丁酸钠体外诱导大鼠肝卵圆细胞系W_省略__F344细胞分化为胆管上皮细胞_唐庆贺
丁酸钠对肥胖孕鼠代谢和胰岛β细胞功能的影响和其分子机制
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非涉密论文□论文作者签名：日期：导师签名：日期：丁酸钠对肥胖孕鼠代谢及胰岛β细胞功能的影响及其分子机制中文摘要丁酸钠对肥胖孕鼠代谢及胰岛β细胞功能的影响及其分子机制中文摘要随着饮食习惯及生活方式的改变，肥胖、糖尿病的发病率逐年攀升。
高龄、肥胖孕妇的增多，妊娠期糖尿病（gestational diabetes millus, GDM）的发病率也不断增加，GDM产后2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)及子代肥胖发病率都明显增加；GDM的发病与胰岛β细胞增殖不足密切相关,研究者已把目光投向了胰岛β细胞增殖这一焦点，且认为无论是GDM还是糖尿病患者，寻找可以有效保护修复胰岛β细胞，恢复胰岛功能，抑制胰岛β细胞凋亡的药物是当今治疗糖尿病发展的重要方向。
研究显示组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors, HDACIs）可以改善胰岛β细胞功能，促进胰岛素释放与合成；减轻炎症反应对胰岛β细胞的损伤，还可以改善外周组织的胰岛素抵抗，调节全身免疫对T1DM和T2DM致病的影响。
丁酸钠诱导结肠癌Lovo细胞凋亡及其对p53靶基因的调控
丁酸钠诱导结肠癌Lovo细胞凋亡及其对p53靶基因的调控【摘要】目的观察丁酸钠对结肠癌Lovo细胞P53的三个重要靶基因，p21wafl> Bax和Gadd45的调控，进一步探讨其抑制细胞增生、诱导细胞凋亡的分子机制。
方法Lovo细胞常规培养分别用1.25、2.5、5.0、10 mmol/L 丁酸钠进行干预。
用MTT法检测细胞增生，流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期; AnnexinV FITC/PI双标记观察细胞凋亡；RT PCR和Western blotting分别检测丁酸钠对p21wafl、Bax和Gadd45三种基因mRNA和蛋白的表达。
结果丁酸钠以剂量和时间依赖的方式抑制Lovo结肠癌细胞的增生，诱导其凋亡，并阻滞Lovo细胞停滞丁‘G2/M期。
p21wafl、Gadd45和Bax基因mRNA和蛋白的表达增加，其中以Gadd45的表达变化最明显。
结论2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠以剂量和时间依赖的方式，抑制结肠癌Lovo细胞增生，诱导调亡；了酸钠参与结肠癌Lovo细胞周期的调控，2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠可以引起Lovo细胞的G2/M期阻滞；r酸钠的上述作用可能与其调控Lovo细胞中p21wafl、Bax和Gadd45基因的表达有关。
【关键词】Lovo结肠癌细胞；丁酸钠；细胞凋亡；p53靶基因【Abstract】 Objective To observe the regulation of sodium butyrate on the three main target genes of p53，includingp21wafl, Bax and Gadd45, and to explore the molecule mechanism ofits inhibiting proliferation and inducing apoptosis of Lovo colon cancer cells. Methods The colon cancer cell line Lovo was cultivatedin different concentrations of NaBT which concentrations were1. 25mmol/L,2.5 mmol/L, 5.0 mmol/L, 10 mraol/L respectively. MTT was used to detect the cellular proliferation. The apoptosis was examined by both flow cytometry and Annex in V FITC/PI double tagging. RT PCR and Western blotting were used to study the expression ofp21wafl, Bax, and Gadd45 messenger ribonuclcic acid(mRNA) and that of the protein. Results Sodium butyrate inhibited proliferation，induced apoptosis, and blocked Lovo cell mainly in G2 phase in a timeand dose dependant manner. The expression of p21wan, Bax and Gadd45 gene was all enhanced after being treated with sodium butyrate bothat mRNA and protein levels, and the expression of Gadd45 was the most obvious of all. Conclusions Sodium butyrate above 2. 5 mmol/L may inhibit proliferation, induce apoptosis and blocked Lovo cell mainlyin G2 phase in a time and dose dependant manner. Maybe the effect associated with its up regulating the expressions of p21waf1,Bax and Gadd45 within Lovo cell.【Key words】 Lovo colorectal cancer cell line, sodium butyrate, cell apoptosis , p53 target genesT酸钠是膳食纤维在肠道厌氧菌作用下产生的一种四碳短链脂肪酸（丁酸) 的钠盐。
211240431_丁酸盐在肠道疾病中作用和机制的研究进展
丁酸盐在肠道疾病中作用和机制的研究进展*韩晓霞1冷玉芳1,2#吕兴娇1侯小煜1曹雪芬1Janvier NIBARUTA 1兰州大学第一临床医学院1（730000）兰州大学第一医院麻醉科2摘要丁酸盐是结肠和盲肠部位的微生物群酵解膳食纤维和部分氨基酸的主要产物，可减轻肠道炎症，调节肠道菌群平衡，改善肠黏膜屏障等。
近年来国内外诸多研究表明丁酸盐在炎症性肠病、肠易激综合征、肠缺血再灌注损伤、结直肠癌、短肠综合征等肠道疾病中发挥作用。
本文就丁酸盐在肠道疾病中作用和机制的研究进展作一综述。
关键词丁酸盐类；肠疾病；作用；机制Research Progress on Role and Mechanism of Butyrate in Intestinal DiseasesHAN Xiaoxia 1,LENG Yufang 1,2,LÜXingjiao 1,HOU Xiaoyu 1,CAO Xuefen 1,Janvier NIBARUTA 1.1The First School of Clinical Medicine,Lanzhou University,Lanzhou (730000);2Department of Anesthesiology,the First Hospital of Lanzhou University,Lanzhou Correspondence to:LENG Yufang,Email:**************.cnAbstractButyrate is the main product of colonic and cecal microbiota in the fermentation of dietary fiber and some aminoacids,which can reduce intestinal inflammation,regulate the balance of intestinal flora,and improve intestinal mucosal barrier.In recent years,a large number