回收实验干扰
【检验医学】方法学评价实验
◈⊃ ► ◄ ■
测定误差与选定的可允许误差比较, 判断方法的可接受性
性 能 指 标
正
精
携 带
确
密
污
度
度
染 率
◈⊃ ► ◄ ■
可
生
报
物标
告
参准
范
考化
围
区间验证
正确度的评价
正确度：是指由大量测试结果得到的平均数 与真值的一致程度，以偏倚来表示，偏倚 小则说明正确度高，偏倚大则说明正确度 低。
*干扰试验 *回收试验 *方法比较试验
▪ 由于干扰物质的种类很多，影响因素非常复杂，到 目前为止，实验室只能对极少数的干扰物做出评价。
◈⊃ ► ◄ ■
可报告范围评价
▪ 分析测量范围 指对没有进行任何预处理(稀释、浓缩等) 的标 本，分析方法能够直接测定出的待测物的范围。也就是系统 最终的输出量（活性或浓度）与被分析物的活性或浓度成线 性比例的范围，它反映整个系统的输出特性。常用线性试验 来评价实验方法的分析测量范围
◈⊃ ► ◄ ■
干扰实验
▪ 干扰实验是评价被分析样本中其他物质引起实验方法的系统 误差，以评价方法的准确度。因为特定浓度的干扰物质一般 引起恒定数量的误差，而与样本中被分析物的浓度无关。
▪ 误差大小受样本中干扰物浓度影响。 ▪ 临床检验绝大部分反应是以血清为介质，在测定某分析物的
浓度或活性时，除参与反应的物质外，还有许多复杂成分通 过直接参与反应、抑制反应或激动反应等方式对反应过程进 行干扰，从而使检测结果出现偏差。 ▪ 例如葡萄糖氧化酶反应测量葡萄糖，其中产物过氧化氢可能 与尿酸起反应，干扰可能是轻微的。因此，临床实验室应对 影响实验的干扰物质进行评价，了解干扰物质的种类及干扰 特性，对检测结果做出评价。
关于加标回收的标准
加标回收的标准样品类型和来源加标回收实验适用于各种类型的样品，包括但不限于水样、土壤样、生物样等。
样品的来源应具有代表性，且经过有效采集和处理，以保证实验结果的准确性。
添加标准物质的种类和浓度在加标回收实验中，应选择合适的标准物质，包括其种类和浓度。
应根据样品的性质和实验目的选择标准物质，同时考虑其稳定性、溶解性等因素。
添加标准物质的浓度应适中，以避免对样品产生过度干扰。
回收率的计算方法回收率是加标回收实验的重要指标，其计算方法包括以下步骤：（1）对添加标准物质后的样品进行测定，得到样品中目标物质的浓度c1；（2）对未添加标准物质的相同样品进行测定，得到样品中目标物质的浓度c0；（3）根据公式计算回收率：回收率=（c1-c0）/添加标准物质的浓度×100%。
实验操作规范在进行加标回收实验时，应遵循以下操作规范：（1）按照规定的方法和步骤进行实验操作，避免误差和干扰；（2）在实验过程中，对每个步骤都要详细记录，以便后续分析和处理；（3）在实验结束后，对实验结果进行审核和校验，确保数据的准确性。
结果报告格式加标回收实验的结果应按照以下格式报告：（1）报告实验目的、样品类型、添加标准物质的种类和浓度等信息；（2）报告实验结果，包括每个样品的浓度、平均浓度、标准差等信息；（3）根据需要，可以绘制相应的图表或曲线，以直观地展示实验结果。
实验质量保证为保证加标回收实验结果的准确性，应采取以下措施：（1）使用经过认证的标准物质，并定期进行校准和维护；（2）采用可靠的实验室设备和仪器，并按照规定进行操作和维护；（3）对实验数据进行审核和校验，及时发现并纠正错误。
实验记录与存档要求加标回收实验的记录和存档要求包括：（1）对实验全过程进行详细记录，包括实验目的、样品信息、添加标准物质信息、实验操作步骤、实验结果等；（2）将实验记录整理成册，并按照实验室档案管理规定进行存档；（3）对实验数据进行分析和处理，并将分析结果和数据处理过程记录在实验记录中。
临床生化检验：7-回收试验
• 回收实验可以对分析方法受基质效应的影响 作出估计。
试剂与器材
• 生理盐水 • GOD-POD试剂盒单一试剂
葡萄糖标准液（80mmol/L） • 标本：患者混合血清(2.2mmol/L) • 标准血清（血糖浓度6.41mmol/L） • 蒸馏水
?加入标准液的体积不得超过血清样品的10避免将血清稀释过度引起误差的改变或消失?加入标准液后最好使实验标本的被测定浓度达到医学决定水平
回收试验
检验系生化教研室
方法学评价试验
• 方法学评价的基本内容是通过实验途径， 测定并评价方法的精密度和准确度。
• 评价方法准确度的实验有： 方法比较实验、回收试验和干扰试验
GOD-POD法测血糖原理
葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOD）的作用下生 成葡萄糖酸和过氧化氢。后者与酚和4-氨基 安替比林（4-AAP）在过氧化物酶（POD） 的作用下生成红色的醌类化合物。可在 500nm处检测，其颜色的深浅与葡萄糖含量 成正比。
操作步骤-标本制备
U①基 础 管：血清0.9ml+0.1ml生理盐水
×100%
回收试验的数据处理
样品
基础样品 回收管Ⅰ 回收管Ⅱ 回收管Ⅲ 平均回收率
测定浓度 (mmol/L)
加入浓度 (mmol/L)
—
回收浓度 (mmol/L)
—
回收率 （%）
—
注意事项
• 准确加量是本实验最主要的技术关键（被分析物 的理论值是根据加入标准液体积及原标本体积所 得到的，吸量稍不准确就会影响结果。）
评价
• 一般要求回收率在95%～105%，最为理 想的回收率为100%。
