化学发光免疫分析技术原理及优势课件

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《化学发光免疫分析》课件

《化学发光免疫分析》课件
内分泌疾病诊断
在内分泌疾病的诊断中,化学发光免疫分析可用于检测激素、维生素 D等,有助于评估患者的内分泌功能状态。
在药物研发中的应用
药效学研究
化学发光免疫分析可用于研究药物对生物体的作用机制和效果, 为新药研发提供重要的药效学数据。
药物代谢动力学研究
通过化学发光免疫分析技术,可以研究药物在体内的吸收、分布、 代谢和排泄过程,为新药研发提供药物代谢动力学数据。
04
化学发光免疫分析的优缺 点
优点
高灵敏度
化学发光免疫分析具有较高的灵敏度, 能够检测到极低浓度的目标物质,如肿
瘤标志物、激素等。
稳定性好
化学发光标记物在长时间内保持稳定 ,不易降解,提高了检测的可靠性。
宽线性范围
该方法具有较宽的线性范围,能够检 测到目标物质在较大浓度范围内的变 化。
自动化程度高
特点
高灵敏度、高特异性、低背景干扰、 操作简便、可实现自动化检测等。
历史与发展
1 2 3
起源
20世纪70年代,随着酶标记技术的发展,研究 者开始探索利用化学发光反应进行免疫分析。
发展历程
经过几十年的研究和发展,化学发光免疫分析技 术不断完善,成为一种成熟且应用广泛的免疫分 析方法。
最新进展
新型的化学发光标记物和检测系统不断涌现,提 高了检测的灵敏度和特异性,拓展了应用范围。
在生物医学研究中的应用
生物标志物检测
基因表达分析
化学发光免疫分析可用于检测生物体 中的各种生物标志物,如激素、细胞 因子、生长因子等,有助于研究生物 体的生理和病理过程。
结合其他技术,化学发光免疫分析可 以用于基因表达分析,检测基因表达 产物的蛋白质水平,从而研究基因功 能和调控机制。

化学发光免疫技术 ppt课件

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HRP
对-羟基苯乙酸(HPA)
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体(荧光 物质),在350nm激发光作用下,发出450nm波长 的荧光,可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH
+荧 光
HO
CH2 COOH
氧化二聚体
AMPPD
• AMPPD在碱性条件下,被AP酶解生成相当稳定的 AMP-D阴离子,其有2~30min的分解半衰期,发 出波长为470nm的持续性光,在15min时其强度 达到高峰,15~60min内光强度保持相对稳定。
N Ru疫测定(CLEIA)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一 步酶反应所用底物为发光剂,通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为: 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术 根据免疫学反应模式分 1.双抗体夹心法和双抗原夹心法 3.固相抗原竞争法:
荧光酶免疫测定技术反应原理图
E E E
洗涤
弃上清
E
E
E
E
4 M U E 激 发 荧 光
是利用理想的酶荧光底物,生成的产物稳定并有 碱性磷酸酶 标记抗体 样 本 抗体包被 强的荧光强度,通过测定荧光强度进行定量。
化学发光酶免疫测定技术反应原理图
E E E
洗涤
弃上清
E
E
E
E A M P P D 发
E
化学发光免疫技术
第一节
发光与化学发光剂
第二节 第三节
第四章
发光酶免疫测定(CLEIA) 化学发光免疫测定技术(CLIA)
电化学发光免疫测定技术(ECLI)

化学发光免疫分析技术原理及优势ppt课件

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经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的,应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失,增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
直接化学发光的机理
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带吖啶酯 标记物抗

(1) 加入H2O2 (pH<10)
冲洗后
(2) 加入碱 (pH>10)
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的,应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失,增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
㈠ 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP)标 记抗体(或抗原),在与反应体系中的待测标 本和固相载体发生免疫反应后,形成固相包 被抗体-待测抗原-酶(HRP)标记抗体复合 物,这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发 光增强剂使产生化学发光。
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术:化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与 待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
二、化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学 发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或 抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。 然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分 析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧 化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到 稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器 光量子产率。

化学发光免疫(免疫学)PPT课件

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第二节 发光酶免疫测定(CLEIA)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂,通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。 二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为: 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
二、技术要点
一) 反应模式:
1.双抗体夹心法:常用于大分子的检测 2. 双抗原夹心法:常用于抗原的检测 3.固相抗原竞争法:多肽类小分子的检测
化学发光剂应符合以下几个条件 ①能参与化学发光反应; ②与抗原或抗体偶联后形成稳定的结合物试剂; ③偶联后仍保留高的量子效应和反应动力; ④应不改变或极少改变被标记物的理化特性, 特别是免疫活性。
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1.酶促反应的发光底物 • • • • • 是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物。 CLEIA中常用的酶有HRP和ALP HRP的发光底物有鲁米诺、对-羟基苯乙酸 ALP的发光底物有AMPPD、4-MUP(荧光底物) 特点:可作标记物、也可作过氧化物酶的底物 1.1 鲁米诺及其衍生物
AMPPD
• AMPPD在碱性条件下,被ALP解生成相当稳定的 AMP-D阴离子,其有2~30min的分解半衰期,发 出波长为470nm的持续性光,在15min时其强度 达到高峰,15~60min内光强度保持相对稳定。
1.3
AMPPD
ALP /OH
O O OCH3

