酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孔雀石绿
水产品中孔雀石绿的测定
6.2.8.标准贮备溶液:准确称量孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫各10mg，用乙睛分别定容于100mL容量瓶中，配制成100μg/mL的标准贮备液。
6.2.9.混合标准溶液:用流动相稀释标准贮备溶液，配制成孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫均为10μg/mL的混合标准溶液。0℃～4℃避光保存。
5.3.仪器和设备
5.3.1.酶标仪：配备450 nm滤光片。
5.3.2.分析天平：感量0.001g，感量0.0001g。
5.3.3.恒温培养箱。
5.3.4.均质器。
5.3.5.旋涡振荡器。
5.3.6.离心机：离心力≥4000g。
5.3.7.氮吹仪
5.3.8.微量单道/多道移液器：10μL～100μL；100μL～1000μL； 50μL～300μL。
5.7.1.检出限
本方法孔雀石绿及其代谢残留物的检出限为0.2μg/kg。
5.7.2.回收率
在样品中添加0.1μg/kg～4μg/kg浓度水平时，回收率为70％～120％。
5.7.3.重复性
本方法的批内变异系数≤10％，批间变异系数≤10％。
5.8.结果表述
当所对应的样品的测定值小于其检出限时，报告为孔雀石绿未检出。当测定值大于检出限时，报告为孔雀石绿检出。
水产品中孔雀石绿和结品紫及其代谢产物的快速测定方法SN/T 1768-2006
水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法GB/T 20361-2006
4.概述
孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，既是杀真菌剂，又是染料。长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。研究显示，孔雀石绿在鱼体内残留时间长，且具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。
水产品中孔雀石绿的测定
5.4.6.取3mL上层液(盐酸-乙酸乙酯)至10mL玻璃管中，于60℃下，利用氮气将有机溶剂吹干。
5.4.7.于此玻璃管中加入正己烷1mL ,剧烈震荡将残余物完全溶解(若氮吹后的管内有很多油脂时，可将正己烷加入量改为2mL。)。
5.3.9.水浴锅。
5.3.10.聚四氟乙烯离心管：5mL，50mL，具塞。
5.4.样品处理
5.4.1.将2克已均质之样品放入15mL离心管中，加入0.4%还原剂3mL后立刻震荡1分钟使成肉浆状。
5.4.2.静置30分钟。
5.4.3.再加入6mL 0.002N盐酸-乙酸乙酯，震荡1分钟。
5.4.4.以离心机离心1700×g(约3500rpm)10分钟。
颁布日期：2014年月日
层，待玻璃管冷却至室温后再次以离心机离心1700×g(约3500rpm) 10分钟。用吸管吸去上层液(正己烷)，再吸取下层液(水层)备用
稀释倍数：1
5.5.酶联免疫测定
5.5.1.使用前将试剂盒置于室温(20-25℃)平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于2-8℃不要冷冻;
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标题：水产品中孔雀石绿的测定
水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法
水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法1范围本方法规定了水产品及其养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于鱼肉及养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的快速测定。