回收率试验不及格
回收率试验不及格⼀、引⾔在化学分析中，回收率试验是⼀个重要的步骤，⽤于评估实验⽅法的准确性和可靠性。
回收率试验不及格意味着实验结果可能存在偏差，⽆法准确反映样品的真实成分。
本⽂将重点探讨回收率试验不及格的原因及改进措施，以确保实验结果的准确性。
⼆、回收率试验不及格的原因1.实验操作误差：实验操作不规范、操作步骤错误或操作顺序颠倒等都可能导致回收率试验不及格。
2.样品处理不当：样品处理过程中，如溶解、萃取等步骤出现错误，可能导致⽬标成分损失或引⼊杂质，从⽽影响回收率。
3.试剂纯度问题：试剂纯度不⾜或存在杂质，会影响实验结果，导致回收率不及格。
4.仪器设备问题：仪器设备故障或误差、仪器校准不及时等都可能影响实验结果的准确性，进⽽导致回收率不及格。
5.环境因素影响：实验室环境条件如温度、湿度、空⽓质量等也会对实验结果产⽣影响，导致回收率不及格。
三、提⾼回收率试验的措施1.严格遵守实验操作规程：实验操作必须按照标准规程进⾏，不得随意更改操作步骤或操作顺序。
同时，实验过程中要保持注意⼒集中，避免因疏忽导致操作失误。
2.样品处理规范化：样品处理过程中应遵循规范的操作程序，保证样品的均匀性和代表性。
在处理过程中要防⽌样品污染或损失，确保⽬标成分的完整性。
3.保证试剂纯度：选⽤⾼纯度试剂，避免试剂中的杂质对实验结果产⽣⼲扰。
对于试剂的储存和使⽤要遵循规定，避免试剂变质或被污染。
4.仪器设备维护与校准：定期对仪器设备进⾏维护和校准，确保其性能稳定、准确度⾼。
在使⽤仪器设备之前，应检查其是否处于正常⼯作状态，避免因设备故障或误差导致实验结果偏差。
5.控制环境因素：实验室环境条件应符合实验要求，如温度、湿度、空⽓质量等。
在实验过程中要保持实验室的整洁和安静，避免环境因素对实验结果产⽣⼲扰。
6.提⾼实验⼈员的素质：实验⼈员的素质是影响实验结果的重要因素之⼀。
应定期对实验⼈员进⾏培训和考核，提⾼其专业技能和素质，确保其能够熟练掌握实验操作和技能，遵守实验室规章制度。
危险废物鉴别标准 浸出毒性鉴别 考核题及答案
危险废物鉴别标准浸出毒性鉴别姓名：分数：一、填空题（每空5分，共40分）1.当火焰温度高到足以导致中性原子失去电子而成为带正电荷的离子时，会发生电离干扰。
在标准和试样中都加入超过量的浸电离_元素，可控制这类干扰。
2.测定危险废物浸出液中总铭时，样品中碱金属含量比标准高很多，应当在样品和标准中加入电离抑制剂。
3.测定危险废物浸出液中锌时，加入锢溶液（1500mg∕L）可消除血和磷酸盐的干扰。
4.固体废物遇水浸沥，浸出的有害物质迁移转化，污染环境，这种危害性称为浸出毒性。
5.样品中含有初始液相时，应将样品进行压力过滤，再测定」⅛丸的含水率,并根据总样品量（初始液相与滤渣重量之和）计算样品中的干固体百分率。
二、判断题（每小题5分，共20分）1.根据《固体废物浸出毒性浸出方法硫酸硝酸法》（HJ/T299-2007）用于浸出的样品颗粒可以通过9.5mm孔径的筛即可。
（J）2.根据《固体废物浸出毒性浸出方法硫酸硝酸法》（HJ/T299-2007）用于浸出的样品含有初始液相时，对于干固体百分率小于或等于5国的，初始液相即为浸出液；对于干固体百分率大于95%的，需将滤渣按要求浸出。
（X）3.根据《固体废物浸出毒性浸出方法硫酸硝酸法》（HJ/T299-2007）用于测定汞的样品从采集到浸出最多可保留28天。
（√）4.当分析样品中可溶性碑时，不要求冷藏，但应避光保存，温度不能超过室温。
（√）三、简答题（共40分）简述测定危险废物浸出液时如何确定是否存在干扰？答：1.稀释实验：在试样中选一个有代表性的试样做逐次稀释以确定是否有干扰存在，试样中分析元素的浓度至少为其检出限的25倍。
测定未稀释的试样的浓度，将试样稀释至少5倍后在进行分析。
如果所有试样的浓度均低于检出限的10倍，则需做加标回收分析。
若未稀释试样和稀释了5倍的试样的结果一致（相差在10%以内），则表明不存在干扰。
2.回收实验：如果稀释实验的结果不一致，则可能存在基体干扰，需要做加标样品分析确认。
干扰和回收实验
允许总误差（Tea，%）
期望 32.1 15.2 15.7 9.5 30.3 22.2 11.7
TP
ALB T-BIL D-BIL UA UREA CREA GLU T-C
1.4
1.6 12.8 18.4 4.3 6.2 2.2 3.3 3
1.2
1.3 10 14.2 4.8 5.5 3.4 2.3 4.1
―准确度(accuracy)
―精密度(precision)
―可报范围(reportable range) ―参考区间(reference interval) 对非配套系统，验证更为广泛，除上述指标外： ―分析特异性 ―分析灵敏度 ―任何其他必要指标
---陈文祥
[The U.S. CLIA]
建立被评价方法的干扰标准 确定被测量的实验浓度 列出可能干扰物清单 确定干扰物的实验浓度 仪器、试剂、人员的准备 干扰物筛查实验 干扰物剂量效应评价实验
患者样本(serum, plasma, whole blood, cerebrospinal fluid,urine, and most other body) 混合患者样本； 标准溶液或者其它制备物； 需确认测试样本同临床样本具有相似的反应性。 计算样本量：测量程序所需样本量、实验所需样本 数量、重复测定次数。 调整分析物浓度。
