T淋巴细胞亚群检测操作程序教学提纲
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程一、编号：JS0604二、标题：流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程三、关键词：流式细胞术淋巴细胞操作规程四、目的：规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的实验操作五、背景知识：T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。
在感染性疾病中，因为CD4+ T细胞是辅助、诱导T细胞的标志，CD4+ T 细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。
而CD4+ T细胞长期低于正常水平，常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。
CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中，CD8+ T细胞常升高。
CD4+／CD8+细胞比值下降，除肿瘤等疾病外，常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。
六、原理：利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。
待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号，利用这些信号，可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量，从而得出各细胞群的相对比值。
七、仪器设备和材料：肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。
八、操作步骤1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。
2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。
3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。
九、注意事项1、为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。
2、每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照，以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
T淋巴细胞亚群（Tcellsubset）
T淋巴细胞亚群（Tcellsubset）【参考范围】CD3+CD4+CD8-：0.34～0.70（34.O%～70.0%）；CD3+CD4-CD8+：0.25～0.54（25.0%～54.0%）；CD4+/CD8+：0.68～2.47。
【影响因素】1．标本最好用EDTA抗凝，其次用肝素。
2．标本要新鲜采集，不能发生凝血。
3．制备细胞悬液时，使用标准溶血剂以使红细胞充分溶解。
4．血液采集后，应尽快进行免疫荧光染色和固定，最迟不能超过6h。
5．标记后的细胞应尽快上机检测，最迟不能超过72h。
【临床意义】正常机体中各T淋巴细胞亚群相互作用，维持着机体的正常免疫功能。
当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，机体就可导致免疫紊乱并发生一系列的病理变化。
目前越来越多的研究说明，T淋巴细胞亚群在各种临床疾病如自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、变态反应性疾病、再生障碍性贫血、病毒感染、恶性肿瘤等都有异常改变。
因此，T淋巴细胞亚群的检测对控制这些疾病的发生、发展、了解疾病的机制、指导临床治疗都有极其重要的意义，它已作为临床研究的一种重要手段。
1.T淋巴细胞亚群与自身免疫和免疫缺陷病现已普遍认为在自身免疫病中,CD8+细胞的数量和功能的低下是发病的重要因素，有时也CD4+细胞数量和功能的增高。
最典型的例子就是活动性系统性红斑狼疮（SLE）患者，这种疾病患者外周血单个核细胞中CD8+细胞百分率下降，常伴有CD4+细胞百分率增高，CD4+/CD8+比值升高。
其他自身免疫病象HBsAg阳性的乙型肝炎，多发性硬化症活动期，自身溶血性贫血，类风湿症，重症肌无力，急性GVHD或排斥反应时患者都具有类似的T淋巴细胞亚群异常分布的特征。
CD4+/CD8+比值减小是免疫缺陷病的重要指征。
在获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者中，就存在着CD4+细胞数显著减少的现象，因而常常出现CD4+／CD8+比值倒置。
在一些上呼吸道感染的患者中，体内T抑制细胞的数量和功能都有异常增高的现象。
小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（
小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆，组织液及相关液体样本中T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）水平。
用纯化的小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8），再与HRP标记的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程英文回答：Lymphocyte Subset Absolute Count Protocol.Principle:Lymphocyte subset absolute count is a quantitative analysis of lymphocyte subpopulations, such as CD3+, CD4+, CD8+, and CD19+ cells, in a blood sample. This procedure is used to assess the immune system's composition and function, particularly in conditions involving immune dysregulationor infection.Materials:Blood sample.Flow cytometry analyzer.Fluorochrome-conjugated antibodies specific for lymphocyte subpopulations.Lysis buffer.Wash buffer.Absolute counting beads.Procedure:1. Sample Preparation:Collect a blood sample into a tube containing an anticoagulant.Centrifuge the blood sample at 300 x g for 10 minutes.Remove the plasma and wash the cells with PBS.Lyse the red blood cells