肝素-琼脂糖凝胶6FF 说明书

肝素(Heparin)亲和层析在蛋白纯化中的应用

肝素（Heparin）亲和层析在蛋白纯化中的应用
肝素（Heparin）是一种天然产生的粘多糖，以此形式作为一个亲和配基和离子交换配基作用于宽范围的生物分子，包括凝血因子、其他血浆蛋白质、脂蛋白、蛋白质合成因子以及对核酸和类固醇受体作用的酶类。

将肝素固定在琼脂糖微球上制备的Heparin Focurose 6FF，也可以用来纯化DNA 聚合酶，低盐上样，高盐洗脱，洗脱后酶液可通过透析，超滤或者Focudex G-25凝胶过滤的方式除研。

肝素亲和填料性能参数
应用案例
样品：DNA聚合酶(大肠胞内可溶表达）
填料：汇研生物Heparin Focurose 6FF
平衡：用5CV的平衡缓冲液（50mM Tris，pH8.0平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。

上样：菌体重悬破碎液同平衡液。

为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。

淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。

洗脱：用洗脱缓冲液（50 mM Tris+1M KCl，pH8.0，KCl浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整）洗脱，收集流出液。

可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。

taq酶经肝素亲和层析一步纯化后，纯度95%。

GST琼脂糖凝胶FF

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北京卓冠科技有限公司北京市西城区德外大街 2 号 512 室
邮政编码：100011
TEL：62364123
FAX：62360884
品目录
货号
产品名称
CS-A03-00 GST 琼脂糖凝胶 FF
CS-A03-01 CS-A03-02 CS-A03-03 CS-A03-04
GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF
联系人：韦新桂
E-mail: weixingui@
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１、除去因离子交换作用吸附的蛋白，用 2-3 倍柱床体积 2M 的 NaCl 溶液淋洗柱子，再反向淋洗。２、除去蛋白沉淀、疏水性蛋白，用 1M 的 NaOH 以 100cm/h 的速度淋洗柱子 1-2h，再反向淋洗。３、所有操作中，都要用至少 3 倍柱床体积的初始缓冲液洗柱子。４、除去强的疏水性蛋白和脂质等，用 4 倍柱床体积的 70%的乙醇或者 30%的异丙醇洗柱子，再反向淋洗。八、保存在 20%乙醇，4℃下长期保存。
包装 1ml (预装柱) 25ml
100ml
500ml
大包装
载量 mg/ml
≤10mg/ml
≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml
特性及应用
平均粒径(μm)
GST 及 GST 融合蛋白
90
GST 及 GST 融合蛋白
90
GST 及 GST 融合蛋白
90

Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂)说明书

Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂）说明书货号：P2010规格：5mL/10mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年产品说明：Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose 耦连了一种四齿螯合剂NTA而得.它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。

NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。

6×His可与Ni2+螯合，从而使His 标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。

该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5-20mg/mL。

可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。

纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95%。

Ni-NTA可再生4-6次，重复使用。

本产品悬浮液为20%乙醇，已螯合Ni2+。

操作方法：A.非变性条件下抽提His标签蛋白1)准备细胞，接种，诱导表达。

收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤2操作。

2)加入1/20细胞生长体积的NTA-0Buffer和PMSF。

PMSF使用的工作浓度为1mM现用现加。

3)将细胞悬浮起来，加入溶菌酶，混匀，冰上放置30分钟，超声或匀浆破碎细胞。

该步骤冰上操作。

4)加入10%Triton X-100,使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。

5)12000rpm/min(20,000×g以上)，4°C离心15分钟以上。

取上清，置于冰上备用或-20°C保存。

6)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0Buffer洗。

7)将样品加至NTA层析柱中，流速在15mL/h左右，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的结合情况。

链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF使用说明

链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF使用说明货号：S5810产品说明：链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF利用生物素与链霉亲和素配体之间的相互作用纯化生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质。

链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，需要在变性条件下洗脱，链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在pH9.5-11.0结合，pH4.0时洗脱，不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

具体性能见表1。

性能指标基质4%琼脂糖微球配体链霉亲和素载量>120nmol/ml介质；生物素化白蛋白6mg/ml介质粒径（μm）45-165最大流速0.1MPa，1barPH稳定范围2-10储存缓冲液含20%乙醇的1×PBS储存温度2°C-8°C纯化流程：1.Buffer的准备所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