获取纯的干扰物质；物质能够实现准确定量，如称重、使用标准物质 或标准液； 选择能获得足够溶解度的溶剂；且溶剂本身不能是干扰物质。 为避免稀释样本基质，储备液的浓度至少应该是干扰浓度的20倍， 即加入体积不能超过总样本的5%（10%）。
回收率不合的原因
回收率不合的原因一、样本本身的问题哎呀，你想啊，样本要是一开始就有问题，那回收率不合太正常啦。
比如说样本的采集过程就不规范，采集的时候就有杂质混进去了，这就像做饭的时候食材没洗干净一样，那做出来的饭能好吃吗？肯定不能啊。
还有啊，样本的储存条件要是不合适，有些东西可能就变质了或者发生反应了，这样在进行回收率检测的时候，结果肯定就不对喽。
就好比你把水果放在高温下很长时间，它都烂了，你再想得到好的果汁，那是不可能的啦。
二、实验操作的失误这可太容易发生了。
实验仪器要是没校准好，那测量出来的数据能准吗？就像你拿一个不准的秤去称东西，称出来的重量肯定不对呀。
操作人员要是操作不熟练或者不小心，也会影响回收率。
比如说在进行萃取或者过滤等操作的时候，没有按照标准的步骤来，漏了一步或者多做了一步，那最后的结果肯定就偏差很大了。
这就像你走迷宫，走错了路，肯定到不了正确的出口啦。
而且啊，在加试剂的时候，如果量加错了，要么太多要么太少，都会对回收率有影响。
这就好比做菜的时候盐放多了或者放少了，菜的味道就不对了。
三、试剂的影响试剂的纯度可是很关键的哦。
如果试剂不纯，里面有其他的杂质，就会干扰实验的结果。
就像你本来要加白糖，结果加了混有沙子的糖，那做出来的甜品肯定不好吃。
还有试剂的稳定性，如果试剂不稳定，在实验过程中发生了分解或者变质，那也会影响回收率。
这就像你用快过期的牛奶做蛋糕，蛋糕可能就发不起来了。
而且不同批次的试剂可能也会有差异，如果没有注意到这一点，也可能导致回收率不合。
四、环境因素环境对实验的影响也不容小觑呢。
温度、湿度这些因素都很重要。
如果温度不合适，可能会影响反应的速度或者平衡，就像有些化学反应在高温和低温下进行的结果是完全不同的。
湿度要是太大，可能会让样本或者试剂受潮，这样也会影响实验结果。
还有实验室的通风情况，如果通风不好，有些反应产生的气体可能会影响实验的准确性，就像人在一个空气不流通的房间里会感觉不舒服一样，实验在这样的环境下也不会得到好的结果。
加标回收实验的实施及回收率计算的研究
（3）实验操作：根据设计方案，对处理后的样品进行回收实验。具体操作 过程包括加入标准物质、进行化学反应、分离和富集等。
（4）数据记录：详细记录实验过程中的各项数据，如加入标准物质的量、 反应时间、温度等。
3、实验结果
根据记录的数据，计算回收率、测定目标物质的含量，并对实验结果进行分 析和讨论。
实验实施
1、实验设计
在进行回收实验前，需要根据研究目的和实际状况，设计合理的实验方案。 具体包括：确定目标物质、选择合适的采样方法和样品处理方式、设定对照组等。
2、实验过程
（1）样品采集：根据实验目的和设计方案，选择具有代表性的样品进行采 集。
（2）样品处理：对采集的样品进行预处理，如过滤、浓缩、萃取等，以使 目标物质得到充分的分离和富集。
回收率计算
回收率是指实验过程中目标物质的回收比例，可采用以下公式进行计算： 回收率 = (测定值-空白值) /加入标准物质的量 × 100%
其中，测定值是指实验后目标物质的测定值，空白值是指未进行回收实验的 空白样品的测定值，加入标准物质的量是指回收实验中加入的标准物质的质量。
1、回收率过低
如果回收率过低，说明实验过程中目标物质损失较大，可能是由于实验条件 不够优化、样品处理不当等原因引起的。这种情况下，实验结果可能存在较大误 差，影响研究的准确性和可靠性。
实验讨论
根据实验结果，对加标回收实验的优点和不足进行讨论和分析。例如，加标 回收实验能够有效地评估方法的准确性和可靠性，但可能会受到基质干扰等因素 的影响。此外，实验中使用的标准物质和待测样本的稳定性也会影响实验结果的 可重复性。
结论
总结加标回收实验方案的关键步骤和注意事项，提出改进意见。例如，选择 稳定性更高的标准物质和待测样本，优化基质干扰的消除方法等。通过改进加标 回收实验方案，可以提高实验结果的准确性和可靠性，从而更好地为环境监测、 生物分析以及化学分析等领域提供支持。
实验三 GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干扰试验1
4、消除干扰的方法有
1）空白对照 包括试剂空白和标本空白。 2）物理、化学方法去除干扰（可能会引入新的干扰） 3）只使用对干扰物的敏感度不高的方法。如：己糖激酶法 测定GLU，酶法测定肌酐等 4）以两点法或双波长法消除部分干扰，可以设计双试剂法 消除内源性干扰
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样 品的10%，避免将血清稀释过度，引起误差 的改变。
3．准确加量是最主要的技术关键。
注意事项(干扰试验)
1、加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所 见浓度的上限，有可能时应达到病理标本 的最高值。
2、凡可疑干扰物都应做，这里仅是举例示范。 3、适当增加测定次数以减少实验的随机误差。