of studies at home and abroad have shown that butyrate plays a role in intestinal diseases such as inflammatory bowel disease,irritable bowel syndrome,intestinal ischemia⁃reperfusion injury,colorectal cancer andshort bowel syndrome.This article reviewed the research progress on role and mechanism of butyrate in intestinal diseases.Key wordsButyrates;Intestinal Diseases;Roles;MechanismsDOI ：10.3969/j.issn.1008⁃7125.2022.03.010*基金项目：国家自然科学基金（81960345）；甘肃省自然科学基金（21JR1RA069）#本文通信作者，Email:**************.cn肠道是人体最大的吸收器官和免疫器官，机体内环境紊乱或各种疾病的发生均会影响肠道功能，反之肠道内有毒介质可通过肠系膜淋巴结和体循环影响全身各个组织器官，进一步引起全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭，甚至死亡。
丁酸钠在养鸡生产中的研究进展
２１年第１ 饲 ０１ 期 料博览 ３３
二指 肠 的 ＶＣ值 （ ＜ ． ） ４ ／ Ｐ Ｏ０ 和 ２日龄 肉仔 鸡十二 指肠 ５ 绒毛 高度 ，极 显著 提高 ４ ２日龄 肉仔鸡 十二指 肠 ＶＣ ／ 值 ；显著 提高 ２ １日龄 肉仔鸡 空肠 的绒 毛高度 和 ＶＣ ／ 值 （＜ ． ） Ｐ Ｏ０ ，显著提 高 ４ ５ ２日龄 肉仔 鸡空肠 的 ＶＣ值 ／ （＜ ．５ ，显 著 降低 ４ Ｐ０ ） ０ ２日龄 肉仔 鸡 空肠 隐窝 深 度
ＦＯ Ｈ 酸 在 鸡 产中 研究 展 ８Ｌ 丁 钠 养 生 的 进 １Ｏ ＯＧ Ｙ ．Ｉ Ｕ摹 Ｔ Ｅ Ｃ Ｈ Ｎ Ｗ
肖 宇 ，林 英庭
（ 青岛农业大学 动物科技学院，山东 青 岛 ２６ ０ ６ １９）
摘 要 ：丁酸钠作 为一种新型的绿色添加 剂，具有改善动物肠道微 生态平衡 、促进肠道健 康发 育等功效。文 章针对丁酸钠 的理化性 质及其在养鸡生产 中的应用作一 简要综述。
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｓ ｄ ｕ ｂ ｔ ｒ ｔ ｓａ ｎ ｗ ｇ ｅ ｎ ａ ｄ ｔ ｅ ， ｉｈ ｉ ｒ ｖ ｈ ｎ ｍａ ｎ ｅ ｔ ａ ｍｉｒ ｅ ｏ ｏ ｉ ａ ｂ ｌ ｓｒ ｃ ： ｏ ｉ ｍ ｕ ｙ ａ ｅ ｉ ｅ ｒ ｅ ｄ ｉ ｖ ｓ ｗｈ ｃ ｍｐ ｏ ｅ ｔ ｅ ａ ｉ ｌ ｔ ｓｉ ｌ ｃ ｏ ｃ ｌ ｇｃ ｌ ａ－ ｉ ｉ ｎ
丁酸钠 自２ ０ 年被农业部列入《 ０６ 饲料添加剂品
种 目录》 ，其 在 畜 牧 生 产 中的使 用 快 速 而 广 泛 ， 后
作 为一种 新 型绿色添 加剂 日益 引起人 们 的关 注 。研 究 发现 ，丁酸钠 可 以替代抗 生素 起到 改善 胃肠道微
剂的生理作用 ， 南于其游离性和挥发性 ，生产中 但
丁酸钠对饮食诱导肥胖大鼠的作用
对 于 高脂 饮 食 敏 感 的 Ｓ Ｄ大鼠 ， 在 其 高 脂 饲 料 中添 加 丁 酸 盐 能 够 改 善 其 体 质 量 增 加 与 体 质 指 数 ， 减 少 体 脂 肪 含
量， 降低 血 脂 与 血 清 瘦 素 水 平 ．
关键词
丁酸 钠 ；高脂 饲 料 ；肥 胖 文 献标 志码 Ａ
朱 涵 ， 谭 莎 莎 ，杨 虹 ，王 凌 Ｈ
（ １ ． 华 中农 业 大 学 食 品 科 学 技 术 学 院 ， 环境 食 品 学 教 育 部 重 点 实 验 室 ， 武汉 ４ ３ ０ ０ ７ ０ ２ ． 武汉市普爱医院 ， 武汉 ４ ３ ０ ０ ３ ０ ）
摘 要 为 建 立 由 高脂 饲 料 诱 导 的 肥 胖 易 感 （ ｏ ｂ ｅ ｓ ｉ ｔ ｙ — ｓ ｕ ｓ ｃ ｅ ｐ ｔ ｉ ｂ ｌ ｅ ，Ｏ Ｓ ） 和肥 胖抵抗 （ ｏ ｂ ｅ ｓ ｉ ｔ ｙ － ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ，ＯＲ） 大 鼠 模 型， 并探 讨 在 高脂 饲 料 中添 加 丁 酸钠 对 二 者 的 作 用 ， 给予 Ｓ Ｄ（ Ｓ ｐ ｒ ａ ｇ ｕ ｅ － Ｄ ａ ｗｌ ｅ ｙ ） 大 鼠 高脂 饲 料 饲 喂 ３周 后 依 据 其
Ｅ — ｍａ ｉ ｌ ： ｚ ｄ ｘ ｂ ｎ ｓ ｂ ＠ｚ ｊ ｕ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ａ Ｄ ＯＩ ： １ ０． ３ ７ ８ ５ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ． １ ０ ０ ８ — ９ ２ ０ ９ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ９． １ ９ ２
丁 酸 钠 对饮 食 诱 导肥 胖 大 鼠的作 用
浙 江 大 学 学报 （ 农业与生命科学版） ４ １ （ ２ ） ： １ ９ ５ ～２ ０ ０ ， ２ ０ １ ５
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｚｈ ｅ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ（ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ．８ Ｌ Ｌｉ ｆ ｅ Ｓｃ ｉ ． ） ｈ ｔ ｔ ｐ： ／ ／ ｗｗｗ． ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｓ ． ｚ ｊ ｕ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ｎ ／ ａ ｇ ｒ
丁酸和植物提取物在动物组蛋白乙酰化中的作用
丁酸和植物提取物在动物组蛋白乙酰化中的作用马涛刁其玉*【摘要】摘要:表观遗传学是遗传学研究的热点，然而针对畜禽的研究还处在起步阶段。
表观遗传学的范畴包括组蛋白质修饰、DNA甲基化、microRNA 调控等。
本文综述了丁酸和植物提取物等饲料添加剂作为组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂在模型动物及畜禽上的研究进展。
【期刊名称】动物营养学报【年(卷),期】2015(000)004【总页数】6【关键词】关键词:表观遗传学;组蛋白去乙酰化酶;组蛋白去乙酰化酶抑制剂;丁酸;植物提取物;维生素E表观遗传学一直是遗传学研究的热点，指在基因组序列不发生改变的情况下，基因的表达发生可遗传的变异，是环境因素和细胞内的遗传物质相互作用的结果，主要包括组蛋白乙酰化、磷酸化、泛素化，DNA甲基化以及microRNA 调控等［1-2］。
尽管目前已经确定营养素具有调控表观遗传的作用，但对于营养素调控表观遗传内在机制的研究相对较少，就畜禽而言，相关研究更是处在起步阶段。
组蛋白是真核生物染色体的基本结构蛋白质，是一类小分子碱性蛋白质。
决定组蛋白乙酰化状态的酶有2类:组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase，HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)。
HAT的作用是对组蛋白N端进行乙酰化修饰，使核小体结构松散、激活基因转录;HDAC则对其N端进行去乙酰化修饰，抑制基因转录［3］。
目前在哺乳动物中已发现的HDAC根据其与酵母的同源性可分为3种类型:Ⅰ型包括HDAC1、HDAC2、HDAC3 和 HDAC8，分子质量在42～45 ku，该类型全部位于细胞核内，调控组蛋白乙酰化修饰;Ⅱ型包括HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9 和 HDAC10，分子质量为120～130 ku，主要位于细胞质，但可在细胞质与细胞核间穿梭，调控组蛋白及非组蛋白的乙酰化修饰;Ⅲ型则与细胞衰老和能量代谢的调节相关［4］。
丁酸钠对LPS刺激肉仔鸡肠道炎症反应的作用研究
钠可以改善肉仔鸡小肠形态结构和功能，并能降低 Ｌ Ｐ Ｓ 刺
Ｍ Ｈ Ａ蛋氨酸等价添加水平分别为 ０ ． ０ ８ ０ ％和 ０ ． ０ ７ ９ ％。综上
