含有丰富营养物质的培养液，特别适用于培养多种优质的细胞系。
细胞培养常用液体配置
【精华】细胞培养常用液体配置细胞冻存！/bbs/post/view?bid=66&id=1075571&sty=1&tpg=1&age=0求助：1%的胰蛋白酶如何配置成0。
25%的？急！/bbs/post/view?bid=66&id=1601091&sty=1&tpg=1&age=0求助海马神经元的培养基配方/bbs/post/view?bid=66&id=1876036&sty=1&tpg=1&age=0【求助】活性碳-葡聚糖苷处理过的胎牛血清问题/bbs/post/view?bid=66&id=1566352&sty=1&tpg=1&age=0谁知道加了小牛血清的1640还能过滤吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1936251&sty=1&tpg=1&age=0求助！/bbs/post/view?bid=66&id=1730359&sty=1&tpg=1&age=0小急！乳鼠心肌细胞培养时配胰蛋白酶没调PH值/bbs/post/view?bid=66&id=1949765&sty=1&tpg=1&age=0配ＤＭＥＭ时直接添加粉剂ＮＡＨＣＯ３可以吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1949670&sty=1&tpg=1&age=0冻存液怎么配置？/bbs/post/view?bid=66&id=1633674&sty=1&tpg=1&age=0求助乳鼠心肌细胞培养的D-HANKS液配方DMEM液和DMEM/F12液/bbs/post/view?bid=66&id=1888172&sty=1&tpg=1&age=0请教心肌细胞的消化！/bbs/post/view?bid=66&id=1913926&sty=1&tpg=1&age=0求助：急需知道/bbs/post/view?bid=66&id=1941147&sty=1&tpg=1&age=0胞内钙测定/bbs/post/view?bid=66&id=1130119&sty=1&tpg=1&age=0<共享>双抗的配置方法/bbs/post/view?bid=66&id=1933663&sty=1&tpg=1&age=0请教0.1%透明质酸酶的配制/bbs/post/view?bid=66&id=1927260&sty=1&tpg=1&age=0请教高人：关于PBS配方及浓度的问题/bbs/post/view?bid=66&id=1655901&sty=1&tpg=1&age=0【请教】培养基、血清长时间放在37度水浴箱内，还能用吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1922789&sty=1&tpg=1&age=0关于1640液的配置/bbs/post/view?bid=66&id=1096940&sty=1&tpg=1&age=0 弱弱地问：EDTA《资源》说明书上关于1640的配置/bbs/post/view?bid=66&id=1906137&sty=1&tpg=1&age=0细胞培养常用液体配制/bbs/post/view?bid=66&id=400040&sty=1&tpg=1&age=0细胞培养用的PBS应该如何处理。
细胞培养液制备SOP
1. 目的规范细胞培养液配制的操作。
2. 范围细胞生长液和细胞维持液的配制。
3.职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。
3.2. 质量管理部QC：负责本规程的操作。
3.3. 总经理：负责本规程的审批。
4. 定义无5. 引用标准无。
6. 材料6.1. 试剂6.1.1 配制好的MEM溶液，见《MEM培养基制备程序》6.1.2 配制好的谷氨酰胺溶液见《谷氨酰胺配制程序》6.1.3 配制好的双抗溶液见《双抗配制程序》6.1.37.5％碳酸氢钠见《双抗配制程序》6.2. 器械、用具6.2.1 移液管6.2.2 配液瓶6.2.3 75％洒精棉6.3 仪器设备6.3.1 高压灭菌器6.3.2 超净工作台7. 流程图无8. 内容8.1.细胞营养液的配制8.1.1. 配制前的准备8.1.2 消毒手部：将手用清水及肥皂洗净，用75%酒精棉球擦拭手的各个部位。
8.1.3. 超净台的启动：接通超净台开关，风机进入标准状态，开启紫外灯，运行20分钟。