2原理样品中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿经有机试剂提取，吸附剂净化，正己烷除脂后，加入氧化剂将隐色孔雀石绿氧化成为孔雀石绿，经浓缩复溶后，孔雀石绿与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1正己烷。
3.1.2乙腈。
3.1.3冰乙酸。
3.1.4盐酸。
3.1.5吐温-20。
3.1.6氯化钠。
3.1.7对-甲苯磺酸。
3.1.8无水乙酸钠。
3.1.9盐酸羟胺。
3.1.10无水硫酸钠。
3.1.11中性氧化铝：层析用，100目~200目。
3.1.12二氯二氰基苯醌。
3.1.13氯化钾。
3.1.14磷酸二氢钾。
3.1.15十二水合磷酸氢二钠。
3.1.16饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.6）200 g，加水500 mL，超声使其充分溶解。
3.1.17盐酸羟胺溶液（0.25 g/mL）：称取2.5 g 盐酸羟胺（3.1.9），用水溶解并稀释至10 mL，混匀。
3.1.18乙酸盐缓冲液：称取4.95 g 无水乙酸钠（3.1.8）及0.95 g 对-甲苯磺酸（3.1.7）溶解于950 mL 水中，用冰乙酸（3.1.3）调节溶液pH 为4.5，用水稀释至1 L，混匀。
3.1.19二氯二氰基苯醌溶液（0.001 mol/L）：称取0.0227 g 二氯二氰基苯醌（3.1.12）置于100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，混匀。
水产品中的孔雀石绿的毒性残留及其研究概况
192区域治理PRACTICE作者简介：宋卫清，生于1988年，本科，助理水产工程师，研究方向为畜禽水产品药物残留的检测。
水产品中的孔雀石绿的毒性残留及其研究概况娄底市畜牧水产和农机事务中心 宋卫清摘要：孔雀石绿是一种具有较强实用性的化学物质，常见的孔雀石绿都是人工化合物，用途广泛，但又充满危害，所以如何科学合理地使用孔雀石绿成了当今研究领域的热门话题。
因此，对孔雀石绿展开相关实验研究具有一定的实际意义和实际价值。
本文基于孔雀石绿的基本性质、新陈代谢以及毒性展开详细介绍，此外，本文还对孔雀石绿的检测方法进行相关探讨，希望为相关研究提供微薄之力。
关键词：孔雀石绿；水产品；毒性；残留；检测方法中图分类号：S859.82文献标识码：A文章编号：2096-4595（2021）01-0192-0002人工合成的孔雀石绿的主要成分包括：苯甲醛和二苯甲胺，是一种三苯基甲烷类工业产品。
因孔雀石绿具有杀菌杀虫的功能，常用于水产养殖业。
孔雀石绿在水产品中新陈代谢后可形成无色孔雀石绿和无色结晶紫。
相关研究表明，无论是孔雀石绿还是其代谢物，都具有较强的副作用，如致癌、致畸等[1]。
所以20世纪90年代起，越来越多的国家开始明令禁止水产养殖业使用孔雀石绿。
但是因为孔雀石绿的杀菌杀虫的效果十分良好，而且没有找到代替药物，所以仍然存在部分水产养殖户继续使用孔雀石绿的情况。
然而水产品营养丰富、味道鲜美，一直以来都是人们餐桌上很受欢迎的食材，因此对水产品质量安全的监控至关重要。
本文基于孔雀石绿的基本性质、新陈代谢以及毒性展开详细介绍，此外，本文还对我国孔雀石绿的检测方法进行相关探讨，希望能为我国孔雀石绿的检测工作提供微薄之力。
一、孔雀石绿的理化性质及应用一般来说，孔雀石绿拥有两种存在形态：①天然矿石；②人工有机化学合成物。
天然矿石类的孔雀石绿物理性质为：表明呈草绿色；化学性质为：易溶于酸性液体；常用作颜料。
人工合成的孔雀石绿的物理性质为：表明呈孔雀绿色；化学性质为：易溶于水和醇类液体，具有毒性[2]。
水产品中孔雀石绿的常规检测方法
142实验研究引言我国有着非常丰富的水产资源，在世界上属于水产养殖大国。
