超氧阴离子产生速率测定

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抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

一、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法)

1、试剂的配制

(1)L磷酸缓冲液(PBS,:

A母液:L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量)71.7g;

B母液:L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量)31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

L PBS()的配制:分别取A母液(Na2HPO4) ,B母液(NaH2PO4) ,用蒸馏水定容至1000ml。参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。

(2)甲硫氨酸溶液:取 Met用磷酸缓冲液()定容至1000ml。

(3)30μM EDTA-Na2溶液:取用磷酸缓冲液定容至100ml。

(4)60μM核黄素溶液:取核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml,避光保存。

(5)氮蓝四唑(NBT)溶液:取 NBT用PBS定容至100ml,避光保存。

酶液制备:取(可视情况调整)样品(新鲜叶片或根系)洗净后置于预冷的研钵中,加入 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液()在冰浴上研磨成匀浆,转入离心管中在4℃、12000g下离心20min,上清液即为酶液。

2、酶活性测定

(1)反应混合液配制(以60个样为准):分别取Met溶液162ml,EDTA-Na2溶液,磷酸缓冲液,NBT溶液6ml,核黄素溶液6ml,混合后摇匀;

(2)分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中

(3)将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min;

超氧阴离子产生速率测定

超氧阴离子产生速率测定

超氧阴离子产‎生速率测定

羟氨氧化法

(王爱国,罗广华.植物的超氧物‎自由基与羟胺‎的反应[J].植物生理学通‎讯,1990,(6):55-57) 一、原理

植物组织器官‎的衰老总是伴‎着细胞内膜结‎构的破坏,表现为细胞内‎的电解质大量‎渗漏出来。很多研究结果‎表明,细胞衰老过程‎中膜的破坏是‎由细胞中(特别是线粒体‎和叶绿体)产生的自由基‎(如O2·¯、OH·、O2等)使膜脂中的不‎饱和脂肪酸发‎生过氧化作用‎而造成的。膜脂过氧化作‎用中产生的自‎由基,它不仅能连续‎诱发膜脂过氧‎化作用,而且还可以使‎蛋白质脱H+而产生蛋白质‎自由基,使蛋白质分子‎发生链式聚合‎,从而使细胞膜‎变性,最终导致细胞‎损伤、衰老和死亡。

二、材料、仪器设备与试‎剂

(一)材料

植物叶片、花瓣等器官

(二)仪器设备

低温高速离心‎机、微量加样器(1mL、20uL)、精密电子天平‎、分光光度计、试管、

研钵、剪刀、镊子、烧杯、试管架

(三)试剂

(1)0.05 mol·L-1磷酸缓冲液‎PH=7.8(0.66304g‎的NaH2P‎O4.2H2O和1‎6.3849g

的‎N a2HPO‎4.12H2O定‎溶1000m‎L,校正PH)

(2)10m mol·L-1盐酸羟胺(NH2OH·HCl,69.49,溶于水)0.3475g定‎溶到500m‎L,(冷)

(3)17m mol·L-1对氨基苯磺‎酸(C6H7NO‎3S 173.19 1.4721g) 或者(C6H7NO‎3S·H2O 191.21 1.6253g)定溶到500‎m L,(冷,磁)

体外超氧阴离子自由基96孔板

体外超氧阴离子自由基96孔板

体外超氧阴离子自由基96孔板

超氧阴离子自由基是一种具有较高活性的氧化物质,它在许多生物学和病理学过程中起着重要作用。为了更好地研究超氧阴离子自由基的性质和功能,科学家们开发了体外超氧阴离子自由基96孔板,这一工具在超氧阴离子自由基的研究中发挥着重要的作用。

体外超氧阴离子自由基96孔板由96个小孔组成,每个小孔都可以容纳一种试剂或样品。这种板子的设计使得科学家们能够同时进行多个实验,提高了实验效率。通过在不同的小孔中加入不同的试剂或样品,可以研究超氧阴离子自由基与其他物质之间的相互作用。使用体外超氧阴离子自由基96孔板,科学家们可以进行多种实验,例如测定超氧阴离子自由基的产生速率、测量其与其他物质的反应速率以及评估抗氧化剂的活性等。这些实验可以帮助科学家们更好地了解超氧阴离子自由基的生物学功能和病理学作用。

