基于流式细胞术的淋巴细胞亚群分类试验条件比较
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的常见问题及注意事项
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的常见问题及注意事项摘要目的规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的操作，保证检测结果准确性，对检测过程中出现的常见问题及注意事项进行汇总，提出解决方案。
方法对本科室使用贝克曼FC500流式细胞仪检测淋巴细胞亚群的检测过程中出现的各种问题进行汇总、整理和分析，提出解决方法。
结果流式细胞术检测淋巴细胞亚群中的常见问题包括前处理中遇到的的问题、实验操作过程中遇到的问题和分析过程遇到的问题等。
采用控制实验环境条件、多步骤多次核对标本信息、严格规范操作等方法可解决检测中存在的上述问题。
讨论淋巴细胞亚群是常见检测项目之一，实验过程中容易出现各种问题，只有发现、解决和预防这些问题，才能保证检测结果的准确性和可靠性。
关键词：淋巴细胞亚群流式细胞仪一、淋巴细胞亚群淋巴细胞是构成人体免疫系统的主要细胞，主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞，三种亚群的分布比例及数量具有重要的临床意义。
检测淋巴细胞亚群的方法有很多种，目前比较常用的是流式细胞术。
二、流式细胞术流式细胞术是用荧光素（如CD3，CD4，CD19等）标记细胞，经过与细胞上的抗原反应，经过流式细胞仪检测，通过对细胞荧光素表达情况，分析标本中的淋巴细胞及淋巴细胞亚群的比例和数量。
三、检测过程中遇到的问题1.分析前1.1 标本前处理1.1.1 实验前应核对标本的信息一致性，确认实验项目。
对标本进行排序和编号，T和NKB需分开编管，并做好标记。
1.2 实验操作1.2.1 加抗体时应核对抗体是否无误，避免加错抗体；每加一次抗体需更换枪头，避免污染试剂瓶中的抗体；检查抗体量，以防多加或漏加。
1.2.2 加标本前，应观察标本状态，是否存在凝集、黄疸、溶血等，加样时，再次核查试验号和项目，充分混匀标本，加样时避免枪头碰试管壁，如管壁沾有血迹，用干净棉签拭去；做绝对计数时，为保证结果准确性，采用反向加样。
1.2.3 溶血时应严格按量按时溶血，若溶血效果不好，可以适当延长溶血时间。
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程一、编号：JS0604二、标题：流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程三、关键词：流式细胞术淋巴细胞操作规程四、目的：规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的实验操作五、背景知识：T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。
在感染性疾病中，因为CD4+ T细胞是辅助、诱导T细胞的标志，CD4+ T 细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。
而CD4+ T细胞长期低于正常水平，常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。
CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中，CD8+ T细胞常升高。
CD4+／CD8+细胞比值下降，除肿瘤等疾病外，常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。
六、原理：利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。
待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号，利用这些信号，可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量，从而得出各细胞群的相对比值。
七、仪器设备和材料：肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。
八、操作步骤1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。
2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。
3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。
九、注意事项1、为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。
2、每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照，以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
PDF版 淋巴细胞亚群和流式细胞术
淋巴细胞计数减少，同时/或者： 淋巴细胞中某个亚群（绝对）计数减少，同时/或
者：
某活化淋巴细胞亚群%减少 有些患者临死前的B细胞计数会非常低！
比如对于感染性疾病患者可帮助了解 有没有感染的免疫反应？
哪群细胞反应强烈？细胞免疫反应为主还是体液免 疫为主？
是否存在免疫反应降低？
自身免疫病中某些亚群细胞活化增高增高，特别是 T细胞中的CD4细胞
CD8细胞又包括以下两群： 抑制性T细胞（Ts）具有抑制细胞免疫及体液免疫癿功能 细胞毒性T细胞（Tc）具有杀伤靶细胞癿功能
