乳酸菌的筛选
【课件】乳酸菌的筛选及应用PPT
2、筛选过程
样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适 的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙 圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单 菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏 阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。
（二）溴甲酚绿指示剂法
1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长
3、 双歧杆菌
样品来源：婴儿新鲜粪便 培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、
PTYG培养基
培养温度：37℃ 需氧情况：严格厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法
第三部分、乳酸菌的应用
一、乳酸菌的生理功能
①维持肠道菌群的微生态平衡； ②增强机体免疫功能； ③预防和抑制肿瘤发生； ④提高营养利用率、促进营养吸收； ⑤控制内毒素、降低胆固醇； ⑥ 延缓机体衰老。
聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学 合成方法聚合而成的一种高分子材料，它无毒、无 刺激性。
聚乳酸制品废弃后在土壤或水中，30天内会在 微生物、水、酸和碱的作用下彻底分解成CO2和H2O， 不会对环境产生污染，因而是一种完全可生物降解 的材料。
（2）聚乳酸的生产过程
目前聚乳酸的生产和制备主要有：
（4）前景
PLA作为一个新型的医用、生物可降解塑料在 我国有广阔的市场发展前景。生物降解塑料大多数 是天然高分子与常用塑料复合体系，或基于天然高 分子(主要是淀粉、纤维素)的改性。
PLA合成直链脂肪族聚酯，在医用领域是最重 要的可降解高分子材料，已越来越受到重视。PLA 树脂替代现有降解材料已成为市场发展的必然趋势， 并具有与烯烃类聚合物竞争的能力，“绿色生态塑 料”的市场前景将十分看好!
3、明串珠菌属（Leuconostoc）
乳酸菌菌种的分离筛选办法
乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称;为兼性厌氧菌,杆状或球状,革兰氏阳性菌,无芽孢,不运动;营养要求高,需要提供丰富的肽类氨基酸维生素;在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落;通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等;乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基;当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时,SL培养基常用作为选择性培养基;对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基,链球菌有TYC培养基、MS 培养基;M17培养基被用作乳球菌的分离培养基;嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种;其特性为：杆菌,两端圆,不运动,无鞭毛;粪肠球菌为革兰氏阳性,圆形或椭圆形;乳酸片球菌细胞呈球状,直径0.6~1.0μm,在直角两个平面交替形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列;革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧;在MRS培养基上菌落小,呈白色;沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状;乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落,不易观察,所以分离时先富集培养并选择合适的培养基;分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质,也常常加入醋酸盐,因醋酸盐能抑制部分细菌生长,对乳酸菌无害;培养基中添加碳酸钙,乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈,作为分离鉴别的依据,通过对生成的乳酸量进行性能鉴定;乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸,维生素及微氧,一般菌落比较小;分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质,均具有促进生长作用;也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长,对乳酸菌无害;一.筛选方法：1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈,从而筛选出这些产酸类细菌,可用于乳酸菌的筛选;其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸,以维持培养基的PH;筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色,经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存;2.