所述，作为蛋氨酸来源的Ｍ Ｈ Ａ和 Ｄ Ｌ Ｍ对生长期北京鸭具
有相似的生物学功效，并且饲粮蛋氨酸水平为 ０ ． ３ ７ ％可使
０ — ３ 周龄北京鸭达到 ９ ５ ％最大日增重。
资料来源： Ｈ ． Ｋ ｌ ｕ ｇ ｅ ， ｅ ｔ ． ａ １ ． Ｐ ｏ ｕ ］ ｔ ｒ ｙ ． Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， ２ ０ １ ６ ， １ ９ （ ３ ） ：
丁酸钠对 Ｌ Ｐ Ｓ刺激 肉仔鸡
肠 道 炎 症 反 应 的 作 用 研 究
陈芳 译 蒋守群 校
摘要：本试验旨在研究肉鸡在 Ｌ Ｐ Ｓ 应激下添加丁酸钠 对肠道炎症反应的影响。１ ２ ０ 只ｉ 日 龄Ａ Ａ肉仔鸡随机分成
２ 个处理组， 对照组饲喂基础饲粮（ 未添加丁酸钠 ） ， 试验组
血浆和高剂量 Ｏ Ｔ Ａ组 肾脏 ｆ ｛ 】 抗氧化能 力显著降低（
组试鸭终末体重、 日 增重和采食量显著低于其它各组： 添加 蛋氨酸剂量依赖性地提高了试鸭的终末体重和口增重。蛋
氨酸来源对试鸭生产性能无显著影响。利用指数回归模型 评估试验鸭 日 增重， 结果显示， 两种蛋氨酸源在试鸭生长方 面的效价（ 曲线效率 ） 几乎相 同（ Ｄ Ｉ Ｍ ＝ １ ０ ０ ％， Ｍ Ｈ Ａ ： １ ０ １ ％） 。 根据指数回归模型，达到 日 增重最大值 ９ ５ ％Ｈ ￣ 的Ｄ Ｌ Ｍ和
微小RNA在丁酸钠诱导胚胎干细胞分化为肝细胞过程中表达差异谱的变化
Ｄｅ ａｔ ｎ ｆＨｅ ａｏ ｉｉｒ ｕ ｇ ｒ Ｄｅ ａ ｍｅ ｔｏ ｄ ｃｉ ｏｏｙ，ｔｅＳｅ ｏ ｄ Ａｆ ｌ ｔｄ Ｈｏｐｉ ｌ ｐ ｒｍｅ ｔｏ ｐ ｔｂ ｌ ｙ Ｓ ｒ ｅｙ， ａ ｐ ｒ ｎ ｆＥｎ ｏ ｒｎ ｌｇ ｔ ｈ ｃ ｎ ｆｉ ｅ ｓ ｔ ， ｉ ａ ａ Ｓｕ ｔｓ ｎ Ｕｎｖ ｒｉ ｎ Ｙａ—ｅ ｉｅｓｔ ｙ，Ｇｕａ ｇ ｈ ｕ ５１ ２ ｎ ｚ ｏ ０１ ０，Ｃｈ ｎ ｉａ
Ｃ Ｅ ａ ｉ ， Ｎ Ｊｎ ， Ｈ Ｎ ｈｎ— ｅ Ｒ ＮＭｅｇ ， Ｅ ＧＸａ．ｉ ｇ， Ｈ ＮＹ －ｎ ＭＩ ｕ Ｓ Ａ Ｇ Ｃ ａｇｚ ｎ ， Ｅ ｎ Ｐ Ｎ ｉ ｘ ｎ ｊ ｈ ｏ ｏ
Ｃ Ｏ Ｊ ｎ ，Ｃ Ｎ Ｊ． ｅ ｇ Ａ ｕ ＨＥ ｉ ｈ ｎ ｓ
丁酸钠对牛乳腺上皮细胞内源性抗菌肽诱导表达及抗金黄色葡萄球菌感染的研究
丁酸钠对牛乳腺上皮细胞内源性抗菌肽诱导表达及抗金黄色葡萄球菌感染的研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要致病菌之一,引起的抗生素耐药性和慢性炎症问题日益突出。
作为疾病控制的新策略,抗菌肽通常是由动物细胞天然产生的,几乎对所有类别的病原体有效且极难产生抗性。
丁酸钠不仅是一种短链脂肪酸类营养化合物,还是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)。
有研究报道称丁酸钠能通过HDACi作用诱导动物内源性抗菌肽表达,同时还能发挥抑菌抗炎的作用效果,但其确切分子机制尚不清楚。
因此,本研究通过全面了解丁酸钠对动物内源性抗菌肽诱导表达的影响以及明确丁酸钠对炎症相关信号通路的调控机制,为有效预防和控制金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎提供了分子领域的理论依据。
本研究以牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为细胞模型。
首先,观察丁酸钠对细胞内源性抗菌肽基因表达的诱导效果。
接着,利用基因转录组学查找并验证关键转录因子、细胞信号转导通路及microRNA对丁酸钠调控细胞内源性抗菌肽基因表达的影响。
然后,观察丁酸钠在金黄色葡萄球菌感染细胞中的抑菌效果。
最后,阐明丁酸钠缓解金黄色葡萄球菌外毒素脂磷壁酸(LTA)引起细胞炎症反应的信号转导机制。
主要试验结果如下:(1)研究结果表明丁酸钠能上调MAC-T细胞内源性抗菌肽的表达,包括β-defensin类抗菌肽DEFB1、DEFB3、DEFB4、DEFB5、DEFB6、DEFB8、DEFB9、DEFB10、DEFB11、DEFB12、DEFB13、LAP、TAP、BPTI和EBD,以及cathelicidin 类抗菌肽Bac1、Bac5、Indolicidin、BMAP-28、BMAP-27和BMAP-34。
抗菌肽基因以剂量和时间依赖性方式被丁酸钠诱导,其中以DEFB1和BMAP-34的表现最为显著。
丁酸钠以剂量依赖性方式上调了MAC-T细胞组蛋白乙酰化水平,并对DEFB5、Indolicidin和BMAP-34基因的诱导表达能力均高于曲古霉素(TSA)。
丁酸钠对肝卵圆细胞甲胎蛋白表达的影响
丁酸钠对肝卵圆细胞甲胎蛋白表达的影响王萍;阎钟钰;丛敏;唐淑珍;陈翌阳;董忠;尤红;贾继东;王宝恩【期刊名称】《临床和实验医学杂志》【年(卷),期】2004(003)002【摘要】目的探讨0.75 mM丁酸钠对肝卵圆细胞甲胎蛋白(AFP)表达和向细胞外分泌AFP的影响.方法从喂饲含0.1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4～6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞.噻唑蓝(MTT)比色法做生长曲线,观察0.75 mM丁酸钠对肝卵圆细胞生长的影响.收集0.75 mM丁酸钠处理4天后的肝卵圆细胞及其培养上清液.将细胞裂解后,用Western Blot检测胞内AFP的表达水平.用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液中的AFP浓度.结果生长曲线的结果显示0.75 mM丁酸钠对肝卵圆细胞的生长有一定的抑制作用.Western Blot的结果提示0.75 mM丁酸钠能显著降低肝卵圆细胞AFP的表达水平(P＜0.05),但ELISA法测定的培养上清液中AFP的含量却没有显著改变.结论0.75 mM丁酸钠对肝卵圆细胞的生长有一定的抑制作用,并能降低肝卵圆细胞AFP的表达水平.【总页数】3页(P65-67)【作者】王萍;阎钟钰;丛敏;唐淑珍;陈翌阳;董忠;尤红;贾继东;王宝恩【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心,北京,100050【正文语种】中文【中图分类】Q26【相关文献】1.外源性甲胎蛋白对甲胎蛋白表达缺失HepG2细胞系增殖与凋亡的影响 [J], 冉云;邓欣;杨大国;吴其恺;陈文林;陶艳艳2.三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏p-ERK1/2表达的影响 [J], 邓志云;李学东;傅华群3.苦参碱对肝卵圆细胞增殖模型大鼠Notch1,Jagged1 mRNA表达的影响 [J], 杨志云;姚树坤;殷飞4.BEL7402人肝癌细胞中癌基因的表达及丁酸钠对癌基因表达的影响 [J], 李仕勇5.丁酸钠体外诱导大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞分化为胆管上皮细胞 [J], 唐庆贺;杨文;谈冶雄;周伟平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丁酸钠对体外培养的卵巢癌细胞生长影响及其机制探讨
丁酸钠对体外培养的卵巢癌细胞生长影响及其机制探讨刘薇;荣风年;汤春生【期刊名称】《肿瘤防治杂志》【年(卷),期】2004(11)1【摘要】目的 :观察丁酸钠 (sodiumbutyrate ,NaB)对体外培养的卵巢癌细胞3AO生长的影响 ,初步探讨其作用机制。
方法 :以人卵巢上皮癌细胞株3AO为肿瘤模型 ,采用不同浓度的NaB对其进行干预 ,MTT比色法测定NaB对 3AO细胞增殖活性的影响 ,进一步通过光镜、电镜观察 3AO细胞的形态学改变 ,进行DNA 降解分析 ,并采用流式细胞技术分析细胞周期动力学变化。
结果 :NaB作用下 3AO 细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制 ,一定浓度的NaB作用一定时间 ,可诱导3AO细胞发生凋亡 ,光镜和电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变 ,DNA降解分析中出现典型的梯形条带 ,流式细胞技术分析发现NaB作用首先引起细胞周期分布的改变 ,随剂量的加大和用药时间的延长 ,凋亡率逐渐升高。
结论 :NaB通过诱导凋亡而抑制体外培养的 3AO细胞生长 ,其机制可能与细胞G1期阻滞有关。
