凌风草组织培养体系的建立

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柠条组织培养体系的建立

柠条组织培养体系的建立杨俊鸾（山西省林木育种研究中心，山西太原030031）摘要:为了建立柠条的组织培养体系，用KF/MS 加激素培养法，选择不同的消毒剂，对柠条茎段愈伤组织诱导，并进行芽分化、芽的继代增殖和生根培养。

结果表明，次氯酸钠的消毒效果最好，最适浓度为2%，且浸泡外植体的最佳时间为8min ；诱导芽分化的基本培养基以KF ＋6-BA 0.8mg/L ＋NAA 0.3mg/L ＋蔗糖20g/L ＋琼脂7g/L 为宜，继代增殖最适培养基配方为KF ＋6-BA 1.2mg/L ＋NAA 0.3mg/L ＋蔗糖20g/L ＋琼脂7g/L ，适合生根的最佳培养基为1/2MS ＋NAA 0.3mg/L ＋蔗糖30g/L ＋琼脂7g/L ＋活性炭0.5g/L 。

关键词:柠条；组织培养；外植体；愈伤组织诱导中图分类号:S793.3文献标识码:A文章编号:1002-2481（2018）09-1440-04Establishment of Tissue Culture System ofYANG Junluan（Shanxi Forest Tree Breeding Research Center ，Taiyuan 030031，China ）Abstract ：To establish tissue culture system of Caragana intermedia ,the stem section callus was induced by Murashige and Skoog （MS ）and KF Streptococcus Agar （KF ）culture medium supplemented with hormone and sterilized with the different disinfectants.The bud callus was carried on bud differentiation,bud subculture proliferation and root culture.The results indicated that the best method of disinfection for explant of Caragana intermedia tissue culture was treated with 2%Sodium Hypochlorite for 8min.The basic culture medium of callus induction was KF ＋6-BA 0.8mg/L ＋NAA 0.3mg/L ＋sucrose 20g/L ＋agar 7g/L.The effect of proliferation subculture in KF ＋6-BA 1.2mg/L ＋NAA 0.3mg/L ＋sucrose 30g/L ＋agar 7g/L of culture medium was better.The optimum rooting medium was 1/2MS ＋NAA 0.3mg/L ＋sucrose 30g/L ＋agar 7g/L ＋acticarbon 0.5g/L.Key words ：Caragana intermedia ;tissue culture;explant;callus induction收稿日期:2018-04-24作者简介:杨俊鸾（1978-），女，山西太谷人，工程师，主要从事植物组培及林业育苗技术研究工作。

一种甘草组培快繁体系的建立方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010852849.7(22)申请日 2020.08.22(71)申请人延安大学地址 716000 陕西省延安市宝塔区圣地路580号(72)发明人白朕卿　吴佳文　高新新　田雨　毛仁俊　李丹　(74)专利代理机构西安研创天下知识产权代理事务所(普通合伙) 61239代理人郭璐(51)Int.Cl.A01H 4/00(2006.01)(54)发明名称一种甘草组培快繁体系的建立方法(57)摘要本发明公开一种甘草组培快繁体系的建立方法，该方法包括以下步骤：步骤S1：无菌苗诱导；步骤S2：愈伤组织诱导；步骤S3：再生植株诱导。

本发明中甘草不同外植体都可诱导出愈伤组织，且诱导率较高，且在愈伤组织诱导培养基和增殖诱导培养基均为：MS+2.0mg/L NAA+2.0mg/L6‑BA时，其诱导率超过92％。

甘草组培苗快繁体系的建立为甘草生产的规模化、效益化提供了坚实的基础。

权利要求书1页说明书5页附图3页CN 112005883 A 2020.12.01C N 112005883A1.一种甘草组培快繁体系的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤S1：无菌苗诱导(1)甘草种子用去离子水浸泡22-26h，将水倒掉，留下种子放到已灭菌的平皿中；(2)倒入8％的次氯酸钠溶液(购于西陇科学股份有限公司)浸泡20min，期间晃动平皿，然后用无菌水冲洗7次，之后将灭过菌烘干后的滤纸铺到灭菌的平皿上，将种子放到滤纸上吸干水分；(3)用灭菌的镊子将种子接种至提前灭菌的MS培养基上，温度25℃，湿度30％培养28-30天；步骤S2：愈伤组织诱导(1)选择生长状态良好的无菌幼苗作为材料，在超净工作台中切割外植体；(2)将获取的外植体放在愈伤组织诱导培养基中，温度25℃，湿度30％,光照强度为3500Lux ,培养15-20天；步骤S3：再生植株诱导待愈伤组织长成后，将形成的生长状态良好的愈伤组织块转接到适宜的增殖诱导培养基中，温度25℃，湿度30％，光照强度为3500Lux ,培养20-25天，可以看到愈伤组织表面长出了绿色小点，继续培养绿色小点逐渐发育，获得甘草再生植株。