样本测定
37 ℃水浴，10分钟，500nm比色。
结果计算-回收率
加入浓度= 标准液浓度* 标准液量ml 血清量(ml) 标准液量(ml) 生理盐水量(ml)
回收浓度 = 分析样品测得浓度 – 基础样品测得浓度
回收率（%）=
回收浓度 加入浓度
100％
一般要求回收率95-105%
干扰值计算
试剂与器材
1、试剂组成：R1：苯酚10mmol/L，POD>1000U/L，抗VIC氧化 酶； R2： GOD>1600U/L, 4-AAP2mmol/L
2、试剂包装：R1及R2，标准液浓度5.55 mmol/L 3、工作试剂配制：本试剂盒为液态双试剂，加双试剂的仪器
可直接应用，试剂更稳定，加单一试剂的仪器临用时缓冲 液和酶溶液以R1：R2=3:1的比例混合。
干扰物加入浓度= 干扰物浓度*
干扰物溶液量 ml
血清量 (ml ) 干扰物溶液量 (ml ) 生理盐水量(ml )
干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值
临床检验方法学性能评价
5 操作过程对样本的污染 6 样本本身的基质效应
如：护手霜、手套粉、血清分离器、采 血管盖，等
如：化学和物理性质不同于理想的新鲜 样本。
测量过程中的干扰因素
不准确度（inaccuracy）又称分析总误差 （total analytical error）主要受三个因素 影响：不精密度、偏倚和样本误差。
北京市部分临床检验项目不精密度建议
肌酸激酶
靶值±21%
6.6
碱性磷酸酶
靶值±27%
4.8
γ‐谷氨酰基转移酶
靶值±20%
6.4
白细胞
靶值±10%
3.9
红细胞
靶值±4%
2.4
血红蛋白
靶值±4.5%
2.1
红细胞压积
靶值±5%
2.1
血小板
靶值±14%
6.8
乙肝表面抗原
3份样本定性均符合
NA
乙肝表面抗体
3份样本定性均符合
准确度
方法学比对 样本数：20
临床准确性
区分不同健康状况的能力； 阳性结果：真阳性和假阳性 阴性结果：真阴性和假阴性 临界值改变：影响灵敏度和特异性
准确度及其评价
回收实验 干扰实验 方法学对比
临床对“准确性”的要求
实验室提供的检验结果或数据，应有助于临 床医生进行疾病诊断、疗效评估和预后判 断。
除了计量学准确性外，实验室还应对检验方 法的临床准确性进行评价。
回收实验
用于评估实验方法正确测定在常规样本中加 入的被测物量的（质量、浓度、活性）能 力；
通过测定比例系统误差，对实验方法的准确 度进行评价。
回收实验的基本要求
使用常规样本基质，如血清或血浆；如果加入的被测物为液 体，应控制体积在10%以内；
3.回收试验
操作提醒
• 准确加样在本实验中尤其重要，如果吸量稍不 准确就会很大影响结果。
实验原理
首先用候选方法测定基础样本和回收样本相 应物质的浓度，然后计算回收率。通过回收率 判断该方法比例系统误差的有无或大小，从而 对候选方法的准确性作出可靠评价。
实验器材
微量移液器 吸量管
722型可见光分光光度计
水浴箱
实验试剂
1．正常人混合血清
2．80mmol/L葡萄糖标准液（1.44g无水葡萄糖 +100ml蒸馏水） 3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒
基础样品及回收样品制备 （实验准备前工作）
基础样品：混合血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 回收样品Ⅰ：混合血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄 糖标准液+0.09ml蒸馏水 回收样品Ⅱ ：混合血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄 糖标准液+0.01ml蒸馏水
学生按下表操作
回收试验
回收
• 回收是指分析方法准确测定加入常规分析样品中的纯 分析物的能力，用于反映分析方法的比例系统误差。
实验误差
恒定系统误差 CE：与干扰物有关 系统误差 SE
实验误差 比例系统误差 PE：与被测物浓度有关 随机误差 RE：是由一些偶然的原因造成的
实验目的
1.掌握回收试验的原理。 2.熟悉实验方法和操作过程。 3.掌握实验数据处理的方法。
计算结果请填入表内：
平均吸光度 测定浓度 加入浓度 回收浓度 回收率
基础样品 回收样品Ⅰ
—
—
—
回收样品Ⅱ 平均回收率
—
—
—
—
回收试验数据处理
1．加入浓度计算： 加入浓度(mmol/L)=加入标准液量ml/(混合血清量ml+标准液量ml)× 标准液浓度（80mmol/L） 2．回收浓度计算： 回收浓度＝回收样品测定浓度－基础样品测定浓度
临床生化检验：8-方法学评价 干扰试验
定的医学决定水平为2.8、6.7、8.9mmol/L。 • 4、标本加入标准液后，总浓度必须在方法的分析范围内，一般须加入高中低
不同浓度做回收试验，计算干扰值。 • 4、加入可疑干扰物浓度应明显高于通常所见浓度的上限，最好达到病理标本
按表加入标本及试剂
加入物（ml） B S
U①
U②
U③
U④
蒸馏水 标准血清 基础U① 干扰U② 干扰U③ 干扰U④ 试剂
0.03 —
—
— 0.03
—
—
—
0.03
—
————————
3
3
3
— — — 0.03 — — 3
