(完整版)生物人教版高中选修1生物技术实践《课题一微生物的实验室培养》知识点归纳
选修一生物技术实践知识复习汇总
1选修1《生物技术实践》知识归纳图解（马中邹伟春）（一）培养基的基本知识微生物的实验室培养I1 •培养基的营养成分2 •培养基的配制原则 （1） 目的明确。
要根据微生物的种类、培养目的等选择原料、配制培养基。
（2）营养要协调。
各种营养物质要保证适当的浓度和比例。
营养物质比例过低，不能满足微生物生长；浓度过高则会抑制微生物的正常生长。
营养物质的浓度比（如C/N ）还会直接影响某些微生物的代谢产物，如谷氨酸生产， C/N=4： 1时，菌体大量繁殖，谷氨酸产量少；而 C/N=3： 1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大。
（3）pH 要适当。
不同微生物生长所需 pH 不同。
如细菌pH 保持在6.5〜7.5之间；放线菌保持在 7.5〜8.5之间；真菌应保持在 5.0〜6.0之间。
3•培养基的分类及作用：培养基种类很多，作用也不同。
根据不同的分类标准，可将培养基分为不同种类。
说明：①病毒为非细胞结构的生物体，专营活细胞寄生，目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动植物组织中才能增殖。
常用于培养病毒的是活鸡胚。
②加入培养基中的凝固剂（如琼脂），一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。
③选择培养基一般只生长具有特定的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。
注意：选择培养基的选择方法（1）在培养基中加入某种化学物质。
例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。
这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。
（2）改变培养基中的营养成分。
例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油作为惟一碳源时，可以分离出消除石油污染的微生物。
（3）改变微生物的培养条件。
例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。
（二）灭菌技术1. 无菌技术的概念在微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，其主要技术是无菌操作。
无菌技术是指通过一定物理、化学的手段，防止实验室培养物被外来微生物污染。
选修1生物技术实践知识点整理doc资料
选修1生物技术实践知识点整理选修1《生物技术实践》第一部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离一、大肠杆菌1．大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，为兼性厌氧的肠道杆菌。
2．用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。
二、本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。
分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
本实验用LB液体培养基（通用的细菌培养基）扩大培养大肠杆菌，培养后用LB固体平面培养基进行划线分离。
三、细菌的培养和分离1．细菌的培养：（1）繁殖方式：细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20min分裂一次。
（2）培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环来转移带菌的培养物。
2．细菌的分离分离的方法与特点：划线分离法：操作简单。
（接种环）涂布分离法：操作复杂，单菌落更易分开。
（玻璃刮刀）四、灭菌操作1．灭菌操作的原因：获得纯净的培养物的关键是防止外来杂菌的入侵污染。
2．无菌操作的条件：（1）各种器皿必须是无菌的。
（首要条件）（2）各种培养基必须是无菌的。
“细菌喜荤，霉菌喜素”细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压。
在中性偏碱的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。
霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
在中性偏酸的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。
如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力（90 ℃以上）灭菌30min.3．灭菌的方法：是指杀灭病原微生物的方法。
（1）灼烧灭菌（2）干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。
（3）高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃(1kg/cm2)下维持15min.（4）过滤灭菌：G6玻璃砂漏斗过滤（用于有些不能加热灭菌的化合物，如尿素加热会分解）4．消毒的方法：是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法（1）煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min（2）巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min（3）化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源（4）紫外线消毒五、大肠杆菌的培养和分离实验1．实验步骤：（1）培养基灭菌：将50mlLB液体培养基、50mlLB固体培养基加上封口膜和培养皿用牛皮纸包好进行高压蒸汽灭菌。
生物人教版高中选修1 生物技术实践微生物的实验室培养基础梳理
微生物的实验室培养基础梳理一、微生物的营养1．碳源2．氮源【注意】①对许多微生物来说，既可利用无机含氮化合物作为氮源，也可利用有机含氮化合物作为氮源。
②固氮微生物可以利用氮气作为氮源。
③铵盐、硝酸盐等既可作为微生物最常用的氮源，也可作为某些化能自养微生物的能源物质。
④自养微生物与异养微生物类型的划分主要是依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一的碳源，而不是由氮源决定。
3．水水是微生物生命活动必需的一种重要物质。
4．无机盐无机盐对微生物的生理功能有：构成微生物细胞的组成成分；作为酶的组成成分，也是某些酶的激活剂；调节和维持微生物细胞的渗透压和pH；某些无机盐具有特殊功能，如化能自养细菌的能源物质NH4+等。
5．生长因子6．其他条件培养微生物时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、培养基1．培养基的概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供适合其生长繁殖的营养基质。