溴甲酚绿指示剂法：培养基：MRS培养基含溴甲酚绿酒精溶液筛选过程：同上,不同之处是稀释涂布后长出菌落,挑取使溴甲酚绿变色的菌落;二.菌种的分离筛选1.培养基：★1.1麦芽汁碳酸钙培养基：麦芽汁10BX1L预先灭菌碳酸钙5-10g/LPH自然分离用★★1.2牛肉膏10g/L蛋白胨10g/L酵母膏10g/L番茄汁200g/L葡萄糖10g/L吐温0.05%CaCO315-20g/L溴甲酚绿0.01%PH6.0-6.5分离用★1.3番茄汁碳酸钙培养基：酵母膏7.5g/L葡萄糖10g/L番茄汁100mL蛋白胨7.5g/LKH2PO42.0 g/L吐温0.5mLPH6.0-6.5分离用1.4葡萄糖20g/L酵母膏10g/LPH6.0-6.51.5蛋白胨8-10g/L酵母膏3-5g/L葡萄糖13-15g/LKH2PO41.5-2.0g/LMgSO40.3-0.5g/LMnSO40.2-0.25g/LNaAC3.0-5.0g/LPH5.5-6.51.6蛋白胨0.8-1.0g/L糖蜜3.0-5.0g/L酵母膏3-5g/L玉米浆0.5-1.0g/LKH2PO40.1-0.3g/LMgSO40.3-0.5g/LNaC13-5g/L葡萄糖8-10g/LPH5.5-6.5发酵或种子培养基★★1.7MRS培养基分离培养计数用蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0mL、乙酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g、琼脂18.0g、蒸馏水1L,pH6.5;分离培养基,当MRS培养基冷却至45～50℃时,加入已灭菌的碳酸钙,充分混匀,倒平板;1.8BCP培养基溴甲酚紫培养基乳糖5.0g蛋白胨5.0g酵母膏3.0g0.5℅溴甲酚紫10ml自来水1000ml pH6.5-7.0分离用1.9BCG牛乳营养琼脂：脱脂奶粉10g,溶于50ml水中,加入1.6℅溴甲酚绿酒精溶液0.07ml,0.075Mpa20min;另取琼脂2.0g,溶于50ml水中,加酵母膏1.0g溶解后调pH6.5-6.8,0.1Mpa20min.趁热在无菌操作下两者混合均匀,倒平板,37℃培养24h,检查是否有杂菌;2.分离筛选：2.1富集培养：取1.0g1.0ml于无菌细口瓶中,加入无菌麦芽汁液体培养液于瓶口处,密闭,25-32℃培养48h;若培养基表内出现绢丝波纹物,镜检杆状,革兰氏阳性,初步定为乳酸菌;以同样方法转接2-3次,接种量3-5℅.2.2菌种分离纯化：溶钙圈法：富集菌液或样品适当稀释至10-7,混菌法分离,先加入10-12ml MRS培养基或麦芽汁培养基,凝固后再注入4-5ml水琼脂培养基,制成厌氧环境,30℃或37℃培养2-3天温度低时间稍长,可出现针头状或圆形稍扁菌落,周围形成透明圈;挑取透明圈大,培养基变黄的菌落,反复划线纯化2-3次,所得单菌落编号,经镜检后,疑似乳酸菌落接种于MRS培养基培养后保存备用;或接入液体培养基中,25-32℃培养24-48h,然后穿刺于MRS培养基或麦芽汁碳酸钙半固体培养基中,25-32℃培养48h 保存备用;2.3性能测定：乳酸菌定性试验：不同条件下的产酸速率试验：将分离菌种接种于MRS液体培养基中25℃37℃温度下培养测不同菌株不同温度的pH;方法1.吸取发酵液10ml,注入空试管中,加入10℅硫酸1.0ml,在加入2.0℅高锰酸钾约1.0ml,此时乳酸转化成乙醛;取滤纸一条,在含氨的硝酸银溶液中浸湿,横搭在试管口上,将试管徐徐加热至沸腾,使乙醛挥发,若管口滤纸变黑,证明有乳酸生成;方法2.纸层析法：展开剂为正丁醇：甲醇：水=80：15：5,毛细血管吸取发酵液,多次点样于新华滤纸上,1.5℅标准乳酸为对照,平衡2小时后进行层析,3℅溴甲酚蓝显色计算Rf值;产酸量测定：5.0ml发酵液于150ml三角瓶中,加中性蒸馏水10-20ml,酚酞指示剂2滴,用0.1mol/l 氢氧化钠滴定至微红色;醋酸量g/100mL=氢氧化钠摩尔浓度.Vx90.08x10-3/样品毫升数x100同时,进行单因素试验,分别考察醋酸速度,耐高温,耐酒精度,耐低酸度等主要生产性能,选择优势菌株;3.菌株鉴定：3.1菌落形态：3.2菌体形态：革兰氏染色观察染色镜检：杆状阳性;3.3乳酸菌运动性检测：半固体穿刺法3.4生理生化：乳酸菌产酸能力曲线：将筛选的乳酸菌接种于MRS液体培养基中,25-32℃培养48h,间隔4-6h测定发酵液pH;食盐对乳酸菌的影响：在MRS液体培养基中,添加0.0℅2.0℅4.0℅6.0℅氯化钠,菌种分别接种于培养基中,32℃培养48h,测定OD值;溴甲酚绿指示剂法：原理：溴甲酚绿指示剂在酸性环境中呈黄色,碱性环境呈蓝色,分离培养基配制后PH为6.8,加入溴甲酚绿指示剂呈蓝绿色,产酸后菌落周围变成黄色,较容易鉴别;培养基：BCG牛乳营养琼脂初筛：将样品富集液梯度稀释,适温培养,平板上出现扁平的黄色菌落及周围培养基也为黄色初定为乳酸菌;复筛：将典型菌落转接脱脂乳发酵管,若凝固,无气泡,呈酸性,镜检细胞杆状或链球状,革兰氏染色阳性,连续传代若干次培养,挑选出3-4h能凝固的乳管保存备用;注：1.乳酸菌筛选常在几种培养基同时进行：分别在麦芽汁碳酸钙培养基,番茄汁碳酸钙培养基,BCP培养基溴甲酚紫培养基同时进行混菌划线或涂布培养放厌氧袋,分别25℃37℃培养48h;菌落观察：平板表面形成浅色黄色或白色小菌落;麦芽汁碳酸钙培养基表面,菌落周围形成透明圈,BCP培养基溴甲酚紫培养基周围使紫色的培养基形成黄色包围圈;触酶反应：厌氧菌一般无触酶过氧化氢酶,用滴管滴加3.0℅过氧化氢于菌落上,若无气泡产生,证明该菌为触酶阴性;将各种特征菌落分别接入斜面,培养后保存,进一步生理生化试验,以鉴定分别何种乳酸菌;2.