回收实验干扰
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
干扰值 基础样品浓度
干扰物溶液量 m l 血清量(m l) 干扰物溶液量 m l) (
×100%
4．计算结果请填入表内：
测定浓度
测定1 测定2 测定3
平均浓度
加入干扰 物浓度
干扰值
干扰率
基础样品
干扰样品Ⅰ 干扰样品Ⅱ 干扰样品Ⅲ
七、注意事项
1．分析物浓度应选择在医学决定水平附近，通 常设置高、中、低三个浓度的回收。
2．干扰样品制备 基础样品：血清0.9ml+蒸馏水0.1ml。 干扰样品Ⅰ：血清0.9ml+1g/L维生素C溶液0.1ml
干扰样品Ⅱ：血清0.9ml+2g/L维生素C溶液0.1ml
干扰样品III：血清0.9ml+3g/L维生素C溶液0.1ml
3、按下表操作
加入物 (ml) B S 回基 回1 回2 回3 干基 干1 干2 干3
八、方法学评价
回收实验：
一般检验方法要求回收率在95%～105%之间， 最为理想的回收率应是100%。回收率接近100%， 说明分析方法对于分析物无论在纯溶液中，还是在 复杂的基体环境中，反应能力是一致的，分析物不 受基体效应影响，若回收率明显偏离100%，说明 分析物处于的基体环境不同，反应能力有明显差别。
DDW
5.5mm ol/糖标 各个 样品 酶酚试 剂
0.01
—
—
0.01
—
—
—
—
—Biblioteka Baidu
—
—
—
—
—
—
—
—
—
— 1.5
— 1.5
0.01 1.5
0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 1.5 1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
混匀，置水浴箱37℃，15分钟，505nm空白管调零， 722型分光光度计分别测各管A值。
测定浓度
加入浓度 回收浓度 回收率
测定1
基础样品 回收样品Ⅰ 回收样品Ⅱ 回收样品Ⅲ 平均回收率
测定2
测定3
平均浓度
（二）干扰实验数据处理
1．干扰物加入浓度计算：
干扰物加入浓度＝干扰物溶液浓度× 2．干扰值计算： 干扰值(mmol/L)＝干扰样品测定浓度－基础样品测定浓度 3．干扰率计算： 干扰率＝
这两种干扰试验各有优缺点，第一种方法的不足之处 是实验标本的介质可能与病理标本的介质不尽致，病理标 本中的干扰物可能不是原来的药物，加入的干扰物可能与 病理标本中的干扰物不完全相同。第二种方法的不足之处 是①病人通常用多种药物，难以确定干扰物；②不是每种 测定项目均有参考方法，而且有的参考方法难以在临床实 验室中开展；③参考方法亦可能受某些物质的干扰。两种 方法同时使用，会起互补作用。
选用维生素C做GOD-POD法测血糖的干扰试 验，维生素C可和GOD反应生成的H2O2发生反应， 使部分H2O2不能参与第二步POD催化的偶联反应， 从而降低显色强度，产生负的测定误差。
三、器材
1、主要器具
微量移液器
计算器
三用水浴箱
722型可见光分光光度计
四、试剂
1．血清标本 含血糖2.2mmol/L的血清（回收实验用） 含血糖6.7mmol/L的血清（干扰实验用） 2．葡萄糖标准液（80mmol/L） 3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒 4. 1g/L、2g/L 、3g/L维生素C溶液
2、回收实验原理
将被测定物标准液加入病人标本中，作为分 析样本；原病人标本中加入等量的无分析物的溶 剂作为基础样本；用候选方法测定并得到各自浓 度，计算回收浓度及回收率。通过测定GOD-POD 法测血糖的回收率，能较确切地反映该分析方法 比例系统误差的大小，从而对方法的准确性作出 可靠评价。
3、干扰实验原理：
六、结果计算
（一）回收实验数据处理 1．加入浓度计算： 加入浓度(mmol/L)=
标准液浓度 病人样品量 ml 标准液量 ml
标准液量 ml
2．回收浓度计算：
回收浓度＝回收样品测得浓度－基础样品测得浓度
3．回收率计算：
回收率=
回收浓度 加入浓度
×100%
4．计算结果请填入表内：
干扰试验：
干扰试验的方法主要有“配对差异”试验及用病人标本 作偏差分析。所谓“配对差异”试验，即将不同浓度的干扰 物加入到实验标本中，然后分别测定加与不加干扰物的标本， 比较二者有无偏差，并了解干扰物浓度与偏差的关系。所谓 用病人标本作偏差分析即选择病人标本，如肝脏、肾脏或心 脏疾病患者，用服用了某种可能有干扰的药物的病人标本， 以及含有高胆红素，高血脂和血红蛋白的标本，用候选方法 和参考方法同时测定，将两方法的测定结果进行比较，以确 定某物质对候选方法是否有干扰及干扰程度。本次实验所选 用的方法为“配对差异”试验。