2．配制原则目的要明确；营养要协调；pH要适宜；要经济节约。
3．培养基的类型（1）按物理性质分：（2）按化学性质分：（3）按功能分：①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效地避免操作者自身被微生物感染。
②培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板。
操作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基。
③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
④在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
三、无菌技术1．无菌技术的主要内容①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
(完整版)生物人教版高中选修1生物技术实践《课题一微生物的实验室培养》知识点归纳
课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源（生长因子）等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
最新选修1生物技术实践知识点整理
选修1《生物技术实践》第一部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离一、大肠杆菌1．大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，为兼性厌氧的肠道杆菌。
2．用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。
二、本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。
分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
本实验用LB液体培养基（通用的细菌培养基）扩大培养大肠杆菌，培养后用LB固体平面培养基进行划线分离。
三、细菌的培养和分离1．细菌的培养：（1）繁殖方式：细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20min分裂一次。
（2）培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环来转移带菌的培养物。
2．细菌的分离分离的方法与特点：划线分离法：操作简单。
（接种环）涂布分离法：操作复杂，单菌落更易分开。
（玻璃刮刀）四、灭菌操作1．灭菌操作的原因：获得纯净的培养物的关键是防止外来杂菌的入侵污染。
2．无菌操作的条件：（1）各种器皿必须是无菌的。
（首要条件）（2）各种培养基必须是无菌的。
“细菌喜荤，霉菌喜素”细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压。
在中性偏碱的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。
霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
在中性偏酸的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。
如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力（90 ℃以上）灭菌30min.3．灭菌的方法：是指杀灭病原微生物的方法。
（1）灼烧灭菌（2）干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。
（3）高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃(1kg/cm2)下维持15min.（4）过滤灭菌：G6玻璃砂漏斗过滤（用于有些不能加热灭菌的化合物，如尿素加热会分解）4．消毒的方法：是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法（1）煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min（2）巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或80 ℃下煮15min（3）化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源（4）紫外线消毒五、大肠杆菌的培养和分离实验1．实验步骤：（1）培养基灭菌：将50mlLB液体培养基、50mlLB固体培养基加上封口膜和培养皿用牛皮纸包好进行高压蒸汽灭菌。
高中生物选修一 专题二 课题1微生物的实验室培养知识点背诵
选修一专题二课题1微生物的实验室培养考点一培养基1、概念？种类？在液体培养基中加入？后可以制成固体培养基2、琼脂的来源？本质？特性？（P14最左侧）3、培养基一般都含有哪些成分？4、培养基在提供主要营养物质的基础上，还需要满足微生物生长的哪些要求？培养乳酸菌时需要添加？培养霉菌是需要将PH调至？培养细菌是需将PH调至？考点二无菌技术1、获得纯净培养物的关键是？2、如何避免杂菌的污染？3、消毒的概念？常用的消毒方法有哪些？4、灭菌的概念？常用的灭菌方法有哪三种？5、灼烧灭菌的对象A:微生物的接种工具，如？直接在酒精灯火焰的？灼烧B:在接种过程中，？等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌6、干热灭菌的条件？对象？干热灭菌过程中灭菌对象要用？包裹严密（附录4）灭菌物品为什么不能与干热灭菌箱内壁的铁板接触？（附录4）7、高压蒸汽灭菌的条件？过程？（附录4）对象：如培养基8、除了消毒和灭菌，实验室里还可以用？方法进行消毒考点三制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、步骤？2、灭菌过程中用什么方法？3、倒平板时的温度是？过程？倒平板后平板倒置的原因？（即可防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发）考点四纯化大肠杆菌1、微生物接种的方法最常用的有？2、菌落的概念？3、平板划线法的概念？操作过程？用的工具？（接种环）4、稀释涂布平板法的概念？过程？用的工具？（涂布器）5、大肠杆菌的培养温度？是否需要设置空白对照？（P20最上）对照组有菌落生长说明什么？6、为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，对于频繁使用的菌种可以采用？方法。
具体过程？此方法的缺点？对于需要长期保存的菌种，可以采用？方法。
人教版高中生物选修一知识点总结