with lysis buffer.Centrifuge the cells and resuspend them in wash buffer.2. Antibody Staining:Aliquot the cells into tubes.Add fluorochrome-conjugated antibodies specificfor each lymphocyte subpopulation.Incubate the cells at room temperature in the dark for 15-30 minutes.3. Washing:Wash the cells twice with wash buffer.Centrifuge the cells and resuspend them in wash buffer.4. Absolute Count:Add absolute counting beads to the cell suspension.Acquire a flow cytometry data file.Gate on the lymphocyte population using forwardand side scatter.Use the absolute counting beads to calculate the absolute count of each lymphocyte subpopulation.Calculation:The absolute count of each lymphocyte subpopulation is calculated using the following formula:Absolute Count = (Event Count / Number of Beads) x (Bead Concentration)。
医院检验中心淋巴细胞亚群测定操作规程
医院检验中心淋巴细胞亚群测定操作规程
(1)试剂
1)CD4 F / CD8 P Cat NO
0747
2)CD3 F / CD16+56 P Cat NO
2076
3)CD19 P Cat NO
1285
4)同型对照 F IgG1/IgG1 P Cat NO
1203
(2)方法
1)取试管各加上述单抗10ul于管底
2)加50ul EDTA K2抗凝血,混匀
3)室温暗处放置15分钟
4)Q-PREP仪上溶血、固定
5)FCMW仪上分析10000个以上细胞
(3)参考范围
CD3 60 — 85 % CD4 24.5 — 48.8 %
CD8 18.5 — 42.1 %
NK 8.0 — 20.0 %
CD19 7.0 — 23.0 %
D20、医院检验中心HLA B27 / HLA B7 测定操作规程(1)试剂
1.HLA B27 F/ HLA B7 P Cat NO 1502
2.同型对照 IgG 2a F / PIgG1 P Cat NO 1255
（2）方法
1.取试管各加上述单抗10ul于管底
2.加EDTA K2抗凝血50ul，混匀
3.室温暗放置15分钟
4.Q-PREP仪上溶血、固定
5.用PBS洗涤细胞2次
6.在FCM仪上数细胞10000个以上，设门在淋巴区域
7.记录阳性百分度及相应的平均荧光强度和荧光峰值（1）参考范围
阴性。
淋巴细胞亚群检测操作程序
一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证淋巴细胞亚群检测的标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：外周血中淋巴细胞亚群检测。
四、溯源：MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)。
五、实验原理：人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为三大类：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK自然杀伤细胞。
T淋巴细胞表达CD3；B淋巴细胞表达CD19；NK自然杀伤细胞表达CD56或CD16，并且不表达CD3。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，即可以把淋巴细胞区分为各种亚型。
进面得到各亚群的比例。
六、主要试剂：MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)，其中包括：1、CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC2、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC3、FACSLysing Solution七、实验操作：抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K22、染色和固定细胞：（1）标本管编号A，取两只流式专用管A1、A2。
（2） A1管加入CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC 20uL；A2管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC 20Ul。
（3） A1、A2管中分别再加入全血100Ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
t淋巴细胞斑点试验操作流程
t淋巴细胞斑点试验操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!T 淋巴细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种用于检测结核感染的免疫学方法。
大鼠T淋巴细胞亚群CD3CD4CD8酶联免疫分析
大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）水平。
用纯化的大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8），再与HRP标记的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
T淋巴细胞功能测定
10-12
spleen Cell+
ConA 10µ g/ml
spleen Cell+ ConA 10µ g/ml thymus Cell+ ConA 10µ g/ml thymus Cell+ ConA 10µ g/ml
N.S. OVA N.S. OVA
八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺 每孔加入100 µ l调好的细胞悬液 1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液， 100 µ l 4-6孔加入2.5 µ g/ml的Con A, 7-9孔加入5 µ g/ml的Con A, 10-12孔加入10 µ g/ml的Con A, 100 µ l 100 µ l 100 µ l
加 样 方 法
v v v v v
NOTE:ConA用10%FCS-IMDM培养液配制
本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!