生物素或生物素化物质的纯化：结合/洗杂Buffer：20mM NaH2PO4，0.15M NaCl，pH7.4洗脱Buffer：8M盐酸胍，pH1.5亚氨基生物素标签物质的纯化：结合/洗杂Buffer：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH10.0洗脱Buffer：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH4.02.样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3.样品纯化（1）将链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer 进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

（2）将样品加到平衡好的链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF中（保证目的蛋白与链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

Heparin Beads 6FF

Heparin Beads6FF目录1.产品介绍 (1)2.纯化流程 (1)3.填料清洗 (2)4.订购信息及相关产品 (3)1.产品介绍Heparin Beads6FF是一种用于纯化肝素依赖性生物分子的亲和层析介质，包括抗凝血酶III、凝血因子和其他血浆蛋白、DNA结合蛋白、脂蛋白、蛋白合成因子、核酸作用酶和类固醇受体。

Heparin Beads6FF采用高度交联的6%琼脂糖介质，可耐受较高的流速及化学稳定性，适合大规模纯化。

具体性能见表1。

表1.Heparin Beads6FF产品性能性能指标基质高度交联的6%琼脂糖微球配体肝素钠配体密度>4mg/ml介质粒径(μm)45-165最大流速0.3MPa,3barpH稳定范围4-12储存缓冲液含20%乙醇的1XPBS储存温度2°C-8°C2.纯化流程2.1缓冲液的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

平衡液:10-100mM Tris-HCl，10mM柠檬酸钠，pH7.4洗杂液:10-100mM Tris-HCl，10mM柠檬酸钠，pH7.4洗脱液:10-100mM Tris-HCl，10mM柠檬酸钠，1M NaCl，pH7.4注:平衡液和洗脱液可根据样品性质进行适当改变，原则是低盐上样高盐洗脱。

2.2样品准备样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

2.3Heparin Beads6FF装填Heparin Beads6FF被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装，下面介绍使用Heparin Beads6FF填装层析柱的方法。

层析柱的装填（使用储液器装填）1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。

2)将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。

苏州蓝晓生物科技有限公司 Butyl Seplife 6FF 层析介质说明书

Butyl Seplife6FF说明书1.产品介绍Butyl Seplife6F层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型疏水层析介质，它是将丁基键合在6%琼脂糖凝胶上，利用疏水相互作用实现目标产物的纯化分离。

2.性能介绍产品牌号Butyl Seplife6FF外观白色球状凝胶基质Seplife6FF配基丁基形状球形耐压流速（cm/h）＊300～600cm/h（在0.15Mpa）粒径（μm）45～165蛋白吸附量﹥30mg（HSA）/ml工作温度4～40℃pH稳定性3~13（长期），2~14（短期在位清洗[CIP]）在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液，1mol/L氢氧化钠；化学稳定性70%乙醇；50%乙二醇；8M尿素；6mol/L盐酸胍；1mM HCl 耐热性121℃，0.1M NaCl溶液30min应用乙肝疫苗专用疏水介质＊检测条件：层析柱16mm×300mm；＊柱床高15cm；温度25℃；流动相为0.1mol/L NaCl。

3.使用方法3.1装柱装柱按照标准操作规程操作。

必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

3.2平衡使用2~5倍柱床体积的平衡缓冲溶液平衡柱子，直至流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全一致。

平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS中加1~2.5mol/L（NH4）2SO4等。

3.3上样（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤以后上样。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产物。

（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。

盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。

3.4洗脱采用降低盐浓度使吸附的生物分子被洗脱下来。

添加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱，最常用的是低盐浓度缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

3.5再生一般先用低盐浓度的缓冲溶液洗10倍以上的柱床体积，然后用结合蛋白的平衡液洗到平衡即可。

肝素-琼脂糖凝胶6FF的制备及其在抗凝血酶III分离纯化中的应用

肝素-琼脂糖凝胶6FF的制备及其在抗凝血酶III分离纯化中
的应用
穆成华;姚红娟;马光辉;连宾
【期刊名称】《过程工程学报》
【年(卷),期】2005(5)5
【摘要】以自制琼脂糖凝胶6FF为基质,肝素为配基,利用还原胺化方法制备了肝素-琼脂糖凝胶6FF介质.考察了肝素偶联反应的影响因素,并对其进行了优化,得到肝素配基的含量为2.7mg/mL.用所制介质从人血浆中分离出抗凝血酶III,从血浆开始计算的抗凝血酶III活性回收率为31.76%,与商品Heparin-SepharoseCL-6B的分离效果相当.
【总页数】5页(P545-549)
【关键词】亲和层析;肝素;抗凝血酶Ⅲ
【作者】穆成华;姚红娟;马光辉;连宾
【作者单位】中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室;贵州大学化学与生物工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】O657
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CM-Sepharose F.F. 使用说明