【总页数】4页(P52-55)【关键词】卵巢肿瘤;药物疗法;丁酸类;药理学;脱噬作用;药物作用【作者】刘薇;荣风年;汤春生【作者单位】山东省立医院妇产科;山东省千佛山医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.31【相关文献】1.注射用磷酸肌酸钠对体外培养人卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响及其机制[J], 魏素菊;张凯2.血管内皮生长因子促进卵巢癌细胞AO体外侵袭的机制探讨 [J], 黎海莉;康林;刘爽;吴小华;杨波;单保恩3.全反式维甲酸与顺铂联合在体外对卵巢癌细胞株3AO增殖、分化、凋亡的影响及其机制的探讨 [J], 李丽;李庭芳;张月明;陈晓;王颢;郭祥萍4.体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP并探讨卵巢癌顺铂耐药机制[J], 栗宝华;胡东晓;赵丽嫣5.雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞株(COC1/DDP)体外活性影响机制的初步探讨 [J], 胡辉;谭布珍;袁铿;杨丽兰;胡银英;黄艳琴;朱四红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丁酸钠对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞系炎性损伤的修复作用
丁酸钠对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞系炎性损伤的修复作用李林;宫彬彬;许长锋;曹萌;李建嫄;赵梅;唐伟斌【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2022(34)2【摘要】本研究拟通过分析丁酸钠对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)炎性损伤的修复作用,进一步从体外角度阐述丁酸钠对奶牛乳腺健康的调控机制。
在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 ng/mL)的LPS,检测细胞活力,以确定LPS的适宜浓度,建立细胞氧化损伤模型;并进一步在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)的丁酸钠,检测细胞凋亡率,以确定丁酸钠的适宜浓度。
最终选用1 000 ng/mL LPS和16μmol/L 丁酸钠用于本试验。
试验分为3组,分别为对照组、LPS处理组和LPS+丁酸钠处理组,分别对其细胞形态、氧化应激指标及凋亡蛋白mRNA表达水平进行检测。
结果表明:1)对照组MAC-T细胞呈扁平的无规则形态,贴壁状态良好;而LPS处理组MAC-T细胞核固缩、破裂,并出现大面积死亡脱落现象;LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞边缘清楚,胞内颗粒较少,死亡脱落现象明显减少。
2)与对照组相比,LPS处理组MAC-T细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化力(T-AOC)显著降低(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05);与LPS处理组相比,LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞中SOD活性和T-AOC含量显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。
3)与对照组相比,LPS处理组MAC-T细胞中半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱天冬蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X 蛋白(Bax) mRNA表达水平显著或极显著升高(P <0.05或P <0.01),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA表达水平极显著降低(P<0.01);与LPS处理组相比,LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。
丁酸钠对内毒素血症小鼠肝脏TLR4表达的影响
丁酸钠对内毒素血症小鼠肝脏TLR4表达的影响华春秀;夏西超;梁桂娜;刘庆春【期刊名称】《西部医学》【年(卷),期】2017(29)12【摘要】Objective To study the effects of sodium butyrate on toll like receptor 4 (TLR4) liver injury of endotoxemia mice.Methods Mice were randomly received a single intratracheal instillation with either normal saline (control cohort) or 4mg/kg LPS (LPS cohort).Mice from LPS cohort were subsequently assigned to 5 groups including model group administered with normal saline,the control group with dexamethasone-21-acetate at 10mg/kg,the low-dose group,middle-group and high-dose group respectively received sodium butyrate solution at a concentration of 0.4mg/kg,2mg/kg and 10 mg/kg.The histological change of liver was examined by hematoxilin and eosin and TUNEL.Levels of alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase(AST)and alkaline phosphatase (ALP) in the serum were determined by spectrophotometry.Expression levels of TLR4,nuclear factor-κB (NF-KB),and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were measured by real-time PCR and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Results Results showed that the sodium butyrate treatment result in a decrease of the liver damage in the septic pared with model group,levels of ALT,AST and ALP of serum in sodium butyrate high-dose group reduced 54.03 ％ (P＜0.01),61.72 ％(P＜0.01)and 46.15 ％ (P＜0.01),respectively.Meanwhile,real-tmie PCR showed that levels of TLR4,NF-KB and TNF-α reduced 61.48％(P＜0.01),64.51％(P＜0.01) and 50.34％(P＜0.01).Results of ELISA showed that levels of TLR4,NF-KB and TNF-α red uced 57.82％ (P＜0.01),46.17％ (P＜0.01) and 61.5％ (P＜0.01),respectively.Conclusions Administration of sodium butyrate can result in a protective effects on liver damage of endotoxemia mic maybe through down-regulation of TLR4 expression.