水产品作为我国城乡居民摄入动物蛋白的主要来源之一，在居民的生产生活中占据着极其重要的地位。
随着我国科学技术的进步，经济的快速发展，人民生活水平不断提高，对水产品的需求量也不断增长。
在养殖过程中，为降低生产成本，使用含有激素或者发生霉变的饲料，滥用抗生素、激素等渔用药物防治水产动物疾病，导致水产品药物残留超标，严重危害人类健康。
加强水产品中的渔药检测就显得尤为重要，本文阐述及归纳了水产品中孔雀石绿检测的常用方法，为水产品药物残留检测提供重要依据，对保障人类食品安全具有一定的意义。
1.孔雀石绿的常规检测方法1.1前处理方法1.1.1液液萃取液液萃取也称溶剂萃取或抽提，是指利用在溶液系统中两种或多种物质组分溶解度或分配系数不同的原理，使溶质物质从其中一种溶剂中转移到另一溶剂中提取方法。
通过静置过程，将出现分层现象的两种互不相容的物质进行分离的操作，叫做分液。
提取孔雀石绿的过程中常用的萃取溶液是二氯甲烷和无水乙醇。
它的优点是可以在常温条件下进行，操作较为方便，不需要特殊的实验装置和操作技术；缺点是有机溶剂的消耗量较大，挥发性较强的溶剂应尽量在通风橱内操作并做好个人防护工作。
1.1.2固相萃取固相萃取是于20世纪80年代发展起来的一种样品前处理技术，通常与液相色谱技术相结合，主要用于样品前处理的分离、提纯和浓缩过程。
它的原理是通过固相萃取小柱中的固体吸附剂吸附液体中的目标化合物，将样品的基质与干扰物有效的分离，再用洗脱液进行洗脱或者通过加热过程使目标化合物解吸附，最后经过氮吹或者旋蒸，达到浓缩与富集目标化合物的目的。
固相萃取的优点是操作简单，分离时间短，试剂消耗量少，可有效提高被测样品的回收率，对于痕量分析物有较为出色的检测能力；缺点是成本较高，属于一次性使用的实验耗材，同时需要专业人员进行方法开发。
1.1.3分散固相萃取净化技术分散固相萃取净化技术也称为QuEChERS技术，是2003年由美国农业部Anastassiades等人开发，提出之后又经过多次验证和方法改进正式确立。
孔雀石绿在水产品中的危害及常见检测方法
ｐ ｐ ｂ ＃ １ 。该法是监督监测水 产品中孑 Ｌ 雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿 孔雀石绿又名碱性 绿 、 孔雀绿 ， 是一种人工合成 的带有金属光泽 （ 的绿色结 晶体 ， 属 于三苯甲烷型 ， 它 既是杀真菌剂 ， 又是 染料 。 易பைடு நூலகம் 于 的残留量 的常用检测方法 。 色谱法检测速度快 ， 灵敏度高 ， 能定量准确 ． 但样品的预处理方法 水． 溶液呈蓝绿色。 但 Ｌ 雀石绿具有毒性 ， 并且有潜在的致 癌 、 致畸、 致
生 长 。 ２ ． ２高 残 留
较之色谱法 ． Ｅ Ｌ １ Ｓ Ａ法的优点有 ： 可现场操作 ， 用 于快速 筛选法 ：
检测速度快 ； 不需用 昂贵的分析设备 ， 即可完成整个检测过程 ： 试剂检
特异性 高， 可准确定性 ； 操作 简便 ， 不需专业技术人员 ， 可进 孔雀石绿一经使用 ． 养殖 动物终 身残 留 孔 雀石绿 及其代谢 产物 测成本低 ： 它的缺点有 ： 实际操作过程 比较麻烦 ， 需要包埋 、 洗板 、 无色孑 Ｌ 雀石绿能迅速在组织中蓄积 ， 并 已在受精卵 和鱼苗 的血 清 、 肝、 行多残留分析。 加底液等繁琐的步骤 ； 并且 因为酶对温度的依赖性 问题 ， 给现场检测 、 肾、 肌 肉和其他组织中检测到。 无色孔 雀石绿 由于其不溶于水 ， 残 留毒 快递检测 、 大批量检测带来不便 。 性 比孔雀石绿更强 虽然在后期的养殖过程 中添加维生素类和微量元 素可 以减少一些 ． 但至今仍无 法完全 消除 。 也就是说 ， 对于 以前使用过 孔 雀石绿这类违禁药物的池塘 ． 在塘内会有残 留
意味着在 短时间 内． 环境 中的含量不会 明显 未得 到美 国食 品与药物管理局 （ Ｆ Ｄ Ａ １ 的认 可 ：我 国在农业行 业标准 孔雀石绿 的高残 留问题 ． 监控环境 中的孔雀石绿含量 ， 也将是人们关 注的焦点 。 国内不仅 （ ＜ Ｎ Ｙ ５ ０ ７ １ — ２ ０ ０ ２ 无公害食品鱼药使用 准则》 中也将孔雀石绿列为禁用 减少 。 而且应大力研究从池塘 水体 中清除 药物 但 由于没有低廉有效的替代品 ， 孔 雀石绿 在水产养殖中的使用 要对其检测方法进一步加以改进 ，