CM Sepharose Fast Flow 使用说明CM Sepharose Fast Flow是一种以琼脂糖凝胶为基质的弱阳离子交换剂，具有流速快、载量高等特征，适用于各种等电点的蛋白质分离。

该离子交换剂以羧甲基作为带电基团，在pH 6 ~ 13的范围内均处于带电状态，并在整个层析过程始终保持高容量。

A 理化性质：离子交换剂类型：弱阳离子离子载量：0.09 ~ 0.13 m mol / ml 填料颗粒结构：6%高度交联琼脂糖粒度（直径）范围：45 - 165 μm平均粒度：90 μm最大线性流速：750 cm / h ( 25℃，100 kPa，K50/30 FF柱，14-16 cm柱床高，流动相0.1 M NaCl )耐压上限：0.3 Mpa（3 bar，42 psi）工作pH范围： 6 - 13pH稳定性：长期：4 - 13在柱清洗：2 - 14对化学试剂的稳定性：对所有常用的水相缓冲液、1.0 M醋酸、1.0 M NaOH、8 M 尿素、8 M盐酸胍、乙醇、甲醇等稳定物理稳定性：因pH或离子强度的改变而引起的体积变化可忽略耐压热性：在0.1 M醋酸钠中，可承受121℃、30 min 的高压灭菌B 填料预处理：购买的CM Sepharose Fast Flow是预先溶胀好的，保存于20%乙醇中；使用前倾出20%乙醇溶液→加入初始buffer（buffer：沉淀填料= 1：3体积比）→得填料悬液。

注：初始buffer中不能含有使粘度显著增加的试剂。

C 装柱：➢将所有需要使用的仪器和试剂平衡至实验进行的环境温度；➢对填料悬液抽气；➢以buffer冲洗柱子两端的部件，排除气泡死角，尤其要确保滤网上无气泡；➢安装下端柱部件，关闭出水阀，使柱中存留几厘米的buffer；➢以连续的液流沿玻璃棒倾加填料悬液至柱中，玻璃棒下端抵靠柱内壁，尽量避免气泡的引入；➢立即以buffer充满剩余的柱体积，安装上端柱部件，并将其连接到泵；➢打开下端的出水阀，调节泵使流速合适，即装柱流速：建议≥6.7 cm/min（15 cm柱床高，25℃，低粘度buffer）；注：如果无法达到建议的装柱流速，可将泵调至最大流速；但在随后的层析洗柱的过程中，流速不能超过装柱流速的75%.➢保持装柱流速一段时间，至柱床高度恒定（大约需要流过3倍柱床体积的buffer）。

Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂)预装重力柱说明书

Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂）预装重力柱说明书货号：YA2410规格：5mL/10mL/25mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年。

产品说明：Ni NTA Beads6FF是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，配体与Ni NTA Beads相同，蛋白的载量可以大于40mg6×His-taggedprotein/ml介质；微球粒径为45–165μm。

Ni NTA Beads6FF除了可以耐受苛刻的试剂条件（多种还原剂、去污剂、高浓度变性剂等）外，因其耐压的基质，可以耐受最高0.3MPa的压力，更稳定，因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化，可以在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

本产品悬浮液为含20%乙醇的1×PBS，已螯合Ni2+。

操作方法：1、样品制备（1）细菌或酵母表达的蛋白1）挑取单菌落到LB培养基中，根据载体使用说明加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。

2）表达结束后，将培养液转移到离心杯中，7,000rpm，离心15min收集菌体，然后加入1/10体积的Lysis Buffer和PMSF，PMSF在破碎前加入，最终浓度为1mM。

加入溶菌酶（工作浓度为0.2-0.4mg/ml，如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加溶菌酶），（同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合）。

3）将菌体沉淀悬浮起来，（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。

4）将澄清的破碎液转移至离心管中，10,000rpm下，4度离心20-30分钟。

取上清，置于冰上备用或-20℃保存。

（2）酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白1）将细胞培养液转移至离心杯，5000rpm下，离心10min，收集菌体得上清，如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等物质，即可直接加入柱子使用；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，需用1×PBS4℃下透析才能加入柱子。