8.1.4 将配液所需各种溶液及器具放入超净台。
8.2 配制过程8.2.1 穿好工作衣，带好帽子、口罩。
胳膊放入超净台内带好套袖和手套。
8.2.2. 用75%酒精棉球消毒手臂，解去HL/MEM瓶线，用酒精棉球消毒各种溶液瓶口，每擦一瓶换一块棉球，一瓶擦拭两遍。
8.2.3 轻轻拿下纸帽及棉塞，拔下溶液瓶塞，在酒精灯外焰处，将瓶口灭菌。
顺次加入所需各种营养液。
8.3 加液顺序8.3.1 MEM或DMEM8.3.2 血清 8～10％（或根据需要配制成2～5%，细胞维持液）8.3.3. 双抗 1%8.3.4 L-谷氨酰胺 0.45%。
1.0～2.0%8.3.5. 7.5%NaHCO38.3.6. pH 6.8～7.28.3.7. 盖好胶塞，备用。
9. 注意事项9.1 注意无菌操作9.2 配制好的细胞营养液一周内用完。
10. 附录及派生记录培养基配制记录F-SOP-ZL023-0111. 相关文件无12. 修订记录。
细胞培养液
细胞培养液简介细胞培养液是一种用于培养、增殖和维持细胞生长的液体培养环境。
它提供了细胞所需的营养物质，并维持了细胞所需的适宜PH值、温度和气体气压等环境条件。
细胞培养液广泛应用于医学研究、生命科学实验和药物开发等领域。
细胞培养液的组成细胞培养液主要由以下几个组分构成：1.水：作为溶剂和质量调节剂，确保细胞培养液的稳定性和适宜的渗透压。
2.碳水化合物：提供能量和碳源。
常用的碳水化合物有葡萄糖、乳糖等。
3.氨基酸：提供细胞合成蛋白质所需的氨基酸。
4.维生素和微量元素：提供细胞所需的维生素和微量元素。
5.生长因子和激素：促进细胞增殖和功能的调节。
6.脂质和胆固醇：构建细胞膜结构所需的成分。
7.pH缓冲剂：维持细胞培养液的适宜pH值。
8.盐类和矿物质：维持细胞内外渗透平衡和细胞骨架结构的稳定性。
9.抗生素和抗真菌剂：抑制细菌和真菌的生长。
10.血清或血清替代物：提供细胞所需的生长因子、支持细胞黏附和增殖。
以上是常见的细胞培养液组分，不同类型的细胞培养液会根据具体的细胞类型和实验需求进行特殊配方。
细胞培养液的分类根据不同的需求和具体细胞类型，细胞培养液可以分为以下几类：1.基础培养液：提供细胞培养所需的基本营养物质。
常见的基础培养液有DMEM（Dulbecco’s modified Eagle’smedium）、RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640 medium）等。
2.血清培养液：添加了胎牛血清或其他动物血清作为补充。
血清中含有丰富的生长因子、细胞黏附物质和免疫调节因子，可以提供细胞生长所需的合适环境。
3.无血清培养液：使用血清替代物或单一生长因子替代传统的血清，避免血清中未知成分的干扰和批次差异。
4.特殊培养液：为特定类型的细胞提供了专门的培养液。
例如，神经细胞培养液、肝细胞培养液等。
细胞培养液的使用方法在使用细胞培养液前，需要先将细胞培养液适当预热，并进行无菌处理。
各种培养液的配方
各种培养液的配方不同的细胞类型和培养目的需要使用不同的培养液。
下面列举一些常见的细胞培养液配方及其用途。
1.DMEM培养液：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种最常用的细胞培养基，适用于多种哺乳动物细胞的培养。
以下是DMEM培养液的配方：-1×DMEM：将DMEM粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%胎牛血清（FBS）：将FBS加入1×DMEM中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素（如青霉素/链霉素）加入1×DMEM中，使最终浓度为1%。
2.RPMI1640培养液：RPMI1640是一种适用于淋巴细胞和白血病细胞的培养基。
以下是RPMI1640培养液的配方：-1×RPMI1640：将RPMI1640粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS：将FBS加入1×RPMI1640中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素加入1×RPMI1640中，使最终浓度为1%。
- 2-mercaptoethanol：将2-mercaptoethanol加入1×RPMI 1640中，使最终浓度为0.05mM。