在使用体外超氧阴离子自由基96孔板进行实验时,科学家们需要注意一些关键因素。首先,要确保每个小孔中的试剂或样品量相等,以保证实验的准确性和可重复性。其次,要选择合适的检测方法来测量超氧阴离子自由基的产生和反应。常用的检测方法包括化学染料法、电子自旋共振法和荧光探针法等。

体外超氧阴离子自由基96孔板在许多领域中都有广泛的应用。在生物医学研究中,它可以用于评估药物的抗氧化能力和抗氧化剂的活

性。在环境科学研究中,它可以用于评估环境污染物对生物体产生的氧化应激和损伤。此外,它还可以用于食品科学、农业科学和材料科学等领域的研究。

体外超氧阴离子自由基96孔板是一种非常重要的实验工具,它可以帮助科学家们深入研究超氧阴离子自由基的性质和功能。通过使用这个工具,科学家们可以更好地理解超氧阴离子自由基在生物学和病理学过程中的作用,为相关领域的研究提供有力支持。

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

一、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法)

1、试剂的配制

(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):

A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g;

B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,B母液(NaH2PO4) 21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。

参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。

(2)14.5mM甲硫氨酸溶液:取2.1637g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至1000ml。

(3)30μM EDTA-Na2溶液:取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。

(4)60μM核黄素溶液:取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml,避光保存。

(5)2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液:取0.1840g NBT用PBS定容至100ml,避光保存。

酶液制备:取0.2g(可视情况调整)样品(新鲜叶片或根系)洗净后置于预冷的研钵中,加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液(pH7.8)在冰浴上研磨成匀浆,转入离心管中在4℃、12000g下离心20min,上清液即为酶液。

2、酶活性测定

耐低钾玉米自交系苗期超氧阴离子、过氧化氢及保护酶的特征

耐低钾玉米自交系苗期超氧阴离子、过氧化氢及保护酶的特征

量逐年减少。因此研究和利用能够在较低的供钾水平下保持较高产量的玉米资源 ( 即耐低钾 ) ,对于缓解我 国的钾肥不足具有一定 的意义…。本文通过分析耐低钾玉米 自交系在低钾供应条件下的部分生理特性 ,揭示
其 耐性 机理 。
1 材 料 与方法
11 供试 材料 .
不耐低钾玉米 自 交系 x2 l 和耐低钾玉米 自交系 Y 。 8
玉米苗期保护酶活性 及活性 氧的特 征。结果表 明,耐低钾 与不 耐低 钾 自交 系玉 米的 a 产生 速率 、
H0 含量 、S D P D活性 在正常供钾条件下没有差异 。低钾胁迫 条件下 ,在幼苗生长 后期耐低钾 22 O 和 O
白交系的 O 产生速率 明显提高 ,P D活性有所增加 ;不耐 自交 系 0 O 的产生速率降低 ,P D活性 明 O
第 2 卷第 2 9 期
Vl . 9 N . o 2 l2 1 o
长 春师范学 院学报 ( 自然科学版 )
Junl f h ̄ hnN ra U i rt( a r c ne orao Ca u o l n e i N t aSi c) m v sy u l e
21 年 4月 00
[ 收稿 日 期】2O — 9 2 O9 0 — 7 【 基金项目]国家 “ 十一五”科技支撑计划 (06A 0A5。 2oB D2 1)
[ 作者简介】张晶晶 ( 8 一) 1 3 ,女,辽宁丹东人,沈阳农业大学农学院硕士研究生, 9 从事作物营养生理研究。 【 通讯作者】闫洪奎 (93 ,男,副教授,博士,主要从事作物营养生理研究。 1 一) 6

