2 -干扰和回收实验--张传宝

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从评价的角度看，干扰既可造成系统误差，也可造成随机
误差。

对于一个特定的病人群体，样本中干扰物的平均浓度可以 造成系统偏差，而对个体病人，干扰物带来的误差取决于
它在标本中的浓度。
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通过与检测试剂竞争或抑制指示反应；

干扰物具有与被测物相似的性质，（如荧光、颜色、光散
文献中提及的对与被评价方法类似的其他方法有干扰作用的物质。


饮食：咖啡因、β-胡萝卜素、罂粟籽等。
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干扰物的实验浓度确定原则
可能干扰物 样品类型 血清、血浆与全血 药物与代谢物 尿液 内源性干扰物 抗凝剂与防腐剂 尿液 五倍于24小时尿清除率 样品与设备接触24小时，样品体积应与 实际使用相同，需注意防止样品蒸发与 不稳定分析物的丢失，同时应准备一份 与实验样本相同的对比样本，此样本除 了不与实验设备接触外其余处理过程均 与实验样本相同。
CLIA’88中的质量规范 允许的偏倚 10.0% 10.0% 15.0% 10.0% 15.0% 15.0% 5.0% 5.0% 允许总误差 20% 20% 30% 20% 30% 30% 10% 10%
8.5% 1mg/dl或4.5% 0.15mg/dl或7.5% 3mg/dl或5% 5.0% 12.5% 15.0%

Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP7-A2 ; 《临床检验方法确认与性能验证》P240； 中华人民共和国卫生行业标准《干扰实验准则》；
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基于生物学变异的质量规范 分析 项目 ALT AST AMY LDH CK GGT ALP TP ALB T-BIL D-BIL UA UREA CREA GLU T-C TG LDL-C HDL-C Apo A1 Apo B K Na Cl Ca Mg P 允许CV% 12.2 6 4.8 4.3 11.4 6.9 3.2 1.4 1.6 12.8 18.4 4.3 6.2 2.2 3.3 3 10.5 4.2 3.6 3.3 3.5 2.4 0.4 0.6 1 1.8 4.3 允许的偏倚 （%） 2 5.4 7.8 4.3 11.5 10.8 6.4 1.2 1.3 10 14.2 4.8 5.5 3.4 2.3 4.1 10.7 6.8 5.2 3.7 6 1.8 0.3 0.5 0.8 1.8 3.2 允许总误差（Tea，%） 期望 32.1 15.2 15.7 9.5 30.3 22.2 11.7 3.4 3.9 31.1 44.5 11.9 15.7 6.9 7.9 9 28 13.6 11.1 9.1 11.6 5.8 0.9 1.5 2.4 4.8 10.2 最低 48.1 22.8 23.5 14.2 45.5 33.3 17.5 5.2 5.8 46.6 66.8 17.9 23.5 10.4 11.8 13.6 42 20.4 16.6 13.6 17.5 8.7 1.3 2.2 3.6 7.2 15.3 0.17mol/L 0.13mmol/L 1.67% 0.33mg/dl 8.33% 10.0% 5.67% 0.33mg/dl或4.5% 0.1mg/dl或5% 2mg/dl或3.3% 3.33% 8.33% 10.0% 3.33% 3.33% 允许变异 6.67% 6.67% 10.0% 6.67% 10.0%
验证，

在实验室中对干扰物质引起的误差的判定却非易事。任可 一个测量程序都可能存在干扰物质。
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不准确度（inaccuracy）又称分析总误差（total analytical error）主要受三个因素影响：不精密度、方 法学系统误差和样本误差。 实验室可以通过对测量程序的评估，对不精密度和方法学 系统误差进行分析，但通常把样本误差（干扰）看成是个 别样本的问题，而不是测量程序的问题。 干扰物对检测结果的影响可通过一些方法进行补偿或修正， 使干扰效果在特定病人群体中减小。对于常见的内源性干 扰物（如胆红素、血红蛋白、脂类等），可通过样品前处 理、样品空白、血清基质校准或数学修正等方法减少干扰 效果。
根据被评价方法的检测原理和预期用途列出可能引起干扰 效果的物质清单。 常见的可能产生干扰作用的物质：
样本中的异常物质：溶血、黄疸、脂血。 药物：常见处方与非处方药，接受某项目检测的特定病人群体中常用的药物。 代谢物：在特定病人群体中可能出现的异常生化代谢物与药物代谢物。

样品添加剂及在样品采集与处理过程中可与之接触的物质：抗凝剂（肝素、EDTA、 柠檬酸盐、草酸盐等）与防腐剂（NaF、HCl、碘醋酸盐等），血清分离胶，样品采集 容器及胶塞、导管、导管冲冼液、皮肤消毒剂、手部清洁剂、玻璃清洗液、手套粉未 等。


计算样本量：测量程序所需样本量、实验所需样本数量、 重复测定次数。 调整分析物浓度。
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Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP7-A2 ; 21:13:59
17% 2mg/dl或9% 0.3mg/dl 或15% 6mg/dl或10% 10% 25% 30%
0.2mmol/L 2mmol/L 2.5% 0.5mmol/L 12.5%