3.MEM培养液：MEM（Minimum Essential Medium）是一种用于哺乳动物细胞培养的基础培养液。
以下是MEM培养液的配方：-1×MEM：将MEM粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS：将FBS加入1×MEM中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素加入1×MEM中，使最终浓度为1%。
-1×非必需氨基酸：将非必需氨基酸（如谷氨酰胺、苏氨酸等）加入1×MEM中。
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。
（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。
(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。
(4)调节pH值至7.2~7.4。
(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。
此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。
(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。
（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。
配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。
3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。
细胞培养液配方
胎牛血清 (20ml)
双抗 （2ml）
溶液各组分终浓度为90%RPMI-1640培养基 +10%胎牛血清+1%双抗（200mM L-谷氨酰胺、10mg/ml链霉素和10000U青霉素）
三 细胞冻存液配方：(20ml)
RPMI-1640培养基 (14ml)胎牛血清 Nhomakorabea(4ml)
细胞培养常用溶液配方
一PBS配方：
方法一 1×PBS(Phosphate-Buffered Sallines)
Na2HPO4、Na2HPO4•7H2O、Na2HPO4•12H2O中任选其一。
方法二 母液的配制：
0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml水
0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水
0.01MPBS（PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml即可。
0.02MPBS（PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml即可。
若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。
细胞培养常用溶液配方
二 细胞培养液配方：（200ml）
DMSO （2ml）
双抗(0.2ml)
各种浓度PBS(pH=7.4)的配制：
先配0.2M PBS(pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L的Na2HPO4,即可。
然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：
0.1MPBS（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml即可。
细胞培养液收集方法
细胞培养液收集方法
细胞培养液的收集主要包括以下步骤：
1. 取细胞培养液约2mL，低速离心，将细胞沉淀分离。
2. 取1mL（建议量，最少500μL）以上上清液，-80℃储存样本，足量干冰寄送样本。
需要注意的是，由于培养液上清的样品属性，其代谢物含量较低，且含盐含糖量较高，分析难度较大，对实验仪器和实验方法均有较高要求。
在收集过程中，需要严格避免高速离心、剧烈晃动、过高或过低温度导致培养基中的细胞破碎。
收集后避免反复融冻，全程低温储运，长距离运输使用干冰，直至分析。
以上步骤仅供参考，具体操作需根据实际情况调整。