菌落鉴定：半固体或双平板琼脂利于乳酸菌的生长,菌落出现早;2.1菌落形态观察：乳白色边缘不整齐,稍呈半球状凸起,实心菌落;个体形态：半透明细杆状链状排列,大量时呈发丝状堆积;初步认为乳杆菌;2.2生化鉴定：在吲哚试验中,加入菌种试管无任何变化,为阴性反应;说明该菌不具有分解色氨酸产生吲哚的能力;明胶液化淀粉水解氢氧化钾试验均为阴性,说明此菌为乳酸菌;过氧化氢酶还原硝酸盐糖发酵试验：发酵果糖半乳糖葡萄糖乳糖产酸为阳性反应,其余麦芽糖蔗糖棉子糖鼠李糖产酸为阴性反应;根据手册第九版判断此种乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种;纤维二糖甘露醇山梨醇七叶苷水杨苷2.3乳酸菌生长曲线pH-t测定结果：三.几种乳酸菌筛选举例1.嗜热链球菌：样品来源：市售酸奶培养基：M17改良培养基,培养温度：42℃,需氧情况：兼性厌氧,筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离2.保加利亚乳杆菌：样品来源：市售酸奶,培养基：牛肉浸膏1.5％,酵母浸膏0.5％,葡萄糖3.0％,柠檬酸三铵0.2％,七水硫酸镁0.02％,琼脂1.5％,pH5.1;培养温度：42℃,需氧情况：兼性厌氧,筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法;3.双歧杆菌：样品来源：婴儿新鲜粪便,培养基：MRS培养基、NPNL培养基、TYP培养基、PTYG培养基,培养温度：37℃,需氧情况：严格厌氧,筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法;。
乳酸菌菌种的分离筛选原理
乳酸菌菌种的分离筛选原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，广泛应用于食品、饲料、医药等领域。
乳酸菌菌种的分离筛选是乳酸菌应用研究中的重要一环，其目的是从大量的混合菌群中筛选出具有优良特性的菌株。
乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括以下几个方面：1. 选择合适的培养基：乳酸菌菌种对营养要求较高，因此选择适宜的培养基是分离筛选的首要步骤。
常用的培养基有MRS培养基、DC培养基等，它们含有适宜乳酸菌生长的营养成分，能提供所需能量和营养物质。
2. 适宜的培养条件：乳酸菌对培养环境的温度、pH、氧气和二氧化碳等条件有一定要求。
通常情况下，乳酸菌分离筛选需要在适宜的温度（一般为30-40）下进行，pH值保持在4.5-7.0之间，氧气和二氧化碳含量适中。
3. 分离方法：乳酸菌菌种的分离常采用传统的分离培养技术，如层析法、稀释平板法、摇瓶培养法等。
其中，层析法是一种常用的快速分离方法，通过将混合菌群在筛选培养基上涂抹或刺激，使不同菌株在筛选培养基上形成分离的菌落。
4. 鉴定鉴别：乳酸菌菌种的筛选与鉴定是不可分割的一步，只有确定菌株的种属和特性才能真正确认其乳酸菌的菌种类型。
目前，常用的鉴定方法包括形态学观察、生理和生化特性检测、分子生物学方法（如PCR技术、16S rDNA序列分析）等。
在乳酸菌菌种的分离筛选过程中，还需要注意以下几个问题：1. 选择样品：样品的选择对于乳酸菌菌种的分离筛选至关重要。
通常情况下，从乳制品、肠道、土壤等环境中寻找潜在的乳酸菌菌种，可以提高分离到优良菌株的几率。
2. 优化培养条件：对于特殊的乳酸菌菌种，可能需要优化培养条件，如调整温度、添加特定的营养成分等，以促进其生长和繁殖。
3. 评价筛选结果：乳酸菌菌种的分离筛选结果需要综合考虑其特性和应用价值。
如菌株的酸奶生产能力、耐酸碱能力、抗菌能力、抗氧化能力等。
总结起来，乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括选择合适的培养基和培养条件、采用适当的分离方法和鉴定鉴别技术。
乳酸菌的筛选及应用.ppt
形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列
运动性：一般不远动
营养类型：化能异养型
需氧情况：兼性厌氧型
2020/1/8
5
3、明串珠菌属（Leuconostoc）
形态：细胞球形或豆状，成
对或成链排列
运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型
2020/1/8
6
4、双歧杆菌属（Bifidobacterium ）
一、乳酸菌的分布
乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养 菌。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰 富的环境中。具体如下： （1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等； （2）与植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实 损伤部位等； （3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等； （4）乳酸饮料：酸奶等。
能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。
2020/1/8