风车草的组织培养与快繁体系的建立

风车草的组织培养与快繁体系的建立彭文杰;华振铃;苏娜;李学东【期刊名称】《首都师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2009(030)003【摘要】本实验以风车草(Graptopetalum paraguayense)的叶片为材料,研究其快繁成功.结果表明:正面叶片接种于琼脂或者MS培养基上,其无菌苗培养出苗率最高;疏松愈伤组织和胚性愈伤组织诱导的最佳培养基分别为:MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D 0 mg/L;MS+6-BA 0.5+2,4-D 2.0;疏松愈伤芽诱导以及生根分别以:MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5mg/L;MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L最适.各培养基pH5.8,附加0.7%的琼脂,3%蔗糖.炼苗和移栽的适当方案为:蛭石:珍珠岩=3:1灭菌培养基质中保湿培养;蛭石:珍珠岩=5:1未经灭菌的培养基质中炼苗培养.【总页数】5页(P20-24)【作者】彭文杰;华振铃;苏娜;李学东【作者单位】首都师范大学生命科学学院,北京,100048;首都师范大学生命科学学院,北京,100048;首都师范大学生命科学学院,北京,100048;首都师范大学生命科学学院,北京,100048【正文语种】中文【中图分类】Q945.5;Q949.751.1【相关文献】1.鱼腥草变异植株的组织培养及快繁体系研究 [J], 苏月明;高相国;李玲玉;宁淑香;姜长阳2.张良姜无菌组织培养快繁体系建立 [J], 张伟;尹守恒;马培芳;李延龙;崔蕴刚;王雅丽;刘文克;张亚丽3.微型月季组织培养快繁体系的建立 [J], 王禹4.软枣猕猴桃组织培养快繁体系的建立 [J], 王禹5.应用正交试验建立树莓组织培养快繁体系 [J], 王禹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

植物组织培养项目一课程导入之组培发展史

放一片滤纸，再在滤纸片上放上一个烟草体细胞，单细
胞培养成功。 1956年：Miller分离出Kinetin（激动素）。
3. 迅速发展阶段
1960 年以来组织培养理论、实践、技术和方法不
断完善和发展，形成独具特色的专业技术；
在实验技术上建立了较完整的实验程序，已成为一种重要和精细的实验技术；组织培养已广泛应用于生物学的许多分支学科，并取得丰硕的成果。
体细胞杂种。
1978年，有性杂交不亲和的番茄/马铃薯间的体细胞杂交获得了杂种植株（Melchers）。随后获得了地上结番茄，地下生马铃薯的杂种植物。
1985 年，马铃薯的栽培品种与野生种的体细胞
杂交，得到了抗晚疫病和卷叶病的体细胞杂种（Austin）。科间的大豆 /粉蓝烟草（ Kao， 1977）、大豆 /烟草（Chien，1982）产生了连续增殖的杂种细胞系，更远缘的大豆/水稻产生了愈伤组织（
组织培养的奠基人
1943年：White主编了植物组织培养手册《A Handbook of Plant Tissue Culture》，标志组织培养成为一门新兴学科； 1946年：罗士韦在菟丝子茎尖培养地观察到花的形成，为
试管受精奠定了基础；
1948 年： Skoog 和崔真培养烟草茎段时，发现腺嘌呤或腺苷可解除生长素对芽生长的抑制作用，腺嘌呤 / 生长素高，生芽；低，生根；相等，不分化。
交中获得了理想的重组体。
中国农科院蔬菜所培养结球甘蓝和大白菜的杂种
胚得到了种间杂种。
3.4 组织及细胞培养生产有用物质
Arregnin 和 bonner在 1950 年首先进行了培养橡胶茎愈伤组织获取橡胶的尝试。 1967 年， Kaul 和 Staba 从牙签草的组织和细胞培

凉粉草组培快繁和多倍体诱导的研究

凉粉草组培快繁和多倍体诱导的研究凉粉草(Mesona chinensis)又名仙草、仙人草、黑豆腐草等,为唇形科仙草属一年生草本植物,在中国南部、印度和马来西亚均有分布,是一种非常重要的药食两用植物,其性味甘、寒、涩,具清暑、凉血、利尿、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤和抗癌等功效,主治中暑、感冒、高血压、黄疸、肾病、糖尿病和关节肌肉疼痛等症,是一种应用广泛的中草药品种,其相关产品的市场份额已突破100亿元。