如果需要更多信息，建议咨询生物领域专业人士。
4.2细胞培养常用液体
缺点：来源受限。
成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验 结果的分析。易发生支原体污染
合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用 人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基， 如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、 无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 Note：人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞
生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血 清）。
培养基的基本要求
• 营养成分:氨基酸、单糖、维生素、无机离 子与微量元素
• 促生长因子及激素：胰岛素 、泌乳素 • 渗透压 • pH • 无毒、无污染
宜的PH; • 酚红作指示剂：PH7.4呈红色； PH7.0呈橘红色；
PH6.5呈柠檬黄；PH低于6.5呈黄色；PH高于7.8呈紫红 色； • 大多情况下细胞培养液PH值可凭肉眼判断或PH试纸， 只有在染色如荧光染色时，需要用PH计来测定。
无毒、无污染
• 体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质无任何 抵抗力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生 物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他 对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、 补体等）。
Na2HPO4H2O NaH2PO42H2O KH2PO4 NaHCO3 葡萄糖
PBS 8.00 0.20 1.56 0.20 -
Hank’s D-Hank’s
8.00 8.00
0.40 0.40
0.14 -
-
-
mark--145细胞培养 的相关知识
一．Marc-145细胞培养1.细胞消化传代Marc-145细胞培养48-72小时后，将细胞用0.2%的胰酶消化后以1：3的比例传代。
细胞培养液（6%小牛血清、1%双抗、93%DMEM培养液），细胞维持液（3%小牛血清、1%双抗、96%DMEM培养液）。
2.细胞冻存（15ml中号培养瓶）将细胞形态较好，细胞活力旺盛（即传代后36-48小时细胞长成单层面）用0.2%的胰酶消化后加入细胞冻存液20ml（30%小牛血清、10%二甲基亚砜DMSO、60%DMEM 培养液），混匀后2ml/管分装，放入细胞冻存盒置-70℃冰箱72小时后放入液氮罐保存。
3.细胞复苏将液氮罐中的细胞快速取出，置37℃温水中解冻，再将解冻后的细胞1000转离心5分钟，在无菌操作台内小心倒掉上清，加入1ml细胞培养液后吹打混匀，吸入到5ml细胞培养瓶内，在加入5ml细胞培养液。
marc 145细胞培养的简单综述2008-07-25 00:00 来源：丁香园点击次数：1930 关键词：marc 145细胞细胞培养综述分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网Marc 145细胞培养和维持有关资料综述一、细胞及培养1、Marc145细胞上皮样细胞，来源于猴肾细胞，从母细胞（MA 104细胞）克隆而得到，可连续培养。
2、生长培养基DMEM（高糖型，含4500mg/L D－葡萄糖、L-谷氨酰胺，和110mg/L丙酮酸钠，不含碳酸氢钠）＋5－10％新生牛血清+ 1%双抗（青霉素和链霉素）的培养液。
3、冻存液生长培养基＋10% DMSO4、细胞健康生长的几项注意事项（1）细胞没有支原体等外源因子的感染。
（2）培养液的pH值可在7.0－7.3，以7.2为佳。
（3）一般按1：3传代，细胞接种密度为1－1.5×105cells/ml，48hr后长成单层。
（4）培养基和血清的质量可靠、稳定；建议采用特级小牛血清。
（5）细胞及时传代，不可以在老化后传代，一般在刚长成细胞单层时进行传代、扩增。