超高效液相色谱-串联质谱快速检测水产品中孔雀石绿及无色孔雀石绿
超高效液相色谱-串联质谱快速检测水产品中孔雀石绿及无色孔雀石绿苏建峰;连文浩;陈文凯【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2007(043)011【摘要】采用超高效液相色谱(UHPLC)与串联质谱(MS/MS)联用对水产品中残留量的孔雀石绿(MG)及无色孔雀石绿(LMG)进行了快速检测.经均匀化处理的试样用乙腈在pH 4.5的乙酸盐缓冲介质中萃取使MG及LMG萃入有机相,所得萃取液用液-液分配,先后用酸性氧化铝及氯化钠和酸性氧化铝及无水硫酸钠进行分离及净化.上层清液经0.2 μm滤膜过滤后供UHPLC-MS/MS分析,采用电喷雾离子化(ESI+)及多反应监测模式进行测定,用D5-MG及D6-LMG内标法进行定量.在优化的试验条件下,使质谱分析中的基体效应得到合理降低.方法的测定下限(S/N=10),MG为0.19 μg·kg-1,LMG为0.10 μg·kg-1,在0.5～5.0 μg·kg-1浓度范围内作标准加入法,方法的回收率在89.4%～110%范围内.相对标准偏差(n=6)值在5.9%～9.8%.【总页数】4页(P937-939,942)【作者】苏建峰;连文浩;陈文凯【作者单位】福建华日食品安全检测有限公司,福清出入境检验检疫局,福清,350300;福建华日食品安全检测有限公司,福清出入境检验检疫局,福清,350300;福建华日食品安全检测有限公司,福清出入境检验检疫局,福清,350300【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿残留量 [J], 梅光明;郭远明;陈雪昌;张小军;李佩佩;刘琴2.液质联用法测定水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿的残留量 [J], 张秀妍;马琳;王慧龙3.酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孔雀石绿 [J], 邢玮玮;王榕妹;王俊卿;杨红;贺莉;邓安平4.用紫外和荧光检测器同时分析水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿含量的高效液相色谱法 [J], 桂英爱;张秀妍;马琳;王丹;周军5.高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿的残留量 [J], 沈春华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
环境中孔雀石绿的研究进展
环境中孔雀石绿的研究进展陶雁斌;杨绍贵【摘要】孔雀石绿(Malachite green,MG)因其对水产品疾病防治的高效性和低廉的价格而被广泛用于水产养殖,但也带来了水产品食用的健康风险,并且污染水体环境.本文综述了孔雀石绿在不同环境介质(水体、水产品和底泥)中的检测方法和前处理技术研究进展,自然降解情况以及降解孔雀石绿的方法研究现状,旨在对环境中孔雀石绿的残留检测新方法的建立与选择以及孔雀石绿的污染治理提供参考.【期刊名称】《四川环境》【年(卷),期】2015(034)005【总页数】7页(P123-129)【关键词】孔雀石绿;自然降解;检测方法;降解方法【作者】陶雁斌;杨绍贵【作者单位】污染控制与资源化研究国家重点实验室,南京大学环境学院,南京210023;污染控制与资源化研究国家重点实验室,南京大学环境学院,南京210023【正文语种】中文【中图分类】X8351 引言孔雀石绿 (Malachite green，MG)是一种三苯甲烷类染料和药物，母体及其代谢产物无色孔雀石绿 (Leucomalachite green，LMG)有高毒性、高残留的性质，可产生致畸、致癌、致突变等副作用［1］，已被包括中国在内的大部分国家列为禁药。