人教版高中生物选修一知识点总结The manuscript was revised on the evening of 2021高中生物选修一生物技术实践 知识点总结专题一 传统发酵技术的应用 课题一 果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、有氧发酵：醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C 6H 12O 6＋6O 2→6CO 2＋6H 2O5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C 6H 12O 6→2C 2H 5OH ＋2CO 26、20℃左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。
在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。
在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
2C 2H 5OH ＋4O 2→CH 3COOH ＋6H 2O10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。
③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
人教版高级高中生物选修一专题二微生物的培养与应用知识点归纳
人教版高级高中生物选修一专题二微生物的培养与应用知识点归纳文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
课标人教版高中生物选修1生物技术实践知识点复习
高二下生物选修1生物技术实践复习知识点1、 果酒和果醋的制作发酵：利用微生物或其他生物的细胞在有氧或无氧条件下繁殖或积累其代谢产物的过程。
类型：（1）根据是否需要氧气分为：需氧发酵和厌氧发酵。
（2）根据产生的产物可分为：酒精发酵、乳酸发酵、醋酸发酵等1．酵母菌的细胞呼吸酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖：C 6H 12O 6+6H 2O +6O 2→6CO 2+12H 2O+能量酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳：C 6H 12O 6→2C 2H 5OH+2CO 2+能量2．酵母菌发酵的最佳环境:酵母菌在有氧和无氧的条件下都能生活在有氧时，酵母菌大量繁殖，但是起不到发酵效果；在无氧时，繁殖速度减慢，但是此时可以进行发酵。
在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵。
20℃左右最适合酵母菌繁殖，酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH 最好是弱酸性。
3．醋酸菌好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸。
表达式为：C 2H 5OH+O 2→CH 3COOH+H 2O ；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。
醋酸菌生长的最佳温度是在30℃～35℃装置各部位的作用充气口：在醋酸发酵时连接充气泵进行充气。
排气口：排出酒精发酵时产生的CO 2。
出料口：是用来取样的。
该装置的使用方法：使用该装置制酒时，输入氧气，酵母菌有氧呼吸时，产生能量多，可大量繁殖；无氧呼吸时，产生能量少，仅能满足自身代谢，基本不繁殖；所以利用酵母菌进行工业生产时先进行通气再密封。
(1)两种对照方式都必须遵循单一变量原则。
(2)前者是标准对照，后者是自身对照。
还可以设置一组空白对照（2ml 蒸馏水）几种常用发酵菌种的比较酶酶 酶 对照组→2mL 白酒 实验组→2mL 发酵液 试管甲→2mL 发酵前液试管乙→2mL 发酵后液／L 的H 2SO 43滴→振荡混3滴→观察／L 的H 2SO 43滴→振荡混3滴→观察果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌种及控制条件的比较深化拓展：1、由于醋酸菌和乳酸菌属于原核生物，因此在利用这两类微生物时，其环境中一定不要加入青霉素等抗生素。
人教版 高中生物选修一知识点总结
高中生物选修一生物技术实践 知识点总结课题一 果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、有氧发酵：醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C 6H 12O 6＋6O 2→6CO 2＋6H 2O5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C 6H 12O 6→2C 2H 5OH ＋2CO 26、20℃左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。
在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。
在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
2C 2H 5OH ＋4O 2→CH 3COOH ＋6H 2O10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。
③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
先在试管中加入发酵液2ｍL ，再滴入物质的量浓度为3mol/L 的H 2SO 43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。
人教版高中生物选修一2.1微生物的实验室培养
超净工作台
3.消毒与灭菌的概念及两者的区别
（１）消毒定义： 利用较为温和的物理或化学方法杀死
物体表面或内部的部份微生物（不包括芽 孢和孢子）
（2）灭菌的定义：
使用强烈的理化因素杀死物体内外所 有的微生物，包括芽孢和孢子。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作 中最普通也是最重要的技术。
2.长期保存： 甘油管藏 1ml甘油＋1ml菌液 -20℃保存
本课题知识小结:
【典例例题】
1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板
1、微生物的实验室培养要进行严格的灭菌
和消毒，以下理解不正确的是( D )
A. 灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细 胞、芽孢和孢子 B. 任何消毒方法一般都不能消灭微生物的 孢子和芽孢 C. 灼烧法灭菌主要对象是金属器具，也可 以是玻璃器具 D. 常用灭菌方法有灼烧灭菌法、高压蒸汽 灭菌法和紫外线灭菌法
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 琼脂20.0g
牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g Nacl 5.0g H2O 定容至1000mL
分析营养构成？
4.配制原则
生产 科研
⑴目的明确：根据微生物的种类、培养目的选择原料
自养型：不加碳源（CO2碳源） 异养型：有机碳源
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当
⑶适宜的pH值：加入缓冲剂 细菌偏碱，真菌偏酸
特殊营养物质：生长因子
(1)概念： 微生物生长不可缺少的微量有机物。