%目的探讨丁酸钠对内毒素血症小鼠肝脏Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)表达的影响.方法将180只健康小鼠(体重20±5g)随机分成正常组、模型组、阳性对照组、丁酸钠低剂量组、丁酸钠中剂量组、丁酸钠高剂量组,每组30只.腹腔注射戊巴比妥(40mg/kg)麻醉小鼠,后5组小鼠给予腹腔内注射LPS4mg/kg诱导建立内毒素血症肝脏损伤模型.注入LPS前1、12、24、36h和注入后12、24、36h,对此5组动物分别蛤予生理盐水、10mg/kg盐酸地塞米松、0.4mg/kg丁酸钠溶液、2mg/kg丁酸钠溶液和10mg/kg丁酸钠溶液,正常组给予同等体积生理盐水.在LPS注入后48h解剖肝脏,观察肝细胞形态学改变,分光光度法测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量,real-time PCR和ELISA分析TLR4、核转录因子-KB(nuclear factor-κB,NF-KB)和肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达.结果与模型组相比,丁酸钠处理组小鼠肝细胞损伤程度减轻,以丁酸钠高剂量组最为显著;与模型组比较,丁酸钠高剂量组血清中ALT、AST和ALP含量分别减少了54.03％、61.72％和46.15％ (P＜0.01);TLR4、NF-κB和TNF-α mRNA水平分别减少了61.48％、64.51％争50.34％(P＜0.01);ELISA结果显示,TLR4、NF-κB和TNF-α蛋白水平分别减少了57.82％、46.17％和61.5％(P＜0.01).免疫组化结果表明,丁酸钠处理组TLR4表达水平较模型组明显降低,其中以高剂量组最为显著.结论丁酸钠对内毒素血症小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能与下调TLR4的表达有关.【总页数】6页(P1651-1656)【作者】华春秀;夏西超;梁桂娜;刘庆春【作者单位】南阳医学高等专科学校基础医学部,河南南阳473061;平顶山学院医学院,河南平顶山476000;南阳医学高等专科学校基础医学部,河南南阳473061;南阳医学高等专科学校基础医学部,河南南阳473061【正文语种】中文【中图分类】R589.1【相关文献】1.小檗碱和育亨宾对内毒素血症小鼠脾脏TLR4信号通路中相关基因表达的影响[J], 李辉;王一阳;李红梅;王发强;吕秀秀;戚仁斌;陆大祥;王彦平;王华东2.α-MSH对内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响 [J], 肖锐;胡巢凤;王彦平3.己酮可可碱对内毒素血症大鼠心肌TLR4与TNFα mRNA表达影响及机制研究[J], 顾建军;叶记录;孙华4.凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体表达的影响 [J], 余林中;江爱达;陈育尧;林慧;秦清和;马晓冬5.大承气汤对内毒素血症小鼠肺与大肠TLR4及TNF-α表达的影响 [J], 孙学刚;范钦;王启瑞;刘亚伟;唐靖;刁建新;石彩霞;吕志平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丁酸钠诱导Raji细胞基因表达的变化
丁酸钠诱导Raji细胞基因表达的变化【摘要】目的分析丁酸钠诱导Raji细胞的基因表达变化，探讨丁酸钠诱导凋亡作用机制。
方法限制性显示PCR技术(Restriction Display PCR，分析基因表达变化，利用互联网提供的GenBank 核酸数据库分析比对获得的差异表达序列。
结果获得14条差异表达序列，其中6条是对照组高表达序列，8条是实验组高表达序列。
结论采用技术可以快速简便地分析药物诱导基因表达变化。
分析表达差异的序列发现，丁酸钠可诱导促进细胞凋亡的基因表达，降低肿瘤细胞高表达的基因表达。
【关键词】限制性显示PCR技术；丁酸钠；凋亡；基因表达Change of Gene Expression in Raji Cells Induced by Sodium ButyrateAbstract：Objective This study was designed to analyze the change of gene expression and investigate themechanism of apoptosis induced by sodium butyrate. MethodsThe change of gene expression was analyzed by Restriction Display PCR .The differences expressed sequences were sequenced. Nucleic acid sequences were analyzed by using the GenBank in internet. ResultsFourteen differential expressed sequences were gained， of which 6 high expressed sequences were in control cells and 8 high expressed sequences were induced by sodium butyrate. ConclusionThe change of gene expression induced by drugsquickly and simply. Gene expression that prompted cell apoptosis was upregulated induced by sodium butyrate while Gene expression that was high expression in tumor cells was downregulated.Key words：Restriction Display PCR；Sodium butyrate； Apoptosis； Gene expression0引言Raji细胞是悬浮状态生长的，但我们前期研究发现Raji细胞在丁酸钠的处理下可由悬浮生长状态转变为贴壁生长状态，伴随有细胞凋亡现象的发生[1]。
丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达的诱导作用及机制
丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达的诱导作用及机制付素珍;钱新华;杨敏;赵丹华【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(043)003【摘要】目的:研究丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达和胎儿血红蛋白合成的诱导作用及机制.方法:以丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h的K562细胞为实验组,设K562亲本细胞和SB203580(10 μmol/L)处理1 h后用丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h 的K562细胞为阴性对照组,设羟基脲(100 μmol/L)诱导72 h的K562细胞为阳性对照.分别提取细胞总RNA 和总蛋白.采用RT-PCR、Western blotting 和联苯胺染色方法检测γ珠蛋白基因、胎儿血红蛋白和p38表达及p38磷酸化水平.结果:与K562亲本细胞和SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞相比,丁酸钠诱导的K562细胞中G-γ珠蛋白、A-γ珠蛋白和胎儿血红蛋白的表达均明显上调(P<0.05),p38 mRNA和蛋白水平表达均无明显变化(P>0.05),但p38蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05).K562亲本细胞、SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞和丁酸钠诱导的K562细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±0.4)%、(12.7±0.2)%和(36.3±0.8)%(P<0.05).