B细胞，最早在禽类中发现，称（法氏）囊依赖性淋 巴细胞，祖细胞存在于胎肝癿造血细胞岛中，此后B 淋巴细胞癿产生和分化场所逐渐被骨髓所代替
其分化成熟经历前B细胞、丌成熟B细胞、 成熟B细内加入植物凝集素（诱导T细胞），48小时观察 结果
传统测定T细胞癿方法 我们癿改进是用克脑迷（Antiradon ）处理绵羊红
细胞，4℃可保存1周 不小鼠红细胞形成花环癿为B淋巴细胞
系一种免疫组化技 术，通过复合物中 的碱性磷酸酶催化 底物显色来判断抗 原分子的存在
用于淋巴细胞分化 抗原、活化抗原、 MHC-I、II类抗原表 达的检测等
• 肾脏和心脏移植后接受预防排斥的免疫调节药物OKT-3的患 者
• 恶性肿瘤、自身免疫性疾病（SLE和RA等）、先天性免疫 缺陷病、艾滋病、接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激 素等免疫抑制剂资料的患者
T细胞增多，常见于：见于慢性活动性肝炎、重症肌无力
等自身免疫病活动期
即辅助性T细胞无论对于细胞免疫还是体液免疫都非常重要，
报告绝对值能让临床医师能够一目了然地获知何种 淋巴细胞亚群发生了异常，所以很受欢迎
某一亚群活化百分比升高见于该亚群的淋巴细胞功 能亢进或活性被调动起来了
淋巴细胞亚群分析报告
淋巴细胞亚群分析报告一、背景介绍淋巴细胞是免疫系统中的重要成分，通过分析淋巴细胞亚群的分布情况，可以评估机体的免疫功能及潜在疾病风险。
本报告旨在对您进行淋巴细胞亚群分析，以提供对您免疫系统状况的了解。
二、实验方法我们采用了流式细胞术（flow cytometry）对您的淋巴细胞亚群进行检测。
通过自动计数细胞的特定抗体标记，我们能够高效准确地分析淋巴细胞的亚群分布情况。
三、结果解读1. CD3+ T淋巴细胞CD3+ T淋巴细胞是一类非常重要的免疫细胞，负责调节和执行免疫应答。
根据我们的检测结果显示，您的CD3+ T淋巴细胞数量处于正常范围内。
2. CD4+ T细胞CD4+ T细胞又称为辅助性T细胞，对机体的免疫反应起重要作用。
根据检测结果，您的CD4+ T细胞比例为XX%，处于正常范围。
3. CD8+ T细胞CD8+ T细胞是细胞介导的免疫反应的关键成分，负责杀伤感染的细胞和控制体内的肿瘤细胞。
我们的结果显示，您的CD8+ T细胞比例为XX%，处于正常范围。
4. CD4+/CD8+ 比值CD4+/CD8+ 比值是评估免疫功能的重要指标之一。
正常情况下，CD4+/CD8+ 比值在1.5到2.5之间。
根据我们的检测结果，您的CD4+/CD8+ 比值为XX，可判断您的免疫功能正常。
5. NK细胞NK细胞是重要的自然杀伤细胞，对抗病毒感染和肿瘤细胞起到重要作用。
根据我们的检测结果，您的NK细胞比例为XX%，处于正常范围。
四、结果分析根据对您淋巴细胞亚群的分析，您的免疫系统状况良好，各项指标均在正常范围内。
您的CD4+/CD8+ 比值正常，表明您的免疫应答和监测能力正常。
此外，您的NK细胞比例正常，对抵抗感染和抗肿瘤细胞有良好的保护作用。
然而，请注意，本报告只是对您淋巴细胞亚群的初步分析，仅能提供免疫系统的总体情况。
如有其他相关检测需求或担忧，建议您咨询专业医生或进行更全面的免疫功能评估。
五、结论通过对您淋巴细胞亚群的分析，我们认为您的免疫系统状况良好，各项指标处于正常范围内。
流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的准确性评价
流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的准确性评价夏欣欣;王慧睿【摘要】目的:探讨流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的准确性.方法:选取2016年3月至2017年3月收治的恶性肿瘤患者36例为观察组,另选取同期就诊的非肿瘤患者36例为对照组,比较两组对象的外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞数量;利用流式细胞术对两组患者外周血T淋巴细胞亚群进行检测,判断该检测结果与临床诊断结果的符合率.结果:观察组患者的CD3+T细胞数量为(823.42±212.03)个/mm3,低于对照组的(1270.21±685.14)个/mm3(t=2.786,P=0.008);观察组患者的CD4+T细胞数量为(424.06±235.02)个/mm3,低于对照组的(750.98±367.56)个/mm3(t=2.786,P=0.008);观察组患者的CD8+T细胞数量为(860.94±633.86)个/mm3,高于对照组的(456.37±334.20)个/mm3(t=2.525,P=0.016);观察组患者的CD4+/CD8+T细胞数比值为(0.51±0.29),低于对照组的(2.11±1.32)(t=5.295,P=0.000);流式细胞术对患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果的符合率为100.0％.结论:采用流式细胞术检测恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群准确性较高,能够为恶性肿瘤的临床诊断和治疗提供依据.【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2018(034)003【总页数】2页(P5-6)【关键词】流式细胞术;恶性肿瘤;外周血T淋巴细胞亚群;检测准确性【作者】夏欣欣;王慧睿【作者单位】郑州大学附属洛阳中心医院肿瘤科,河南洛阳471000;郑州大学附属洛阳中心医院血液科【正文语种】中文恶性肿瘤的发生、发展与患者机体免疫功能的关系密切，在机体抗肿瘤免疫监视功能中，免疫系统具有非常重要的作用，而在维持人体机体免疫平衡的过程中，T细胞及其亚群所起到的作用至关重要，如T细胞亚群发生功能或数量改变时，机体的免疫功能紊乱，从而导致疾病[1-2]。