蓝色琼脂糖凝胶6FF使用说明

蓝色琼脂糖凝胶6FF使用说明1.简介：蓝色琼脂糖凝胶6FF是一种高亲和力树脂，可用于从复杂混合物中富集蓝色亲和结合的蛋白质。

它基于琼脂糖凝胶的基础上改性而来，通过染色剂与蛋白质之间的非共价相互作用实现蛋白质的富集。

蓝色琼脂糖凝胶6FF的独特之处在于其特定的电荷和碱基结构，可以与蛋白质中的亚甲蓝酸、负荷硫酸氨基糖苷酸或负荷正聚乳酸等带负电的结构相结合。

2.成分和特性：-孔隙率：低孔隙率（通道直径为30到40纳米）-细胞尺寸：45微米至165微米（平均值为90微米）- 动态吸附容量：2-5mg蛋白质/mL凝胶-pH稳定范围：从2至14（长时间操作适宜pH范围为3至13）-化学稳定性：抗生素、有机溶剂和洗涤剂不会影响其性能3.使用前的处理：-悬浮剂混匀：使用前需充分摇匀瓶中的蓝色琼脂糖凝胶6FF悬浮剂，确保悬浮剂均匀分布。

-预处理：将凝胶悬浮剂转移到离心管中，离心5分钟以除去胶粒。

然后将上清转移到新离心管中，以准备使用。

-储存条件：凝胶悬浮剂应存放在4°C下，并避免光照。

4.工作条件：-缓冲液：通常使用PBS（磷酸盐缓冲液）或TRIS缓冲液。

缓冲液pH应调整到蓝色琼脂糖凝胶6FF最佳工作范围内。

-调节离心速度：在操作过程中，应根据蓝色琼脂糖凝胶6FF的体积来调整离心机的转速。

通常，在使用小尺寸离心管时以1000×g离心，使用大尺寸离心管时以500×g离心。

-使用管柱：建议使用适量的硅胶管柱来提高分离纯度和减少非特异性结合。

5.操作步骤：-第一步：根据需要的操作规模，将合适的量的蓝色琼脂糖凝胶6FF悬浮剂移入离心管中。

-第二步：离心，以去除胶粒。

将上清转移到新离心管中。

-第三步：将上清与样品混合，允许接触20至30分钟。

在混匀期间，染色剂和蛋白质发生非共价相互作用。

-第四步：离心混合物并收集上清液。

收集到的上清液中富集有蓝色亲和力的蛋白质。

-第五步：如需要，再次重复步骤三和步骤四，以提高纯度。

琼脂糖凝胶6FF

琼脂糖凝胶6FF琼脂糖凝胶6FF是在琼脂糖凝胶6B的基础上经过两次交联形成的高交联基质，微球的化学稳定性及物理性能显著增强，刚性增加，流速更快，使产品处理时间大大缩短。

可用于生物大分子的凝胶层析。

1.外观本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

2.理化指标项目指标基质6%交联琼脂糖排阻极限10000~4×106(球蛋白)形状球形粒径45~165μm最高流速300cm/h*耐压0.20MPapH适用范围2~14(短时间，在位清洗)，2~12(长时间)化学稳定性以下溶液中40℃下稳定：2mol/L NaOH；70%EtOH；30%异丙醇；30%乙腈；1%SDS；6mol/L盐酸胍；8mol/L尿素*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm,25℃,流动相为0.1mol/LNaCl3包装产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小”等内容。

4贮存产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。

不能冷冻。

用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。

5注意事项本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。

6.运输运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

7保质期5年。

8应用本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。

8.1装柱凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。

凝胶柱床一般高于60cm。

装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。

以下过程为通用介质装填过程。

若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

（1）让所有的材料和试剂达到室温。

Heparin层析填料说明书

Heparin Sepharose 6 Fast Flow原理肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，将它偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的物理化学稳定性。

肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。

*图为含有交互转换的抗坏血酸的肝磷脂多糖的结构（A）和D-葡萄糖残基（B）分离操作结合缓冲液：20mM Tris-HCl, pH 8.0或者10mM 磷酸钠, pH7.0洗脱缓冲液：20mM Tris-HCl, 1~2M NaCl, pH 8.0或者10mM 磷酸钠,1~2M NaCl, pH7.01，用10倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。