结论:丁酸钠可以诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因、合成胎儿血红蛋白,p38MAPKs的激活在丁酸钠诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因中发挥重要作用.【总页数】4页(P446-449)【作者】付素珍;钱新华;杨敏;赵丹华【作者单位】南方医科大学南方医院新生儿科,广州,510515;新乡医学院第一附属医院儿科,卫辉,453100;南方医科大学南方医院新生儿科,广州,510515;南方医科大学南方医院新生儿科,广州,510515;南方医科大学南方医院新生儿科,广州,510515【正文语种】中文【中图分类】R556【相关文献】1.MicroRNA-451和microRNA-503对羟基脲诱导的K562细胞γ珠蛋白基因表达的调控作用 [J], 盘玲媛;赖永榕;刘容容;方栋2.低剂量羟基脲和丁酸钠联合应用对人红系细胞珠蛋白基因表达的影响 [J], 吴倩倩;钱新华;徐梅佳3.新乌头碱对K562细胞及耐柔红霉素的K562细胞凋亡的诱导作用及其机制 [J], 关心;杨同华;张超然;冯帅4.TAT PTD-BCR/ABL SH3融合蛋白对白血病细胞系K562凋亡诱导作用 [J], 梁英民;蒋姗姗;韩骅;刘利;孙强;陈任安;吴绒丽;杜鹃;李巧蛾5.人红白血病K562细胞系β—珠蛋白基因表达的调控 [J], 马文丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901体外生长分化的影响
丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901体外生长分化的影响杨平湖;黄文广【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(38)4【摘要】目的研究丁酸钠对人胃癌细胞系生长抑制及诱导分化的抗肿瘤作用.方法以不同浓度的丁酸钠作用体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901,应用MTT法检测对细胞生长的抑制情况;应用分光光度法检测分化标志酶活力;应用流式细胞技术检测细胞周期分布.结果丁酸钠可以使SGC-7901细胞发生形态学改变;可抑制细胞生长,2.5mmol/L和5.0 mmol/L两种浓度丁酸钠在24、48、72 h对细胞生长的抑制率分别为27.72%、39.25%、85.02%和39.05%、60.76%、93.63%,具有时间剂量依赖性(P<0.01);可使细胞分化标志酶乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)活力降低;可使G0/G1期细胞大量增多,S期、G2/M期细胞相应减少,出现G0/G1期停滞.结论丁酸钠可诱导SGC-7901细胞分化并抑制其恶性生长.【总页数】4页(P504-507)【作者】杨平湖;黄文广【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R735.2【相关文献】1.苯丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用 [J], 刘奇;陈德兴;赵吉生2.丁酸钠对胃癌细胞株AGS增殖分化的影响及其机制 [J], 庄亚琼;李建英;陈治新;王小众3.奥曲肽联合奥美拉唑体外对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响 [J], 李春雷;李志浩;刘菁;李鹏;郑芳;朱雪松4.NM-3含药血清对体外胃癌细胞株SGC-7901生长和VEGF及其受体KDR、Flt-1表达的影响 [J], 宋明全;朱金水;朱励;张强;李沁;郭花;张卫平5.FR/CL体外干预人胃癌细胞株SGC-7901及人肺癌细胞株A549生长 [J], 赵婷;李苏宜;崔玖洁;张华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丁酸钠对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制的影响
丁酸钠对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制的影响苏标;徐庆微;黄志力;张国祥【摘要】Objective To investigate the inhibitory effect of sodium butyrate on the growth of breast cancer cells MCF-7. Methods Breast cancer MCF-7 cells were cultured to logarithmic growth phase, they were processed with sodium butyrate, 0, 2.5, 5.0, 10.0mmol/L were the concentration, the growth inhibition of MCF was observed. Results The growth rate of MCF-7 cell processed with the sodium butyrate with the Concentration 2.5, 5.0, 10.0mmol/L was significantly slower than that of the parent cell, the growth rate with increasing concentration was slower, there was the significant difference(P < 0.05). The colony efficiency of MCF-7 cells processed with the sodium butyrate with the concentration 5mmol/L was significantly lower than that of the parental cells, there was the significant difference (P < 0.05). After processed with sodium butyrate, Cell G1 was significantly higher than the parental cells, S phase and G2 / M phase were significantly lower than the parental cells, the percentage of apoptotic cells was significantly higher than the parental cells, there was the significant difference(P<0.05). Conclusion Sodium butyrate may be by inducing apoptosis in MCF-7 cells and play a reversal of its role in the malignant behavior.%目的：探讨丁酸钠对乳腺癌细胞MCF-7生长的抑制作用。
丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制
丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制李林;曹萌;宫彬彬;赵梅;王婕;张晓辉【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2022(53)9【摘要】通过向脂多糖(LPS)诱导牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)脂代谢紊乱模型中添加不同浓度(2、8、16μmol·L^(-1))的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。
分别用1 000 ng·mLLPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油(TG)含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组:对照组、LPS处理组、2μmol·L^(-1)丁酸钠+LPS处理组、8μmol·L^(-1)丁酸钠+LPS处理组和16μmol·L^(-1)丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。