干扰物：
不是被测量，但对测量结果有影响的量。


干扰标准：
被测物浓度与真值间可产生的最大允许干扰偏差，此偏差可能影响医生的医 疗决定。


总分析误差：
测定值与参考值间的差异。
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关于“确认” (Validation)
方法学研究或方法产品性能研究 由方法建立者或产品生产者完成 给出主要方法性能： ―准确度(accuracy)
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获取纯的干扰物质；物质能够实现准确定量，如称重、使 用标准物质或标准液； 选择能获得足够溶解度的溶剂；且溶剂本身不能是干扰物 质。 为避免稀释样本基质，储备液的浓度至少应该是干扰浓度 的20倍，即加入体积不能超过总样本的5%（10%）。
Байду номын сангаас

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实验样本：基础样本+干扰物储备液（体积不超过5%）；一般加入的 浓度接近病人样本中可能出现的最大浓度水平； 对照样本：基础样本+与实验样本加入量相等的溶剂；以保证样本基 质的一致性。 所有样本应该进行双份测定。
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临床可接受标准 基于生物学变异的标准； 基于分析变异的标准； 基于临床实验的标准； 统计学标准
张传宝 卫生部临床检验中心 cbzhang@nccl.org.cn
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干扰实验 回收实验
试验：为了察看某事的结果或某物的性能而从事某种活动。 如：试验新机器。 实验：为了检验某种科学理论或假设而进行某种操作或从事 某种活动。如：做科学实验。 《现代汉语词典》
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射、电极反应等；）

干扰物可以改变样本基质的物理性状，（如粘度、表面张
力、浊度、离子强度，等）
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干扰物可通过屏蔽金属离子（激活剂）、结合活性位点、 氧化巯基等改变酶（被测物或试剂）的活性，也可在竞争 酶反应过程中的关键底物。 干扰物发生与被测物相似的反应。 在免疫化学反应过程中，干扰物结构与抗原类似，而与相 应抗体发生交叉反应。
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异常标本：如溶血、黄疸、脂血，等


处方及非处方药；
异常生化代谢：糖尿病、多发性骨髓瘤、肾病 样本添加剂，如抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸盐、草酸
盐，等），防腐剂（氟化钠、碘乙酸、盐酸，等）
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instruments have been calibrated and maintained according to the manufacturer’s instructions;按照仪 器厂家的要求进行校准和维护。 the analytical system is in control and performing as expected; 进行质控，结果良好。 all operators have been trained and demonstrate acceptable proficiency; and操作人员经过培训，具备 熟练操作仪器的能力。 laboratory safety procedures are being followed。 按照生物安全操作程序进行。
---陈文祥
[The U.S. CLIA]
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回收实验


干扰实验
方法学对比 测定标准物质
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1 病理条件下产生的代谢物 如：糖尿病、多发性骨髓瘤，等 2 由治疗过程引入的化合物 如：药物、非肠道营养物、血浆扩 充剂，抗凝剂，等。 3 病人本身原因引入的物质 如：饮酒、滥用药物、补品、不同 饮食习惯，等 4 标本处理过程中的添加物 如：抗凝剂、添加剂、稳定剂，等。
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干扰物实验浓度 至少三倍于治疗药物浓度或最高预期浓 度 至少三倍于24小时尿清除率 目标病人群体中预期最高浓度 五倍于添加浓度
血清、血浆与全血 血清、血浆与全血
样品采集与处理设备
血清、血浆、全血、尿液
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胆红素：标准溶液； 溶血：血红蛋白溶液； 脂血： Vit C： 样本管添加剂干扰：
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干扰实验的目的是评估被分析样本中由其他物质引起的系 统误差，这些误差是恒定系统误差 特定浓度的干扰物质一般引起恒定数量的误差，而与被分 析物的浓度无关。 误差大小主要受样本中干扰物质浓度影响。

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干扰：
在临床化学中，被测物浓度因样品特性或其它成分的影响而出现的临床显著 性偏差。这种影响可见于检测系统的非特异性、指示反应响应不佳、被测物 活性抑制等情况。
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建立被评价方法的干扰标准 确定被测量的实验浓度 列出可能干扰物清单 确定干扰物的实验浓度 仪器、试剂、人员的准备 干扰物筛查实验 干扰物剂量效应评价实验
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患者样本(serum, plasma, whole blood, cerebrospinal fluid,urine, and most other body) 混合患者样本； 标准溶液或者其它制备物； 需确认测试样本同临床样本具有相似的反应性。
5 操作过程对样本的污染 6 样本本身的基质效应
如：护手霜、手套粉、血清分离器、 采血管盖，等 如：化学和物理性质不同于理想的 新鲜样本。
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临床实验室测量过程中，干扰物质可以是测量误差的重要
来源；

实验室测量的精密度可以通过室内质控进行监测，准确度 则可以通过回收实验、或与参考物质或方法进行比较进行
―精密度(precision)
―特异性(specificity) ―检测限和定量限(LOD and LOQ, "灵敏度")
―线性(linearity)
―耐变性(robustness) ... ...
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---陈文祥
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关于验证 (Verification)
对主要方法性能的证实 在引入新方法时进行 对配套系统，一般验证下列指标： ―准确度(accuracy) ―精密度(precision) ―可报范围(reportable range) ―参考区间(reference interval) 对非配套系统，验证更为广泛，除上述指标外： ―分析特异性 ―分析灵敏度 ―任何其他必要指标