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样品 体积的10%，以避免将血清稀释过度，引起误 差的改变或消失。
3．加量是否准确对实验结果影响很大。
1．干扰试验的对象有厂商研制的新产品；新建立的方法；新 引进的方法或试剂。 2．应做的主要干扰物：病人标本中常出现的黄疸、脂血和溶 血；某些药物如维生素C等；实验常用的抗凝剂，防腐剂 和稳定剂。 3．可疑干扰物浓度 加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常 所见浓度的上限，有可能时应达到病理标本的最高值。 4．无论是方法特异性差或是受干扰，都影响到测定结果的正 确性，影响的程度与与非分析物的量有关，所以产生的误 差都是恒定系统误差，常以偏差Bias作为统计量。 5．由某些物质引起测定结果的偏差，足以影响临床解释者谓 之干扰，但各项测定的临床要求至今仍未确定，建议将该 分析方法批内测定值±1.96s作为控制限度。
实验六：回收试验和干扰试验
一、实验目的
1．掌握GOD-POD法测定血糖的原理及临床意义。
2．掌握回收试验的原理和方法。 3．掌握干扰试验的原理和方法。
二、实验原理
1、GOD-POD法测血糖原理：
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）能将葡萄 糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。后者在过氧化物 酶（peroxidase，POD）的作用下与色原性氧受体4-氨基 安替比林偶联酚缩合成红色醌类化合物，即Trinder反应。 该红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
五、操作步骤
1、回收样品制备 基础样品：血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 回收样品Ⅰ：血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.09ml蒸馏水 回收样品Ⅱ：血清0.9ml+0.06ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.04ml蒸馏水
回收样品Ⅲ：血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.01ml蒸馏水
干扰物溶液量 m l 血清量(m l) 干扰物溶液量 m l) (
×100%
4．计算结果请填入表内：
测定浓度
测定1 测定2 测定3
平均浓度
加入干扰 物浓度
干扰值
干扰率
基础样品
干扰样品Ⅰ 干扰样品Ⅱ 干扰样品Ⅲ
七、注意事项
1．分析物浓度应选择在医学决定水平附近，通 常设置高、中、低三个浓度的回收。
2．干扰样品制备 基础样品：血清0.9ml+蒸馏水0.1ml。 干扰样品Ⅰ：血清0.9ml+1g/L维生素C溶液0.1ml
干扰样品Ⅱ：血清0.9ml+2g/L维生素C溶液0.1ml
干扰样品III：血清0.9ml+3g/L维生素C溶液0.1ml
3、按下表操作
加入物 (ml) B S 回基 回1 回2 回3 干基 干1 干2 干3
八、方法学评价
回收实验：
一般检验方法要求回收率在95%～105%之间， 最为理想的回收率应是100%。回收率接近100%， 说明分析方法对于分析物无论在纯溶液中，还是在 复杂的基体环境中，反应能力是一致的，分析物不 受基体效应影响，若回收率明显偏离100%，说明 分析物处于的基体环境不同，反应能力有明显差别。
DDW
5.5mm ol/糖标 各个 样品 酶酚试 剂
0.01
—
—
0.01
—
—
—
—
—Biblioteka Baidu
—
—
—
—
—
—
—
—
—
— 1.5
— 1.5
0.01 1.5
0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 1.5 1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
混匀，置水浴箱37℃，15分钟，505nm空白管调零， 722型分光光度计分别测各管A值。
测定浓度
加入浓度 回收浓度 回收率
测定1
基础样品 回收样品Ⅰ 回收样品Ⅱ 回收样品Ⅲ 平均回收率
测定2
测定3
平均浓度
（二）干扰实验数据处理
1．干扰物加入浓度计算：
干扰物加入浓度＝干扰物溶液浓度× 2．干扰值计算： 干扰值(mmol/L)＝干扰样品测定浓度－基础样品测定浓度 3．干扰率计算： 干扰率＝