孔雀石绿对公众暴露途径主要是通过食用含有孔雀石绿的鱼、虾等水产品，可怕的是低浓度水平下，孔雀石绿就对有孕生命有敏感毒害性［2］。
由于没有更为廉价而有效的替代药物，孔雀石绿仍被频繁使用，在环境中被频频检出。
从2005年英国《星期日泰晤士报》报道了在英国一家知名超市出售的鲑鱼体内发现孔雀石绿后，我国加大了对孔雀石绿污染的重视，之后分别在全国多个省市的水产养殖场、鱼药商店和某些鱼类食品中检测到孔雀石绿，严重威胁生态环境和人类健康。
如何有效快速地检测孔雀石绿在环境中的污染水平?孔雀石绿在自然条件下能否降解?目前已有哪些高效而无害的降解方法?本文对这几个方面进行了一个总结，最后提出了孔雀石绿检测方法和降解方法的研究方向和趋势。
水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法
水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法1范围本方法规定了水产品及其养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于鱼肉及养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的快速测定。
2原理样品中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿经有机试剂提取，吸附剂净化，正己烷除脂后，加入氧化剂将隐色孔雀石绿氧化成为孔雀石绿，经浓缩复溶后，孔雀石绿与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1正己烷。
3.1.2乙腈。
3.1.3冰乙酸。
3.1.4盐酸。
3.1.5吐温-20。
3.1.6氯化钠。
3.1.7对-甲苯磺酸。
3.1.8无水乙酸钠。
3.1.9盐酸羟胺。
3.1.10无水硫酸钠。
3.1.11中性氧化铝：层析用，100目~200目。
3.1.12二氯二氰基苯醌。
3.1.13氯化钾。
3.1.14磷酸二氢钾。
3.1.15十二水合磷酸氢二钠。
3.1.16饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.6）200 g，加水500 mL，超声使其充分溶解。
3.1.17盐酸羟胺溶液（0.25 g/mL）：称取2.5 g 盐酸羟胺（3.1.9），用水溶解并稀释至10 mL，混匀。
3.1.18乙酸盐缓冲液：称取4.95 g 无水乙酸钠（3.1.8）及0.95 g 对-甲苯磺酸（3.1.7）溶解于950 mL 水中，用冰乙酸（3.1.3）调节溶液pH 为4.5，用水稀释至1 L，混匀。
3.1.19二氯二氰基苯醌溶液（0.001 mol/L）：称取0.0227 g 二氯二氰基苯醌（3.1.12）置于100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，混匀。
4℃避光保存。
3.1.20复溶液：称取8.00 g 氯化钠（3.1.6），0.20 g 氯化钾（3.1.13），0.27 g 磷酸二氢钾（3.1.14）及 2.87 g 十二水合磷酸氢二钠（3.1.15）溶解于900 mL 水中，加入0.5 mL 吐温-20（3.1.5），混匀，用盐酸（3.1.4）调节pH 为7.4，用水稀释至 1 L，混匀。
酶联免疫法检测水产品中孔雀石绿的残留
孔雀石绿（malachite green，MG）是有毒的三苯甲烷类化合物，是一种杀真菌、细菌、寄生虫的药物，经各种途径向机体侵入后，经生物转化，向具脂溶性隐性性质的孔雀石绿（LMG）还原。
多项报道指出，在鱼体和周围环境中，孔雀石绿及隐性孔雀石绿有着较长时间残留，可经食物链途径，对人类及相关哺乳动物产生严重的致突变、畸形、恶性肿瘤、作用，故现阶段被多个国家划分至水产养殖禁用药物区域。