流式检测淋巴细胞亚群在临床中的应用
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
化疗(n=48) 67.60 27.40 28.20 0.82 13.20 7.40 5.80
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 5.90 8.10 6.90
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 9.10 6.30 7.70
p值
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.031 0.165
* t检验：P<0.05 显著性差异
手术、化疗和放疗对肺癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
手术 (n=152) 67.57 34.39 31.09 1.25 16.08 6.42 8.64
化疗(n=244) 67.67 33.78 32.07 1.30 16.27 7.48 7.93
放疗(n=164) 65.64 28.59 32.99 1.13 17.98 5.85 6.58
p值
0.093 0.001 0.021 0.011 0.045 0.029 0.430
* t检验：P<0.05 显著性差异
2、流式专业讲座：流式相关免疫学、流式相关血 液学、流式相关其他实验。
3、临床流式疑难病例解答：临床在职流式专家为 您解决临床检测中遇到的疑难病例问题，帮您更好 的做出诊断。
4、交流平台：丰富的交流平台可以让更多的流式 从业者在此交流心得，互相帮助，获得更多有用的 信息。
流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南
488nm的 激 发 光 源 激 发 ,最 大 发 射 波 长 分 别 为
525nm、 575nm、 670nm、
675nm和
613nm。
别 藻 青 蛋 白 (APC)的 激 发 光 源 为 630nm,最 大 发 射 波 长 为 660nm。
3.2
溶血素 使 用 与 仪 器 相 匹 配 的溶 血 素 (内 含 固定 液 ),并 严 格 按 照 使 用 说 明 和 注 意 事 项 进 行 操 作 。 如 果 使 用
FCSC Count StandardtM(Flow C~vt° metry Standards Corporaton)和
TruCountTM(Becton Ekkns° ω 等 。
4
标 本 采集 和 处理 生物 安 全 血 液 和体 液 标 本 中可 能存 在致 病 性 甚 至致 死 性 的活 体 病 原 微 生 物 ,所 有 标 本 都 应 当作 潜 在 传 染 源
3.1.2
单抗对 细胞 的反应 性
CD45表 达 于 所 有 白细 胞 ;CD3表 达 于 T淋 巴细 胞 ;CD4表 达 于 T辅 助 /诱 导 淋 巴细 胞 (CD4+T细 胞 )和 单 核 细 胞 ;CD8表 达 于 细 胞 毒 T细 胞 (CD8・ T)和 NK细 胞 ;CD19表 达 于 B淋 巴 细 胞 ;CD16表 达 于 NK细 胞 、 核 巨 噬 细 胞 、 细 胞 和 树 突 状 细 胞 等 ;CD56表 达 于 NK细 胞 和 细 胞 毒 T细 胞 。 单 粒
2
术语和定 义 下 列 术 语 和定 义适 用 于 本 文 件 。
2.1
分 化 抗 原 cIuster of differentiation,CD 活 成 不 同谱 系 细 胞 在 分 化 、 熟 、 化 过 程 中 ,出 现 或 消 失 的 细 胞 表 面 标 志 。 细 胞 表 面 标 志 通 常 用 单 克 隆抗 体 来 识 别 。每 个 抗 体 都 有 指 定 的 CD编 号 ,能 被 特 定 抗 体 识 别 的特 定 抗 原 通 常 具 有 相 同 的 编 号 ,例 ” “ ” “ 如 ,被 CD1抗 体 识 别 的抗 原 称 为 tlDl抗 原 。
两种流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析
两种流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析流式细胞仪是一种用于研究和分析细胞的仪器。
它可以通过分析细胞的表面标记物或细胞内的分子，来获得关于细胞亚群的信息。
其中，T细胞是一类重要的免疫细胞，可以分为多个不同的亚群，如细胞毒性T细胞（CD8+）、辅助性T细胞（CD4+）等。
在免疫学研究和临床检测中，了解T细胞亚群的数量和比例对于评估免疫功能的状态至关重要。
下面将介绍两种常用的流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析方法。
1.全血淋巴细胞表面标记法全血淋巴细胞表面标记法是通过将新鲜全血样本进行细胞表面标记，然后使用流式细胞仪进行分析。
该方法的优点是样本处理简单快速，可以直接得到体内T细胞亚群的比例。
具体步骤如下：（1）制备淋巴细胞上清液：将新鲜全血样本与等体积的生理盐水混合，用离心管密封离心，将上清液分离出来。
（2）染色：将淋巴细胞上清液转移到离心管中，加入适量的表面标记的单克隆抗体。
常用的表面标记抗体有CD3、CD4和CD8等。
（3）洗涤：离心管密封离心，将上清液倒掉，再次加入适量的生理盐水洗涤淋巴细胞。
（4）流式细胞仪检测：将洗涤后的细胞上样到流式细胞仪中，设置相应的检测参数，如激发波长和荧光信号的检测通道。