实验2 细胞培养液的配制
实验二细胞培养用液的配制一、D-MEM细胞培养液1. 实验用水的选择配制培养溶液最好使用新制备的三蒸水。
一般在试验前当天或前一天制备为好。
调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配制。
（本实验用新买的怡宝纯净水）2. 实验器材的准备所用的器材清洗要绝对干净，烤干后备用（滤器、滤膜、量筒、吸液管及盛放培养液的小瓶等存放和转移培养液的器材都应进行灭菌）。
（小的东西放在饭盒内）3. 溶解培养基干粉：将D-MEM培养基干粉溶于总量1/3（约300 ml）的水中，再用水洗包装袋内面两次，合并三次溶液。
用磁力搅拌器或玻璃棒人工搅拌助溶。
4. 补加试剂：根据D-MEM培养基包装袋说明和试验需要加入NaHCO35. 加抗生素：一般抗生素终浓度为――青霉素100U/ml，链霉素100U/ml。
（本实验最终体积按1000 ml加入现有的100mg链霉素，62.5mg青霉素）6. 调pH值：将上述溶液加水至850ml，然后用1N盐酸或1N氢氧化钠或5%NaHCO3调pH值最终为7.2-7.4。
（不用调p H）7. 过滤除菌：用不锈钢过滤器过滤上述溶液，分装于100 ml盐水瓶中，一瓶85 ml，余下装于盐水瓶中备用，即得基本培养液，标记，4℃冰箱保存，备用。
8. 加小牛血清：取一瓶基本培养液，用针头过滤器过滤加入小牛血清15ml，摇匀，即得完全培养液（用于细胞培养），标记，4℃冰箱保存，备用。
（小牛血清需预先从冰箱中取出解冻）第7和第8的工作一定要在超净工作台上进行！二、D-hanks配方：NaCl 8gKCl 0.4gNa2HPO40.06gKH2PO40.06gNaHCO30.35 g取约500ml水，分别依次加入上述药品，每加入一种药品先搅拌溶解后，再加入另外一种药品，最后加水至1000ml，摇匀，分装至100 ml、250 ml或500 ml 盐水瓶，高压灭菌，标记，4℃冰箱保存，备用。
三、0.25%胰蛋白酶溶液取25mg胰蛋白酶粉末，溶于100 mL D-hanks液，摇匀。
第三章动物细胞培养用液
⑦提供蛋白酶抑制剂，保护细胞免受死细胞释放的蛋白 酶的损害。
血清的不足之处：
①存在不少有害于细胞生长和繁殖。例：补体、
免疫球蛋白和一些生长抑制因子等。
②血清的成分不明确，影响对结果的分析。
③不同动物，不同批次血清成分和活性差别比
较大，使的培养结果不稳定。
血清一般不自制，如果特殊需要需自制时要 注意： ①消毒 ②空腹 ③隔绝 ④倾斜、室温、4℃过夜 ⑤离心 ⑥滤过，血清检测
微量元素的增加较复杂，多采用商品包
装，现多培养基中已加好无需再加。
无血清培养基内必需增加酶抑制剂来中 止残余酶的作用。如，大豆胰酶抑制剂， 0.1-0.5%
九 消化液
消化液中最常用的是胰蛋白酶液和 EDTA液。
1 胰蛋白酶液
主要作用：使细胞间的蛋白质水解从而使细
胞离散。主要作用于与赖氨酸或精氨酸相连
3 贴壁因子
贴壁因子：细胞体外培养时绝大多数真核细胞
（贴壁依赖性细胞）需要固着于适当的基底， 帮助细胞固着贴附的物质叫贴壁因子或胞外
基质。
配制：
①配贮液（10×）1mg/ml,适当温度保存 ②选择适当贴壁因子保存 ③三蒸水或PBS稀释，0.1mg/ml工作液 ④滤菌 ⑤涂布 ⑥静置，洗涤
4 微量元素
①能提供细胞生存生长和增生所必需的生长调节因子。 ②能补充基础培养液中没有或量不足的营养成分。 ③含有一些可供贴壁依赖型细胞在培养皿表面贴附和铺 展的生长基质成分。 ④提供载体蛋白，可结合维生素、脂质、金属离子等。
⑤在有些情况下，血清有中和毒性物质保护细胞不受伤 害的作用。
⑥给培养液提供良好的缓冲系统。
激素：胰岛素、生长激素、胰高血糖素等、
甾体激素等。
细胞工程--C4.2 细胞培养液
动物细胞体外培养的营养条件
5. 促生长因子：已证明各种激素、生长因子对于维 持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化） 具有十分重要的作用。如胰岛素能促进细胞利用葡 萄糖和氨基酸，用量为1~10 U/mL，对很多细胞的 增殖生长均有促进作用。有些激素对某一类细胞有 明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生 长，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用等。血 清是提供促生长因子及激素的重要来源，因此这方 面的营养需要可通过在培养基中添加5%~20%的小 牛血清来满足。
胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。
4. 消化酶抑制液
用含血清培养液终止其对细胞的消化作用。
5.pH调整液
• 常用的有HEPES液和NaHC03溶液 • 1.NaHC03溶液 NaHC03是培养基中必须
添加的成分，一般情况下是按照说明书的 要求准确添加，以保证培养基在5%CO2的 环境下pH达到设计标准 • 2．HEPES液 HEPES是一种弱酸，中文 名称是羟乙基哌嗪乙硫磺酸。 HEPES对细 胞无毒性，主要作用是防止培养基pH迅速 变动。
溶液
消毒或灭菌
水
高压灭菌
维生素
过滤
胰蛋白酶
过滤
丙酮酸钠
过滤
血清
NaHCO3 NaOH（1mol/L） HCl（1mol/L）
谷氨酰胺
葡萄糖（1-2%）
保存 室温 -20℃ -20℃ -20℃
溶液
消毒或灭菌
水
高压灭菌
维生素
过滤
胰蛋白酶
过滤
丙酮酸钠
过滤
血清
过滤（用重叠式过滤器）
NaHCO3 NaOH（1mol/L） HCl（1mol/L）
HCl（1mol/L） 过滤
细胞培养PBS配方
细胞培养PBS配方
所需试剂和设备:
-NaCl(氯化钠)
-KCl(氯化钾)
-Na2HPO4(磷酸氢二钠)
-KH2PO4(磷酸二氢钾)
-无菌水
-电子天平
-烧杯和量筒
-反应管和磨研器
步骤:
1.称取所需试剂。
根据下述配方，称取正确比例的NaCl、KCl、
Na2HPO4和KH2PO4、确保所有试剂都是无菌的，并在称取时保持清洁卫生。
2.备制1L的PBS溶液。
将称取的试剂添加到烧杯中，并用无菌水稀
释至1L。
3.搅拌混合。
使用一个电子磨研器或类似的设备，将溶液进行彻底的
混合以确保所有试剂充分溶解。
尽可能避免气泡的形成。
4.pH调节。
使用pH计来测定溶液的pH值。
根据需要，使用NaOH或HCl溶液调节pH值。
PBS的理想pH值为7.4左右。
5.灭菌。
将溶液装入无菌试管中，并将其密封。
以121°C的温度下，在高压蒸汽灭菌器中处理溶液。
处理时间为15-20分钟。
注意事项:
-在制备PBS时务必保持实验室的环境无菌，因为这种溶液广泛应用
于细菌和真菌的生长培养中。
-要使用新鲜的试剂来制备PBS，以避免试剂的老化和变质。
-处理溶液时要小心，避免对溶液的污染。
使用无菌操作来减少污染
的风险。
-在制备PBS溶液之前，请先确保相关设备（如烧杯、磨研器等）已
经过彻底清洁和消毒处理。
细胞培养-细胞培养用液及培养基
培养基（液）-无血清培养基
·为什么要使用无血清培养基？
➢血清成分复杂，干扰实验结果 ➢血清含有毒性物质、抑制性物质、影响
某些细胞功能
培养基（液）-无血清培养基
·无血清培养基-缺点
➢通用性较差 ➢细胞增殖缓慢、成本较高 ➢可能失去血清的一些保护性作用
培养基（液）-无血清培养基
·无血清培养基-配置方法
工作浓度： 0.02%
培养用液
·消化液-EDTA
注意事项 ① 需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解 ② 与胰酶联合使用可提高消化效率 ③ EDTA不能被血清中和，消化后应彻底
清洗
培养基（液）
维持体外细胞生存和生长的基本 溶液，是组织细胞培养最重要的条件 分类 ·天然培养基 ·合成培养基
培养基（液）-天然培养基
维持渗透压、调节PH、供给细胞生存所需 能量及无机离子成分。 ➢用途
合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组 织、细胞等
培养用液
·平衡盐溶液
培养用液
·消化液-用途
➢分散组织、细胞 ➢使细胞脱离附着底物
培养用液
·消化液-成分
➢胰蛋白酶 ➢二乙烯四乙酸二钠（EDTA） ➢胶原酶溶液
培养用液
·消化液-胰蛋白酶
细胞培养用液及培养基（液）
主要内容
· 培养用液 · 培养基（液）
主要内容
· 培养用液 · 培养基（液）
培养用液
细胞培养时，除需要培养基，还 需要大量的液体，包括
·水 ·盐溶液 ·消化液 ·缓冲液 ·维生素液等
培养用液
·水
➢细胞培养所必须的成分（吸收与代谢） ➢维持细胞形态、调节渗透压及PH ➢细胞培养对水质的要求极高
取自动物体液或从动物的组织中 分离提取 优点 ·营养成分丰富，培养效果良好 缺点
细胞培养液配制的流程
细胞培养液配制的流程
细胞培养液配制的流程：
①材料准备：