2002年5月，孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，表明孔雀石绿需在食用动物的养殖中禁用，但由于孔雀石绿具有低成本、易得和高效性等特点，在水产养殖中仍有违规使用的情况。
现阶段，针对食品中残留的孔雀石绿，监测方法较为多样，包括酶联免疫吸附法、液相色谱串联质谱法等。
其中酶联免疫法具有很高的特异性、灵敏度和通量，操作简单、快速，能极大地提高分析效率，降低检测成本，已受到广泛重视。
本试验主要使用酶联免疫法检测鱼类水产品中孔雀石绿的残留。
1.材料与仪器1.1 主要仪器MK3型酶标仪：赛默飞世尔（上海）仪器有限公司；刀式研磨仪：RETSCH公司；PL602-L电子天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；3-18k型高速冷冻离心机：Sigma公司；多管漩涡混合仪：美国安胜科技有限公司；N-EVAP-24氮吹仪：美国Organomation公司。
1.2 试剂与溶液孔雀石绿试剂盒：德国拜发集团；检测下限为0.1μg/kg，包括：孔雀石绿标准品（浓度依次为0 ng/ mL、0.05 ng/mL、0.15 ng/mL、0.5 ng/mL、1.5 ng/mL、4.5ng/ mL）、规格为96孔的酶标板、浓缩洗涤液、反应终止液等。
孔雀石绿组织前处理试剂盒：德国拜发集团；包括：提取增强剂1、提取增强剂2、净化剂、浓缩氧化剂。
正己烷：天津市富宇精细化工有限公司，乙腈：广州化学试剂厂。
2.实验步骤2.1 样品处理鱼去皮，取背部肌肉，用刀式研磨仪制成均质物。
水产品中孔雀石绿残留酶联免疫检测的基质干扰及消除方法
中 国 渔 业 质 量 与 标 准
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ｙ Ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ Ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｓ
Ｍａ ｒ ． ２ ０ｌ ３ Ｖｏ １ ． ３ Ｎｏ ．１
第 ３卷
第 １ 期
有 的部 分蛋 白质 ， 是 导致 氟 喹诺酮 等抗 生素 残 留酶联
免 疫 检测 中基 质 干 扰 的主 要 因素 之 一 【 ” Ｊ ， 但 是 针对
孔 雀石 绿类 残 留 ， 是否也存在类似现象 ， 以及 如何 有 效 消 除这些 干扰 以提 高 方法 的准确 度 ， 目前 国内外 尚
孑 Ｌ 雀石 绿 （ Ｍ ａ ｌ ａ ｃ ｈ ｉ ｔ ｅ Ｇ ｒ ｅ ｅｎ ， ＭＧ） 属 三 苯 甲烷 类 ，
一
要 因素之一 。
般作 为工 业染 料 广 泛 应用 于纺 织 品和 陶瓷 制 品 等
本 实验 室 的前期 研究 发 现 ， 鱼 类等 水产 品 中所含
工 业产 品的生 产 。孑 Ｌ 雀 石绿 对 于水产 养殖 中水 霉 病 、
没 有 系统 的研 究报 道 ， 本 研究 拟针 对 以上 问题展 开研
究， 为 相关 技术 和产 品 的进一 步 改进完 善 提供依 据 。
殖 与 流通过 程 中仍然 存 在违 规使 用孔 雀石 绿 的情况 ，
影 响 了我 国水 产 品质量 安全 。
１ 材 料 与 方 法
１ － １ 材 料 与 试 剂
水 产 品 中孑 Ｌ 雀 石 绿 残 留 酶 联 免 疫 检 测 的 基 质 干 扰 及 消 除 方 法
吕芳， 徐锐 ， 林洪， 隋建新 ， 曹立 民
应用酶联免疫吸附法快速检测水产品中孔雀石绿残留
应用酶联免疫吸附法快速检测水产品中孔雀石绿残留何万义【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)018【总页数】2页(P117-118)【作者】何万义【作者单位】米东区农产品质量安全检测中心【正文语种】中文采用酶联免疫吸附法同时测定水产品中孔雀石绿药物残留，并用标准溶液校准曲线、样品添加回收实验、方法比对实验，考察该方法。