结果显示:LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降(P<0.05),TG含量极显著下降(P<0.01);不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降(P<0.01)、P-AMPK表达水平显著上升(P<0.05)、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升(P<0.05)、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升(P<0.05);与LPS处理组相比,(2、8、16μmol·L^(-1))丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。
丁酸钠对食管癌细胞增殖的影响(一)
丁酸钠对食管癌细胞增殖的影响(一)作者：尹惠卿张岚贺付成张云汉高冬玲【摘要】目的:观察丁酸钠对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期及NDRG1蛋白表达的影响.方法:采用0.5mmol/L丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞,用MTT法检测处理不同时间时细胞增殖的变化，采用流式细胞仪检测细胞周期的变化，采用免疫组化方法检测NDRG1蛋白表达的变化.结果:①MTT实验结果显示，丁酸钠作用1～5d时各组吸光度均低于对照组，经统计学处理差异有显著性意义（P0.05）；丁酸钠不同作用时间的细胞增殖抑制率分别为：1d组21.2%，3d组23.5%，5d组25.6%，且随作用时间延长抑制率升高.②细胞周期检测结果为（%）:G1期细胞:对照组57.00±1.10，1d组63.10±0.78，3d组67.20±0.58，5d组69.70±0.64；S期细胞：对照组25.30±0.27，1d组20.20±0.66，3d组20.40±0.82，5d组20.90±0.50；M 期细胞：对照组17.20±1.00，1d组16.70±0.69，3d组12.10±0.41，5d 组9.40±0.23.各组G1期结果分别与对照组结果比较，差异有显著性意义（P0.01）.③丁酸钠可上调NDRG1蛋白表达水平，随作用时间增长蛋白表达增强.结论:丁酸钠可抑制食管癌细胞增殖，这一作用可能与NDRG1蛋白表达增加有关.【关键词】食管肿瘤；肿瘤细胞；NDRG1基因；丁酸钠0引言丁酸钠是一种四碳脂肪酸盐，是重要的肠道黏膜营养剂.研究证实丁酸钠能抑制胃癌、肝癌、结肠癌等肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化，改变瘤细胞形态结构及基因表达，诱导细胞凋亡〔1-3〕，因而丁酸钠作为一种极具潜力的抗癌药物越来越受到关注.NDRG1基因是一种与细胞分化有关的基因，升高其表达可抑制肿瘤细胞的增殖〔4-5〕.我们采用MTT实验及流式细胞技术检测丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞后细胞增殖和细胞周期的变化，并观察丁酸钠对NDRG1表达的影响，为丁酸钠用于食管癌诱导分化治疗提供理论依据.1材料和方法1.1材料食管癌EC9706细胞系由中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室赠送.丁酸钠（servafeinbiochemicaheidelberg公司），RPMI1640细胞培养基（GibcoBRL公司）,胎牛血清（杭州四季青生物工程公司），羊抗人NDRG1多克隆抗体（SantaCruz生物技术公司），丫啶橙(Sigma 公司)，CO2孵育箱（美国FormaScientific公司），流式细胞仪（德国PartecPAS公司），酶标仪（英国Stat公司）.1.2方法1.2.1细胞培养将人食管癌EC9706细胞单层贴壁生长于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中，种植于含盖玻片的六孔板及75cm2培养瓶中.37℃,50mL/LCO2培养箱中培养，隔日换液，取对数生长期细胞进行试验.1.2.2MTT实验取对数生长期的EC9706细胞,调整细胞密度为7.5×107/L,按每孔0.2mL 接种于96孔细胞培养板中.设空白对照组和0.5mmoL/L丁酸钠实验组,每组均设10个复孔.实验终止前4h向细胞液中加入MTT20μL,细胞被染色后以二甲亚砜200μL溶解甲瓒颗粒,于酶标仪上测定A492nm.实验重复2次.细胞抑制率=〔(A对照-A实验)/A对照〕×100%.1.2.3丁酸钠处理及细胞周期检测用RPMI1640培养液将丁酸钠调终浓度为0.5mmol/L,对照组为不含丁酸钠的培养液.取丁酸钠作用1,3,5d的细胞爬片及对照组细胞爬片从六孔板取出后经pH7.4的PBS冲洗，800mL/L丙酮固定30min后用中性树胶黏于载玻片上，4℃保存，用于免疫组化实验.分别取丁酸钠作用1,3,5d 的细胞进行如下处理：培养瓶中的细胞经pH7.4的PBS冲洗后加入2g/L 胰蛋白酶消化，离心后用预冷的PBS洗涤2次，加入700mL/L乙醇1.0mL 固定细胞用于细胞周期测定.上机前将细胞离心洗涤制成单细胞悬液,加丫啶橙染色,暗室放置,300目尼龙膜过滤,用流式细胞仪检测细胞周期分布.1.2.4细胞免疫组织化学染色采用SP试剂盒进行免疫组化实验.按说明书步骤进行操作，DAB显色，苏木素复染，光镜观察细胞显色强度.结果判定：在高倍镜下观察免疫组化着色情况，以信号强弱评定NDRG1表达的强弱.统计学处理：采用SPSS11.0软件进行统计学处理，数据均采用x±s表示,检验水准α=0.05.2结果2.1MTT检测不同时间的各组平均吸光度值均低于对照组，其差异有显著性意义（P0.05，表1）；随丁酸钠作用时间延长，其抑制率升高.表1丁酸钠对人食管癌细胞EC9706的增殖抑制作用确良（略）2.2丁酸钠对食管癌细胞细胞周期的影响实验组G1期细胞比例与对照组比较明显增高,而S,M期细胞比例减少，经统计学处理，差异有显著性意义（P0.01,表2）.表2丁酸钠对食管癌EC9706细胞周期的影响（略）2.3丁酸钠对食管癌细胞NDRG1蛋白表达的影响免疫组化染色结果显示，在作用1～5d时，细胞胞质黄色着色较对照组明显加深，且随作用时间延长而增强（图1）.3讨论食管癌是人类常见的消化道恶性肿瘤，食管癌的治疗方法除手术治疗、放疗等方法外，还有许多新的治疗方法，如基因治疗、免疫治疗、抗血管生成治疗、诱导分化治疗等〔6〕.其中诱导分化治疗是肿瘤化学治疗的一个新领域.诱导分化是指恶性肿瘤在体内外分化诱导剂存在下，细胞恶性行为降低，恶性表性发生改变，形态学趋于正常，呈现出向良性或趋向良性细胞分化的现象.利用分化诱导剂可使肿瘤细胞部分或全部恢复分化潜能，转变为正常细胞或导致细胞凋亡，从而达到治疗肿瘤的目的.。
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#32 #第二军医大学学报Acad J S ec M il M ed Un iv2007J an;28(1)#论 著#丁酸钠体外诱导大鼠肝卵圆细胞系WB -F344细胞分化为胆管上皮细胞唐庆贺1,杨 文2,谈冶雄2,周伟平1*(1.第二军医大学东方肝胆外科医院肝外三科,上海200438;2.东方肝胆外科研究所国际合作信号转导实验室)[摘要]目的:观察不同浓度丁酸钠对大鼠肝卵圆细胞系W B-F344细胞生长、分化的影响,探讨丁酸钠体外诱导W B -F 344细胞分化为胆管上皮细胞的条件及分化规律。
方法:不同浓度丁酸钠(0.75、2.25、3.75、4.5mmol/L )作用于WB -F344细胞(丁酸钠处理组),观察细胞形态学的变化,M T T 法检测细胞生长情况,3.75mmol/L 丁酸钠作用WB -F344细胞后,免疫组化观察细胞角蛋白19(CK 19)蛋白表达的变化;RT -P CR 观察CK 19、B 4-整合蛋白、C -谷胺酰转肽酶(GG T )以及甲胎蛋白(A F P)、白蛋白(A L B)mR N A 表达的变化。
以同期常规培养未作处理的W B -F344细胞作为空白对照组。
结果:丁酸钠处理后,各组W B -F344细胞生长均受到抑制,3.75、4.5mmol/L 丁酸钠处理组光密度值明显低于空白对照组(P <0.01),而0.75、2.25mmo l/L 组与空白对照组无明显差异;3.75、4.5mmo l/L 丁酸钠诱导后细胞变大变圆,细胞核增大,核质比减小,而0.75、2.25mmo l/L 组细胞形态无显著变化。
3.75mmol/L 丁酸钠处理组WB -F344细胞CK 19阳性率为(92.3? 1.1)%,明显高于空白对照组(1.3?0.2)%(P <0.01)。