(2)作用： 酶和核酸的组成成分。 (3)常见的生长因子：
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。 （4）来源：
一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织 提取液等可为微生物提供生长因子
人教版高中生物选修一《生物技术实践》之考点知识归纳
【选修一】高中生物技术实践知识点、发酵原理比较注意：（1）装瓶时应留1/3空间：一是为前期酵母菌繁殖提供氧气；二是防止后期酵母菌酒精发酵产CO2过多，发生爆瓶或发酵液溢出。
（2）适时拧松瓶盖：（注意不是打开瓶盖）既可放出CO2气体，又抑制杂菌和氧气进入瓶内。
（3）果酒变酸的原因：氧气进入瓶内进行醋酸发酵，产生醋酸。
（4）果酒鉴定：酸性条件下，（橙色）重铭酸钾与乙醇（酒精）反应，呈现灰绿色。
（5）为提高产品品质，制作果酒或果醋时可分别加入人工培养的酵母菌或醋酸菌。
、腐乳制作课题背景：腐乳一直受到人们的青睐，是因为经过微生物的发酵，豆腐中的蛋白质被分解成小分子肽和氨基酸，脂肪被分解成甘油和脂肪酸，味道鲜美，易于消化吸收，而腐乳本身又易于保存。
(一)制作原理：多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉，酵母，曲霉，毛霉等，起主要作用的是毛霉。
毛霉是一种丝状真菌，其具有发达的白色菌丝。
毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪水解解成甘油和脂肪酸。
在多种微生物的协同作用下，普通的豆腐转变为风味独特的腐乳。
(二)实验流程：让豆腐长出毛霉一-＞加盐腌制一-＞加卤汤装瓶一-＞密封腌制(三)注意事项1、选择含水量在70%左右的豆腐制作腐乳：含水量过高，豆腐块易酥烂，不易成形；含水量过低, 豆腐透气性差，影响毛霉的生长。
2、腐乳外的“皮”：毛霉的白色菌丝被“搓毛”后形成的，具有保护内部结构的作用，无毒。
3、防杂菌污染：玻璃瓶洗净后用沸水消毒；加卤汤后，用胶条密封；封瓶时，瓶口通过酒精灯火焰。
4、因豆腐含水量的不同，发酵条件的不同以及装罐时加入的辅料的不同，可以制成不同风味的腐乳。
如，红方加入了红曲而成深红色；糟方因加入了酒糟而糟香扑鼻；青方不加入任何辅料，用豆腐渗出的水加盐腌制而成。
四、泡菜制作(一)制作原理：乳酸菌是厌氧细菌，在无氧条件下将葡萄糖分解成乳酸。
常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。
人教版 高中生物 选修一 专题二 课题1 微生物的实验室培养(一)
【学习目标】1、阅读“培养基”部分，回答：（1）什么是培养基，有哪些类型？（2）各种培养基共有的营养成分是哪些？（3）培养基除提供主要营养物质外，还应满足什么条件？举例说明。
2、阅读“无菌技术”部分，回答：（1）回答旁栏思考题（2）什么是消毒？什么是灭菌？二者的主要区别是什么？（3）消毒方法有哪些？适用于哪些对象？如何操作？（4）灭菌方法有哪些？列表比较（从适用物品、灭菌条件、灭菌时间方面展开）知识补充1、生长因子：微生物生长必不可少的微量有机物，如维生素、氨基酸、碱基等，一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等，可为微生物提供生长因子。
2、芽孢：某些细胞在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形或椭圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。
一个细胞只形成一个芽孢，所以芽孢是一个休眠体而没有繁殖功能，芽孢具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压能力，芽孢的休眠能力惊人，可达几十年。
【达标检测】[必做]1、下列叙述正确的是（ ）A 、培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B 、培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C 、固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D 、微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌2、关于微生物的营养，下列说法正确的是（ ）A 、同一种物质不可能既是碳源又是氮源B 、凡是碳源都提供能量C 、除水以外的无机物仅提供无机盐D 、无机氮源也能提供能量【使用时间】 第 2 周 第 1 课时 【编辑】申俊云 【审核】刘萍萍 【编号】2262021 【主题】 第二章 第一节 微生物的实验室培养（一） 2012.02.143、关于灭菌和消毒的理解不正确的是（）A、灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B、消毒和灭菌实质上是相同的C、接种环用灼烧法灭菌D、常用的消毒方法有加热法、紫外线法、化学药品法4、高温灭菌的原理是（）A、每种微生物繁殖和生长的最适温度是一定的B、微生物对于高温环境不适应C、高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸D、高温降低了环境中氧的浓度5、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒的方法依次是（）①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A、⑤③②①④⑥B、①②③④⑤⑥C、⑥②③④①⑤D、③④②①⑥⑤[选做]1、某小组同学为了调查湖水中细菌的情况而进行了实验。
高中生物选修一现代生物技术实践必背知识点
高中生物选修一《生物技术实践》必背知识点实验一大肠杆菌的培养和分离【考点一】培养基1、培养基配置①微生物的生命活动需要五大营养要素：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子；②有的物质既是碳源又是氮源（为微生物生长提供碳元素和氮元素），如：蛋白质、蛋白胨；③有的既是碳源又是生长因子（是微生物生长不可缺少的微量有机物），如：酵母提取物；④“细菌喜荤，霉菌喜素”；细菌喜37℃的温度；霉菌喜25-30℃的温度；⑤细菌的培养基：蛋白胨、酵母提取物、一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；通常在中性偏碱的环境中生长；⑥霉菌的培养基：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可；通常在中性偏酸的环境中生长；⑦在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要适宜的pH、温度以及特殊营养物质，以满足微生物生长对的要求。
2、培养基的种类及用途：①液体培养基：呈现液态，用于扩大培养和工业生产；②固体培养基：配制时需加入琼脂（凝固剂），呈固态，用于菌种分离、鉴定、计数等；③我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，用LB固体培养基来分离大肠杆菌。
【考点二】灭菌和消毒1、无菌技术：人们利用微生物完成一定的反应，必须要求某种微生物是没有被其他微生物污染的，因此，在培养微生物时必须进行无菌操作；2、灭菌是用物理或化学的方法，杀死或除去环境中的一切微生物的方法。