3
二、乳酸菌的分类
1、乳杆菌属（Lactobacillus）
形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状,一
般成链状排列
运动性：通常不运动，有的能
够运动,具有周生鞭毛。
营养类型：化能异氧型 需氧情况：微好氧性
2020/1/8
4
2、链球菌属（Streptococcus）
15
3、 双歧杆菌
样品来源：婴儿新鲜粪便 培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、
PTYG培养基
培养温度：37℃ 需氧情况：严格厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法
2020/1/8
16
第三部分、乳酸菌的应用
一、乳酸菌的生理功能
①维持肠道菌群的微生态平衡； ②增强机体免疫功能； ③预防和抑制肿瘤发生； ④提高营养利用率、促进营养吸收； ⑤控制内毒素、降低胆固醇； ⑥ 延缓机体衰老。
酵母菌、乳酸杆菌的分离筛选
姓名:温迪雅学号：10991367 专业：环境科学乳酸杆菌的分离筛选及鉴定一、材料与方法：1、菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2、试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml 浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g、香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；3、仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸4、方法：（1）无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养（2）菌落观察与镜检（3）筛选生产用菌株二、实验步骤1、分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
BCG牛乳培养基配制：A溶液：脱脂乳粉100g,水500ml，加入1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。
（1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）B溶液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g，PH6.8，121℃湿热灭菌20min。
以灭菌操作趁热将A溶液和B溶液混合均匀后倒平板。
（2）样品的处理按照无菌操作要求，从市售新鲜酸乳中吸取10ml检样，放入装有90ml无菌水的三角瓶内，振摇混匀。
（3）分离方法①倒培养基在无菌室，先用紫外线照射半小时把表面菌灭了，在通风10min后，每培养皿倾注约15ml左右已溶化的BCG牛乳培养基，立即放在桌上摇匀，冷却凝固后即成平板。
《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》
《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》一、引言乳酸细菌（Lactobacillus）是一类常见的益生菌，它们能帮助消化系统聪明，同时也可以通过促进有益的肠道微生物的生长来改善肠道健康。
因此，乳酸细菌的分类和鉴定对于研究乳酸细菌的功能和应用具有重要意义。
本文将首先介绍乳酸细菌的分类和鉴定，然后介绍乳酸细菌的实验方法。
二、乳酸细菌的分类和鉴定1. 乳酸细菌的分类乳酸细菌是属于细菌科（Bacteroidetes）的一类细菌。
它们可以分为三大类：乳酸菌（Lactobacillus）、乳酸乳球菌（Streptococcus）和乳酸变形杆菌（Bifidobacterium）。
每一类乳酸菌都有不同的特征，如形态、生长习性和生理功能。
2. 乳酸细菌的鉴定乳酸细菌的鉴定可以分成宏观鉴定和微观鉴定两种。
宏观鉴定可以从外观上分辨不同种类的乳酸细菌，其中包括形态、大小、色泽和膜结构等。
微观鉴定则是从细节上来识别乳酸细菌的特征，包括菌体的形态、菌落的形状、菌落的大小和染色等。
三、乳酸细菌的实验方法1. 样品采集乳酸细菌的实验方法首先要从样品的采集开始。
乳酸细菌的样品可以从食品、生物体表面、自然环境或肠道等环境中获取。
采集的样品应当及时保存，以防乳酸细菌的生长和繁殖。
2. 培养基制备乳酸细菌的培养基是乳酸细菌实验的基础，它可以保证乳酸细菌的生长和繁殖。
常用的乳酸细菌培养基有MRS培养基、MRS-glucose培养基和MRS-sucrose培养基等。
这些培养基中的成分可以满足乳酸细菌的需求，从而促进乳酸细菌的繁殖和活力。
3. 培养和筛选采集到的样品和制备好的培养基可以混合在一起，然后置于培养室中，根据规定的条件进行培养。
一旦乳酸细菌在培养基中获得了生长和繁殖的机会，就可以开始筛选。
筛选的过程可以通过诸如生长观察、生理鉴定和生化鉴定等方法来进行。
4. 分子鉴定最后，分子鉴定是乳酸细菌分类鉴定的最关键步骤。
分子鉴定可以通过PCR技术、限制性片段长度多态性分析（RFLP）和16S rRNA基因测序等方法准确地识别乳酸细菌的种类。
乳酸菌菌种的分离筛选方法修订稿
乳酸菌菌种的分离筛选方法WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。
为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。