通过流式细胞仪收集数据，并使用分析软件对数据进行解析和计算。
这种方法的优点是可以同时检测多种T细胞亚群，准确计算亚群的比例。
但是由于这种方法无法获得细胞内的功能和分子表达信息，只能通过表面标记物进行鉴定。
2.胞浆染色法胞浆染色法是通过流式细胞仪检测细胞胞浆内的标记物，从而分析T 细胞亚群的比例。
该方法通常与细胞表面标记法联合使用，可以同时获得细胞表面和胞浆内的信息。
具体步骤如下：（1）制备全血淋巴细胞上清液：与全血淋巴细胞表面标记法相同。
（2）染色：将淋巴细胞上清液进行细胞膜标记和胞浆胞浆标记。
胞浆标记常用的有抗体和荧光染料，如免疫球蛋白（IgG）等。
（3）洗涤：与全血淋巴细胞表面标记法相同。
（4）流式细胞仪检测：与全血淋巴细胞表面标记法相同，但需要在分析软件中选择相应的通道来检测胞浆标记物。
PDF版 淋巴细胞亚群和流式细胞术
某一亚群活化百分比升高见于该亚群的淋巴细胞功 能亢进或活性被调动起来了
某一亚群活化百分比降低则为其功能低下，或被过 量消耗、或被严重“误伤”（因为许多抗癌药物和 免疫抑制剂都是针对处于增值状态的细胞的）
活化淋巴细胞亚群严重降低者应当关注全身化脓性 感染的危险！
汪子伟 主任技师 迪安诊断管理部
原 杭州市第一人民医院 中心实验室主任 曾 浙江省临检中心 实验室主任
浙江浙江省人民医院 中心实验室主任
1997年第一次使用流式细胞仪，浙江省人民医院中心实验 室购买了Coulter Epics，主要用于淋巴细胞亚群、活化血小 板、MRD、白血病免疫分型及临床科研等
CD4/CD8 6.9±3.12 0.2±0.04 1.3±0.05 0.7±0.13
（中华检验医学杂志. 2000, 23: 214-216）
肺部疾病表现出局部免疫功能环境发生改变；结节病是以CD4细胞占绝对优势 的淋巴性肺泡炎，4/8显著升高，提示CD4免疫细胞功能亢进；特发性肺间质纤 维化有学者认为是中性粒细胞性肺泡炎，但CD8细胞显著增多，4/8显著下降， 与结节病表现完全不同；八年制内科学（上册）（第2版），人民卫生出版社， 2013年已将支气管肺泡灌洗液检查是鉴别诊断结节病和IPF的重要依据；肺部肿 瘤机体免疫功能移植，CD8细胞升高，但没有IPF明显
• 肾脏和心脏移植后接受预防排斥的免疫调节药物OKT-3的患 者
• 恶性肿瘤、自身免疫性疾病（SLE和RA等）、先天性免疫 缺陷病、艾滋病、接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激 素等免疫抑制剂资料的患者
T细胞增多，常见于：见于慢性活动性肝炎、重症肌无力
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理及注意事项
流式细胞术（flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学领域的技术，它通过检测细胞表面和内部分子的存在和数量，从而可以对细胞进行高度特异性的分析和分类。
在临床诊断、生物医学研究以及药物开发等方面都有着重要的应用。
其中，流式细胞术检测淋巴细胞亚群，可以帮助我们更好地了解免疫系统的功能状态，对于免疫相关疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本文将从原理和注意事项两个方面，深入探讨流式细胞术检测淋巴细胞亚群的相关知识。
**一、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理**1. 标本处理流式细胞术检测淋巴细胞亚群的首要步骤是标本处理。
通常情况下，我们会收集外周血进行检测。
在实际操作中，需要抗凝剂进行处理，避免血液凝固，从而保证细胞的完整性。
2. 抗体染色标本处理完成后，接下来是抗体染色。
我们会选择特定的单克隆或多克隆抗体，将其与待检测的淋巴细胞结合。
这些抗体会携带着荧光标记，通过激光的激发，可以将淋巴细胞亚群进行精准识别。
3. 流式细胞分析染色完成后，样本会被注入到流式细胞仪中，通过激光的激发和散射光的检测，可以将不同淋巴细胞亚群进行高效、高速的分析。
在这一步骤中，流式细胞仪会根据荧光信号的强度和特异性来对淋巴细胞进行分类和计数。
4. 数据分析通过计算机对流式细胞仪获取的数据进行分析和解读，我们可以得到淋巴细胞亚群的比例、数量和表达特征等信息，从而更好地了解免疫系统的状态和功能。
**二、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的注意事项**1. 样本保存在进行流式细胞术之前，我们需要认真保存样本，避免细胞的损伤和变性。
通常情况下，标本需要在4摄氏度下保存，并尽快进行检测，避免细胞的失活和降解。
2. 抗体选择在进行抗体染色时，需要根据实际情况选择合适的抗体，保证其对于待检测的淋巴细胞具有高度的特异性和亲和性。
还需要注意避免抗体的交叉反应，以免对结果的准确性造成影响。
3. 仪器校准流式细胞仪作为检测设备，需要定期进行校准和质控。
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测是通过流式细胞术来进行的。
下面是其操作方法的一般步骤：
1. 预处理样本：收集新鲜的全血样本，并将其分成多个试管。
每个试管中的样本应含有适当的抗凝剂（例如EDTA），以防止血液凝固。
2. 样本染色：将每个试管中的全血样本分成不同的管中，每个管中加入不同的单克隆抗体染色。
根据实验需要，可以选择染色CD3、CD4、CD8、CD19等表面标记物来区分不同的淋巴细胞亚群。
染色时间和温度根据抗体厂商的建议进行。
3. 洗涤：将染色后的细胞悬液用PBS或其他适当的缓冲液洗涤，以去除未结合的抗体。
每个管中的细胞可用700 rpm离心3-5分钟，将上清液倒掉。