2，上样。

3，用5-10倍柱体积的结合缓冲液平衡分离柱，直到基线，即所有未结合物质都被冲洗出柱子。

紫外吸光A280nm处监测。

4，用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱。

使用连续的或者阶梯式的梯度洗脱，洗脱缓冲液的浓度从0%-100%。

使用注意1，通过改变缓冲液的pH值或者离子强度来修饰肝磷脂的选择性。

洗脱时使用连续的或者阶梯式的洗脱方式，用NaCl,KCl或者硫酸铵溶液，浓度可以高达1.5~2M。

2，对于凝血因子而言，肝磷脂作为亲和配基，在结合缓冲液中含有一个低浓度的0.1M的NaCl是合适的。

3，如果增加盐离子浓度的梯度产生一个令人不满意的结果，使用肝磷脂（1~5mg/ml）在洗脱缓冲液中作为一个竞争性试剂。

净化1，用0.5个柱体积的2M的NaCl冲洗10分钟去除离子键结合蛋白。

2，通过用4倍柱体积的0.1M NaOH溶液冲洗柱子1~2小时去除沉淀物或变性蛋白或用2倍的柱体积的6M的盐酸胍冲洗柱子30~60分钟，或者用2倍柱体积的6M的尿素冲洗30~60分钟。

3，用4倍柱体积的0.1%~0.5%的TritonX-100冲洗1~2小时，去除疏水键结合的蛋白质。

琼脂糖凝胶电泳用 6

琼脂糖凝胶电泳用6×Quadricolor-loading Buffer使用说明书TaKaRa Code：D608包装量： 1 ml ×5支6×Quadricolor-loading Buffer组成EDTA 30 mMGlycerol 40%Xylene Cyanol FF 0.05%Cresol red 0.1%Bromophenol Blue 0.05%Orange G 0.1%保存：室温制品说明6×Quadricolor-loading Buffer是在琼脂糖/聚丙烯酰胺凝胶电泳中示踪核酸样品的6倍浓度的四色Loading Buffer。

向电泳样品溶液中加入1/5量即可进行凝胶电泳，并可通过Loading Buffer中的四种色素带判断电泳样品的迁移情况。

本Buffer中含有色素染料Xylene Cyanol FF，Cresol red，Bromophenol Blue及Orange G，在琼脂糖凝胶电泳时，四种染料对应的色素带分布均匀，示踪范围广，如：在0.8%琼脂糖凝胶中（在0.5×TAE中），Xylene Cyanol FF约与8000 bp的双链线型DNA的迁移率相同，而Orange G则与100 bp的双链线型DNA的迁移率相同。

另外，各色素带的迁移率依据电泳所使用的琼脂糖的浓度不同而存在差异,不同的电泳缓冲液对迁移率也有影响。

本缓冲液配制组成合理，四条色素在可见光下清晰可见，可以相对指示出大致的核酸迁移情况，且无核酸酶污染，相对于普通的loading buffer具有一定优势，是实验室常用的琼脂糖凝胶电泳的上样用缓冲液。

质量标准◆ 核酸外切酶活性检测5 μl 6×QuadriColor-loading Buffer与1 μg λ-Hin d III digest (dye-)在37℃水浴中保温12小时，未检出核酸外切酶活性。

Ni-琼脂糖凝胶6FF使用说明

Ni-琼脂糖凝胶6FF使用说明货号：P2010规格：5mL/10mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年。

产品说明：Ni NTA Beads6FF是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，配体与Ni NTA Beads相同，蛋白的载量可以大于40mg6×His-taggedprotein/ml介质；微球粒径为45–165μm。

Ni NTA Beads6FF除了可以耐受苛刻的试剂条件（多种还原剂、去污剂、高浓度变性剂等）外，因其耐压的基质，可以耐受最高0.3MPa的压力，更稳定，因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化，可以在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

Ni-琼脂糖凝胶6FF悬浮液为含20%乙醇的1×PBS，已螯合Ni2+。

操作方法：1、样品制备（1）细菌或酵母表达的蛋白1）挑取单菌落到LB培养基中，根据载体使用说明加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。

2）表达结束后，将培养液转移到离心杯中，7,000rpm，离心15min收集菌体，然后加入1/10体积的Lysis Buffer和PMSF，PMSF在破碎前加入，最终浓度为1mM。