营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。
在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。
通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。
乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。
当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。
对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。
M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。
其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。
粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。
乳酸片球菌细胞呈球状，直径~μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。
革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。
在MRS培养基上菌落小，呈白色。
沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。
乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。
分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。
乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。
分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。
也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。
一.筛选方法：1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。
乳酸菌的筛选与鉴定流程
乳酸菌的筛选与鉴定流程1.材料首先要确定目标，即所筛选的乳酸菌来自哪里，例如想要筛选一株果蔬发酵乳酸菌，那我们就得找一个产区或者其他地方自然发酵果蔬的样品。
1.1培养基查找相关文献，菌种生化鉴定用培养基建议查看文献：工业微生物实验手册MRS培养基：牛肉膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，吐温801g/L，葡萄糖50 g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，溴甲基酚紫0.4 g/L，酵母提取物5 g/L，琼脂15～20 g/L，pH 6.3～6.7，121 ℃湿热灭菌30 min。
（PS：若自己嫌麻烦，可买现成的MRS培养基）初筛培养基：在MRS分离培养基的基础上，添加0.5%碳酸钙，乳酸调至PH2.0.（加碳酸钙是为了能更好的挑出优势菌，乳酸调至PH2.0也是同样道理）如图：若是乳酸菌菌落旁会有清晰可见的透明圈，这是由于乳酸与碳酸钙反应了。
高盐复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上，添加10%氯化钠和0.5%碳酸钙。
高糖复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上将葡萄糖质量分数提高到30%，添加0.5%碳酸钙。
明胶培养基∶蛋白胨25 g/L，牛肉膏7.5 g/L，氯化钠5g/L，明胶100 g/L，pH7.0～7.2，121∶湿热灭菌15 min。
果蔬发酵培养基∶将苹果、胡萝卜、西瓜、西红柿等水果、蔬菜清洗去皮切分后分别榨汁除渣制得发酵果酱，然后按1∶1∶1∶1比例混合经巴氏灭菌后4 ∶冷藏。
按照混合果蔬汁33.3%、葡萄糖5%、蔗糖5%、氯化钙0.5%、磷酸氢二钠0.05%、磷酸二氢钠0.05%、硫酸镁0.03%、柠檬酸0.1%的配比配制，除果蔬和柠檬酸外其余成分于115 ∶湿热灭菌15 min。
2.方法2.1乳酸菌的分离筛选取产区自然发酵苹果原浆，用0.9%灭菌生理盐水进行10 倍梯度稀释后，吸取适宜稀释度溶液涂布至MRS分离培养基中，37 ∶恒温厌氧培养24h，挑取菌落黄色范围大并具有乳酸菌典型特征的单菌落，进行革兰氏染色观察菌体形态。
酸菜中乳酸菌的分离筛选与鉴定分析
为0.725、0.694、0.712，对照柠檬酸和乳酸的Rr 值分别为0.483、0.731，证明其三菌株都有乳酸，均为产乳酸菌株:2.形态学鉴定。
在MRS 培养基上分别涂上已经经过分纯操作的菌种，在38°C 的环境中培养24小时，然后观察其特征情况，进行试剂染色处理，运用油镜进行观察：观察 结果为：1号菌株在培养基上的菌落形态为突起，0.5到1 毫米的菌落直径，呈圆形、光滑和灰白色，在革兰氏染色 上呈阳性，具有厌氧兼性，且生长物浑浊，豆状或球状的 菌体，0.8到1.2um 的直径，列为短链或单个2号和1号的不同之处是菌体直径不同，菌体为圆端直杆状，0.9到 1.2L U T 1的直径，且排列为成对或单个3号菌落中间突起且为深色，菌体粗短杆状，0.9到1.2画的直径，从形态学特 征角度分析可知，1号有肠膜明串珠菌形态学特征，2号有 植物乳酸杆菌特征，3号有短乳杆菌特征：3. 生理特性鉴定和生化鉴定。