3.75mmol/L 丁酸钠处理组可见B 4-integr in 表达,而空白对照组未见表达;GG T 、CK 19表达较空白对照组增强;空白对照组见AF P 表达,而3.75mmo l/L 丁酸钠处理组未见表达;A L B 在两组均未见表达。
结论:3.75mmol/L 丁酸钠适合体外诱导大鼠肝卵圆细胞系W B -F344细胞向胆管上皮细胞分化。
[关键词] WB -F344细胞;丁酸钠;胆管;上皮细胞;细胞分化[中图分类号] R 329.21 [文献标识码] A [文章编号] 0258-879X(2007)01-0032-04Sodium butyrate induces rat liver oval cells WB -F 344differentiating into billiary epithelium cells in vitroT A NG Q ing -he 1,YA N G Wen 2,T A N Y e -x io ng 2,ZH OU We-i ping 1*(1.Department of H epatic Surg ery Ⅲ,Easter nHepatobiliar y Surg ery H ospital,Second M ilitary M edical U niv ersity ,Shang hai 200438,China; 2.I nter nat ional Coo per atio nLabor ator y o n Sig nal T ransduct ion,Eastern H epato biliary Surg er y Inst itute)[ABSTRACT] Objective:T o investig ate the effect of sodium but ytate (different concentrat ions)on t he gr ow th and pro lifer atio n of r at liver ov al cell line WB -F 344,and to discuss the co nditions and r ules for sodium buty rate -inducd WB -F344cells differ ent iatio n int o bilia ry lineage in v itro .Methods:W B -F 344cells w ere treated w ith sodium butyr ate (0.75, 2.25, 3.75, 4.5mmol/L )and the cell g ro wt h and mo rpholog ical changes w ere observed;ro utinely cultur ed WB -F344cells w ere taken as co nt rol.T he chang es of CK19pr otein ex pr essio n w ere ex amined immunohistochemically aft er WB -F244cells wer e treated w it h 3.75%so dium but yrat e;and the ex pr essio n o f pheno typic markers,such as C -g lutamyltransferase (GG T ),B 4-integ rin,CK 19,AF P and AL B at mR N A lev el wer e determined by RT-PCR.U ntr eated WB -F344cells w ere used as blank co ntr ol.Results:We found that so dium buty rate inhibited the g row th o f W B -F344cells.T he o pt ical densities w ere sig nif icantly decr eased in 3.75and 4.5mmol/L g roups co mpar ed w ith that in contro l g ro up (P <0.01);but no sig nificant differ ence was found betw een 0.75,2.25mmo l/L gr oups w ith contro l gr oup.W B -F 344cells treated w ith 3.75, 4.5mmol/L so dium buty rate became lar ger and round,with incr eased nuclei and decr eased nucleus to cyt oplasm ratio;those tr eat ed w ith 0.75, 2.25mmo l/L had no obvio us changes.Immuno histo chemical r esults show ed that sodium butyr ate sig nificantly incr eased CK 19ex pr ession compared w it h co nt rol gr oup([92.3?1.1]%v s [1.3?0.2]%,P <0.01).RT -PCR show ed increased ex pr essio n of B 4-int eg r in in so dium buty rate treated g roups,but not in co ntr ol g ro up;the expressio n of GG T and CK 19was higher than t hat of contr ol g ro up.Alpha -feto pr otein (AF P)ex pr essio n w as observed in blank contro l gr oup,but not in sodium buty rate treated cells.A lbumin ex pression w as not detected in the 2g ro ups.C onclusion:Sodium butyr ate at 3.75mmo l/L is suitable for inducing WB -F 344cells differentiate into the biliar y lineage in v itr o.[KEY WORDS] W B -F344cells;sodium buty rate;bile ducts;epithelial cells;cell differentiation[A cad J Sec M il M ed U niv,2007,28(1):32-35][作者简介] 唐庆贺,博士生.E -m ail:peking301@h otm *Corres ponding author.E -mail:ehphw p@肝卵圆细胞被认为是肝脏中的前体细胞,大量研究[1]认为它能够在肝脏严重受损、肝细胞增殖受抑制的情况下被活化,通过增殖、分化而产生成熟的肝细胞和胆管上皮细胞,重建受损的肝组织。
目前,关于卵圆细胞分化机制的研究大多依赖于体外分化第1期.唐庆贺,等.丁酸钠体外诱导大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞分化为胆管上皮细胞#33#模型。
已有研究[2-4]证实体外肝卵圆细胞可诱导分化为成熟肝细胞,但关于其诱导分化为胆管上皮细胞的报道还较少。
丁酸钠是目前干细胞分化过程中广泛使用的一种分化刺激剂,有研究[5]发现其可以体外诱导大鼠胚胎干细胞表达部分胆管上皮细胞标记物。
本研究观察不同浓度丁酸钠对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞的分化刺激作用,初步探讨具体的诱导条件和分化规律,为后续研究奠定基础。
1材料和方法1.1材料和试剂大鼠WB-F334肝卵圆细胞系由中国医学科学院药理所韩锐教授惠赠。
TRIzol RNA 抽提试剂盒,RT-PCR试剂盒购自Gibco公司;丁酸钠、DMEM细胞培养液购自Sigma公司;胎牛血清购自杭州四季青生物公司;0.05%胰蛋白酶-EDTA购自Gibco公司;免疫组化DAKO EnVision System,细胞角蛋白19(CK19)小鼠单克隆抗体购自美国DAKO 公司;SP-9002免疫组化试剂盒、DAB试剂盒及PBS 缓冲液购于北京中山生物技术有限公司;RT-PCR所用引物由上海申能博彩公司合成。