野生的凉粉草主要以宿根繁殖,0℃以下时,地上部分冻死,以宿根过冬。

人工种植的凉粉草一般采取扦插方式繁殖,但该方式繁殖效率低且易造成品种退化等问题。

因此,本研究以广西梧州凉粉草为实验材料,建立凉粉草离体快繁体系,并在此基础上,以秋水仙素为多倍体诱导试剂,结合离体快繁技术,进行凉粉草多倍体育种研究。

结果如下：1凉粉草组培快繁技术研究：以凉粉草去叶茎段为外植体,以75%的乙醇浸泡10s,再以0.1%的HgCl2消毒15min,无菌水清洗5次后转接至培养基中,存活率达60%。

凉粉草的初代诱导培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L；继代增殖及丛生芽诱导培养基为MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.06mg/L+ZT0.3mg/L,繁殖系数7.3/30d；最适生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L,生根率100%；生根苗移栽到有机质丰富的基质中,于温室大棚中培养40d,成活率达80%。

此技术可用于凉粉草种苗的产业化繁育。

2凉粉草多倍体育种研究：(1)多倍体诱导：以凉粉草盆栽苗或无菌组培苗为多倍体诱导材料,分别采用了滴液法、混培法和浸泡法进行多倍体诱导研究。

结果显示,浸泡法的诱导效果是三种方法中最好的,最佳处理方式为0.01%的秋水仙素溶液浸泡48h,继代培养后诱导率达16.6%。

取凉粉草根尖进行染色体观测,发现普通二倍体的染色体数目为2n=2x=32,四倍体的为2n=2x=64；还有一些二倍体和四倍体嵌合体,这些嵌合体通过分离和转接后,也能得到纯合的四倍体。

珠兰花组织培养体系建立

珠兰花组织培养体系建立珠兰花组织（ZhulanFlowerOrganization）是一个以激发青少年志愿服务的热情，建立一个年轻人为社会共同发展而做出贡献而建立的社团。

这一系统是专门为培训青少年志愿者而设置的，旨在培养更多具有责任感与社会参与能力的青年及充实他们的志愿服务活动。

珠兰花组织的培养体系分为两部分：一部分是以线上培训为主；另一部分是基于社区实践的社会服务。

线上培训是以自学习为主，主要培训内容涵盖青少年自身志愿者团体的组织与管理，服务态度，如何更好地负责学校和社区社会服务等。

另一部分是基于社区实践的服务，主要是按照一定的服务形式参与到学校和社区社会服务活动，从而加深他们在使命感、社会责任感以及服务精神的认识和掌握。

基于以上珠兰花组织的培养体系，以学习和服务相结合的形式来培养青少年的社会参与精神，他们可以在线上自学知识，也可以在社区中参与实际的服务活动。

学习及服务结合起来，青少年可以获得更多的认知，加深他们对志愿服务的认知与理解，同时也能培养他们自己独立完成任务，对自身责任担当的能力。

在线上学习中，青少年可以学习到更多志愿服务活动的知识，进而更好地参与实际的服务活动，学习更多实践服务的经验和知识。

同时，社区实践的服务也可以使他们更好地认识社会及社会的变迁。

珠兰花组织的培养体系旨在培养青少年的责任心，从而使他们以正确的价值观投身于社会，以正确的方式为社会共同发展作出贡献。

同时，珠兰花组织将持续不断地完善和推行这一培训体系，以配合社会日新月异的发展，不断改善和完善青少年志愿者的服务内容和质量。

综上所述，珠兰花组织的培养体系对于青少年来说至关重要，它可以使他们以正确的价值观投身社会，以正确的方式为社会共同发展作出贡献。

将这一体系完善与推行，以配合社会的发展，为孩子们提供更为丰富的志愿服务活动体验，更好地配合社会发展，为青少年志愿者服务活动开展提供更好的培训规划，从而为社会发展作出更大的贡献。

西藏卷丹地下鳞茎的组织培养和悬浮体系的建立

西藏卷丹地下鳞茎的组织培养和悬浮体系的建立本论文主要探讨了西藏卷丹(Lilium lancifolium Thunb．)组织培养技术。

实验以西藏卷丹的地下鳞茎作为外植体，一方面诱导芽点生根成苗，另一方面诱导形成愈伤组织。

本研究为西藏卷丹的引种驯化和大规模工厂化育苗，以及对其药用成分研究打好了一个坚实的基础。

通过实验得出以下结果：1、鳞茎初代培养的最佳配方是：MS+NAA1.5mg／L+BA0.5mg／L，鳞片的分化能力依次为中层＞内层＞外层，鳞片下部形成小鳞茎能力最强，中部其次，上部最少；将鳞片背面紧贴培养基的接种方式比以基部斜插入培养基和腹面放入效果好，其诱导率高；而以腹面放入的方式诱导不出小鳞茎。

