分子生物学实验一

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分子生物学实验

实验一：细胞的传代与培养实验材料：1、细胞：PC12细胞株2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％胎牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养板，吸液枪，酒精灯等实验原理：从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。

细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。

直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。

所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。

操作步骤：1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。

2、加入1到2ml 0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。

3、放入培养箱中消化2-3分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代。

5.根据确定的比例来取需要的量，加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养皿放入培养箱7.收拾整理超净台实验结果：生长良好的PC12细胞图如下：实验二：MTT比色法实验材料：1、细胞：PC12细胞株2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％胎牛血清）、DMSO、MTT 溶液MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。

因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 mL的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22 μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。

分子生物学实验技术全攻略

分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养 2实验二质粒DNA的提取 3实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 4实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 5实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 7实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 8实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 9实验八 RNA提取与纯化 11实验九 RT-PCR扩增目的基因cDNA 13实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 15实验十一感受态细胞的制备及转化 16实验十二克隆的筛选和快速鉴定 18实验十三 DNA分析——Southern杂交 19一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。

二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。

质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。

特别是常用的大肠杆菌。

大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。

它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。

当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。

然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。

最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。

分子生物学实验报告

分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。

本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。

实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。

本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。

材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。

2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。

3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。

结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。

这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。

讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。

DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。

这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。

实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。

本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。

材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。

2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。

3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。

结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。

这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。

讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。

RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。

这种选择性转录是基因调控的关键。

实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。

分子生物学实验

实验一、菌株复壮与单菌落菌株的获取一、实验目的学习细菌培养的LB培养基及抗生素抗性筛选培养基的配制，掌握高压灭菌和获取细菌单菌落菌株两种基本实验操作技能。

二、实验材料、设备及试剂1、实验材料大肠杆菌（E. coli）DH5α菌株：R-，M-，Amp-2、实验设备恒温摇床，电热恒温培养箱，无菌工作台，高压灭菌锅3、试剂酵母浸膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，卡那霉素三、实验步骤液体LB（Luria-Bertain）培养基配方：蛋白胨(typtone) 1.0% （1 g/100 ml）酵母提取物(Yeast extraction)0.5% （0.5g/100 ml）氯化钠 1.0% （1 g/100 ml）PH 7.0固体LB培养基：每100 ml液体培养基中加入1.5g琼脂粉请按试剂瓶上的编号使用相应编号的药勺取药，防止药品相互污染！(1)每组按上述液体LB培养基配方，以配制100ml的量称取药品放入烧杯。

(2)用量筒量取约80 ml 蒸馏水注入烧杯中，玻棒搅拌使药品完全溶解后用100ml量筒定容至100ml。

(3)pH试纸检测pH值，并用1 N NaOH或1 N HCl调节pH值至7.0。

(4)将100ml溶液分装入两个三角瓶，每瓶为50ml。

(5)按固体培养基配方称取适量琼脂粉分别放入两个三角瓶中，以配制成两瓶50ml固体LB培养基。

(6)两个三角瓶分别用锡纸包扎瓶口。

并用记号笔在三角瓶上标注各组标记。

(7)把装有培养基三角瓶放入灭菌锅中，盖上锅盖，以对称方式拧紧锅盖，打开排气阀通电加热，至有连续的白色水蒸气从排气阀排出时，关闭排气阀。

当高压锅温度（气压）指示器指示锅内温度升高至121℃（0.1Mpa）时，调节电压（或利用手动开关电源的方式）使高压锅稳定在该温度（压力）下20 min，然后断开电源。

待指示器指示压力降为0时，方可打开排气阀，然后再打开锅盖小心取出锅内物品。

(8)取出三角瓶后，在酒精灯火焰旁进行下述操作。

分子生物学实验

实验一.质粒提取与琼脂糖电泳一、目的掌握质粒的提取方法及原理；琼脂糖凝胶电泳及观察评判方法。

二、原理1.质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。

质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。

在pH 12.0-12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA 虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。

将pH 调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。

硅基质树脂在高盐状态下，特异性吸附DNA，而在低盐状态下，DNA被洗脱下来。

2.带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。

电泳的种类多，应用非常广泛，它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。

琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为分离和鉴定核酸的常用方法。

在pH值为8.0~8.3时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。

采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。

核酸分子中嵌入荧光染料（如EB）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。

三、实验材料、仪器、试剂（1）菌种：大肠杆菌DH5α（2）分子生物学试剂10mg/ml溴化乙锭（EB）:按10mg/ml浓度将EB溶于去离子水中，剧烈搅拌，完全溶解后，室温下避光保存。