石榴果皮褐变实验方案16-2-23

石榴果皮褐变实验方案16-2-23

果皮褐变指数

果皮失重率和平均散失速率的测定

失重率采用称量法,每个样品50g,重复称量3次,取其平均值。

失重率(%)=(不同时间样品质量-样品初质量)/样品初质量×100%

平均散失速率(%/d)=失重率/存放时间;其中%为散失百分率;d 为存放时间(d)

1.‘玉石籽’褐变过程中酶促褐变相关酶活性的变化

褐变过程中PPO,POD等活性变化。

(1)PPO酶活性测定方法

①石榴果皮PPO酶液的提取

取石榴果皮0.5g,置于研钵中,加入5mL 4℃下预冷的pH 7.0 的磷酸缓冲液(含1%聚乙烯吡咯烷酮和10 mmol/L 的抗坏血酸)和少量石英砂,冰浴研磨成匀浆,4℃下12000r.min-1 离心20min,上清液即为PPO和POD粗提液,4℃保存备用。

②PPO活性测定参考张立华等(2007)的方法并改进,向反应管中加入2.95ml (邻苯二酚,浓度为0.2mol/L ),于25℃水浴中

平衡3 min,取出试管,向其加中加50μL粗酶提取液(以煮过失活的酶液为对照),使用410nm波长处进行酶动力学分析,立即计时,扫描随后2min 内溶液在410 nm处的吸光度变化,每30s 读数一次,共记录5次,然后以每分钟内A410变化

0.01为一个酶活性单位(U)。每个样品重复测定3次,取其平均值。

③PPO 活性计算公式:

(2)果皮过氧化物酶(POD)活性测定采用愈创木酚比色法。

POD 活性测定参考印芳等( 2008) 的方法并改进:取上述粗酶液50μL 与2.95 mL POD 反应液( 0. 125 mL 愈创木酚+ 0. 255 mL 30% H2O2,用pH7. 0 磷酸缓冲液稀释至250 mL) ,使用紫外分光光度计在470 nm 波长下比色,每隔1 min 记录1 次吸光度,共记录5次,然后以每分钟内A470变化0. 01 为1 个酶活性单位( U) 。每个样品重复测定3 次,取其平均值。

一定强度的UVC辐射对玉米幼苗活性氧成分及抗氧化系统的影响

一定强度的UVC辐射对玉米幼苗活性氧成分及抗氧化系统的影响

一定强度的UVC辐射对玉米幼苗活性氧成分及抗氧化系统的

影响

卜婷;刘灵霞;杨建霞;鲜盼盼

【摘要】Through a certain intensity UVC irradiation,we detected the change of some reactive oxygen species and antioxidant enzyme activity in corn leaves,then explored the possible mechanism for the corn seeding response to UVC irradiation. Corn seeding was continuously exposed to UVC for 5 days (5hrs/d),O2- generation rate,H2 O2 content,SOD activity,CAT activity and POD activity were measured as follows:when the corn seeding was irradiated by UVC alone,O2- generation rate promoted significantly(P﹤0. 01),SOD activity,H2O2 content and POD activity all reduced significantly(P﹤0 . 01 ),CAT activity had no obvious change;when the corn seeding was exposed to daylight and UVC simultaneously,O2- generation rate kept promoting(P ﹤0. 01),SOD activity kept reducing(P ﹤0.

低温胁迫下茶树叶片活性氧代谢及渗透调节物质含量的变化规律

低温胁迫下茶树叶片活性氧代谢及渗透调节物质含量的变化规律

m t as od t mietegnrt nrt o prxd n n( )a dtecne t o 2 2 ma n i d — ae l t ee n e ea o a f u eoiea i 0 i r r h i e s o n h otns f , l da e H0 o l
S HIHui ,W ANG Yu,Z HOU Ke—f u,DI NG a Zh o—tng a
( e e ac ntueo i d o gi l rl n e i ,Qn do2 60 C i ) TaR s r Istt fQn a r ut a i rt ig a 6 10, hn e h i g A c u U v sy a
Th e u t h we h twih t e p oo gng o te stme,te g n r to a e o e r s lss o d t a t h r ln i fsr s i h e e ain r t fO i c e s d t et i e n ra e o a c ra n d - g e nd t e e r a e r e a h n d c e s d,a d t e c n e t fH2 n n h o tn so a d MDA n r a e in fc nl 02 i c e s d sg i a t i y.Bu h a ito fp o tt e v rain o r —