- 准备所需的所有化学试剂、培养基粉末、抗生素、血清、pH指示剂、无菌水或三蒸水。
②滤器消毒：
- 准备0.45μm和0.22μm孔径的滤膜，浸入三蒸水中，然后置于滤器上，打包后进行高压蒸汽灭菌。
③容器准备：
- 确保所有使用的容器（如烧杯、量筒、移液管等）都是干净且无菌的。
④溶解培养基：
- 将培养基粉末倒入无菌容器中，加入预热的三蒸水，使用磁力搅拌器充分搅拌直至完全溶解。
⑤添加补充成分：
- 按照实验需求，向溶解的培养基中加入nahco3、抗生素（如青霉素和链霉素）、L-谷氨酰胺等成分。
⑥加入血清：
- 如果配方需要，加入胎牛血清或其他类型的血清，通常为10%或20%体积比。
⑦ pH调节：
- 使用pH计检测溶液的pH值，根据需要加入1N HCl或1N NaOH进行调节，直至达到目标pH值。
⑧温度控制：
- 将配制好的培养液加热至接近细胞培养的温度（37°C左右），以防止温度骤变影响细胞。
⑨过滤除菌：
- 通过0.22μm孔径的滤器过滤培养液，以除去任何可能存在的微生物。
⑩分装：
- 将过滤后的培养液转移到无菌的细胞培养瓶或培养皿中，避免空气中的微生物污染。
⑪标记与记录：
- 在容器上标记培养液的类型、批号、配制日期以及有效期，并记录所
有操作细节。
⑫储存：
- 将配制好的培养液储存在适当的温度下，通常是4°C，直到使用前再恢复至室温或培养温度。
细胞培养液的成分
细胞培养液的成分
实验室常用的细胞培养液的主要成分是氨基酸、葡萄糖、无机盐、维生素和微量元素等。
为了维持稳定的pH，培养液中一般有一个pH缓冲系统，同时常加入少量的酚红作为pH指示剂。
另外培养液中一般需要加入一定量的血清。
培养液中的氨基酸除了13种细胞生长所必须的氨基酸外，往往加入一些非必需的氨基酸以促进细胞的生长。
在必需的氨基酸中，L-谷氨酰胺在溶液中不稳定，需要在使用时加入。
葡萄糖在培养液中的含量一般为1g/L（低糖）或4.5g/L（高糖）。
它是细胞代谢重要的能量来源。
细胞培养液中都有一个平衡盐系统，用于维持细胞的渗透压、维持pH和细胞正常的代谢等。
培养液中的pH缓冲系统一般是碳酸氢钠和HEPES等。
培养液中的维生素包括叶酸、维生素B等。
培养液中的微量元素元素包括Cu2+，Zn2+，和Mn2+等。
血清中含有生长因子、促进细胞帖壁的因子、矿物质、激
素、脂类等，另外血清可以抑制胰酶的活性。
一般培养液都含酚红作为pH指示剂，它是细胞培养液状态的一个很好的标志。
过长时间的培养或者微生物的污染都会使培养液的pH发生改变。
需要注意的是，酚红可以模拟类固醇激素的作用，所以如果培养的细胞对雌性激素敏感（比如实验本身就是研究雌性激素对细胞的作用），就应当使用没有酚红的培养液。
ksr细胞培养浓度范围
ksr细胞培养浓度范围
KSR细胞培养液是一种无血清培养液，通常用于体外培养干细胞和诱导多能干细胞分化。
在使用KSR细胞培养液时，对于浓度的范围需要根据具体的细胞类型和实验要求来确定。
一般来说，KSR 细胞培养液的浓度通常在5%到20%之间。
对于干细胞的培养，一般建议使用10%到20%的KSR浓度，以提供细胞生长和分化所需的适当营养物质和因子。
在进行多能干细胞的诱导分化时，可以根据特定的实验方案来确定KSR的最佳浓度，通常在5%到15%之间。
需要注意的是，不同细胞系可能对KSR的浓度有不同的需求，因此在使用KSR细胞培养液时，最好根据文献资料或者先前的实验经验来确定最适合特定细胞类型和实验条件的最佳浓度范围。
此外，还需要注意到KSR细胞培养液的浓度也会受到其他培养条件的影响，比如细胞密度、培养基成分等。
因此，在确定KSR细胞培养液的最佳浓度时，需要综合考虑多种因素，进行实验优化和验证，以获得最佳的培养效果。
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常用细胞系所用培养液参考，其它详细参见ATCC细胞库()
细胞系名称细胞类型物种来源组织培养液与血清
293成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM, 10% 马血清
3T6成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% FBS
A549上皮样 人 肺癌 F-12K, 10% FBS
A9成纤维细胞 小鼠 结缔组织 DMEM, 10% FBS