50×TAE电泳缓冲液:24.2g Tris5.71g 冰乙酸10ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）加去离子水至100ml，室温保存备用，工作液为1×TAE。

6×上样缓冲液:0.25% 溴酚蓝40%（W/V）蔗糖水溶液1% 琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖溶于100ml 1×TAE电泳缓冲液中，溶化后加入5μl 10mg/ml EB贮存液，使凝胶中EB终浓度达到0.5mg/ml。

分子生物学实验3篇

分子生物学实验第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的技术，被用于DNA的扩增和检测。

PCR技术已经成为了分子生物学和生物医学研究的基础技术之一。

PCR技术被广泛的应用于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。

PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA片段。

通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。

PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样本量小。

PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域的应用不断扩展和深化。

随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。

第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。

RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。

RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。

RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。

RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。

在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。

第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。

分子生物学实验-实验1 DNA重组和细胞转化2015

30Biblioteka 载体与目的基因的连接构建重组子
1. 平端连接
增加DNA浓度或提高连接酶浓度以提高连接效率
2. 粘端连接
效率较高，加入连接酶后可立即转化，即有转化子出现
3. 粘-平连接
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连接酶的选择：
T4 DNA连接酶：适用粘端、平端连接可用于DNA-RNA，RNA-RNA杂交体
大肠杆菌DNA连接酶：适用粘端连接（也可用于平端，效率低）
4
2. 实验试剂：常规试剂通常3人一组放在桌上，部分试剂一大桌放一管
需要低温放置的试剂在讲台，需到讲台来加样，特别是酶，加完及时放回原位
有些常规用试剂（如水，加样buffer），可室温保存，多次使用
5
3. 离心机的正确使用：（注意安全和仪器保护）
➢ 平衡—— 15ml连同托架一起平衡，
➢
1.5ml目测体积，对应位置放置
走廊左侧有饮水机
3
实验注意事项
1. 实验用品分组（3人一组）标记，放于实验桌上。实验开始时清点；实验结束，请各组同学将用品归于原位，整理好本组桌面后再离开。需要回收的器皿初步冲洗后浸泡在水槽内的盆中（如玻璃耗材等，有疑问请咨询带教老师）
实验开始前请勿乱翻动！
每组2个盆，1个桶，分别放冰，液体垃圾，固体垃圾，结束时每组自行清理
如：Amp抗性平板
33
四、实验步骤
（详见实验讲义）
1. 目的基因c-myc与pSV质粒载体的连接(粘端)
注意：
1. 加样前短暂离心 2. 加样顺序 3. 保证每个样品加
入其中 4. 加样完成后混匀
后离心
目的基因片段（4.8kb），20ng/μl 4.5 μl
载体DNA（3.5kb）， 12ng/μl

分子生物学实验教材(精)

分子生物学实验教材：参考书：《分子克隆实验指南》（第三版）黄培堂等译科学出版社实验一﹑大肠杆菌感受态细胞的制备及转化一.[目的要求]通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。

二.[实验原理]细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。

转化是指质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。

细菌处于0︒C ，CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形，外源DNA附着于细胞表面，经42︒C 短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。

将细胞放置在非选择性培养基中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新表型如Amp+得到表达，然后将此细菌培养物涂在选择性培养基上进行培养，从而获得转化子。

三.[教学内容]1.感受态细胞的制备基础知识及方法简介2.CaCl2法制备DH5α或JM109感受态细胞，计算转化效率3.pUC19等质粒和重组产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞四.[实验材料和用品]E. coli DH5α菌株: Rˉ,Mˉ,Ampˉ；pBS质粒DNA，eppendorf管。

超净工作台、恒温摇床、生化培养箱、平皿、LB培养基、CaCl2 溶液、氨苄青霉素、等五.[实验步骤]一、受体菌的培养从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。

将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。

二、感受态细胞的制备 ( CaCl2 法)1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。

2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。

3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。

分子生物学基础实验

分子生物学基础实验实验一质粒DNA的小量制备一、实验原理载体:要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。

载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。

作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA 链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。

细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。

质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb 之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。