盐胁迫对草莓抗氧化系统和离子吸收的影响

盐胁迫对草莓抗氧化系统和离子吸收的影响
叶片中 K / N a 和 C a 抖/ Na 。综上结果表 明, 在 盐胁 迫初期 , 植 物 可通过提 高其体 内抗氧化 酶
活性 来提 高草莓抗性 , 随胁迫 时间延长 , 植物体 内抗氧化 系统遭到破 坏 ; 同时, 盐胁迫也抑制 了草 莓 对矿质 营养 离子的吸收, 破坏 了植物体 内离子平衡 。
胞中 N a 、 C 1 一 的平衡 , 影响植物对 K 、
等离子的吸
收和在植物体 内的分 布 , 抑 制植株生长L 6 ] 。草莓是盐敏 感植物 , 生产上 多以塑 料大棚 、 日光温 室等保 护设 施进 行促成栽培 , 由于生产 环境相 对封 闭 , 加之不 合 理 的施 肥等 因素 , 容 易造 成 土 壤 次 生 盐 渍 化 , 影 响 草 莓 的 生 长 引。现以“ 红颊” 草莓为材料 , 研究 了盐胁 迫处理对 草
丙二醛含量测定参 照 He a t h等叫 方法 ; 质膜相对 透性测
定参照 G o n g等[ 1 ] 方法 。 1 . 3 . 2 S O D 、 P O D和 C A T 活性 的测定 取0 . 5 g草莓 叶片 , 用8 r n L预冷的 5 0 mm o l / L p H 7 . 8 磷酸缓 冲液研 磨匀浆 , 在4 ℃、 1 5 0 0 0 r / mi n下离 心 2 0 mi n 。取上 清液
离子吸收 的影响 。结果表 明: 与对照相 比 , 盐胁迫初期 , 草莓 叶片 内超氧化 物歧化酶 ( S ( ) D ) 、 过 氧

巯基乙胺修饰电极法测定植物体内超氧阴离子自由基

巯基乙胺修饰电极法测定植物体内超氧阴离子自由基

巯基乙胺修饰电极法测定植物体内超氧阴离子自由基

王燕*

陈蓁蓁

(山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南250014)

摘 要 盐酸羟胺与超氧阴离子自由基反应生成NO -2,通过检测NO -2的生成量,可间接测定超氧阴离子自由基。基于上述原理,建立了一种用巯基乙胺自组装修饰金电极测定生物体系中超氧阴离子自由基的新方法。实验结果表明,在p H 4.8的HA c -N a A c 缓冲溶液中,修饰电极对NO -2的氧化具有良好的电催化作用,差分脉冲溶出伏安法测定其氧化峰电流与NO -2的浓度在5.0@10-8~1.0@10-4m o l/L 范围内呈线性关系,其线性回归方程为i pa (L A )=3.726C (L mo l/L)+0.0257,相关系数为0.9983;检出限为1.0@10-8m ol/L 。该法用于玉米幼苗和叶片中超氧阴离子自由基产生速率的测定,结果令人满意。关键词 超氧阴离子自由基,化学修饰电极,巯基乙胺,差分脉冲溶出伏安法

2008-04-02收稿;2008-05-28接受

本文系山东省自然科学基金(No .Y2006B28)资助项目*E-m ai:l f agong @sdu .edu .cn

1 引 言

在生物体的氧化代谢过程中会产生大量的活性氧自由基,它们具有很强的氧化能力,可以损伤生物膜的结构及功能,引起核酸及蛋白质变性,从而对细胞及组织产生十分有害的生物学效应。其中超氧阴离子自由基(O 2

#-

)是生物体中第一个生成的氧自由基,它既能与体内的活性物质直接作用,又能经过

抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法

抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

一、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法)