加入溶菌酶（工作浓度为0.2-0.4mg/ml，如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加溶菌酶），（同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合）。

3）将菌体沉淀悬浮起来，（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。

4）将澄清的破碎液转移至离心管中，10,000rpm下，4度离心20-30分钟。

取上清，置于冰上备用或-20℃保存。

（2）酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白1）将细胞培养液转移至离心杯，5000rpm下，离心10min，收集菌体得上清，如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等物质，即可直接加入柱子使用；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，需用1×PBS4℃下透析才能加入柱子。

DEAE-产品说明

Bestarose DEAE-琼脂糖凝胶FF产品说明书DEAE-琼脂糖凝胶FF是将二乙胺基乙基键合在快流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阴离子交换介质。

广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

1. 外观本品呈白色，球状、无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

2. 理化指标*3．包装产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小”等内容。

4．运输运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

5．贮存产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇)，通风、干燥、清洁的地方。

不能冷冻。

用过的柱子贮存在4℃(20% 乙醇)。

6.注意事项本产品避免与氧化剂接触；避免在pH值< 4时长时间暴露(一周,20℃)。

7.保质期：5年。

8.应用本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

下面简要介绍介质的使用过程。

8.1 装柱⑴让所有的材料和试剂达到室温。

配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

⑵根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。

匀浆作脱气处理。

⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。

打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

⑸打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。

用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

8.2平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris 、PBS等。

8.3上样⑴样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。

Streptavidin Beads 6FF

Streptavidin Beads6FF目录1.产品介绍 (1)2.纯化流程 (1)3.填料清洗 (3)4.订购信息及相关产品 (3)1.产品介绍Streptavidin Beads6FF利用生物素与链霉亲和素配体之间的相互作用纯化生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质。

链霉亲和素与生物素之间的亲和力很强，需要在变性条件下洗脱，链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在pH9.5-11.0结合，pH4.0时洗脱，不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

Streptavidin Beads6FF采用高度交联的6%琼脂糖介质，可耐受较高的流速及化学稳定性，适合大规模纯化。

具体性能见表1。

表1.Streptavidin Beads6FF产品性能性能指标基质高度交联的6%琼脂糖微球配体链霉亲和素载量>200nmol Biotin/ml介质粒径(μm)45-165最大流速0.3MPa,3barpH稳定范围4-9储存缓冲液含20%乙醇的1XPBS储存温度2°C-8°C2.纯化流程2.1缓冲液的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

生物素或生物素化物质的纯化平衡/洗杂液:20mM NaH2PO4,0.15M NaCl,pH7.4洗脱液:8M盐酸胍，pH1.5亚氨基生物素标签物质的纯化平衡/洗杂液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl,pH10.0洗脱液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl,pH4.02.2样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡/洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂液透析。

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

2.3Streptavidin Beads6FF装填Streptavidin Beads6FF被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装，下面介绍使用Streptavidin Beads6FF填装层析柱的方法。

(完整版)DEAEsephroseFF说明及使用

DEAE琼脂糖凝胶FF的详细资料：英文名称：DEAE Sepharose FFCAS号：57407-08-6级别：BR凝胶类型：离子交换填料，弱碱型结构成分：6%交联琼脂糖粒径： 45-165μm配基基团：diethylaminoethyl （二乙氨乙基）蛋白质吸附量：110mgHSA/ml凝胶总离子交换量：0.11-0.16mmol/ml凝胶交换载量：3.1mg Thyroglobulin/ml drained medium；110 mg HSA/ml drained medium；100mg α-lactalbumin/ml drained medium流速：300~600 cm/h;最大流速750 cm/h工作PH值：2-9工作温度：4-40℃PH稳定性：1~14 (短时间,在位清洗);2~12 (长时间）耐压：0.3MPa性状：白色微球,凝胶状、含20%乙醇，底部为乳白色胶体用途：生化研究、适用于各种带负性电荷生物大分子的浓缩纯化等、利用离子交换作用，应用于蛋白等生物分子的快流速高产量纯化等保存：2～8℃包装：100毫升/瓶，500毫升/瓶、1升/瓶等离子交换层析分离蛋白质【实验目的】通过分离蚓激酶的实验，学习和掌握离子交换层析法的工作原理和离子交换介质的选择；了解离子交换树脂的处理及转型；学习该实验方法的筛选和基本操作技术。