—
—
—
—
—
—
—
—
0.03
—
—
0.03
3
3
各管混匀，置37℃水浴中保温5分钟，在波长500nm处比色，以B管调零 读取各管吸光度（A）。
16
8
操作步骤1-标本制备
U①基 础 管：血清0.9ml+0.1ml生理盐水 U②干扰管Ⅰ：血清0.9ml+750mg/L维生素C溶液0.1ml U③干扰管Ⅱ：血清0.9ml+500mg/L维生素C溶液0.1ml U④干扰管Ⅲ：血清0.9ml+250mg/L维生素C溶液0.1ml
9
操作步骤2-浓度测定
的最高值。 • 5、干扰物对测定的影响与被分析物浓度无关，而与干扰物本身的浓度有关，
所以产生的是恒定系统误差。 • 6、与回收实验不同，计算不同干扰物浓度下的平均干扰率无意义。 • 7、如要区别干扰还是方法的特异性差，可用干扰物的纯溶液作为样本测定，
体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则
附件：《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》目录1.体外诊断试剂分析性能评估指导原则――编制说明2.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——检测限3.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——线性范围4.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——可报告范围5.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——准确度（回收实验）6.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——准确度（方法学比对）7.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——精密度8.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——干扰实验9.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——稳定性10.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——参考值（参考区间）附件1：体外诊断试剂分析性能评估指导原则编制说明《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》颁布后，体外诊断试剂产品的注册过程中要求提供申报产品的分析性能评估资料，产品性能评估是产品研发、制定产品标准等过程的重要技术支持研究过程，并可能对产品的质量造成一定的影响。
目前国际上对体外诊断试剂的性能评估通常是以美国临床实验室标准化组织（Clinical and Laboratory Standards Institude以下称为CLSI）的相关标准为依据，也是美国FDA 推荐采用的评价标准，但我国还没有相关的标准及指导原则的要求。
为进一步明确体外诊断试剂分析性能评估的技术要求，我中心组织有关专家起草产品分析性能评估指导原则，以明确体外诊断试剂产品性能评估的技术要求。
体外诊断试剂产品性能评估包括检测限、线性范围、可报告范围、准确度（回收实验）、准确度（方法学比较）、精密度、干扰实验、稳定性、参考区间共九个项目。
起草的主要依据CLSI发布的以下标准:1. C28-A2: How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory; Approved Guideline-Second Edition.2. EP5-A: Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices; Approved Guideline.3. EP6-A: Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures; A Statistical Approach; Approved Guideline.4. EP7-A: Interference testing in clinical chemistry; Approved Guideline.5. EP9-A2: Method comparison and bias estimation using patient samples; Approved Guideline-Second Edition.每项性能的主要研究方法均采用以上标准和国内实际采用的评价方法相结合的方法。
干扰实验
1.干扰实验1.1干扰物对检测结果的影响1.1.1干扰物的干扰效果检测方法的总分析误差有3个主要来源：不精密度、方法特异性偏差、样品特异性偏差。
方法学评价时通常只考虑前2者，样品特异性偏差常被认为与特定样品有关，不属于方法学的计量特征。
但如果一种检测方法本身易受某种干扰物质的影响，则干扰物即可引起系统误差也可引起偶然误差。
当采用特异性更好的方法做为比对方法时，特定病人群体样品中某中干扰物的平均浓度可引起系统偏差，而偏离平均偏差的个体差异则成为总偶然误差的成份。