这两种干扰试验各有优缺点，第一种方法的不足之处 是实验标本的介质可能与病理标本的介质不尽致，病理标 本中的干扰物可能不是原来的药物，加入的干扰物可能与 病理标本中的干扰物不完全相同。第二种方法的不足之处 是①病人通常用多种药物，难以确定干扰物；②不是每种 测定项目均有参考方法，而且有的参考方法难以在临床实 验室中开展；③参考方法亦可能受某些物质的干扰。两种 方法同时使用，会起互补作用。
选用维生素C做GOD-POD法测血糖的干扰试 验，维生素C可和GOD反应生成的H2O2发生反应， 使部分H2O2不能参与第二步POD催化的偶联反应， 从而降低显色强度，产生负的测定误差。
三、器材
1、主要器具
微量移液器
计算器
三用水浴箱
722型可见光分光光度计
四、试剂
1．血清标本 含血糖2.2mmol/L的血清（回收实验用） 含血糖6.7mmol/L的血清（干扰实验用） 2．葡萄糖标准液（80mmol/L） 3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒 4. 1g/L、2g/L 、3g/L维生素C溶液
2、回收实验原理
将被测定物标准液加入病人标本中，作为分 析样本；原病人标本中加入等量的无分析物的溶 剂作为基础样本；用候选方法测定并得到各自浓 度，计算回收浓度及回收率。通过测定GOD-POD 法测血糖的回收率，能较确切地反映该分析方法 比例系统误差的大小，从而对方法的准确性作出 可靠评价。
3、干扰实验原理：
六、结果计算
（一）回收实验数据处理 1．加入浓度计算： 加入浓度(mmol/L)=
标准液浓度 病人样品量 ml 标准液量 ml
标准液量 ml
2．回收浓度计算：
回收浓度＝回收样品测得浓度－基础样品测得浓度
3．回收率计算：
回收率=
回收浓度 加入浓度
×100%
4．计算结果请填入表内：
干扰试验：
干扰试验的方法主要有“配对差异”试验及用病人标本 作偏差分析。所谓“配对差异”试验，即将不同浓度的干扰 物加入到实验标本中，然后分别测定加与不加干扰物的标本， 比较二者有无偏差，并了解干扰物浓度与偏差的关系。所谓 用病人标本作偏差分析即选择病人标本，如肝脏、肾脏或心 脏疾病患者，用服用了某种可能有干扰的药物的病人标本， 以及含有高胆红素，高血脂和血红蛋白的标本，用候选方法 和参考方法同时测定，将两方法的测定结果进行比较，以确 定某物质对候选方法是否有干扰及干扰程度。本次实验所选 用的方法为“配对差异”试验。
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样品 体积的10%，以避免将血清稀释过度，引起误 差的改变或消失。
3．加量是否准确对实验结果影响很大。
1．干扰试验的对象有厂商研制的新产品；新建立的方法；新 引进的方法或试剂。 2．应做的主要干扰物：病人标本中常出现的黄疸、脂血和溶 血；某些药物如维生素C等；实验常用的抗凝剂，防腐剂 和稳定剂。 3．可疑干扰物浓度 加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常 所见浓度的上限，有可能时应达到病理标本的最高值。 4．无论是方法特异性差或是受干扰，都影响到测定结果的正 确性，影响的程度与与非分析物的量有关，所以产生的误 差都是恒定系统误差，常以偏差Bias作为统计量。 5．由某些物质引起测定结果的偏差，足以影响临床解释者谓 之干扰，但各项测定的临床要求至今仍未确定，建议将该 分析方法批内测定值±1.96s作为控制限度。
实验六：回收试验和干扰试验
一、实验目的
1．掌握GOD-POD法测定血糖的原理及临床意义。
2．掌握回收试验的原理和方法。 3．掌握干扰试验的原理和方法。
二、实验原理
1、GOD-POD法测血糖原理：
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）能将葡萄 糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。后者在过氧化物 酶（peroxidase，POD）的作用下与色原性氧受体4-氨基 安替比林偶联酚缩合成红色醌类化合物，即Trinder反应。 该红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
五、操作步骤
1、回收样品制备 基础样品：血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 回收样品Ⅰ：血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.09ml蒸馏水 回收样品Ⅱ：血清0.9ml+0.06ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.04ml蒸馏水
回收样品Ⅲ：血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄糖 标准液+0.01ml蒸馏水