在培养基中引入1%的对应菌液，每隔4小时吸取菌液，进行梯度性稀释，结合结果 将生理特性明显的1号、2号和3号菌株再培养2-3小时，以 培养时间为横坐标、菌落总数为纵坐标，绘制生长曲线， 明确培养时间和温度等情况对乳酸菌的影响（图1 ) 生化特性鉴定的试验方法有很多，如明胶液化试验、硝酸盐还 原试验等，根据试验需要有序进行试验即可C 寸》O C 寸》c 丨O ，《 N V O Q时阐(h >图1:三种菌株生长曲线经这两种鉴定结果反馈，1号最佳生长温度在2 5 °C - 30°C , 2号和3号最佳生长温度为30°C -35°C ,都为乳酸菌， 结合其生化特性鉴定情况，确定1号菌株为肠膜明串珠菌，2号菌株为短乳杆菌，3号菌株为植物乳酸杆菌.7!作者简介：杨家玉（1999.7.5-),女，河北盐山县， 本科；研究方向：食品。
■文I 杨家玉青岛工学院菜是经过乳酸发酵而形成的蔬菜制品，其增进食欲 的功效是因为含有乳酸菌。
高产细菌素乳酸菌的筛选（方案）
⾼产细菌素乳酸菌的筛选（⽅案）项⽬⼀⾼产细菌素乳酸菌的筛选⼀、概述1、乳酸菌乳酸菌是⼀群形态、代谢性能和⽣理学特征不完全相同的⾰兰⽒阳性菌( G+) 的统称，在发酵碳⽔化合物时其代谢产物主要为乳酸。
乳酸菌形态多样，通常不运动，乳酸菌微好氧，在固体培养基上培养时，采⽤厌氧或低氧压可增加其在表⾯的⽣长物，乳酸菌的⽣长温度在20~53℃，最适温度是30~40℃，耐酸，最适pH 通常是5.5~6.2，⼀般pH在5.0 或更低情况下可以⽣长，在碱性或中性条件其⽣长速率降低。
2、细菌素细菌素是由细菌在代谢过程中通过核糖体合成产⽣的⼀类具有抑菌活性的蛋⽩质或多肽，主要对同源和近缘的细菌有抑制作⽤，在产⽣细菌素的同时还会产⽣免疫蛋⽩，从⽽避免细菌素对⾃⾝细胞的杀伤作⽤。
乳酸菌素是乳酸菌在代谢过程中，合成并分泌到环境中的⼀类对⾰兰⽒阳性菌，尤其是亲缘较近的细菌具有抑菌作⽤的杀菌蛋⽩或多肽乳酸菌素( Nisin) 是乳酸球菌代谢过程中合成和分泌的具有很强杀菌作⽤的物质。
作为乳酸菌细菌素，许多证据表明，Nisin对细胞主要作⽤在细胞质膜，⽽对细菌的杀菌作⽤是由于在菌膜上形成空洞，使膜的通透性增⼤。
⼆、实验⽬的1.熟练掌握培养基的接种，抑菌试验。
2.掌握培养基的配制原则与⽅法。
3.了解⽜津杯法，并能规范操作相关步骤。
三、实验内容1.材料与试剂泡菜⼤肠杆菌、⾦黄⾊葡萄球菌1mol/L NaOH、和HCl溶液、pH试纸、⽊⽠蛋⽩酶、双氧⽔2．培养基①MRS培养基: 蛋⽩胨10g、⽜⾁膏10g、酵母膏5g、柠檬酸氢⼆铵2g、葡萄糖20g、吐温80 1mL、⼄酸钠5g、磷酸氢⼆钾2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g、琼脂18g、蒸馏⽔1000mL,②⽜⾁膏蛋⽩胨固体培养基：⽜⾁膏3.00g、蛋⽩胨5.00g、NaCl3.00g、蒸馏⽔1000ml、琼脂粉8.00g、115℃灭菌20min。
③⽯蕊⽜奶培养基：⽜奶培养基(⽜奶培养基的制备取脱脂奶粉，制成10%的溶液) ，每100ml中加⼊2.50ml⽯蕊⼄醇溶液( 取⽯蕊20g，研磨后置锥形瓶中，加⼊40%⼄醇150ml，煮沸1min，倒出上层液，再加⼊40%⼄醇150ml，煮沸1min，倒出上层液，与第1次倒出液合并，再以40%⼄醇加⾄全量为300ml，滴加1mol/L 盐酸，随加随振摇，⾄溶液变紫⾊为⽌,pH6.0~8.0，混匀，取5~10ml分装于试管中，115℃灭菌20min。
乳酸菌的分离与筛选试验
ｌ ７
酸菌 ，将 其 编 号 从 Ｌ ．到 Ｌ ．９ Ｓ １ Ｓ２ 。
２２ 菌株 的筛选 ． 通 过产酸 能 力的检 定和 对猪源 弱 毒型大肠 杆菌有 抑 制效果的 比较 ，Ｌ ． 、Ｌ ．、Ｌ ．５ 个菌株产酸 能力较 Ｓ３ Ｓ９ Ｓ １ －
强，对Ｅ ｃｉ 抑菌 圈的直径（ ． ｏｌ 的 ｍｍ） 别 为 ： １． ２ １． 分 ８２ 、 ５ ＋ ８
１ ． 初 筛 将 分 离 得 到 的 纯 化 菌 株 接 种 于 液 体 产 酸 培 ．３ ２
２ 结果与分析
２１ 菌种 的确 定 ．
从 不 同来 源材 料 中，共 分离得 到纯 培养菌株 ５ 株 。 ６ 其ｑ Ｇ染色 结果 为 阳性 、ＫＯ － ＇ Ｈ试 、Ｈ２ ２ Ｏ 酶试验 、明胶 水 解 试验 、产硫 化氢试 验均 为为 阴性 的有２ 株 ，确定 为乳 ９
（ ａｍｏｅｌ Ｃ ９ １ ，革 兰 氏 阳性 菌 金黄 色 葡 萄球 菌 Ｓ ｌ ｎｌ ７ ．３） ａ （ ｔｐ）ｏｏ ｃｓ ａ ｒｕ ） 单 核 细 胞 增 生 利 斯 特 氏菌 Ｓａｈｒｃ ｃｕ ｕｃ ｓ ， ｌ （ ｉｅａｍｏ ｏ ｙｏ ｅｅ ４ ０ ） Ｌｓ ｒ ｎ ｅｔｇ ｎ ｓ５ ０ ２ ，热带产朊 假丝酵母和啤 ｔ 酒酵母 （ ａｃ ａ ｍａｅ ｅｅ ｉ ａ ）作 为试 验菌 ，用管碟 Ｓ ｃｈｒ ｃｓｃｒｖｓ ｅ ｏ ｉ 法测定复筛确定的菌株对上述供试菌株 的抑菌作用。 １ ． 抗 药性 的测 定 采用 牛津杯 法 。预 先将 复筛 确定 ．７ ２
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选在我们的日常生活中，发酵食品是不可或缺的一部分。
无论是酸奶、酸菜还是啤酒，它们都是通过乳酸菌的发酵作用而产生的。
但是，我们知道乳酸菌不仅仅只有发酵的功能，它还具备着许多其他的益处。
因此，对于发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选，具有重要的意义。
功能鉴定是指通过实验和测试，了解乳酸菌在食品中的具体功能和效果。