返回
1-3
A B C D
spleen cell+ 10% IMDM spleen cell+ 10% IMDM thymus cell+ 10% IMDM thymus cell+ 10% IMDM
摘眼取血 摘眼取血 无菌取脾 胸腺 无菌取脾/ / 胸腺
获取血清 获取血清
研 脾 研磨 磨成单 成单细胞 细胞悬液 悬液 (1/ (1/2 2 脾/胸 /胸 腺 M 腺+2ml +2ml I I M DM DM（ （无 无 FCS) FCS)
操 作 步 骤
细胞计数 ? //ml 】 细胞计数【 【 ? ml 】 取 数液 取20µ 20µl 细 l 细胞 胞 +980µ +980µl 的计 l 的计 1W 数液
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测是通过流式细胞术来进行的。
下面是其操作方法的一般步骤：
1. 预处理样本：收集新鲜的全血样本，并将其分成多个试管。
每个试管中的样本应含有适当的抗凝剂（例如EDTA），以防止血液凝固。
2. 样本染色：将每个试管中的全血样本分成不同的管中，每个管中加入不同的单克隆抗体染色。
根据实验需要，可以选择染色CD3、CD4、CD8、CD19等表面标记物来区分不同的淋巴细胞亚群。
染色时间和温度根据抗体厂商的建议进行。
3. 洗涤：将染色后的细胞悬液用PBS或其他适当的缓冲液洗涤，以去除未结合的抗体。
每个管中的细胞可用700 rpm离心3-5分钟，将上清液倒掉。
4. 固定：将细胞悬液溶入适当量的荧光素（如二甲亚基绿），用PBS稀释至适当浓度，静置固定30分钟。
固定之后，可以继续离心去除上清液。
5. 流式细胞术：将固定的细胞悬液在流式细胞仪中进行检测。
根据实验需要，设置适当的流速和激发波长来检测不同染色的细胞。
通过检测细胞表面荧光素的强度，可以确定不同淋巴细胞亚群的百分比和数量。
需要注意的是，以上是一般的操作方法，具体的步骤可能会因实验目的、试剂和仪器的不同而有所变化。
因此，在进行实验之前，最好参考实验方案和相关的文献资料，以确保操作的准确性和可靠性。
t淋巴细胞亚群测定检测内容
t淋巴细胞亚群测定检测内容淋巴细胞是免疫系统中的重要细胞群，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。
其中，T淋巴细胞又可分为多个亚群，如辅助性T细胞（CD4+ T细胞）、细胞毒性T细胞（CD8+ T细胞）等。
这些不同的淋巴细胞亚群在免疫应答中发挥着不同的作用，具有重要的生理功能。
T淋巴细胞亚群的检测对于研究免疫功能的状态、诊断某些免疫相关疾病、评估治疗效果等具有重要意义。
通过测定T淋巴细胞的各个亚群的比例和数量，可以了解机体的免疫状态及炎症程度。
例如，在免疫抑制治疗后，CD4+ T细胞数量减少，容易导致感染的发生。
而在某些自身免疫性疾病中，CD8+ T细胞可能异常激活，导致炎症反应增加。
T淋巴细胞亚群的检测方法有多种，常用的包括流式细胞术、酶联免疫吸附法等。
这些方法在具体的实验室操作中都有一定的局限性，需要严格控制实验条件，确保检测结果的准确性和可靠性。
此外，对于正常值的确定和不同实验室之间的结果比对也是一个重要的问题，需要更多的研究和标准化操作的制定。
除了在科研领域中的应用，T淋巴细胞亚群的检测在临床诊断和治疗中也有着广泛的应用。
例如，在HIV感染者的监测中，CD4+ T细胞计数是评估疾病进展和治疗效果的重要指标之一。
通过监测CD4+ T细胞的数量，可以及时调整治疗方案，有效控制病情发展。
在肿瘤的免疫治疗中，T淋巴细胞亚群的检测也可以辅助判断患者的免疫状态，选择最合适的治疗方案。
在未来，随着免疫疗法的发展和个体化治疗的需求增加，T淋巴细胞亚群的检测将变得越来越重要。
我们需要进一步深入研究不同T淋巴细胞亚群在免疫反应中的作用机制，发现新的治疗靶点，并开发更加灵敏、准确的检测技术。
通过不断地探索和创新，我们可以更好地利用T淋巴细胞亚群的信息，为免疫相关疾病的诊断和治疗提供更好的支持。
流式细胞术检测T细胞亚群
③
④
⑤
⑥
6，FCM分析
7，结果判断： + 如上图所示，CD3 T细胞占细胞总数的66.82%，其中 CD4+T细胞占51.59%，CD8+T细胞占14.83% 。
8，注意事项： 确保细胞悬液上机检测前浓度为1×105/ml,细胞浓度过低直 接影响检测结果。 使用蛋白封闭剂，封闭非特异结合实际位点，常用的蛋白 封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。 设置对照样品，采用与抗体来源同型匹配的1g对照。
实验原理（2）
T淋巴细胞表面的CD分子与相应荧光素直接标记的抗人CD 分子McAb结合后，细胞表面形成带有荧光色素的抗原抗体 复合物。经激光激发后发出与荧光素相对应的特定波长的 荧光，其荧光强度与被测CD分子表达密度成正比例关系， 由此通过流式细胞仪课检测结合含有相应荧光素标记抗体 的阳性细胞百分率。
1956年，Coulter 在多年研究的基础上利用 Coulter
效应生产了Coulter 计数器。其基本原理是：使细 胞通过一个小孔，只在细胞与悬浮的介质之间存 在着导电性上的差异，便会影响小孔道的电阻特 性，从而形成电脉冲信号，测量电脉冲的强度和 个数则可获得有关细胞大小和数目方面的信息。
1967年 Holm等设计了通过汞弧光灯激发荧光染 色的细胞，再由光电检测设备计数的装置。 1973年 Steinkamp设计了一种利用激光激发双色 荧光色素标记的细胞，既能分析计数，又能进行 细胞分选的装置。这样就基本完成了现代FCM计数 技术的主要历程。
④
5使用后的清洗
①
将装FACS清洁液的FACS管放置机器吸管孔，高速吸入 1min
②
将装FACS洗净液的FACS管放置机器吸管孔，高速吸入 1min
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测操作方法淋巴细胞是免疫系统中一种重要的细胞类型，负责识别和清除体内的病原体。
淋巴细胞可以分为不同的亚群，包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等。
淋巴细胞亚群检测可以帮助了解患者的免疫系统状态，判断免疫功能的异常情况，临床应用广泛。