杀死病原菌的方法叫消毒。
如：实验室要对使用前和使用后的培养基、各种容器进行灭菌；要对实验服、对病人的排泄物和衣物进行消毒。
3、干热灭菌法：是利用火焰将接种环和试管上的微生物烧死（又称灼烧灭菌法），或在140-160℃的烘箱中加热2-3h，将微生物的营养体和芽孢杀死。
4、加压蒸气灭菌法（高压蒸气灭菌法）：这是生产和实验室常用的灭菌法，将灭菌锅内通入压力达到1000g/cm2的高压蒸气，锅内温度达121℃，持续15-30min，即可达到灭菌目的；注意：当培养基内有葡萄糖时，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力（90℃以上）灭菌30min。
人教版高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳 (2)
专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
人教版高中生物选修一知识点总结
人教版高中生物选修一知识点总结高中生物选修一是对生物技术实践方面的学习，包含了丰富且实用的知识。
以下是对人教版高中生物选修一主要知识点的总结。
一、传统发酵技术的应用（一）果酒和果醋的制作1、果酒制作的原理酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵，反应式为：C₆H₁₂O₆ →2C₂H₅OH ＋ 2CO₂＋能量。
2、果醋制作的原理醋酸菌在有氧条件下将乙醇氧化为醋酸，反应式为：C₂H₅OH ＋O₂ → CH₃COOH ＋ H₂O。
3、制作流程挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵。
4、发酵条件的控制果酒制作：温度控制在 18 25℃，前期需通入氧气让酵母菌大量繁殖，后期无氧发酵产生酒精。
果醋制作：温度控制在 30 35℃，持续通入氧气。
（二）腐乳的制作1、原理毛霉等微生物产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
2、制作流程让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。
3、影响腐乳品质的因素盐的用量、酒的用量、发酵温度、发酵时间等。
（三）泡菜的制作1、原理乳酸菌在无氧条件下将葡萄糖分解为乳酸。
2、制作流程准备原料→配制盐水→装坛→封坛发酵。
3、亚硝酸盐含量的测定原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N 1 萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
二、微生物的培养与应用（一）微生物的实验室培养1、培养基按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基；按照化学成分可分为天然培养基和合成培养基；按照用途可分为选择培养基和鉴别培养基。
2、无菌技术包括消毒（如煮沸消毒、巴氏消毒等）和灭菌（如灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等）。
3、大肠杆菌的纯化培养包括平板划线法和稀释涂布平板法。
（二）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1、筛选菌株选择以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。
2、统计菌落数目常用的方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。
3、实验流程土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
高中生物选修一微生物的实验室培养(人教版)全
微生物包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类 生物群体，它个体微小，与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类，广泛涉 及食品、医药、工农业、环保、体育等诸多领域。
实验室培养的目的与意义
实验室培养的目的
在人为控制的条件下，创造适宜于微生物生长繁殖的环境条件， 使微生物大量地生长繁殖，从而获得所需要的各种微生物制品。
培养基的制备
按照培养基配方准确称量 各成分，混合均匀后分装 到培养皿或试管中。
培养基的灭菌
采用高压蒸汽灭菌或干热 灭菌等方法对培养基进行 灭菌处理，确保无菌状态。
接种与培养方法
接种方法
掌握平板划线法、稀释涂布平板法、 斜面接种法等常用接种方法，正确接 种微生物。
培养条件
培养时间
根据微生物的生长速度和实验目的， 确定合适的培养时间，及时观察并记 录微生物的生长情况。
根据微生物的生长需求，设置合适的 培养温度、湿度和pH等条件。
03 细菌的培养与观察
细菌的形态与结构
细菌的基本形态
01
球菌、杆菌、螺旋菌等。
细菌的结构
02
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质等。
特殊结构
03
荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
细菌的生理特性与分类
细菌的生理特性
营养类型（自养与异养）、呼吸类 型（好氧、厌氧与兼性厌氧）、生 长繁殖（简单分裂、芽孢形成与萌 发）等。
食品保鲜
利用微生物代谢产物，如乳酸链球菌素等，延长 食品保质期。
食品检测
利用微生物对食品中的有害物质进行快速、灵敏 的检测。
微生物在医药工业中的应用
抗生素生产
通过微生物发酵生产抗生素，如青霉素、头孢等。
人教版高中生物选修一：《微生物的实验室培养》
3.溶化：牛肉膏、称量牛纸肉膏、少5量g 水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、蛋N白aC胨l→琼10脂g →补水定容
调pH、分装、封口N：acl 5g 4.灭菌：培养基、H培2O养皿定容至1000ml 5.倒平板：
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌：
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 琼脂20.0g 牛肉膏 5g
蛋白胨 10g Nacl 5g H2O 定容至1000ml
分析营养构成？
5. 配制原则
生产 科研
⑴目的明确：根据微生物的种类、培养目的选择原料
自养型：不加碳源（CO2碳源） 异养型：有机碳源
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当
⑶适宜的pH值：加入缓冲剂 细菌偏碱，真菌偏酸
例2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
(B )
A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前