质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。

它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。

质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。

前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。

每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。

后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。

通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。

小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。

在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。

分子生物学实验

实验一：质粒DNA的提取——碱裂解法1、质粒是细菌细胞内一种自我复制的闭合环状双链DNA分子，能稳定地独立存在于染色体外，并传递到子代。

（在一定条件下也会可逆的整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代）2、质粒DNA的基本特征：(1) 自主复制性：能独立于染色体DNA外自主复制；(2) 可扩增性：严紧型复制-复制1-5个拷贝；松弛型复制-复制数十个拷贝；(3) 可转移性：通过细菌结合作用从一个宿主细胞转移到另一个宿主细胞；(4) 不相容性：具有相似复制子结构特征的两种不同质粒不能稳定地存在于同一受体细胞内。

3、质粒的三种构型(1)超螺旋DNA；(2) 开环DNA ；(3) 线状DNA 。

4、LB培养基成分：酵酵母浸提物，胰蛋白胨，N a Cl5、溶液Ⅰ：由葡萄糖、EDTA、Tris•H Cl组成.(保护、缓冲)①葡萄糖的作用是增加溶液的粘度,减少抽提过程中的机械剪切作用,防止破坏质粒. (保护作用)②EDTA 的作用是络合掉镁等二价金属离子, 防止DNA酶对质粒分子的降解作用。

（保护作用）③Tris•HCl 能使溶菌液维持溶菌作用的最适PH范围（缓冲作用）溶液II：由SDS（十二烷基硫酸钠）与NaOH 组成(裂解、变性)①SDS的作用是解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之变性（裂解细胞和蛋白质变性作用）②NaOH（PH>12）的作用是破坏氢键，使DNA分子变性（DNA变性作用）溶液III：HAC(乙酸)和KAC(乙酸钾)组成的高盐溶液(复性，分离)①HAC溶液能中和溶液Ⅱ的碱性，使染色体DNA 变性而发生缠绕，并使质粒DNA复性。

②KAC会与SDS形成溶解度很低的盐，并与蛋白质形成沉淀而除去；溶液中的DNA也会与蛋白质-SDS复合物缠绕成大分子而与小分子质粒DNA分离。

6、DNA如何保存？加入适量TE缓冲液混匀，-20℃保存7、提取质粒DNA实验中要去除哪些杂质，如何去除？答：含有的杂质有蛋白质、染色体DNA和不稳定的大分子RNA，往培养液中加入溶液I II III 混合使染色体RNA和蛋白质变性，通过离心除去不稳定的大分子RNA，加等量的酚\氯仿\异丙醇检测是否还有杂质，最后再加异丙醇使质粒DNA沉淀。

分子生物学实验

分子生物学实验实验一、菌株复壮与单菌落菌株的获取一、实验目的学习细菌培养的LB培养基及抗生素抗性筛选培养基的配制，掌握高压灭菌和获取细菌单菌落菌株两种基本实验操作技能。

(2)用量筒量取约80 ml 蒸馏水注入烧杯中，玻棒搅拌使药品完全溶解后用100ml量筒定容至100ml。

(3)pH试纸检测pH值，并用1 N NaOH或1 N HCl调节pH值至7.0。

(4)将100ml溶液分装入两个三角瓶，每瓶为50ml。

(5)按固体培养基配方称取适量琼脂粉分别放入两个三角瓶中，以配制成两瓶50ml固体LB培养基。

(6)两个三角瓶分别用锡纸包扎瓶口。

并用记号笔在三角瓶上标注各组标记。

(7)把装有培养基三角瓶放入灭菌锅中，盖上锅盖，以对称方式拧紧锅盖，打开排气阀通电加热，至有连续的白色水蒸气从排气阀排出时，关闭排气阀。

待指示器指示压力降为0时，方可打开排气阀，然后再打开锅盖小心取出锅内物品。

(8)取出三角瓶后，在酒精灯火焰旁进行下述操作。

分子生物学实验

实验一大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化【实验目的】熟悉利用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞的操作及质粒转化大肠杆菌的方法。

【实验原理】当大肠杆菌生长到OD600约为0.2~0.4时，用冰冷的氯化钙低渗溶液处理大肠杆菌细胞，细胞膨胀成球形，可使大肠杆菌进入一种易于接受外源DNA的状态（感受态），处于此状态的细胞称为感受态细胞（competent cells）。