2、继代培养中的最佳配方是：MS+NAA2.0mg／L+BA1.0mg／L，平均增殖系数达到为8.2，且小鳞茎生长较强壮，糖的浓度以20g／L为最利于鳞茎的增殖。

3、小鳞茎生根的最佳实验组合为为MS+IBA1.0mg／L+活性炭1.0g／L，生根率最高，达到98.0％，且根生长粗壮。

卷丹组培移栽以蛭石为最好，成活率最高，可以达到93.3％，移栽苗生长良好，叶片伸展。

4、当BA=1.5mg／L，NAA=0.5mg／L时愈伤诱导率最高，达到91％，暗环境下更有利于愈伤组织的形成；实验中还观察到，光培养下愈伤浅绿色，较硬，暗环境下的愈伤组织呈淡黄绿色，松散。

5、当BA=1.0mg／L，NAA=0.5mg／L时，愈伤增殖最快，愈伤组织淡黄绿色，疏松，含糖为20g／L的培养基中愈伤生长最快，加入0.5g／L活性炭利于愈伤组织的增殖，且有效抑制褐化现象。

6、培养基为MS+NAA1.5mg／L+BA0.1mg／L 时，愈伤分化率较高，且芽生长情况最好。

7、pH5.8-6.2的MS+BA0.8mg／L+NAA0.3mg／L+20g／L蔗糖的液体培养基中愈伤组织增殖最快，颗粒大，结构疏松，颜色黄绿色。

植物组织培养步骤之欧阳道创编

叫离体培养，指从植物体分离作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。

植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上织再经过再分化形成再生植物。

组织培养的步骤一、培养基配制配制培养基有两种方法可以选择，一是购买培养基中所有化学药品，按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂，如MS、B5等。

自己配制可以节约费用，但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题，给实验带来麻烦。

就目前国内的情况看，大部分还是自己配制。

为了方便起见，现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。

1、配制几种母液（1）配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。

分别称取NH4NO3 165g KH2PO4 17gKNO3 190g CaCl2·2H2O 44gMgSO4·7H2O 37g各自配成1L的母液。

倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

（2）配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。

依次称取KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025gH3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025gMnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025gZnSO4·7H2O 0.86g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。

分别称取CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。

（3）配制MS有机母液一般配制成100倍MS有机母液。

植物愈伤组织诱导与植株再生培养体系建立

——
植物愈伤组织培养是植物生物技术的最基本的内容，植物愈伤组织培养是植物生物技术的最基本的内容，无论是细胞培养，原生质体培养，植物培养和器官培养，论是细胞培养，原生质体培养，植物培养和器官培养，一般都要经过愈伤组织培养这个过程。因此，都要经过愈伤组织培养这个过程。因此，愈伤组织在离体培养过程中占有重要的地位，其用途也十分广泛，养过程中占有重要的地位，其用途也十分广泛，最直接和最重要的用途包括：1·无性繁殖并不大量扩繁被拍样的植重要的用途包括：无性繁殖并不大量扩繁被拍样的植为细胞悬浮培养和此生代谢产物生产和利用、物;2·为细胞悬浮培养和此生代谢产物生产和利用、原生质体为细胞悬浮培养和此生代谢产物生产和利用培养和细胞融合提供易于操作的起始材料；为植物体细胞无培养和细胞融合提供易于操作的起始材料；3·为植物体细胞无性系变异、细胞突变体筛选创造适宜的体系和基础；为外源性系变异、细胞突变体筛选创造适宜的体系和基础；4·为外源基因的遗传转化提供便于保存和利用的操作对象；为种质资基因的遗传转化提供便于保存和利用的操作对象；5·为种质资源的保存提供新的形式；6·为离体研究植物组织和细胞分裂、源的保存提供新的形式；为离体研究植物组织和细胞分裂、为离体研究植物组织和细胞分裂分化、带鞋和状态的转变创造适宜的材料和体系。分化、带鞋和状态的转变创造适宜的材料和体系。植物再生：植物再生：植物体因受伤或生理上分离而失掉组织或器官后，恢复或复制失去部分的现象。官后，恢复或复制失去部分的现象。再生现象广泛存于植物植物的组织，甚至单个细胞都具有再生能力。中。植物的组织，甚至单个细胞都具有再生能力。在植物组织中，尤以分生组织的再生能力更为明显。织中，尤以分生组织的再生能力更为明显。
2、小麦成熟胚愈伤组织