4. 固定：将细胞悬液溶入适当量的荧光素（如二甲亚基绿），用PBS稀释至适当浓度，静置固定30分钟。
固定之后，可以继续离心去除上清液。
5. 流式细胞术：将固定的细胞悬液在流式细胞仪中进行检测。
根据实验需要，设置适当的流速和激发波长来检测不同染色的细胞。
通过检测细胞表面荧光素的强度，可以确定不同淋巴细胞亚群的百分比和数量。
需要注意的是，以上是一般的操作方法，具体的步骤可能会因实验目的、试剂和仪器的不同而有所变化。
因此，在进行实验之前，最好参考实验方案和相关的文献资料，以确保操作的准确性和可靠性。
流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用
【 摘要 】 目 的 探 讨胸 水 、 水 、 泡灌 洗 液 Ｔ 淋 巴 细胞 亚 群 的检 测 方 法及 临床 价 值 。方 法 采 用 流式 细 胞 术 检 测 良 、 性 腹 肺 恶 疾病患者的 ５ Ｏ例胸 水 、 ６例腹 水 、 ７例肺 泡 灌 洗 液 （ Ａ ） Ｔ淋 巴 细 胞 亚 群 的水 平 并 分 组 进 行 比较 。结 果 １ 胸 水 ： 核 性 ４ ４ Ｂ Ｉ 中 Ｆ ） 结
病 组 肺 泡灌 洗 液 Ｔｓ 胞 占 Ｔ 淋 巴细 胞 的（ ４５ ±９ ５ ） 、 ｈ细 胞 占 Ｔ 淋 巴 细 胞 的 （９ ２ ± １． ８ ％ 、 ｈ Ｔ 细 ４ ． ４ ． ６ Ｔ ４ ．８ ２ ８ ） Ｔ ／ ｓ比值 为 １ １ ± ．３
０２， ． ９ 肺部 恶性 肿 瘤 组 肺 泡灌 洗 液 Ｔｓ 细胞 【 淋 巴 细胞 的（ ５ １ ±７ ７ ） 、 Ｔ ６ ． １ ． ７ Ｔｈ细 胞 占 Ｔ 淋 巴 细 胞 的（ ４ ５ ±６ ６ ） 、 ／ ｓ ３ ． ７ ． ５ Ｔｈ Ｔ
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国际检验 医学杂志 ２１ １ 第 ３ 卷第 ｌ ００年 月 １ 期 ｌｔ ａ ｎ ＪＬｂ
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临 床 研 究
・
流 式 细 胞 术 检 测 体 液 Ｔ 淋 巴细 胞 亚 群 的 临床 应 用
莫 扬 许 小 东 ，
（ 中科技 大学 同济 医学院 附属 襄樊 医院检验科 ， 北襄樊 ４ １ ２ ；． 生部北京 医院流式细胞仪 室 １ ０ ３ ） 华 湖 ４ ０ １２卫 ０ ７ ０
不同商家试剂用流式细胞术测定T淋巴细胞亚群比较
睾丸 炎或 睾 丸萎 缩 的发 生 率 ， 发疝 为 １ ， 原 ％ 复发 疝 术后 为 ５ ％。本 文报 道 的 ４ ０例疝 修 补 术 中 ， 生 睾 ２ 发 丸萎 缩 ２例 ， 丸水 肿 ２例 。为 避 免造 成 损 伤 ， 具 睾 除
及时手 术 探查 、 解 缝 线 、 补 破 损 肠 管 、 腔彻 底 松 修 腹 冲洗 引流 、 后 加 强 抗 感 染 、 持 等 处 理 获 痊 愈 ， 术 支 另 １ 例虽 经 手术 等 积极 救 治 ， 因肠 瘘 ， 重腹 腔感 染 终 严
而死 亡 ， 教ห้องสมุดไป่ตู้ 深 刻 。 参 考 文 献 ：
的一 部 分而 致 损 伤 。 病 史 较 长 的 巨大 阴囊 型 疝 ， 呈
［ ］Ｄ ｖｉ Ｈ ｎｇｍ ｎ ｆｄｏ ｎｅ ｈｒａ ｄ Ｂ ｔｒｏｒ １９ ： ２ ｅｌ ＢＭａｄｅ ｅｔ ｂｍｉ ｌ ｅ ｉ ｌ ． ｕｅｗ ｏｔ Ｃ，９ ８ ｎ ｏａ ｅ ｎ ｓｅ ｔ ｈ
１ ７ — １ ８． ８ ９
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第 １ ７卷 第 ３期 ２０ ０ ２年 ９月
川
北
医
学
院
学
报
Ｖ０ ． ７。 １ １ Ｎｏ． ３
Ｓｐ ２０ ｅ ０２
Ｊ ＲＮ ＯＲ Ｈ Ｉ ＨＵ ＤＩ ＡＬ Ｃ Ｌ Ｅ ＯＵ ＡＬ ＯＦ Ｎ Ｔ Ｓ Ｃ ＡＮ ＭＥ Ｃ ＯＬ ＥＧ
备正 确 的解 削 知识 外 ， 应操 作 轻柔 ， 远端 疝 囊壁 不 于 剥离 ， 应 将睾 丸 拖 出阴 囊 ， 护 睾 丸侧 支血 循 环 。 不 保 ３５ 肠 管 损 伤 ： 顿 疝 还 纳 过 程 中易 发 生 小 肠 损 ． 嵌 伤， 因复 位 时 用 力 猛 ， 使 充 血 水 肿 的 肠 管 破 裂 损 可 伤 ； 术松 解 内环 时损 伤 已有 血 运 障碍 的肠 管 ， 在 手 或 麻 醉后 已有 血 运 障碍 的肠 管 自行 返 纳入 腹 腔 内继 发 坏死 穿 孔 。 滑 动 型 疝 在 疝 修 补 术 时 易 造 成 结 肠 损 伤， 由于盲 肠 、 乙状 结 肠 常 为 疝 内容 物 、 成 疝 囊 壁 构
t淋巴细胞亚群检测 标准
t淋巴细胞亚群检测标准一、样本采集1.采样时间：在早晨未接受任何其他处理之前，空腹状态下进行。
2.采样量：2-3ml外周血3.采样方式：静脉采血，使用EDTA抗凝管4.样本处理：采血后立即轻轻摇动抗凝管，使血液与抗凝剂充分混合，避免形成血块。
5.样本保存：采集后的样本应立即送检，或在4℃下冷藏保存，但不得超过48小时。
二、检测方法1.检测原理：采用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）进行T 淋巴细胞亚群的检测。
通过荧光标记的单克隆抗体特异性识别淋巴细胞表面的标志物，将T淋巴细胞分为CD4+和CD8+两个亚群。
2.检测流程：a)预处理样本：将EDTA抗凝的全血样本进行涡旋混合，使红细胞和白细胞充分裂解。
b)抗体标记：向预处理后的样本中加入荧光标记的单克隆抗体，孵育一定时间后洗涤并固定细胞。
c)流式细胞术检测：将标记好的样本通过流式细胞仪进行检测，获取每个淋巴细胞的荧光信号。
d)数据处理与分析：使用软件对获取的荧光信号进行数据处理和分析，得到CD4+和CD8+两个亚群的细胞比例。