1、试剂的配制

(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):

A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g;

B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,B母液(NaH2PO4) 21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。

参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。

(2)14.5mM甲硫氨酸溶液:取2.1637g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至1000ml。

(3)30μM EDTA-Na2溶液:取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。

(4)60μM核黄素溶液:取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml,避光保存。

(5)2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液:取0.1840g NBT用PBS定容至100ml,避光保存。

酶液制备:取0.2g(可视情况调整)样品(新鲜叶片或根系)洗净后置于预冷的研钵中,加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液(pH7.8)在冰浴上研磨成匀浆,转入离心管中在4℃、12000g下离心20min,上清液即为酶液。

2、酶活性测定

抗氧化酶活性等测定方法

抗氧化酶活性等测定方法

抗氧化酶活性等测定方法

叶绿体得提取

一、试剂配置

1、PBS提取液:每L水依次加入MES(195、2×0、05=9、76g)、山梨糖醇(0、33×18

2、2=60、126g)、NaCl(0、010×58、5=0、585g)、MgCl(0、002×95=0、19g)、EDTA(292、25×0、002=0、5845g)、KH2PO4(200×0、0005=0、1g);使用时加入ASA-Na(198、1×0、002=0、3962g);

2、悬浮液:将PBS提取液中得MES换为238、3×0、05=11、915g得HEPES(238、3×0、05=11、915g);

3、80%Percol:80ml原液+20ml水;40%Percol:40ml原液+60ml 水;

实际配制:

PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),

悬浮液100ml(3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml);

80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml、(3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml)

二、提取步骤

1、10g鲜样加20ml提取PBS(50mM MES PH6、1,含0、33M 山梨糖醇,10mM NaCl,2mM MgCl2,2mM EDTA,0、 5 mMKH2PO4,2mM ASA-Na,ASA-Na使用前现配现加)

2、快速研磨,使叶片碎成绿豆粒大小,4层纱布过滤,去除残渣(注意过滤时不可用力挤压,以免叶绿体膜破碎)

3、滤液2000g 3min,小心倒出上清液,将离心管放入离心机后,使离心机得加速很快上升到预定值(水平转头,加速度调到9),约经30s后很快使其下降停止,整个离心持续大约2-3min左右完成;

一定强度UVC辐射对小麦活性氧组分及抗氧化酶的影响_卜婷

一定强度UVC辐射对小麦活性氧组分及抗氧化酶的影响_卜婷

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图2 小麦幼苗经日光灯和/或UVC照射处理后H2O2浓度检测结果
(图中“C”表示对照组,日光照射,“UVC”表示短波紫
外线UVC照射,“C+UVC”表示日光与UVC同时照射;
“**”表示与C组相比有极显著性差异,P<0.01; “##”表
(图中“C”表示对照组,日光照射,“UVC”表示短波紫
外线UVC照射,“C+UVC”表示日光与UVC同时照射;
“**”表示与C组相比有极显著性差异,P<0.01; “##”表
示UVC+C组与UVC组相比有极显著性差异,P<0.01。)
小麦幼苗经日光灯和/或UVC照射处理后, SOD酶活性检测结果见图3。与对照相比,UVC照 射组和C+UVC照射组SOD酶活性均极显著性下降 (P<0.01),且两组之间无明显差异(P>0.05)。
SOD酶是生物体内降解 的主要物质。它可对 抗与阻断氧自由基对细胞的损害,并及时修复受损 细胞,复原因自由基造成的细胞伤害[18]。而本研究
结果显示小麦幼苗经UVC照射后,活性氧组分 产 生速率和SOD酶活性都是降低的。有学者研究发现
株体内的 产生系统及SOD酶产生系统遭到不同程 度的破坏,从而使 产生速率减慢,SOD酶含量下 降[22],这刚好与我们的实验结果相吻合。

