T淋巴细胞亚群检测操作程序教学提纲

T淋巴细胞亚群检测

操作程序

一、目的：

保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。

二、修改程序：

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。

三、适用范围：

外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。

四、实验原理：

人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。

六、主要试剂：

CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)，

七、实验操作：

抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。

1、标本采集：使用EDTA-K

2

2、染色和固定细胞：

（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。

（2） A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。

（3） A1管中再加入全血100ul，混均。

（4）置室温，避光孵育15min。

（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。

（6） 300g离心5min，弃上清液。

（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。

3、上机检测；分析结果；打印实验报告。

八、参考值：

总T细胞（CD3+）： 59.4-84.6

辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5

抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3

Th/Ts: 0.9-3.6

九、临床意义：

T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。

十、质量控制：

1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。

2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋巴

瘤可能有较大差异。

3、收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴

细胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。

4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的

干干扰。