三、正常参考值根据正常参考值数据库的数据，正常成年人外周血中T淋巴细胞亚群的正常参考值范围如下：CD4+T细胞：40%-65%CD8+T细胞：20%-40%四、T细胞亚群的识别和计数1.CD4+T细胞的识别：通过流式细胞术检测样本中表达CD4分子的T细胞，以识别CD4+T细胞。
2.CD8+T细胞的识别：通过流式细胞术检测样本中表达CD8分子的T细胞，以识别CD8+T细胞。
3.计数方法：采用绝对计数方法，计算每微升血液中CD4+和CD8+T细胞的个数。
每微升血液中含有多少个淋巴细胞，其中有多少个是CD4+或CD8+T细胞。
五、质量控制1.仪器校准：使用流式细胞仪前必须对仪器进行校准，确保数据的准确性和可重复性。
2.试剂质量控制：采用高质量的抗体试剂和荧光标准品，确保检测结果的可靠性。
同时，对抗体试剂进行质量检测和控制，以确保其特异性和灵敏度。
流式细胞术淋巴细胞亚群检测室间质评结果分析
流式细胞术淋巴细胞亚群检测室间质评结果分析朱宇清;朱俊;徐翀【摘要】目的通过分析卫生部临床检验中心、上海市临床检验中心的淋巴细胞亚群室间质量评价(EQA)报告数据以及上海市2家实验室室内质控上报数据,探讨目前国内淋巴细胞亚群检测EQA评判规则的合理性,为进一步提高国内该检测项目的质量水平提供依据.方法对BD流式细胞仪用户组2014年卫生部临床检验中心及2015年上海市临床检验中心第1次淋巴细胞亚群EQA报告数据进行统计,计算各浓度质评样本上报数据的标准差(s)和变异系数(CV),选取上海市2家BD流式细胞仪用户2014年9月至2015年4月期间的淋巴细胞亚群室内质控数据,计算月s和月CV值.并对卫生部临床检验中心第201403和201405号质评样本CD3+CD4+百分比(CD3+ CD4+％)项目(靶值分别为42.7％、42.1％)、上海市临床检验中心第1521和1525号质评样本CD3+CD4+％项目(靶值分别为43.2％,44.13％)的回报数据以及2家上海市临床实验室CD3+ CD4+％项目中值水平(月组均值为44.39％～ 46.80％)室内质控数据进行比较分析.结果 2014卫生部临床检验中心5份EQA样本的s为1.10％～ 1.55％,CV为3.1％～5.5％,平均CV为3.36％;2015年上海市临床检验中心第1次EQA 5份样本的s为0.67％～1.63％,CV为3.51％～8.64％,平均CV为4.83％.在样本CD3+ CD4+％值相近的情况下,卫生部临床检验中心2个EQA样本组s(1.55％、1.35％)和组CV(3.6％、3.2％)、上海市临床检验中心2个EQA样本的组s(1.63％、1.55％)和组CV(3.78％、3.51％)均在上海市2家临床实验室室内质控月s(1.06％～2.44％、0.98％～ 2.03％)和月CV(2.18％～5.28％、2.14％～4.35％)的变化范围之内.结论由于仪器品牌和型号、溶血方法、荧光抗体的品牌和用量、设门方法、实验人员、环境条件等不同因素的影响,EQA数据统计中的s和CV低于室内质控的s和CV不合理.其原因可能是部分参与EQA的实验室在数据上报前对检测结果进行了交流、核对和更改.当前除了加强对实验室的质量教育外,EQA组织者还需要探讨建立更合适的质控规则.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2015(030)011【总页数】5页(P1086-1090)【关键词】淋巴细胞亚群;流式细胞术;室间质量评价;标准差;变异系数【作者】朱宇清;朱俊;徐翀【作者单位】上海市临床检验中心,上海200126;上海市临床检验中心,上海200126;上海市临床检验中心,上海200126【正文语种】中文【中图分类】R446.63淋巴细胞亚群检测对影响机体免疫系统的多种因素的诊断和监测提供了重要信息。
流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南说明书
ICS点击此处添加ICS号CCS 点击此处添加CCS号WS 中华人民共和国卫生行业标准XX/T XXXXX—XXXX代替 WS/T 360流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南Guidelines for peripheral lymphocyte subsets by flow cytometry(点击此处添加与国际标准一致性程度的标识)（征求意见稿）在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。
XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施前言本标准按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本标准代替WS/T360-2011《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》，与WS/T360-2011相比，主要技术内容变化如下：a) 增加了流式细胞术检测淋巴细胞亚群的6色分析方案；b) 增加了流式细胞仪性能评估内容；c) 完善了仪器质量控制，仪器性能评估和项目性能评估的指标和质量目标；d) 梳理了分析前、分析中、分析后的内容及要求；e) 增加了自动样本制备内容；f) 补充了结果审核内容。
本标准起草单位：中国医学科学院肿瘤医院、北京医院/国家卫生健康委临床检验中心、北京大学第一医院、中国医学科学院北京协和医院、上海市第一人民医院、上海交通大学医学院附属新华医院、上海长征医院、苏州大学附属第一医院/江苏省血液研究所。
本标准主要起草人：崔巍、彭明婷、屈晨雪、黄春梅、李莉、沈立松、周琳、朱明清、崔婵娟、李臣宾。