不同品种无核葡萄采后活性氧代谢的比较研究

不同品种无核葡萄采后活性氧代谢的比较研究

反映出植物受损程度 的高低 。由图 1可知 , 葡萄贮藏期
间 3种无核葡萄果实 内 产生速率均呈现上 升趋势 。
0 2 ) ; 国家农 业 科技 成 果转化 资金 资助项 目( 2 0 l 1 ( 艘 A1 O O ) 。
收 稿 日期 : 2 O 1 3 一O 4 一l 1
测定 。 1 . 4 数 据 分 析
目前 , 针对无 核 品种 , 尤 其是新 疆 的无核 品种 的研 究多集中于育 种栽培 方面 。而对 于其 采后生 理代谢 的
研究却鲜有 报道 。该研究 采用 S 0 2 类 保鲜剂 处理 结合 低温贮藏技术 , 比较分析 了“ 无核 白” 、 “ 弗蕾” 、 “ 克瑞森 ” 3
工 艺 及 理 论 。E- ma i l : z q 3 8 2 3 4 4 @q q . c o m.
2 结 果与分 析
2 . 1 不 同品种无核葡 萄贮藏期超氧阴离子 自由基 ( )
产生速率的变化
是一种可直接作用于蛋 白而进一 步转化为对细 胞和结构功能产生破坏作用 的活性氧 , 其生 成速率可 以
关键词 : 无核葡萄 ; 品种 ; 采后 ; 活性氧代谢 中图分 类号 : S 6 6 3 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1 0 0 1 -0 0 0 9 ( 2 0 1 3 ) 1 7 —0 0 2 O —O 3

抗氧化酶活性等测定方法

抗氧化酶活性等测定方法

叶绿体的提取

一、试剂配置

1、PBS提取液:每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl (0.010×58.5=0.585g)、MgCl(0.002×95=0.19g)、EDTA(292.25×0.002=0.5845g)、KH2PO4(200×0.0005=0.1g);使用时加入ASA-Na(198.1×0.002=0.3962g);

2、悬浮液:将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES(238.3×0.05=11.915g);

3、80%Percol:80ml原液+20ml水;40%Percol:40ml原液+60ml水;

实际配制:

PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),

悬浮液100ml(3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml);

80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.(3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml)

二、提取步骤

1、10g鲜样加20ml提取PBS(50mM MES PH6.1,含0.33M山梨糖醇,10mM NaCl,2mM MgCl2,2mM EDTA,0.5 mMKH2PO4,2mM ASA-Na,ASA-Na使用前现配现加)

2、快速研磨,使叶片碎成绿豆粒大小,4层纱布过滤,去除残渣(注意过滤时不可用力挤压,以免叶绿体膜破碎)

3、滤液2000g 3min,小心倒出上清液,将离心管放入离心机后,使离心机的加速很快上升到预定值(水平转头,加速度调到9),约经30s后很快使其下降停止,整个离心持续大约2-3min左右完成;

外源H2 O2对盐胁迫下小白菜种子萌发和幼苗生理特性的影响

外源H2 O2对盐胁迫下小白菜种子萌发和幼苗生理特性的影响

第39卷第20期2019年10月生态学报ACTAECOLOGICASINICAVol.39,No.20Oct.,2019基金项目:国家自然科学基金项目(31460100,31660477);贵州省科技计划项目(黪科合平台人才[2017]5788号);常州大学人才引进项目(201709,201710)收稿日期:2018⁃09⁃17;㊀㊀网络出版日期:2019⁃08⁃19

∗通讯作者Correspondingauthor.E⁃mail:junyuhe0303@126.com

DOI:10.5846/stxb201809172021

任艳芳,何俊瑜,杨军,韦愿娟.外源H2O2对盐胁迫下小白菜种子萌发和幼苗生理特性的影响.生态学报,2019,39(20):7745⁃7756.

