HPLC法测定氨咖黄敏胶囊中的对氨基酚_凌真.caj

Drug Standards of China 2013，Vol. 14 No. 2
积不得大于对照溶液的主峰面积（ 4. 0% ） ，各杂质 峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的 1. 25 倍 （ 5. 0% ） ，结果见表 1。
3 讨论 3. 1 流动相的选择
试验中对 2 个流动相系统进行了筛选： ①甲醇乙腈-0. 679 g·L － 1 磷酸二氢四丁基铵水溶液（ 55 ∶ 60∶ 885，用 稀 氨 水 调 pH 值 至 7. 75 ） ； ② 甲 醇-含 0. 002 mol·L － 1 磷酸二氢铵和 0. 0018 mol·L － 1 四 丁基氢 氧 化 铵 的 水 溶 液 （ 30 ∶ 70 ） 。 流 动 相 ① 为 BP2010 硝酸毛果芸香碱滴眼液质量标准中“毛果芸 香酸”检查项下的流动相组成，考虑到“磷酸二氢四 丁基铵”试剂国内不易买到［4］，且价格昂贵，故采用 常用的四丁基氢氧化铵和磷酸二氢铵代替磷酸二氢 四丁基铵，经摸索，建立了流动相②。经比对，两种 流动相分离效果无明显差别，且流动相②条件下，毛 果芸香碱主峰洗脱快，缩短了分析时间，故拟定质量 标准选择流动相②，实验数据见表 2。 3. 2 检测波长的选择
分别提取样品有关物质检查色谱图中毛果芸香 酸峰、异毛果芸香碱峰和毛果芸香碱主峰的紫外光
中国药品标准 2013 年第 14 卷第 2 Nhomakorabea期 97
表 2 有关物质检查流动相筛选结果比较
流动相
① ②
主峰保留时间 / min
22 9
毛果芸香酸 /%
3. 89 3. 95
其他杂质 /%
0. 49 0. 43
总杂质 /%
配制一定浓度的对氨基酚对照品溶液，用 0. 1 mol·L － 1 盐酸溶液逐级稀释，进样，按 3 倍信噪比计 算，测得对氨基酚最低检测限约为 20 ng·mL － 1 2. 6 精密度试验
取同一批号供试品，按“2. 2. 2 ”项下方法制备 供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样 6 次，对氨 基酚色谱峰峰面积的 RSD 为 0. 41% 。 2. 7 重复性试验
氨咖黄敏胶囊原名速效伤风胶囊，本品是由我 国自行研制的抗感冒复方制剂，临床效果较好，由对 乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏和人工牛黄组 成，每粒含对乙酰氨基酚 250 mg，咖啡因 15 mg，马 来酸氯苯那敏 1 mg，人工牛黄 10 mg，本品中对乙酰 氨基酚是主要成分。对氨基酚是生产对乙酰氨基酚 时带入或对乙酰氨基酚储存时产生的降解产物，对 人体有一定的毒副作用，在 2010 年版《中国药典》 二部中，对乙酰氨基酚品种项下严格控制对氨基酚 的含量，含对氨基酚不得过标示量的 0. 1%［1］。氨 咖黄敏胶囊中的主成分是对乙酰氨基酚，所以胶囊 中可能存在其有关物质对氨基酚，建立一种灵敏的 方法来检测氨咖黄敏胶囊中对氨基酚的含量很有必 要，而氨咖黄敏胶囊的检验标准中未控制对氨基酚 的含量［2-3］。本文对其有关物质的检测方法进行了 研究，建立了一种 HPLC 方法测定有关物质，结果准 确可靠，能满足控制该药品质量的需要。
4. 38 4. 38
谱 图，结 果 最 大 吸 收 波 长 分 别 为 215 ，213 和 208 nm ，考 虑 到 低 波 长 检 测 对 试 剂 的 色 谱 纯 度 要 求 较 高，同时结 合 BP2010 硝 酸 毛 果 芸 香 碱 滴 眼 液 项 下有 关 物 质 检 查 色 谱 条 件，选 定 检 测 波 长 为 220 nm。
［3］ 英国药典［S］． 2010 年版． 2010： 3008． ［4］ 肖仰，尚素琴． 硝酸毛果芸香碱滴眼液的高效液相色谱分析及
其稳定性考察［J］． 中国医院药学杂志，1999，19（ 2） ： 91-92． （ 收稿日期： 2012-02-27）
HPLC 法测定氨咖黄敏胶囊中的对氨基酚
凌真，李倚云，闻琍毓，丁苏苏，王威（ 江苏省扬州药品检验所，扬州 225009）
取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，在 上述色谱条件下进行分析，结果表明，对氨基酚对照 品的保留时间约为 3. 2 min，样品中其他成分不干扰 对氨基酚的测定，见图 1。
1 仪器与试药 1. 1 仪器
LC-20AB 液 相 色 谱 仪，SPD-20A 紫 外 检 测 器 （ 日本岛津公司） ； 135-S 分析天平（ 瑞士梅特勒-托 利多公司） 。 1. 2 试药
基酚，可用于该药品的质量控制。
关键词：氨咖黄敏胶囊； 有关物质； 对氨基酚； 高效液相色谱法
中图分类号：R921. 2
文献标识码：A
文章编号：1009 － 3656（ 2013） － 2 － 97 － 4
Determination of the Related Substance 4-aminophenol in Anka Huangmin Capsules by HPLC
图 1 HPLC 色谱图
A. 阴性对照； B. 供试品； C. 对照品
Drug Standards of China 2013，Vol. 14 No. 2