首先，鉴定乳酸菌的抗菌能力是一项重要的功能。
通过抑制其他有害菌的生长，乳酸菌能够保持食品的卫生安全。
其次，乳酸菌的产酸能力也是功能鉴定的重点之一。
乳酸的产生会使食物呈现出酸性，这不仅有助于保持食品的新鲜度，还能抑制有害菌的生长。
最后，功能鉴定还包括乳酸菌的抗氧化能力、调节肠道菌群平衡等。
当我们完成了乳酸菌的功能鉴定后，接下来就需要进行筛选，以选出优质的乳酸菌菌种。
筛选的方法有很多种，其中最常用的是理化指标法和生物学指标法。
理化指标法主要是通过测定乳酸菌产酸、产气、耐酸和耐热等性能来筛选合适的菌株。
这种方法能够对乳酸菌的基本性质进行初步评估，并快速进行筛选。
而生物学指标法则是通过检测乳酸菌对人体健康的影响来筛选菌种。
例如，观察乳酸菌对肠道菌群平衡的调节效果、对免疫系统的影响等。
这些生物学指标可以更好地衡量乳酸菌菌种的功能和效果。
在功能鉴定和筛选乳酸菌菌种的过程中，我们也需要注意一些问题。
首先，在筛选乳酸菌时，要考虑到乳酸菌的耐受能力。
有一些菌株在强酸或高温条件下表现出较强的耐受能力，这对于发酵食品的质量和储存稳定性都是至关重要的。
其次，在饮食习惯和健康需求方面，也需要进行相应的筛选。
不同的人群对于乳酸菌的需求和反应可能有所不同，因此要选择适合的乳酸菌菌种。
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选，是一个需要科学、精确和细致的过程。
它涉及到食品的质量和安全问题，也关系到人们的健康和生活质量。
因此，在进行功能鉴定和筛选时，我们需要综合考虑多个因素，如抗菌能力、产酸能力、抗氧化能力、调节肠道菌群平衡等。
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌的分离鉴定主要包括以下步骤：
1. 菌落筛选：根据菌落的颜色、大小、光泽度和透明程度，挑取含溶钙圈的单菌落。
2. 分离纯化：在MRS或Elliker固体培养基上反复划线分离，直到分离到纯的单一菌落。
3. 革兰氏染色：镜检观察菌体颜色、大小、形状和排列方式。
4. 过氧化氢酶实验：将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株初步认定为乳酸菌。
5. 保藏：用终浓度为25%甘油冻存管进行菌株的保藏，置于-80℃冰箱中保存备用。
乳酸菌的试验方法主要包括以下步骤：
1. 耐酸性优良菌株筛选试验：将分离纯化的乳酸菌和实验室耐酸性较好的WHH544接种到MRS液体培养基中，接种量为2%，于37℃培养箱中培养24小时，连续活化2代后，以6000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀菌体用灭菌生理盐水洗涤、离心2次后，通过麦氏比浊法调整菌悬液浓度为×108CFU/mL。
2. 其他试验：根据具体研究需求进行相关试验，例如通过不同条件培养，观察菌株生长情况；或通过发酵实验，测定乳酸菌的产酸能力等。
以上内容仅供参考，建议查阅专业微生物学书籍或文献获取更全面和准确的信息。
食品中乳酸菌的筛选与应用研究
食品中乳酸菌的筛选与应用研究导语：乳酸菌是一种对人体健康有益的微生物，被广泛应用于食品行业中。
而乳酸菌的筛选和应用研究也成为重要的科研领域。
本文将探讨乳酸菌的筛选方法以及其在食品中的应用。
乳酸菌筛选方法：乳酸菌的筛选是研究乳酸菌应用于食品工业的基础。
常见的乳酸菌筛选方法主要有以下几种：1.传统方法：传统方法基于菌落形态、生理生化特性以及抗生素敏感性等特征来筛选乳酸菌。
该方法虽然简单易行，但耗时耗力，且对菌落形态判断依靠人眼，存在主观误差。
2.分子生物学方法：基于分子生物学技术的乳酸菌筛选方法，利用PCR、DNA 测序等技术对乳酸菌的基因信息进行分析。
这种方法高效准确，但操作复杂、设备昂贵，对实验人员要求较高。
3.生物传感器方法：生物传感器方法通过构建感知器件来筛选乳酸菌。
例如利用表达乳酸菌特异性受体的细胞表面展示库进行筛选。
这种方法具有高通量、自动化的优势，但需要对感知器件进行改造，成本较高。
乳酸菌在食品中的应用：乳酸菌在食品工业中的应用研究广泛，可以应用于乳制品、面包、蔬菜发酵等多个领域。
1.乳制品中的应用：乳酸菌可以用于酸奶、乳酸菌发酵乳等乳制品的制作。
乳酸菌能够将乳糖转化为乳酸，使得乳制品呈现酸味，增加口感的多样性。
同时，乳酸菌还能够产生多种有益物质，如维生素K、抑菌肽等，对人体健康有益。
2.面包中的应用：乳酸菌在面包的制作中可以发挥酸性发酵作用，促进面团的发酵过程，改善面包的质地和口感。
同时，乳酸菌还可以降低面包的pH值，抑制一些有害菌的生长，提高面包的品质和保质期。
3.蔬菜发酵中的应用：乳酸菌可以用于腌制蔬菜，如泡菜、酸豆等。
乳酸菌能够降低蔬菜的pH值，抑制有害菌的生长，同时产生乳酸和其他代谢产物，为蔬菜增添风味。
结语：乳酸菌的筛选与应用研究在食品工业中具有重要意义。
采用不同的筛选方法可以得到各具特色的乳酸菌株，通过将乳酸菌应用于食品制作中可以改善食品的品质和口感，并增加对人体的健康获益。
乳酸菌的筛选及应用
筛选方法：常规的稀释涂布
和划线分离
2021/1/17
14
2、 保加利亚乳杆菌
样品来源：市售酸奶 培养基：牛肉浸膏 1.5％，酵母浸膏 0.5％，葡萄糖
3.0％，柠檬酸三铵 0.2％，七水硫酸镁 0.02％，琼 脂 1.5％，pH 5.1。 培养温度：42℃ 需氧情况：兼性厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法
2021/1/17
18
2、乳酸菌在医药中的应用
（1）乳酸菌素；（2）γ-氨基丁酸(GABA)
2021/1/17
19