1.检测前的准备工作：a.检测设备：流式细胞仪b.试剂：荧光标记的单克隆抗体c.样本：外周血（或其它体液）2.样本的预处理：a.收集外周血样本b.加入抗凝剂（如EDTA）稀释血液c.转移稀释后的血液到离心管中d.进行离心，使细胞沉淀在离心管底部e.弃去上清液，保留沉淀细胞3.细胞的染色：a.加入洗涤缓冲液洗涤沉淀细胞b.弃去洗涤缓冲液，在室温下重悬细胞4.荧光标记的抗体的加入：a.根据需要检测的细胞亚群选择相应的抗体b.添加荧光标记的抗体到细胞悬液中c.充分混匀细胞和抗体的混合物d.增加透明覆膜，避免光照射5.细胞的分析：a.打开流式细胞仪，设置相应的参数和通道b.将细胞悬液转移至流式细胞仪的样品管中c.启动细胞仪的运行d.分析获得的数据6.数据的解读：a.根据荧光标记抗体的特异性，将细胞亚群进行分类和计数b.根据不同细胞亚群的含量比例，判断免疫功能状态需要注意的是，淋巴细胞亚群检测需要流式细胞仪等高级设备，且操作需要一定的专业知识和技能。
在实际应用中，建议由有经验的专业人员进行操作和解读结果。
另外，不同的抗体组合可以用于检测不同的细胞亚群，应根据具体需要选择适当的抗体。
总结起来，淋巴细胞亚群检测操作方法主要包括样本的收集和预处理、细胞的染色、荧光标记抗体的加入、细胞的分析和数据的解读等步骤。
这些步骤需要严格操作和准确的仪器设备来保证数据的准确性和可靠性。
通过淋巴细胞亚群的检测，可以了解患者的免疫系统情况，为临床诊断和治疗提供重要的信息。
T淋巴细胞亚群检测操作程序
一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。
四、实验原理：人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。
六、主要试剂：CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)，七、实验操作：抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K22、染色和固定细胞：（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。
（2） A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。
（3） A1管中再加入全血100ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
3、上机检测；分析结果；打印实验报告。
八、参考值：总T细胞（CD3+）： 59.4-84.6辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3Th/Ts: 0.9-3.6九、临床意义：T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程英文回答：Lymphocyte subset absolute count is a laboratory test that measures the number of different types of lymphocytes in the blood. Lymphocytes are a type of white blood cells that play a crucial role in the immune system. They help the body fight off infections and diseases.The process of obtaining lymphocyte subset absolute count involves several steps. Here is a general outline of the procedure:1. Patient preparation: The patient may be asked to fast for a certain period before the test, usually overnight. This is to ensure accurate results.2. Blood sample collection: A healthcare professional will collect a blood sample from the patient. The most common method is venipuncture, where a needle is insertedinto a vein, usually in the arm, and blood is drawn into a collection tube.3. Sample processing: The blood sample is then sent to the laboratory for processing. The sample is centrifuged to separate the different components of blood, including the lymphocytes.4. Lymphocyte subset analysis: The separated lymphocytes are then analyzed using flow cytometry, a technique that uses fluorescently labeled antibodies to identify and quantify different lymphocyte subsets. Commonly measured subsets include CD4+ T cells, CD8+ T cells, B cells, and natural killer (NK) cells.5. Absolute count calculation: The flow cytometry data is used to calculate the absolute count of each lymphocyte subset. This is done by multiplying the percentage of each subset by the total lymphocyte count obtained from a complete blood count (CBC) test.6. Result interpretation: The calculated absolutecounts are then reported to the healthcare provider. The results are typically given in cells per microliter(cells/μL) of blood.Lymphocyte subset absolute count is an important testin diagnosing and monitoring various medical conditions, including immune disorders, infections, and certain typesof cancer. It provides valuable information about thestatus and function of the immune system.中文回答：淋巴细胞亚群绝对计数是一种实验室检测方法，用于测量血液中不同类型淋巴细胞的数量。