【实验原理】离子交换层析是一种吸附层析，利用不同蛋白质表面电荷的差异而达到分离、纯化蛋白质的目的。

阴离子交换剂的电荷基团带正电，反离子带负电,因此这种交换剂可以与溶液中的负电荷化合物或阴离子进行交换反应；阳离子交换剂则反之。

【实验材料】0.05M Tris-HCl pH7.5、1M NaCl 0.05M Tris-HCl pH7.5、蚓激酶粗提物、20%乙醇、1MNaOH、DEAE-Sepharose Fast Flow柱、AKTA purifier 液谱纯化系统、高速离心机、电子天平、试管、一次性滤器、2ml注射器、2ml Eppendorf管、冲洗瓶、玻璃滤器【实验方法】1离子交换介质：选用Hitrap DEAE-SepharoseFF阴离子交换层析柱。

igg琼脂糖凝胶6ff实验室用途

igg琼脂糖凝胶6ff实验室用途下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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igg琼脂糖凝胶6ff是一种常用于实验室的琼脂糖凝胶，其具有多种实验室用途。

肝素-琼脂糖凝胶HP使用说明

肝素-琼脂糖凝胶HP使用说明货号:S9350规格:25ml产品说明:肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，将它偶联到活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的物理化学稳定性。

肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。

产品特性:特点基团脱落少，结合特异性强基质6%的琼脂糖凝胶配基肝素吸附载量2-3mg抗凝血因子Ⅲ（ATⅢ）/ml亲和填料的颗粒大小10-45μm最大流速150cm/hpH范围4-10，在位清洗时pH范围可到3-13使用温度4℃~常温保存温度4~8℃保存液体20%乙醇适用范围肝素琼脂糖凝胶用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。

注意事项：1、该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温，然后再装柱，以免产生气泡影响柱效。

2、吸附：20-50mM,pH7.4-8.0的缓冲液，为避免离子交换的干扰，缓冲液中可以适当加50mM-100mM的NaCl,，最常用的为Tris-HCl缓冲液。

3、洗脱：可以用pH7.4-8.0的缓冲液加0.2-2M进行阶段或者线性洗脱。

4、上样样品必须与平衡柱子的缓冲液的pH、电导相同。

5、不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。

6、肝素琼脂糖凝胶亲和填料的再生处理方法：先用0.1M Tris-HClpH7.0缓冲液洗3个柱床体积，然后用0.1M NaOH含2MNaCl流洗3个床体积,最后用20%乙醇洗3个床体积即可。

长时间用酸碱洗填料会是填料的吸附能力下降，所以清洗要尽量缩短时间。

7、该亲和填料保存条件为20%乙醇，4-8℃。

特别注意：上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

苯甲脒琼脂糖凝胶 FF使用说明

苯甲脒琼脂糖凝胶FF使用说明货号：S9390规格：25ml/100ml一、简介苯甲脒类物质是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂，所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶6B上，可以从各种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。

苯甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高，非特异吸附少，而且填料粒度均匀，所以分离效果好，是纯化丝氨酸蛋白酶类最适合的填料。

二、亲和填料特性特点载量大，分辨率好，流速高，使用方便。

基质6%的交联琼脂糖凝胶配基苯甲脒配基密度7μmol/ml吸附载量13mg胰蛋白酶/ml填料的颗粒大小45-165μm最大流速300cm/hpH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-11保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇三、适用范围本一步从各种样品中纯化丝氨酸蛋白酶类物质。

四、应用实例实验名称：苯甲脒琼脂糖凝胶FF分离尿激酶。

实验步骤：（1）苯甲脒琼脂糖凝胶FF装柱，1.6×20m，柱床体积为10ml（2）用缓冲液1平衡2-5个床体积，流速为2ml/min（3）取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的缓冲液1中，用0.45μm的滤膜过滤，上样，流速为1ml/min（4）用缓冲液1再洗2-5个床体积，流速为2ml/min（5）最后缓冲液2进行洗脱，流速为2ml/min，收集洗脱峰，用SDS-PAGE纯化后的效果。

（6）用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl 和100mM,pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用纯水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇流洗3个柱床体积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存。

（7）色谱图见图1，SDS-PAGE结果见图2。

缓冲液组成：缓冲液1：100mM pH7.4的PBS缓冲液；缓冲液2：100mM醋酸缓冲液，pH4.0。

也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋白酶类蛋白酶。