3、开发可降解的聚乳酸塑料
2021/1/17
20
（1）聚乳酸（PLA）简介
聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学合 成方法聚合而成的一种高分子材料，它无毒、无刺 激性。
聚乳酸制品废弃后在土壤或水中，30天内会在微 生物、水、酸和碱的作用下彻底分解成CO2和H2O， 不会对环境产生污染，因而是一种完全可生物降解 的材料。
乳酸菌的筛选及应
用
邹远强 2010年7月12日
2021/1/17
1
• 乳酸菌的分类
• 乳酸菌的筛选
• 乳酸菌的应用
2021/1/17
2
第一部分、乳酸菌的分 类
一、乳酸菌
➢ 指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革 兰氏染色阳性细菌；
➢ 分为18个属，共有200多种；
➢ 大部分是人体内必不可少的且具有重要生理功 能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。
③纤维：聚乳酸纤维是由聚乳酸经常规纺丝工艺制得
的生物合成纤维，可制成复丝、单丝、短纤维、针
织物、非织造布等，还可用作建筑材料、农业用材
等。
2021/1/17
抗氧化益生乳酸菌的筛选的开题报告
抗氧化益生乳酸菌的筛选的开题报告一、研究背景及意义氧化反应是生命体系中不可避免的过程之一，过量的自由基和其他活性氧种会对生物体产生有害影响，如细胞膜的损伤、DNA的异常改变、蛋白质的失活等。
干预抗氧化过程已被证明对预防和治疗氧化相关疾病具有重要的作用。
乳酸菌是一类分布广泛的益生菌，具有许多生理功能，如降低胆固醇、增强免疫力、调节肠道功能等。
抗氧化也是乳酸菌作为益生菌中非常重要的一种生理功能之一。
因此，动用乳酸菌来筛选抗氧化益生菌已经成为了一种前沿的研究方向。
本研究通过筛选抗氧化性能强、菌株活跃的乳酸菌，并初步探究其抗氧化机制，有助于开发出具有益生作用及抗氧化功效的新型功能食品。
二、研究内容1. 通过文献综述，了解乳酸菌的分类、特性、生理功能以及抗氧化机制等相关知识。
2. 筛选抗氧化益生乳酸菌，具体包括以下步骤：（1）乳酸菌菌种的培养与预处理：选择常见的乳酸菌菌株，通过预处理方式进行启动，适当增加菌的活性。
（2）抗氧化性能的评估：利用方法测定不同乳酸菌菌株的抗氧化性能，如DPPH自由基和ABTS自由基清除活性等。
（3）筛选抗氧化益生乳酸菌：综合考虑菌株的抗氧化性能和活性等因素，筛选出表现最优异的菌株。
3. 探究抗氧化益生乳酸菌的抗氧化机制，包括：（1）通过测定SOD、CAT等相关酶的活性，评估菌株清除自由基的能力。
（2）测定菌株对人体相关指标的影响，如血清总胆固醇、血糖、免疫指标等。
四、研究进展目前已有相关研究报道了多种具有抗氧化益生作用的乳酸菌，如Lactobacillus plantarum、Lactobacillus fermentum等等。
这些研究不仅充分证明了乳酸菌作为益生菌的生理功能，而且还拓展了其在氧化应激方面的应用，为研发具有抗氧化效果的新型功能性食品提供了支持。
然而，受限于筛选方法、受试者不同以及测定指标等因素，各项研究结果存在差异，并且对乳酸菌的机理尚未有明确的规定。
因此，研究抗氧化益生乳酸菌的筛选、鉴定和机制，在食品开发中具有重要的理论和实践意义。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
乳酸菌的筛选（初筛）
一、实验目的
对采集的仔猪粪便进行梯度稀释和平板涂布，对猪粪中的肠源菌进行初步的筛选。
二、实验材料
PBS、2mL离心管、MRS肉汤、琼脂、冰袋、保温盒、封口膜、200μL 枪头等。
三、实验步骤
1、实验前准备：用MRS肉汤配置MRS固体培养基（内含有1.5%琼脂，1%CaCO3），121℃灭菌15min后倒平板，备后面涂布使用，2mL 离心管中加入1mLPBS备后面实验使用。
2、采样：使用已灭菌的200μL枪头挑取仔猪猪粪适量，放入事先准备好的2mL加有PBS的离心管中，取样标准为每窝仔猪取5个样品，采完样品后，用封口膜将离心管口封住，并放入准备好的装有冰袋的保温盒中保存。
3、涂布：将采好的样品用螺旋振荡器混匀，取100μL样品混匀液，加入900mL的离心管中进行梯度稀释，取10-
4、10-5梯度菌液进行平板涂布。
4、培养：将涂布好的平板依次标好时间、稀释浓度和样品编号后，置于厌氧培养箱中37℃培养24h。
5、培养完成后，对所涂布的平板进行拍照留底。
乳酸菌的筛选
一、实验目的
利用平板划线的原理，对涂布出的单菌落进行划线纯化。
二、实验原理
平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。
一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。
通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。
实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。
四、实验步骤
1、MRS培养基的配置：用MRS肉汤按每升48g计算配置，向其中加入1.5%的比例加入琼脂，按1%的比例加入CaCO3后，121℃灭菌15min。
2、倒平板：培养皿灭菌，烘干后，取灭菌的MRS固体培养基倒平板（每个平板倒10mL左右），放入4℃冰箱备用。
3、划线：于超净工作台中，将涂布平板中的单菌落用接种环挑取，按图1中所示的方法与平板上划线。
4、将接种好的平板置于37℃厌氧培养箱中培养24h。
5、培养期间，注意观察菌的生长情况，培养结束后，拍照留底。