t淋巴细胞亚群检测 标准
t淋巴细胞亚群检测标准一、样本采集1.采样时间：在早晨未接受任何其他处理之前，空腹状态下进行。
2.采样量：2-3ml外周血3.采样方式：静脉采血，使用EDTA抗凝管4.样本处理：采血后立即轻轻摇动抗凝管，使血液与抗凝剂充分混合，避免形成血块。
5.样本保存：采集后的样本应立即送检，或在4℃下冷藏保存，但不得超过48小时。
二、检测方法1.检测原理：采用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）进行T 淋巴细胞亚群的检测。
通过荧光标记的单克隆抗体特异性识别淋巴细胞表面的标志物，将T淋巴细胞分为CD4+和CD8+两个亚群。
2.检测流程：a)预处理样本：将EDTA抗凝的全血样本进行涡旋混合，使红细胞和白细胞充分裂解。
b)抗体标记：向预处理后的样本中加入荧光标记的单克隆抗体，孵育一定时间后洗涤并固定细胞。
c)流式细胞术检测：将标记好的样本通过流式细胞仪进行检测，获取每个淋巴细胞的荧光信号。
d)数据处理与分析：使用软件对获取的荧光信号进行数据处理和分析，得到CD4+和CD8+两个亚群的细胞比例。
三、正常参考值根据正常参考值数据库的数据，正常成年人外周血中T淋巴细胞亚群的正常参考值范围如下：CD4+T细胞：40%-65%CD8+T细胞：20%-40%四、T细胞亚群的识别和计数1.CD4+T细胞的识别：通过流式细胞术检测样本中表达CD4分子的T细胞，以识别CD4+T细胞。
2.CD8+T细胞的识别：通过流式细胞术检测样本中表达CD8分子的T细胞，以识别CD8+T细胞。
3.计数方法：采用绝对计数方法，计算每微升血液中CD4+和CD8+T细胞的个数。
每微升血液中含有多少个淋巴细胞，其中有多少个是CD4+或CD8+T细胞。
五、质量控制1.仪器校准：使用流式细胞仪前必须对仪器进行校准，确保数据的准确性和可重复性。
2.试剂质量控制：采用高质量的抗体试剂和荧光标准品，确保检测结果的可靠性。
同时，对抗体试剂进行质量检测和控制，以确保其特异性和灵敏度。
淋巴细胞亚群检测流程
淋巴细胞亚群检测流程英文回答：Lymphocyte subset testing is a laboratory procedure used to evaluate the distribution and proportion of different types of lymphocytes in the blood. Lymphocytes are a type of white blood cell that play a crucial role in the immune system's response to infections and diseases. By analyzing the subsets of lymphocytes, healthcare professionals can gain valuable insights into the functioning of the immune system and identify any abnormalities or disorders.The process of lymphocyte subset testing involves several steps. First, a blood sample is collected from the patient. This can be done through a simple venipuncture procedure, where a needle is inserted into a vein and blood is drawn into a collection tube. The blood sample is then sent to a laboratory for analysis.In the laboratory, the blood sample is processed to separate the different types of cells, including lymphocytes. This is usually done using a technique called flow cytometry. Flow cytometry involves staining the cells with fluorescent dyes that specifically bind to different surface markers on the lymphocytes. The stained cells are then passed through a flow cytometer, a specialized instrument that can detect and analyze the fluorescence emitted by the cells. By measuring the fluorescence intensity, the flow cytometer can identify and quantify the different lymphocyte subsets.There are several different subsets of lymphocytes that can be analyzed in lymphocyte subset testing. The most common subsets include T cells, B cells, and natural killer (NK) cells. T cells are further divided into helper T cells (CD4+ T cells) and cytotoxic T cells (CD8+ T cells). Each subset of lymphocytes has specific functions and plays a different role in the immune response.Once the lymphocyte subsets have been identified and quantified, the results are usually reported as percentagesor absolute counts. Percentages represent the proportion of each lymphocyte subset out of the total lymphocyte population, while absolute counts indicate the actual number of cells per unit volume of blood.Lymphocyte subset testing is commonly used in clinical practice to evaluate immune system disorders, such as HIV infection, autoimmune diseases, and immunodeficiency disorders. It can also be used to monitor the effectiveness of certain treatments, such as immunosuppressive therapy or vaccination.In summary, lymphocyte subset testing is an important laboratory procedure that allows healthcare professionals to evaluate the distribution and proportion of different types of lymphocytes in the blood. By analyzing the subsets of lymphocytes, valuable information about the functioning of the immune system can be obtained. This testing process involves collecting a blood sample, processing it in the laboratory using flow cytometry, and analyzing the results. The results are reported as percentages or absolute counts, providing insights into the immune system's health and anypotential abnormalities.中文回答：淋巴细胞亚群检测是一种用于评估血液中不同类型淋巴细胞分布和比例的实验室过程。
T淋巴细胞亚群CDCDCD细胞检测临床应用技术讲座演示文稿
第1页，共72页。
优选T淋巴细胞亚群CDCDCD细
胞检测临床应用技术讲座ppt
第2页，共72页。
免疫功能 量化指标
第3页，共72页。
免疫功能，我们究竟了解多少？
众所周知，体育锻炼能提高免疫功能，冬虫夏草能提高免疫功能，免疫 球蛋白能提高免疫功能，蜂胶、螺旋藻亦能提高免疫功能…然而
工作条件苛刻
操作人员要求高
……
瓶颈和焦点 ： CD4细胞检测
比尔·梅琳达·盖茨基金会成立CD4专项基金，全球征募具有简单、廉价、快速、有效特性
的CD4细胞检测新方法。
第15页，共72页。
梦起圣地亚哥
9月相关论文发表于
American
Biotechnology Laboratory 期刊
2002年5月，作为唯一 一家中国企业参展 国际生物大会。
进行该检测方法的培训。
2011年4月，顺利完成南非国家实验室（NHLS） 泛非认证
第24页，共72页。
发表论文
◆ A biochip for specific cell separations. American Biotechnology Laboratory,September 2002,28 ◆ A biochip for CD4 cell count. The 2nd International AIDS Society Conference,July 2003,Paris
2011年 诺贝尔生理学或医学奖授予美、法、加三位科学家在免疫系 统方面的研究。
“免疫学是距离临床最近的学科，它涉及整个人体、每个细胞，在人类破 解生命与疾病之谜道路上，发挥不可估量的作用。”
淋巴细胞亚群检测流程
淋巴细胞亚群检测流程英文回答：Lymphocyte subset analysis is a crucial diagnostic tool in immunology and plays a significant role in evaluatingthe immune system's function. This analysis helps toidentify and quantify different types of lymphocytes, including T cells, B cells, and natural killer (NK) cells, which are essential for immune responses against infections, tumors, and other diseases.The process of lymphocyte subset analysis involves several steps. Firstly, a blood sample is collected fromthe patient. This can be done by venipuncture, where a needle is inserted into a vein, usually in the arm, to draw a small amount of blood. Alternatively, a finger prick or heel stick may be used for infants or young children.Once the blood sample is obtained, it