一种泡桐植物组织培养方法

一种泡桐植物组织培养方法技术总结
一种泡桐植物组织培养方法，包括如下步骤：取“绿桐1号”植物的外植体进行消毒；然后接种到特定初代诱导培养基中诱导丛生芽；将诱导的丛生芽在特定继代增殖培养基进行增殖培养，获得大量有效丛生芽；将有效芽转接到特定生根培养基上进行生根培养，获得完整无菌苗。

本发明选择特定的初代诱导培养基、继代培养基和生根培养基，利用组织培养技术，通过一种新途径获得了“绿桐1号”植物的无菌苗，建立了稳定、高效的组织培养快繁体系。

本发明的方法易操作，生产成本低，适合工厂化育苗，产量高，品质好，不污染环境，可以实现批量生产。

技术研发人员：吕成群;李昆龙;吕世凡
受保护的技术使用者：广西大学。

植物的组织培养技术-课件

【答案】C
植物组织培养与花药培养技术的异同
高等动物的精子也是由减数分裂形成的，但是和被子植物不同。高等动物的精子形成是精原细胞经过减数分裂生成精细胞，然后精细胞再变形形成精子。
二、植物组织培养与花药培养技术的异同 1. 相同之处：培养基配制方法、无菌技术及接种操作基本相同，原理相同，即由离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导生根，然后进行移栽。 2. 不同之处：生殖方式不同，植物组织培养属于无性生殖，而花药培养属于有性生殖。植物组织培养取得的外植体为体细胞，染色体数无需加倍，花药培养取材为花药，培养成的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体数目加倍，重新恢复正常植株的染色体数，后代才能恢复可育性。在花药开裂释放出许多胚状体时，需尽快将幼小植株分开，并移植，培养成的植株要进一步鉴定筛选。
(3)接种：始终在__________旁进行，对接种工具要用________ 灭菌。
(4)培养与移栽：在________℃的无菌箱中培养，得到________ 后进行移栽。
三、月季的花药培养
1. 被子植物花粉的发育过程：花粉母细胞(________细胞)、四分体时期、单核期、______期、精子。
【答案】D
理念依据基本过程影响因素
操作过程
生殖方式可育性
组织培养
花药培养
细胞的全能性
细胞的全能性
脱分化、再分化
脱分化、再分化
选材、营养、激素、选材、营养、激素、pH、
pH、温度、光照等
温度、光照等
制备培养基、外植体选材、材料消毒、接种
消毒、接种、培养、和培养、筛选和诱导、
移栽、栽培
移栽、栽培选育
2. 产生花粉植株的两种途径

林荫银莲花组培快繁体系的建立和形态发生的研究的开题报告

林荫银莲花组培快繁体系的建立和形态发生的研究的开题
报告
一、选题背景及意义
林荫银莲花属于半灌木型植物，药用价值高，广泛分布于亚热带和热带地区。

随着经济和科技的发展，人们对林荫银莲花的需求也一直在增加。

因此，林荫银莲花组
培快繁技术的研究和应用也逐渐受到人们的关注。

本研究旨在建立一种有效的林荫银
莲花组培快繁体系，并探究形态发生机制，为其高效生产提供科学依据。

二、研究内容及方法
1. 林荫银莲花体细胞培养技术的建立：本实验将选用愈伤组织为材料，利用脱分化培养和悬浮细胞培养等技术建立适宜的体细胞培养体系，为后续的繁殖和种质改良
提供技术基础。

2. 林荫银莲花快繁技术的优化：本实验将研究含有不同植物生长调节剂浓度的培养基对组培快速繁殖的影响，优选最适宜的培养基配方，探索最合适的组培快繁技术。

3. 林荫银莲花形态发生机制的研究：本实验将对不同培养条件下的组培林荫银莲花进行形态学结构的观察，并采用离体培养技术和分子生物学技术研究花芽分化的机
制和遗传调控机制。

三、研究成果及意义
1. 建立了一种适宜的林荫银莲花体细胞培养技术，为后续繁殖和种质改良提供技术基础。

2. 优化了组培快速繁殖技术，获得高效、可行的组培快繁体系。

3. 探究了林荫银莲花的形态发生机制，并了解了花芽分化的遗传调控机制，为其高效生产提供科学依据。

本研究的开展对保护和利用林荫银莲花资源具有重要意义，为其在药品、保健品及化妆品等相关领域的开发和应用提供技术支撑。