RenYF,HeJY,YangJ,WeiYJ.Effectsofexogenoushydrogenperoxideonseedgerminationandphysiologicalcharacteristicsofpakchoiseedlings(BrassicachinensisL.)undersaltstress.ActaEcologicaSinica,2019,39(20):7745⁃7756.外源H2O2对盐胁迫下小白菜种子萌发和幼苗生理特性的影响

任艳芳1,2,何俊瑜1,2,∗,杨㊀军2,韦愿娟2

1常州大学环境与安全工程学院,常州㊀2131642贵州大学农学院,贵阳㊀550025

摘要:以小白菜 甜脆青 为试材,研究不同浓度(5㊁10㊁25㊁50和100mmol/L)过氧化氢(H2O2)浸种处理对100mmol/LNaCl胁迫下小白菜(BrassicachinensisL.)种子萌发㊁幼苗生长及生理特性的影响㊂结果表明:100mmol/LNaCl胁迫明显抑制小白菜种子的萌发状况和幼苗生长,发芽势㊁发芽指数㊁活力指数及幼苗根和芽长度和鲜重均明显降低,根和芽中CAT的活性及K+含量明显受到抑制,渗透调节物质㊁活性氧和MDA含量显著增加㊂不同浓度H2O2浸种处理提高了NaCl胁迫下小白菜种子发芽势㊁

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超氧阴离子产生速率测定

羟氨氧化法

(王爱国,罗广华.植物的超氧物自由基与羟胺的反应[J].植物生理学通讯,1990,(6):55-57) 一、原理

植物组织器官的衰老总是伴着细胞内膜结构的破坏,表现为细胞内的电解质大量渗漏出来。很多研究结果表明,细胞衰老过程中膜的破坏是由细胞中(特别是线粒体和叶绿体)产生的自由基(如O2·¯、OH·、O2等)使膜脂中的不饱和脂肪酸发生过氧化作用而造成的。膜脂过氧化作用中产生的自由基,它不仅能连续诱发膜脂过氧化作用,而且还可以使蛋白质脱H+而产生蛋白质自由基,使蛋白质分子发生链式聚合,从而使细胞膜变性,最终导致细胞损伤、衰老和死亡。

二、材料、仪器设备与试剂

(一)材料

植物叶片、花瓣等器官

(二)仪器设备

低温高速离心机、微量加样器(1mL、20uL)、精密电子天平、分光光度计、试管、

研钵、剪刀、镊子、烧杯、试管架

(三)试剂

(1)0.05 mol·L-1磷酸缓冲液PH=7.8(0.66304g的NaH2PO4.2H2O和16.3849g的

Na2HPO4.12H2O定溶1000mL,校正PH)

(2)10m mol·L-1盐酸羟胺(NH2OH·HCl,69.49,溶于水)0.3475g定溶到500mL,(冷)

(3)17m mol·L-1对氨基苯磺酸(C6H7NO3S 173.19 1.4721g) 或者(C6H7NO3S·H2O 191.21 1.6253g)定溶到500mL,(冷,磁)

(4)7m mol·L-1α-萘胺,0.5012g定溶到500mL,(乙醇溶解,定溶,溶解完全)

三、试验步骤

(1)制做亚硝酸根标准曲线

2mL系列浓度的NaNO2(5,4,3,2,1,0.5μg/L)加入4mL对氨基苯磺酸和4mLa-萘胺于25℃保温20min,然后测定OD530以[NO2-]和测得的OD530值互为函数作图,制的亚硝酸根标准曲线

(2)取0.2g植物材料,加入1.0mL 0.05 mol·L-1磷酸缓冲液(PH7.8)于冰浴研磨

(3)研磨物以12000r/min离心15min,取上清液0.5mL加入0.5mL磷酸缓冲液和1mL 10m

mol·L-1盐酸羟胺,25℃静置1h

(4)加入1mL17m mol·L-1对氨基苯磺酸和1mL7m mol·L-1α-萘胺,25℃静置20min,测其

530处OD值

四、计算

根据测得的OD值,查标准曲线将花瓣中氧自由基含量的OD值转换成[NO2-],依据羟胺与O2-的反应式:

NH2OH+2O2-+H+→NO2-+H2O2+H2O

从[NO2-]对[O2-]进行化学计算,将[NO2-]乘以2得到[O2-]。

五、注意:

加样的顺序不能颠倒,25℃是它的反应温度。

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