is processed in the laboratory. The sample is typically mixed with aspecific antibody panel that targets different cell surface markers expressed on lymphocytes. These markers help to distinguish between different lymphocyte subsets. For example, CD3 is a marker for T cells, CD19 for B cells, and CD56 for NK cells.After incubation with the antibody panel, the sample is analyzed using flow cytometry. Flow cytometry is a technique that allows for the simultaneous measurement of multiple characteristics of individual cells as they pass through a laser beam. The laser excites the fluorochrome-labeled antibodies bound to the lymphocytes, and the emitted light is detected by photomultiplier tubes. This information is then processed by specialized software to determine the percentage and absolute counts of each lymphocyte subset.The results of lymphocyte subset analysis provide valuable information about the patient's immune status. Abnormalities in the distribution or numbers of lymphocyte subsets can indicate underlying immunodeficiency disorders, autoimmune diseases, or malignancies. For example, adecreased percentage of CD4+ T cells and an increased CD8+ T cell count may suggest HIV infection.In addition to identifying and quantifying lymphocyte subsets, further analysis can be performed to assess the functional capabilities of these cells. This can include measuring cytokine production, proliferation, and cytotoxicity assays. These functional assays provide insights into the immune system's ability to mount an effective immune response.中文回答：淋巴细胞亚群检测是免疫学中一项重要的诊断工具，对于评估免疫系统功能起着重要作用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
T淋巴细胞亚群检测
操作程序
一、目的：
保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：
外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。
四、实验原理：
人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。
六、主要试剂：
CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)，
七、实验操作：
抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K
2
2、染色和固定细胞：
（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。
（2） A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。
（3） A1管中再加入全血100ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
3、上机检测；分析结果；打印实验报告。
八、参考值：
总T细胞（CD3+）： 59.4-84.6
辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5
抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3
Th/Ts: 0.9-3.6
九、临床意义：
T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。
在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。
HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。
十、质量控制：
1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。
2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋巴
瘤可能有较大差异。
3、收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴
细胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。
4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的
干干扰。