2. 4 线性关系考察 精密称定对氨基酚对照品 20. 69 mg，置 100 mL
量瓶中，加 0. 1mol·L － 1 盐酸溶液溶解稀释至刻度， 摇匀，作为 1 号储备液； 精密量取 1 号储备液 5 mL 置 50 mL 量瓶中，加 0. 1 mol·L － 1 盐酸溶液稀释至 刻度，摇匀，作为 9 号溶液； 再精密量取 1 号储备液 5 mL 置 100 mL 量瓶中，加 0. 1 mol·L － 1 盐酸溶液 稀释至刻度，作为 2 号储备液； 分别精密量取 2 号储 备液 0. 5，1，2，3，5，10，15 mL 置 25 mL 量瓶中，用 0. 1 mol·L － 1 盐酸溶液稀释至刻度，作为系列 1 溶 液。分别精密量取 9 号溶液，2 号储备液和系列 1 溶液各 20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对 氨基酚的峰面积对其浓度进行线性回归，回归方程 为 A = 9. 0323C + 2. 5866 （ r = 0. 9999） ，结果表明在 0. 2058 ～ 40. 5524 μg·mL － 1 范围内，对氨基酚色谱 峰峰面积与其浓度成良好线性关系。 2. 5 最低检测限
Ling Zhen，Li Yiyun，Wen Liyu，Ding Susu，Wang Wei（ Yangzhou Institute for Drug Control，Yangzhou 225009）
Abstract Objective： To establish an RP-HPLC method for determination of the related substance 4-aminophenol in Anka Huangmin
摘要 目的：建立 HPLC 法测定氨咖黄敏胶囊中的有关物质对氨基酚的含量。方法： 采用 C18 色谱柱，以磷酸盐缓冲液（ 磷酸二 氢铵 11. 5 g，加水溶解，加磷酸 1 mL，加水至 1000 mL） - 乙腈（ 88： 12） 为流动相，检测波长为 262 nm，流量为 1． 0 mL·min －1 。 结果： 有关物质对氨基酚的浓度在 0. 2058 ～ 40. 5524 μg·mL －1 范围内与峰面积呈良好线性关系（ r = 0. 9999） ，对氨基酚与药 物中的各成分有效分离，对氨基酚的最低检测限为 20 ng·mL －1 。结论： 该方法灵敏、准确，能够检出氨咖黄敏胶囊中的对氨
作者简介： 凌真，主管药师； 研究方向： 药品检验； Tel： 1377350097； E-mail： jennal@ 126． com
中国药品标准 2013 年第 14 卷第 2 期 98
Drug Standards of China 2013，Vol. 14 No. 2
Capsules. Method： Chromatographic separation was achieved on the Alltima C18 column using phosphate buffer solution and acetonitrile （ 88∶ 12） as a mobile phase，and the flow rate was 1 mL·min －1 ，the detective wavelength was 262 nm. Results： The linear range of the related substance 4-aminophenol was 0. 2058-40. 5524 μg·mL －1 （ r = 0. 9999） ，the effective components in the capsules and 4-aminophenol can be well separated. The lowest detection limit of 4-aminophenol was 20 ng·mL －1. Conclusion： The RP-HPLC method was sensitive，specific for the determination of 4-aminophenol in Anka Huangmin Capsules. ，and can be used for the quality control. Key words： Anka Huangmin Capsules； related substance； 4-aminophenol； HPLC
对氨基酚对照品（ 中国药品生物制品检定所， 批号 100802-201002，含量 98. 0% ） ； 氨咖黄敏胶囊 （ 18 个生产企业 104 批次） ； 盐酸、磷酸二氢铵、磷酸 （ 国药集团化学试剂有限公司） 均为分析纯，乙 腈 （ Dikma 公司） 为色谱纯。
2 方法与结果 2. 1 色谱条件
色谱柱为 GRACE 公 司 生 产 的 Alltima HP C18 （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ； 流动相为磷酸盐缓冲液 （ 磷酸二氢铵 11. 5 g，加水溶解，加 H3 PO41 mL，加水 至 1000 mL） - 乙腈（ 88： 12） ； 流量 1． 0 mL·min － 1 ； 检测波长 262 nm； 进样量 20 μL； 柱温 30 ℃ 。