结果显示：该方法标准曲线良好，线性相关系数达到0.998以上；孔雀石绿检出限达到0.5 μg/kg；对孔雀石绿两个不同添加浓度下的回收率计算结果在88.6%～106.6%之间，相对标准偏差小于10%。
该方法检测分析孔雀石绿，快速灵敏、重现性好、成本低，可以用于水产品中孔雀石绿药物残留的快速检测。
孔雀石绿（malachite green,MG）是人工合成的碱性三苯甲烷类染料,在水产养殖过程中,常作为杀菌剂和抗寄生虫药,用于防治各种鱼病。
孔雀石绿在鱼体内代谢为隐色孔雀石绿（LMG），能够长期残留于生物体内，其化学官能团三苯甲烷具有致突变、致畸和致癌作用。
欧美、中国和日本等宣布严禁在水产养殖中使用孔雀石绿,并规定孔雀石绿（含隐色孔雀石绿）不得检出。
测定食品及环境中孔雀石绿及其代谢物常用高效液相色谱法或液相色谱-串联质谱法。
虽然这些方法的定性、定量准确度较高,但仪器昂贵、样品前处理复杂、检测周期长、检测成本高。
为了确保水产品质量安全,避免孔雀石绿对人体健康的危害,有必要建立对水产品中孔雀石绿药物残留检测的快速、灵敏的分析方法。
本试验采用的酶联免疫吸附检测方法快速灵敏、准确可靠、成本低，能够用于水产中孔雀石绿药物残留的快速检测和筛选。
仪器设备微孔板酶标仪（450 nm/630 nm）、电脑洗板机、涡旋仪、离心机、振荡器、氮吹仪、分析天平（感量0.01g）、聚苯乙烯离心管（2 mL、50 mL）、微量移液器（单道20～200 mL、100～1000 mL，多道250 mL）。
水产品中孔雀石绿药物残留检测技术研究进展
水产品中孔雀石绿药物残留检测技术研究进展孔雀石绿是一种广泛使用的有机合成染料，在水产品中常用作抗菌剂。
长期食用含有孔雀石绿的水产品可能会对人体健康造成潜在威胁，因为孔雀石绿被认为具有致癌和致畸作用。
为了保障食品安全，对水产品中孔雀石绿的药物残留进行检测已成为当前食品安全监管中的重要课题。
近年来，孔雀石绿药物残留检测技术方面取得了一系列重要的研究进展，本文将对该领域的研究现状进行综述。
一、传统检测方法早期的孔雀石绿检测方法主要依赖于色谱法，包括气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）和液相色谱法（HPLC）。
这些方法具有高灵敏度和准确性，但是需要昂贵的设备和复杂的操作过程，限制了其在实际监测中的应用。
这些方法还需要长时间的前处理步骤，使得检测周期较长，不适合大规模样品的快速筛查。
二、免疫分析方法近年来，免疫分析方法在孔雀石绿残留检测中得到了广泛应用。
免疫分析方法主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫层析法。
这些方法具有操作简单、快速、灵敏度高、专属性强等优点，可以实现大规模样品的快速筛查。
免疫分析方法也存在一些局限性，如易受样品复杂性和干扰物的影响，需要经过繁琐的前处理步骤、易受温度和湿度等环境条件的影响。
五、快速大样品检测技术随着社会经济的发展和人们对食品安全的关注度不断提高，快速大样品检测技术逐渐成为了研究热点。
针对孔雀石绿残留的检测，基于纳米材料和生物传感器技术的快速大样品检测技术也在不断完善中。
通过建立高通量的并行检测系统，可以实现对大批量样品的高效快速筛查，为食品安全监管工作提供了重要的技术支持。
六、发展趋势和挑战随着科学技术的不断进步，孔雀石绿残留检测技术也将不断得到改进和完善。
在未来的研究中，需要重点解决以下几个方面的问题：一是提高检测技术的灵敏度和特异性，以满足对孔雀石绿残留的更加严格的监管要求；二是研发更加便捷、快速的样品前处理技术，以缩短检测周期和降低成本；三是建立完善的质量控制和标准化方法，确保检测结果的准确性和可比性；四是加强与食品安全监管部门和食品生产企业的合作，推动检测技术的产业化应用。
DB34T 1421-2011 水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定 酶联免疫法.pdf