解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌 的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵 过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误 的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能 只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵 有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌 后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会 把所接菌种也杀死。
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课题一微生物的实验室培养
·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源（生长因子）等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件
·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
·消毒与灭菌的区别
消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。
消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。
灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
灭菌方
法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
灭菌方法：
①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；
②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；
③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
制作牛肉膏蛋白胨固体培养基
（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
（2）倒平板操作的步骤：
①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。
②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。
③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。
④等待平板冷却凝固，大约需5～10min。
然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。
·倒平板操作的讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？
提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过度地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
纯化大肠杆菌
（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。
将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。
（5）平板划线法操作步骤：
①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。
③将试管口通过火焰。
④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。
⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。
⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。
注意不要划破培养皿。
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。
重复以上操作，在三、四、五区域内划线。
注意不要将最后一区的划线与第一区相连。
⑧将平板倒置放入培养箱中培养。
·平板划线操作的讨论
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
（6）涂布平板操作的步骤：
①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
②取少量菌液，滴加到培养基表面。
③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。
④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
涂布平板操作的讨论
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。
结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。
例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头
不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。
菌种的保存
（1）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
①临时保藏方法
将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。
当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。
以后每3～6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。
②缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。
（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。
将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20℃的冷冻箱中保存。
疑难解答
（1）生物的营养
营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。
营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。
人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。
植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。
微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。
（2）确定培养基制作是否合格的方法
将未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。