流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南1 范围本标准规定了流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群（T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK淋巴细胞、CD4+T 淋巴细胞和 CD8+T淋巴细胞）的技术要求。
本标准适用于开展流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的机构。
2 规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。
3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1细胞分化抗原 cluster of differentiation，CD不同谱系白细胞在分化、发育、活化过程中，出现或消失的细胞表面标志。
流式细胞术测定T淋巴细胞亚群不同商家试剂的比较
流式细胞术测定T淋巴细胞亚群不同商家试剂的比较
唐中
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】2003(021)0z1
【摘要】@@ 淋巴细胞亚群的测定在临床医学中越来越受到重视.应用流式细胞分析技术来检测人外周血T淋巴细胞亚群,具有简便、快速,计数细胞量大,相对精度好等优点.但是,由于流式细胞技术进入临床应用时间短,在操作技术规范、试剂质量指标等诸多方面还无严格标准可循,因而造成测定结果差异较大,可比性差.本文用国外的3个商家试剂在流式细胞仪上测定T淋巴细胞亚群进行比较,现将结果报告如下.【总页数】1页(P27-27)
【作者】唐中
【作者单位】川北医学院附属医院检验科,四川
【正文语种】中文
【中图分类】R446.113
【相关文献】
1.流式细胞术分析不同分期的恶性肿瘤外周血T淋巴细胞亚群的变化 [J], 周晋华
2.流式细胞术测定T淋巴细胞亚群不同商家试剂的比较 [J], 唐中
3.不同商家试剂用流式细胞术测定T淋巴细胞亚群比较 [J], 唐中
4.用流式细胞术测定大气颗粒物提取液对小鼠T淋巴细胞亚群的影响 [J], 马亚萍;杨建军;窦岩
5.流式细胞术检测不同试验条件对猪T淋巴细胞亚群的影响 [J], 屈雪琪;罗胜军;邢海云;高英杰;赵建增;梁智选;李勇;白雪;梅林;温涛;何斌;杨举
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流式细胞术检测肺结核患者血清T淋巴细胞亚群分析
流式细胞术检测肺结核患者血清T淋巴细胞亚群分析【摘要】目的：分析流式细胞术检测中肺结核患者血清T淋巴细胞亚群的改变。
方法：将2015年6月-2016年6月医院收治的100例肺结核患者进行流式细胞术检测，进行血标本采集，随后观察肺结核患者经过治疗后血清T淋巴细胞亚群的改变情况，并且与未患病者进行比较。
结果：初至活动性肺结核患者血清中CD4+、CD4+/CD8+降低，而CD3+、CD8+升高，与正常对照组相比，CD8+、CD4+/ CD8+差异有显著性（P <0. 05）；病变范围广泛者的CD3+、CD4、CD4+/CD8+ 较病变范围小者低，CD3+ 差异有显著性；痰菌阳性者与阴性者比较，CD4+/CD8+ 下降，CD8+升高，但差异无显著性（P >0. 05）。
结论：初治活动性肺结核患者的T 细胞亚群变化存在其自身特点。
对肺结核患者 T 淋巴细胞亚群的检测有助于判断病情、了解抗结核治疗效果。
【关建词】流式细胞术检测；肺结核；T淋巴细胞亚群肺结核是由结核杆菌感染引发的一种慢性传染性疾病，据相关资料表明，我国是高居第二位的结核病高负担国家。
肺结核早期临床表现及体征同其他相关肺疾病相似，易导致误诊或漏诊，进而使病情延误。
T淋巴细胞作为机体执行细胞免疫主要效应细胞之一，其亚群改变对肺部疾病的发生及发展具有直接影响，因此，对T淋巴细胞亚群水平予以相关检测，直接关乎到患者机体免疫功能改善、肺部疾病病情的临床诊断及治疗。
对此，现选取100例初治性肺结核患者，对其血清中T淋巴细胞亚群情况进行分析，相关结果总结并报告如下。
1 资料与方法1.1 一般资料（1）肺结核患者组：选取2015年6月-2016年6月医院收治的肺结核患者100例，其中男58例，女42例，年龄15-76岁，平均（43±2.85）岁，其中结核菌阴性56例，结核菌阳性44例。
诊断依据为：有结核中毒症状；X 线检查及CT 检查发现结核病灶，并提示结核活动；结核菌阳性者痰涂片、痰培养或气管镜刷检找到结核分枝杆菌；结核菌阴性者经诊断性抗结核治疗病灶吸收。
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【关键词】 流式细胞术； 抗体； 淋巴细胞亚群分类；
食蟹猴； 多聚甲醛
中国医药生物技术, 2019, 14(5):400-405
生 物 制 品 的 潜 在 免 疫 毒 性 风 险 不 可 小 觑 [1] 。 CD28 超级激活剂 TGN1412 在临床试验中曾出 现多脏器衰竭甚至昏迷的严重毒性反应[2]，受到社
中国医药生物技术 2019 年 10 月第 14 卷第 5 期 Chin Med Biotechnol, October 2019, Vol. 14, No. 5
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1 材料与方法