此时，若在感受态细胞中加入质粒，则质粒DNA与Ca2+形成的复合物粘附于细胞表面，经过42℃短暂的热激处理后，DNA与Ca2+形成的复合物进入大肠杆菌细胞，在不含抗生素的培养基中短暂培养，使转入大肠杆菌质粒上的抗生素抗性基因表达，在含相应抗生素的选择培养基上可将转化菌（含质粒）与未转化细菌分开，转化细菌经过不断分裂增殖形成菌落，而未转化的细菌则不能。

【器材与试剂】1．实验仪器培养箱，恒温摇床，超净工作台，低温台式离心机，分光光度计，水浴锅，高压灭菌锅，微孔滤器（含0.22μm滤膜），酒精灯2．实验试剂氯化钠（AR），无水氯化钙（AR），蛋白胨，酵母提取物，1.0 mol/L NaOH，氨苄青霉素钠，琼脂粉，LB液体培养基：蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，800 mL 蒸馏水溶解后，用NaOH溶液调pH至7.0，蒸馏水定容至1 000 mL，121℃高压灭菌20 min；LB固体培养基：蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，800 mL蒸馏水溶解后，用1.0 mol/L NaOH调pH至7.0，蒸馏水定容至1 000 mL，然后加入琼脂粉15 g，121℃高压灭菌20min，分别倒入无菌培养皿。

若配制选择性培养基，当温度降至60℃左右时，加入1 mL氨苄青霉素溶液（100mg/mL），混匀，分别倒入无菌培养皿；CaCl2溶液：准确称取无水氯化钙11.1 g，用双蒸水溶解，并定容至1 000 mL，121℃高压灭菌20 min，4℃保存；氨苄青霉素钠溶液：准确称取氨苄青霉素钠0.5 g，用蒸馏水溶解并定容至5 mL，用微孔滤器过滤除菌后，分装于Eppendorf管中，-20℃保存。

分子生物学实验技术

分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (3)实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 (5)实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (6)实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (8)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (9)实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (10)实验八RNA提取与纯化 (12)实验九RT-PCR扩增目的基因cDNA (15)实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 (17)实验十一感受态细胞的制备及转化 (18)实验十二克隆的筛选和快速鉴定 (20)实验十三DNA分析——Southern杂交 (22)一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。

二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。

质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。

特别是常用的大肠杆菌。

大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。

它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。

当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。

然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。

分子生物学实验一二报告

分子生物学实验一二报告实验一：DNA提取引言：DNA提取是分子生物学实验中的基础实验，通过提取DNA我们可以进一步进行分子生物学上的一系列实验。

DNA提取的目的是从细胞中分离出DNA，常用于构建基因库、PCR扩增等实验。

材料与方法：1.取一定数量的细胞样本，如细菌、植物、动物组织等。

2.加入细胞裂解缓冲液，将细胞破裂释放DNA。

3.加入蛋白酶K以降解蛋白质。

4.加入酒精使DNA沉淀，并用无菌纯水洗涤DNA沉淀。

5. 用Tris-EDTA缓冲液溶解DNA。

6.用紫外可见光谱仪检测DNA浓度和纯度。

结果与讨论：通过以上步骤，我们成功地从细胞中提取出了DNA。

观察到DNA溶液呈现典型的黄绿色，说明DNA浓度较高。

利用紫外可见光谱仪检测DNA的浓度和纯度，结果显示DNA浓度为2μg/μL，纯度（A260/A280）为1.8，表明提取的DNA质量良好。

实验二：PCR扩增引言：PCR全称聚合酶链式反应，是一种快速、特异性并且高灵敏度的DNA扩增技术。

PCR可以扩增出目标DNA的大量复制品，常用于基因克隆、基因突变分析等实验。

材料与方法：1.准备PCR反应体系，包括目标DNA，引物，聚合酶、缓冲液及dNTPs。

2.将反应体系加入PCR仪中，设置好反应条件（温度、时间）。

3.进行PCR扩增反应。

4.用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

结果与讨论：通过PCR扩增反应，我们成功得到了目标DNA的扩增产物。

在琼脂糖凝胶电泳中观察到明显的目标DNA条带，且相对应的分子量与预期一致。

这表明PCR扩增反应成功地复制出了目标DNA，并得到纯净的PCR产物。

结论：通过DNA提取实验，我们成功地从细胞中提取出了DNA，并通过PCR扩增技术得到了目标DNA的扩增产物。

这些结果验证了我们实验的有效性，并为后续的分子生物学研究奠定了基础。

附注：以上报告仅为示例，实际报告应根据具体实验结果和实验目的进行撰写。