某些方法中随机干扰效果超过不精密度成为偶然误差的主要来源。
对于个体病人，干扰物的干扰效果可随样品中干扰物浓度的不同发生变化，这可被误认为是病人病情的改变。
干扰物对检测结果的影响可通过一些方法进行补偿或修正，使干扰效果在特定病人群体中减小。
对于常见的内源性干扰物（如胆红素、血红蛋白、脂类等），可通过样品前处理、样品空白、血清基质校准或数学修正等方法减少干扰效果。
1.1.2干扰效果机制干扰物对分析过程的影响机制有：——化学效应：干扰物通过与试剂竞争或抑制指示反应改变反应结果，也可通过络合或沉淀作用改变分析物的形式。
——物理效应：干扰物可具有与被测量相近的性质，如荧光、颜色、光散射、洗脱位置或检测时的电极反应等。
——基质效应：干扰物可改变样品基质的物理特性，如粘度、表面张力、浊度或离子强度等，从而改变被测量浓度。
——酶抑制作用：干扰物可与金属激活因子形成螯合物、与催化位点结合、氧化必需巯基基团而改变被测量或试剂中酶的活性。
——检测方法的非特异性：干扰物以与被测量同样的方式参与反应。
尽管非特异性与干扰有所不同，但对实验结果的效果的相同的。
如：酮酸在碱性苦味酸法测肌酐时发生反应，吲哚硫酸盐在重氮法测胆红素时发生反应，免疫化学中的交叉反应等。
——水的取代效应：非水溶性物质（蛋白、脂类等）可通过取代液体血浆量影响活性测量。
但如测定的是血浆水中被测量的浓度，则不存在水的取代效应。
回收试验
授课对象：06级检验1-5班课 时：2学时回收试验目 标：1.掌握回收实验的基本原理2.学会衡量检验方法和检测结果的准确度---回收率实验的设计3.归纳总结进行回收实验的注意事项及对检测方法的评价实验用品：（以二乙酰法测BUN 为例）水浴箱（100℃）、721型分光光度计、混合血清、（①②③）、BUN 标准液（100mmol/L 、200 mmol/L 、7.14 mmol/L ）等内 容： 一、原理：在已知浓度的样品中加入一定量的被测物，然后用同样方法测定，测定值与“理论值”（样品浓度和加入浓度之和）之比，乘以100%即为回收率，一般实验方法应在100±5%为合格。
回收实验是测定生化实验方法准确性较好的方法之一，有人认为回收率除鉴定测定方法的优劣处，不可用来纠正测定中的误差，其计算公式如下：100%%⨯=加入浓度回收浓度）回收率（)ml )ml )ml 标准液量（血清量（标准液量（标准液浓度加入浓度+⨯=二、操作步骤（以二乙酰一肟法测尿素氮为例）：1．样本处理：a 混合血清2ml+H 2O0.1ml （R ）b 混合血清2ml+BUN 标（200mmol/L ）0.1ml （R+S 1）c 混合血清2ml+BUN 标（100mmol/L ）0.1ml （R+S 2）2．测定： 1 R+S 2 S B R 血清 0.02 — — — — R+S 1血清 — 0.02 — — — R+S 2血清——0.02——BUN 标准 — — — 0.02 — 蒸馏水 — — — — 0.02 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 二乙酰一肟 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，置100℃12min ，取出待冷比色（λ=540nm ），取各管A 值计算。
三、计算：1001.00.21.010014.7A A A %)S ()R )1S R (⨯+⨯⨯-=+（）回收率（四、注意事项：1．加入标准液的体积在整个样品中占比例要少，一般不能超过10%，否则整个样品稀释过大，不能反映原有样品的实际情况。
方法学评价试验-回收试验和干扰试验
方法学评价试验--回收试验和干扰试验
一、回收试验
【原理】
• 回收试验是分析某方法正确测定加入常规分 析样品中的纯分析物能力的试验，用于评价 候选方法的比例系统误差。 通过GOD-POD 法测血糖的回收率，能较确切地反映该分析 方法比例系统误差的大小，从而评价该方法 的准确性。
• 将样本分装，其中一份样本加入已知量的待 测物（多为纯品标准液），另一份样本加入 等体积溶剂，两份样本同时测定。
谢谢大家
注意：数据分析时，既要评价总的回收率（平均回收率） 也要评价各个样本的回收率
【注意事项】
1、加量是否准确对实验结果影响很大。 2、标本加入储存液后，总浓度必须在方法的分析范围内 ，最好使实验标本的被测定浓度达到医学决定水平，然后 计算平均回收率。 3．加入储存液的体积不得超过整个反应液体积的10%， 以避免将血清稀释过度，改变样本的基质。
【试剂与器材】
• 1、葡萄糖标准液（5.55mmol/L） • • 2、GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒
• 3、生理盐水
• 4、血清标本：根据要求收集临床混合血清样本
• 5、葡萄糖储存液 50.0mmol/L
1、样品制备
【操作步骤】
基础管 回收管1 回收管2 回收管3
混合血清（ul） 葡萄糖储存液（ul） 去离子水（ul）
450
50
450
20
30
450
30
20
450
40
10
2．血糖浓度测定：每份样品作双份检测，结果取平均值。
加入物（ml）
B
血清
--
葡萄糖标准应用液
--
蒸馏水
0.03