AtT-20上皮样 小鼠 垂体肿瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS BALB/3T3成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% FBS
BHK-21成纤维细胞 仓鼠 肾 DMEM, 10% FBS or MEM, 10% FBS
and NEAA
BHL-100上皮样 人 乳腺 McCoy'5A, 10% FBS
BT成纤维细胞 牛 鼻甲细胞 MEM, 10% FBS and NEAA
Caco-2上皮样 人 结肠腺瘤 MEM, 20% FBS and NEAA
Chang上皮样 人 肝 BME, 10% 牛血清
CHO-K1上皮样 仓鼠 卵巢 F-12, 10% FBS
Clone 9上皮样 大鼠 肝 F-12K, 10% FBS
Clone M-3上皮样 小鼠 黑色素瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS
COS-1成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS
COS-3成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS
COS-7成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS
CRFK上皮样 猫 肾 MEM, 10% FBS and NEAA
CV-1成纤维细胞 猴 肾 MEM, 10% FBS
D-17上皮样 犬 骨肉瘤 MEM, 10% FBS and NEAA
Daudi淋巴样 人 淋巴瘤患者外周血 RPMI-1640, 10% FBS
GH1上皮样 大鼠 垂体瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS
GH3上皮样 大鼠 垂体瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS
H9淋巴样 人 T-细胞淋巴瘤 RPMI-1640, 20% FBS
HaK上皮样 人 肾 BME, 10% 牛血清
HCT-15上皮样 人 结肠腺癌 RPMI-1640, 10% FBS
HeLa上皮样 人 宫颈癌 MEM, 10% FBS and NEAA (in
suspension, S-MEM)
HEp-2上皮样 人 喉癌 MEM, 10% FBS
HL-60淋巴样 人 早幼粒细胞白血病 RPMI-1640, 20% FBS
HT-1080上皮样 人 纤维肉瘤 MEM, 10% HI FBS and NEAA
HT-29上皮样 人 结肠腺癌 McCoy's 5A, 10% FBS
HUVEC上皮样 人 脐带 F-12K, 10% FBS 肝素100 ug ml
I-10上皮样 小鼠 睾丸肿瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS
IM-9淋巴样 人 骨髓瘤患者骨髓 RPMI-1640, 10% FBS
JEG-2上皮样 人 绒毛膜癌 MEM, 10% FBS
Jensen成纤维细胞 大鼠 肉瘤 McCoy's 5A, 5% FBS
Jurkat淋巴样 人 淋巴瘤 RPMI-1640, 10% FBS
K-562淋巴样 人 髓系白血病 RPMI-1640, 10% FBS
KB上皮样 人 口腔癌 MEM, 10% FBS and NEAA
KG-1髓样细胞 人 红白血病患者骨髓 IMDM, 20% FBS
L2上皮样 大鼠 肺 F-12K, 10%FBS
L6大鼠 骨骼肌成肌细胞 DMEM, 10% FBS
LLC-WRC
上皮样 大鼠 癌 Medium 199, 5%马血清
256
McCoy成纤维细胞 小鼠 未知 MEM, 10% FBS
MCF7上皮样 人 乳腺癌 MEM, 10% FBS NEAA, 10ug/ml 胰
岛素
WEHI-3b巨噬细胞样 小鼠 粒单细胞白血病 DMEM, 10% FBS
WI-38上皮样 人 胚胎肺 BME, 10% FBS
WISH上皮样 人 羊膜 BME, 10% FBS
WS1人 胚胎皮肤 MEM, 10% FBS and NEAA
XC上皮样 大鼠 肉瘤 MEM, 10% FBS and NEAA
Y-1上皮样 小鼠 肾上腺肿瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS
1。