1.1 材料 1.1.1 实验动物 普通级食蟹猴共 34 只，雌雄 各半，购入时 3 ~ 4 岁，购自广西雄森灵长类实验 动物养殖开发有限公司。动物生产许可证号 SCXK （桂）2011-0002 和 SCXK（桂）2016-0001。饲养 于普通级动物房不锈钢笼具内，单笼饲养。动物自 由饮水，每只动物每天定量给料和水果各 150 g， 自由摄取。食蟹猴饲养于恒温（16 ~ 26 ℃）、恒湿 （40% ~ 70%）的条件下，明暗周期为 12 h，每小 时最低换气次数 8 次。所有研究方案均通过国家 药物安全评价监测中心实验动物福利伦理委员会 （IACUC）的伦理审查。 1.1.2 主要试剂和仪器 流式仪校准微球（BD CalibriteTM 3-color、 APC bead ）、 流式 检 测 抗 体 FITC-CD8（Clone RPA-T8，批号：37124）、PE-CD4 （Clone L200，批号：17206）、PerCP-CD3（Clone SP34-2，批号：2230514）、APC-CD20（Clone 2H7） 均购自美国 BD 公司；红细胞裂解液主要成分：氯 化 氨 （ 批 号 ： 20080228 ）、 碳 酸 氢 钾 （ 批 号 ： F20101109）、乙二胺四乙酸二钠（批号：20100324） 和多聚甲醛（批号：20111121）购自国药集团；磷 酸盐缓冲液（批号：AD2016267、AD22391274）购 自美国 Hyclone 公司；多聚甲醛使用前经 PBS 稀 释为 1% 或 4% 的应用液。
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中国医药生物技术 2019 年 10 月第 14 卷第 5 期 Chin Med Biotechnol, October 2019, Vol. 14, No. 5
DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2019.05.003
·论著·
基于流式细胞术的淋巴细胞亚群分类试验
条件比较
会广泛关注，故在非临床安全性评价阶段有必要完
善免疫毒性评价。使用流式细胞术（flow cytometry， FCM）对淋巴细胞亚群，如 CD3+、CD4+、CD8+ 等 指标进行检测，已成为生物制品安全性研究及评价 中常规而重要的免疫毒性评价指标。淋巴细胞根据 表面标志的不同分为 T 淋巴细胞、B 淋巴细胞、 NK 细胞等，而 T 淋巴细胞分为辅助和杀伤细胞 亚群，在 HIV 或其他免疫性疾病的诊断、预后等 都起着很重要的作用[3]。FCM 被认为是血液中淋巴 细胞免疫表型分析的标准方法，其原理为表达不同 表面抗原的淋巴细胞结合不同荧光抗体，被特定的 激光激发后，收集不同的荧光和散射光信号对细胞 进行分析计数[4]。与免疫组化检测法相比，FCM 灵 敏度高且更客观，更适宜对某一指标作定量检测[5]。 然而，流式样本制备过程中多种因素可能对其结果 产生干扰。如抗体组合的选择[6]、抗体稀释比例、 固定液多聚甲醛的浓度[7]、血样放置时间、保存温 度、抗凝剂的选择[8]等。保证试验条件的一致性及 可靠性，是对受试物免疫毒性作出客观评价的基 石[9]，也是确保免疫毒性的评价符合药物非临床研 究质量管理规范（good laboratory practice，GLP） 的前提。
比值。
结 果 经 1% 多 聚 甲 醛 固 定 至 第 4 天 检 测 雄 性 动 物 CD4+、CD8+、CD3-CD20+ 百分率和雌性动物 CD8+ 百分 率与样本制备当天相比存在显著性差异（P < 0.05，P < 0.01），且存在时间依赖性。样本保存至第 4 天时以 1% 多 聚甲醛保存的样本 CD4+、CD8+、CD3-CD20+ 百分率与 4% 多聚甲醛保存的样本相比亦存在显著性降低（P < 0.05，P < 0.01，P < 0.001）。50 μl 抗凝全血中添加 1 μl 抗体时，自 制备后第 4 天起 CD4+ 平均荧光强度即显著降低（P < 0.01）。所有样本至第 4 天起，CD4+ 及 CD8+ 平均荧光强 度显著性衰减（P < 0.01）。
结论 不同多聚甲醛使用浓度、抗体用量及保存时间均对样 本的状态和试验结果产生一定影响。如流式样本当天无法测 定，样本可于 4% 浓度的多聚甲醛中稳定保存至制备后第 4 天检测；在 50 μl 全血中应添加至少 3 μl 抗体用于检 测，以保证流式细胞仪对淋巴细胞表型识别的灵敏度，检测 应于样本制备后 3 天内完成。
基金项目：“重大新药创制”国家科技重大专项（2015ZX09501007-004、 2018ZX09201-017）；国家重点研发计划（2016YFA0101503） 作者单位：100176 北京，中国食品药品检定研究院国家药物安全评价 监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室 通信作者：霍艳，Email：yanhuo@ 收稿日期：2019-07-11 *同为第一作者
姜华*，文海若*，刘丽，颜玉静，霍艳
【摘要】
目的 比较不同抗体稀释度和多聚甲醛浓度对流式细胞术 测定淋巴细胞亚群分类结果的影响。
方法 取猴抗凝全血经浓度为 1% 或 4% 的多聚甲醛固 定后连续 4 d 上机测定淋巴细胞荧光强度及 CD3+、CD4+、 CD8+、CD20+ 百分率及 CD4+/CD8+ 比值。取猴抗凝全血 50 μl 分别与 1、3、5 和 10 μl CD8+-FITC、CD4+-PE、 CD3+-PerCP 抗 体 混 合 后 连 续 7 d 上 机 测 定 CD4+ 和 CD8+ 荧光强度及 CD4+ 与 CD8+ 百分率和 CD4+/CD8+
食蟹猴为生物技术药物临床前安全性评价常 用动物模型，本研究采集食蟹猴血样比较不同浓度 多聚甲醛（1% 和 4%）以及不同抗体与全血稀释 浓度（1:50、3:50、5:50 和 10:50）对外周血淋 巴细胞亚群分类结果的影响，以确立多聚甲醛使用 浓度和全血稀释度的最优条件，为淋巴细胞亚群分 类流式检测条件的优化奠定基础。