O-
HPO42-
4-MUP
4-MUP被ALP催化生成4-甲基伞形酮,在360nm 的激发光的作用下,发出448nm的荧光,可用荧 光光度计进行测量。
第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA)
(chemiluminescence immunoassay) 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)

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总结词
利用酶催化反应放大信号,将化学发光物质作为底物,通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中,酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后,通过酶催 化反应放大信号,使化学发光物质的生成量大大增加,再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质,通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物,与抗体或抗原结合,通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中,化学发光物质直接与抗体或抗原结合,形成复合物 ,当激发时,产生光子并释放出来,通过光电倍增管等设备测量发光强度,从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
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CATALOGUE
目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
CATALOGUE
化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合, 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。
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化学发光免疫分析技术原理及优势
化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技术, 化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性,成为检验方 法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病诊断 的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病、内分泌功 能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面的体外诊断实验中。
化学发光免疫分析技术原理及优势
• 分析方法简便快速
• 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂)的一步模式。
• 结果稳定、误差小
• 样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种可能因素(光源稳定性、光散射、 光波选择器等)给分析带来的影响,使分析结果灵敏稳定可靠。
• 安全性好及使用期长
冲洗后
化学发光免疫分析技术原理及优势
发光
磁微粒技术
磁微粒模式图
特点
化学发光免疫分析技术原理及优势
2.2 化学发光原理
化学发光(Chemiluminescence, CL)是化学物质在特定化学反应中 产生的光辐射。通过高能中间体的分解在化学反应中激发单态分 子形成,分子被激发后是不稳定的,它要释放出多余的能量而回到 基态,其中部分的能量以发光形式释放出来。因此,任何一个化学 发光反应包括两个过程:激发和发光过程。一些激发态分子能量也 会通过系间串跃和系内串跃而消失。因此,化学发光反应的效率是:
化学发光免疫分析技术原理及优势
• 宽的线性动力学范围
• 发光强度在 4 ~ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显 色的酶免疫分析吸光度( OD 值)为 2.0 的范围相比,优势明显。虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围,但放射性限制了其应用。
• 光信号持续时间长
• 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实 验操作及测量。
化学发光免疫分析技术原理及优势
三、化学发光免疫分析的类型
化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类,即化 直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫 分析法。
化学发光免疫分析技术原及优势
3.1 直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体(抗原),与待测标本中相 应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成固相包被抗 体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物,这时只需加 入氧化剂(H2O2)和NaOH使成碱性环境,吖啶酯 在不需要催化剂的情况下分解、发光 。
由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光 子能,这部分光的积分与待测抗原的量成正比,可从标准曲 线上计算出待测抗原的化含学发量光免。疫分析技术原理及优势
直接化学发光的机理
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带吖啶酯 标记物抗

(1) 加入H2O2 (pH<10)
(2) 加入碱 (pH>10)
化学发光免疫分析技术原理及优势
ΦCL =ΦCE·ΦEM (1)
式中,ΦCL为化学发光效率,ΦCE为生成激发态的效率, ΦEM为激发态的发光效率。ΦCE和ΦEM分别定义为:
ΦCE = 生成激发态的分子数/ 参加反应的分子数 (2)
ΦEM = 发光的分子数/ 生成激发态的分子数
(3)
从(1) 、(2) 、(3) 式得化学发光的效率ΦCL等价于生 成荧光和磷光的量子效率。即:
ΦCL = 发光的分子数/ 参加反应的分子数 (4)
化学发光免疫分析技术原理及优势
2.3 化学发光免疫分析的原理
化学发光免疫分析法是化学发光和免疫分析结合的产物。它同 时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高选择性。化学发 光免疫分析是用化学发光反应的试剂标记抗原或抗体, 标记后的 抗原和抗体与待测物经过一系列的免疫反应和理化步骤,最后以测 定发光强度形式测定待测物的含量。
• 免除了使用放射性物质。到目前为止,还未发现其危害性;试剂稳定,保存期可达一年。
化学发光免疫分析技术原理及优势
二、化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光 分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或抗体上, 经 过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。然后进行对标记物 进行检测, 来测定待检物。化学发光分析系统是利用化学发光物 质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用 发光信号测量仪器光量子产率。
化学发光免疫分析技术原理及优势
化学发光免疫分析的优势
• 灵敏度高
• 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性,其灵敏度可达 1022 mol/L ( RIA 为 10 -12 mol/L )。化学发光免疫分析能够检出 放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质,对疾病的 早期诊断具有十分重要的意义。
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析技术原理及优势
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
化学发光免疫分析技术原理及优势
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术:化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度 来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反 应相结合,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与待测的抗原或抗体反 应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入化学发光系统的其它相关物 产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或定性检测。
化学发光免疫分析技术原理及优势
2.1 免疫分析原理
免疫分析是利用抗原与抗体特异性结合形成抗原2抗体复合物而 建立起来的一种高选择性的分析方法, 根据其检测方法可分为非标记 免疫分析和标记免疫分析。非标记免疫分析是利用抗原与抗体结合形 成抗原2抗体复合物后, 其理化性质发生改变,出现肉眼可见的沉淀、 凝集等现象,利用这些现象来检测待检物。标记免疫分析是在不影响抗 原、抗体生物活性的基础上将标记物质标记在抗原或抗体上, 然后进 行免疫反应形成抗原2抗体复合物, 再对标记质进行检测, 从而间接检 测待检物的方法 。目前常用的标记物有放射性的125 I, 非放射性的 碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶, 镧系稀土元素等。
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