葡萄糖试剂
干扰实验和回收实验
回收试验结果： 回收试验结果： 95%-105%，最好达到100% 100%。 95%-105%，最好达到100%。 干扰试验结果： 干扰试验结果： Bias系统误差 Bias系统误差
操作步骤
1回收试验样品制备 基础样品：收集血清， 基础样品：收集血清，双缩脲法测定白蛋白 含量，醋酸纤膜电泳确定白蛋白浓度。 含量，醋酸纤膜电泳确定白蛋白浓度。并 进行适当稀释，使浓度在50g/L 50g/L。 进行适当稀释，使浓度在50g/L。取血清 0.9ml， 0.1ml。 0.9ml，加蒸馏水 0.1ml。 回收样品：血清中加入白蛋白标准液5.5g/L 回收样品：血清中加入白蛋白标准液5.5g/L 干扰样品：血清中加入Hb Hb溶液标准液 干扰样品：血清中加入Hb溶液标准液
加标回收实验回收实验回收率实验加样回收率实验通信抗干扰实验室加样回收实验抗干扰实验室rna干扰实验回收率实验意义甲基化干扰实验
回收试验和干扰试验
一 原理
回收试验： 回收试验： 分析方法比例系统误差的有效评价方法。 分析方法比例系统误差的有效评价方法。 测定回收率，判断分析方法系统误差。 测定回收率，判断分析方法系统误差。 特征：分析物浓度增加，误差比例增大。 特征：分析物浓度增加，误差比例增大。 线性系统误差
干扰试验： 干扰试验： 测定某种物质加入到样品中所产生的系统误差， 测定某种物质加入到样品中所产生的系统误差， 用来评价分析方法的准确度。 用来评价分析方法的准确度。 特异性差： 特异性差：加入物和样品中的分析物类似也同 分析试剂发生交叉反应产生读数， 分析试剂发生交叉反应产生读数，影响了分析 物测定的准确性。 物测定的准确性。 干扰：加入物不与分析试剂发生反应， 干扰：加入物不与分析试剂发生反应，但改变 了分析物与分析试剂间的反应。 了分析物与分析试剂间的反应。
回收试验和干扰试验
回收试验和干扰试验
回收试验：
回收试验是指在原材料或产品加工过程中，对废料进行处理，使之重新加入产品生产
流程的过程。
这项试验通常是为了降低生产成本而进行的，因为废料回收可以减少生产过
程中的浪费，减少对环境的污染。
在回收试验中，主要涉及到的技术包括废料的分离、净化、破碎、再生等。
回收试验的目的是评估废料的再利用价值，以及回收技术的可行性和效果。
在试验前
需要制定明确的试验方案和程序，以确保试验的顺利进行。
试验中需要关注的问题包括废
料的物理性质、化学成分、污染程度等，以及回收技术的适用性和效率。
试验过程中需要进行废料的初步筛选和分类，然后对其进行处理，包括清洗、破碎、
热处理等，以便使其在产品生产过程中能够达到所需的质量和性能要求。
试验结束后需要
进行废料和产品的质量检测和比较，以及成本效益分析和环境评估等工作。
干扰试验：
干扰试验是指在一定条件下，引入某种外部因素或变量，以测试它对实验结果的影响。
这种试验主要用于分析不同因素或变量之间的相互作用和影响，以及评估它们对实验结果
的贡献程度。
干扰试验需要依据实验对象和研究目的制定详细的试验方案和程序，明确要引入的外
部因素或变量，并控制其他因素的影响。
试验的重点是观察引入外部因素后实验结果的变
化情况，然后对其进行分析和解读。
对于干扰试验，需要注意的问题包括：试验条件的严谨性，试验结果的可重复性和可
靠性，以及外部因素的选择和影响程度等。
如果干扰试验的结果存在显著影响，那么研究
人员需要进一步探究这种影响的机理和影响程度，以便更好地理解实验对象的特性和规
律。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
DDW
5.5mm ol/糖标 各个 样品 酶酚试 剂
0.01
—
—
0.01
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
— 1.5
— 1.5
0.01 1.5
0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 1.5 1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
混匀，置水浴箱37℃，15分钟，505nm空白管调零， 722型分光光度计分别测各管A值。
干扰试验：
干扰试验的方法主要有“配对差异”试验及用病人标本 作偏差分析。所谓“配对差异”试验，即将不同浓度的干扰 物加入到实验标本中，然后分别测定加与不加干扰物的标本， 比较二者有无偏差，并了解干扰物浓度与偏差的关系。所谓 用病人标本作偏差分析即选择病人标本，如肝脏、肾脏或心 脏疾病患者，用服用了某种可能有干扰的药物的病人标本， 以及含有高胆红素，高血脂和血红蛋白的标本，用候选方法 和参考方法同时测定，将两方法的测定结果进行比较，以确 定某物质对候选方法是否有干扰及干扰程度。本次实验所选 用的方法为“配对差异”试验。
五、操作步骤
1、回收样品制备 基础样品：血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 回收样品Ⅰ：血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.09ml蒸馏水 回收样品Ⅱ：血清0.9ml+0.06ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.04ml蒸馏水