ICS67.120.30B 50 DB34 安徽省地方标准DB 34/T 1421—2011安徽省质量技术监督局发布DB34/T 1421—2011前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。
本标准由安徽省渔业环境监测中心提出。
本标准由安徽省质量技术监督局批准。
本标准起草单位：安徽省渔业环境监测中心。
本标准主要起草人：孙德祥、鲍鸣、周作友、董星宇、杨瑞、程金明。
IDB34/T 1421—2011水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定-酶联免疫吸附法1 范围本标准规定了水产品中孔雀石绿（Malachite green，MG）及其代谢物隐色孔雀石绿（Leucomalachite green，LMG）残留总量的酶联免疫吸附（ELISA）检测方法。
本标准适用于水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿的快速筛选测定。
阳性样品须用液相色谱-串联质谱法（LC/MS-MS）确证。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法SC/T 3016-2004 水产品抽样方法3 原理本方法基于竞争性酶联免疫方法原理。
样品中 MG 或 LMG 经提取液和乙腈等提取纯化后，LMG 通过氧化剂被氧化为 MG，与 MG-生物素竞争微孔板上包被的 MG 抗体，没有结合的 MG-生物素在洗板中被去除。
再加入过量的酶标记的链亲和素，与结合了抗体的 MG-生物素结合，多余的酶标记的链亲和素在洗板中被去除。
结合的酶使随后加入的 HRP 底物(TMB)显色，样品中 MG 和 LMG 含量越少，则结合的酶越多，颜色则越深，反之，颜色则越浅。
结果用酶标仪在波长 450 nm 处，测定吸光度值，在一定浓度范围内吸光度值与样品中 MG 和 LMG 含量成反比。
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化 学 研 究 与 应 用
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酶 联 免 疫 吸 附 分 析 法 测 定 水 产 品 及 水 中 孔 雀 石 绿 和 无 色 孑 雀 石 绿 Ｌ
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色 孔 雀 石 ， 度 分 别 为 １８ ｇ Ｌ和 １３ 浓 ．４ ／ ．８
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关键词 ： 孔雀石绿 ； 无色孔雀石绿 ； 酶联免疫吸 附分析法 ； 品分析 食
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摘要： 本文报道一 种同时测定水产 品及水样 中孔雀石绿 （ ＭＧ） 和无色孔雀石绿（ ＭＧ） Ｌ 的间接竞争 酶联免疫 吸 附分 析法 。对无色孔雀石绿分子进行修饰 ， 使其 与载体 蛋 白交联 ， 得到免疫 原和包 被抗 原 ， 过多 次免疫动 经 物制得 抗无色孔雀石绿 的多克隆抗体。在优化的实验 条件 下 ，ｃ 值 （ Ｉ 标准 曲线 中吸 光度 抑制至最 大吸光度 值 的 ５ ％时所对应 的待测物浓度 ） ０ ９～ ． ｇ Ｌ 检出限为 ０ ０ ０ １ ｓ Ｌ 无 色孔雀石 绿在水样及水 ０ 为 ． ２６ ／ ， ．２— ．０ Ｉ ／ ， ｘ 产 品中的 回收率为 ７ ． ９ ．％ ， Ｌ ６ ２～ ５ Ｏ 与孑 雀石绿 的交 叉反 应率为 ９ ．５ ５ ２ ％。真实样 品测定 中 ， 两种食 用鱼养殖 水 样及一个鱼样 中未检 出孔雀石绿和无 色孑 雀石 绿 ， 在 观赏鱼养 殖水样及 另一鱼样 中检 出孔雀 石绿和无 Ｌ 但
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