回收样品Ⅲ：血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.01ml蒸馏水
2．干扰样品制备 基础样品：血清0.9ml+蒸馏水0.1ml。 干扰样品Ⅰ：血清0.9ml+1g/L维生素C溶液0.1ml
干扰样品Ⅱ：血清0.9ml+2g/L维生素C溶液0.1ml
干扰样品III：血清0.9ml+3g/L维生素C溶液0.1ml
3、按下表操作
加入物 (ml) B S 回基 回1 回2 回3 干基 干1 干2 干3
选用维生素C做GOD-POD法测血糖的干扰试 验，维生素C可和GOD反应生成的H2O2发生反应， 使部分H2O2不能参与第二步POD催化的偶联反应， 从而降低显色强度，产生负的测定误差。
三、器材
1、主要器具
微量移液器
计算器
三用水浴箱
722型可见光分光光度计
四、试剂
1．血清标本 含血糖2.2mmol/L的血清（回收实验用） 含血糖6.7mmol/L的血清（干扰实验用） 2．葡萄糖标准液（80mmol/L） 3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒 4. 1g/L、2g/L 、3g/L维生素C溶液
干扰值 基础样品浓度
干扰物溶液量 m l 血清量(m l) 干扰物溶液量 m l) (
×100%
4．计算结果请填入表内：
测定浓度
测定1 测定2 测定3
平均浓度
加入干扰 物浓度
干扰值
干扰率
基础样品
干扰样品Ⅰ 干扰样品Ⅱ 干扰样品Ⅲ
七、注意事项
1．分析物浓度应选择在医学决定水平附近，通 常设置高、中、低三个浓度的回收。
六、结果计算
（一）回收实验数据处理 1．加入浓度计算： 加入浓度(mmol/L)=
标准液浓度 病人样品量 ml 标准液量 ml
标准液量 ml
2．回收浓度计算：
回收浓度＝回收样品测得浓度－基础样品测得浓度
3．回收率计算：
回收率=
回收浓度 加入浓度
×100%
4．计算结果请填入表内：
这两种干扰试验各有优缺点，第一种方法的不足之处 是实验标本的介质可能与病理标本的介质不尽致，病理标 本中的干扰物可能不是原来的药物，加入的干扰物可能与 病理标本中的干扰物不完全相同。第二种方法的不足之处 是①病人通常用多种药物，难以确定干扰物；②不是每种 测定项目均有参考方法，而且有的参考方法难以在临床实 验室中开展；③参考方法亦可能受某些物质的干扰。两种 方法同时使用，会起互补作用。
测定浓度
加入浓度 回收浓度 回收率
测定1
基础样品 回收样品Ⅰ 回收样品Ⅱ 回收样品Ⅲ 平均回收率
测定2
测定3
平均浓度
（二）干扰实验数据处理
1．干扰物加入浓度计算：
干扰物加入浓度＝干扰物溶液浓度× 2．干扰值计算： 干扰值(mmol/L)＝干扰样品测定浓度－基础样品测定浓度 3．干扰率计算： 干扰率＝
2、回收实验原理
将被测定物标准液加入病人标本中，作为分 析样本；原病人标本中加入等量的无分析物的溶 剂作为基础样本；用候选方法测定并得到各自浓 度，计算回收浓度及回收率。通过测定GOD-POD 法测血糖的回收率，能较确切地反映该分析方法 比例系统误差的大小，从而对方法的准收实验：
一般检验方法要求回收率在95%～105%之间， 最为理想的回收率应是100%。回收率接近100%， 说明分析方法对于分析物无论在纯溶液中，还是在 复杂的基体环境中，反应能力是一致的，分析物不 受基体效应影响，若回收率明显偏离100%，说明 分析物处于的基体环境不同，反应能力有明显差别。
实验六：回收试验和干扰试验
一、实验目的
1．掌握GOD-POD法测定血糖的原理及临床意义。
2．掌握回收试验的原理和方法。 3．掌握干扰试验的原理和方法。
二、实验原理
1、GOD-POD法测血糖原理：
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）能将葡萄 糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。后者在过氧化物 酶（peroxidase，POD）的作用下与色原性氧受体4-氨基 安替比林偶联酚缩合成红色醌类化合物，即Trinder反应。 该红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样品 体积的10%，以避免将血清稀释过度，引起误 差的改变或消失。
3．加量是否准确对实验结果影响很大。
1．干扰试验的对象有厂商研制的新产品；新建立的方法；新 引进的方法或试剂。 2．应做的主要干扰物：病人标本中常出现的黄疸、脂血和溶 血；某些药物如维生素C等；实验常用的抗凝剂，防腐剂 和稳定剂。 3．可疑干扰物浓度 加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常 所见浓度的上限，有可能时应达到病理标本的最高值。 4．无论是方法特异性差或是受干扰，都影响到测定结果的正 确性，影响的程度与与非分析物的量有关，所以产生的误 差都是恒定系统误差，常以偏差Bias作为统计量。 5．由某些物质引起测定结果的偏差，足以影响临床解释者谓 之干扰，但各项测定的临床要求至今仍未确定，建议将该 分析方法批内测定值±1.96s作为控制限度。