第九章微生物的遗传变异1

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第九章
微生物的遗传变异
遗传:亲代生物传递给子代生物的一套实现 与其相同性状的遗传信息。 变异:由于内外环境作用,子代某一或几个 性状与亲代不一致,且能遗传下一代。
主要内容



第一节 第二节 第三节 第四节 第五节
遗传的物质基础 微生物发生变异的机制 基因重组 基因工程 菌种的衰退、复壮和保藏
几种代表性质粒
2. R因子(resistence factor)

百度文库
最初发现于痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae), 后来发现还存在于Salmonella、Vibrio、Bacillus、 Pseudomonas和Staphylococcus中。 R因子由相连的两个DNA片段组成,即抗性转移因子 (resistence transfor factor, RTF )和抗性决定R 因子(r-determinant),RTF为分子量约为11×106 Dalton,控制质粒copy数及复制,抗性决定质粒大小不 固定,从几百万到100×106Dalton以上。其上带有其它 抗生素的抗性基因。

二、诱变

1.定义:在外界诱变剂的参与下是生物体发生 的突变 2.诱变剂:凡能使诱变率提高的物理化学因素

(1)物理诱变剂:紫外线、放射线、同位素; (2)化学诱变剂:HNO2、H2O2、 硫酸二乙酯、氮芥
3.诱变的机制

(1)碱基对的臵换 属于一种染色体的微小损伤,它只涉及一对 碱基被另一对碱基所臵换 转换:一种嘌呤(嘧啶)被另一种嘌呤(嘧 啶)所臵换 A=T G=T C=G T=G 颠换:一个嘌呤(嘧啶)被另一个嘧啶(嘌 呤)所臵换

基因组:是指一种生物体内单套遗传物质的全 部遗传基因。 染色体:指携带细胞功能所必备的基因的遗传 单元。 非细胞生物,它们的全套遗传基因称为基因组, 但不足以形成染色体。 原核生物的染色体常为一个环状的DNA分子。




真核生物的细胞有几条至几十条染色体,各含 一个线状的DNA分子。
四、染色体以外的遗传因子

几种代表性质粒
3. Col因子(colicinogenic factor)
产大肠杆菌素因子。 大肠杆菌素是由E.coli的某些菌株所分泌的细菌素,能通
过抑制复制、转录、转译或能量代谢等而专一地杀死其 它肠道细菌。大肠杆菌素都是由Col因子编码的。
Col因子可分为两类,分别以ColE1和ColIb为代表。



线粒体和叶绿体中含有的DNA能够自体复制, 并编码执行线粒体和叶绿体功能的蛋白,属于 染色体以外的遗传因子。 质粒一般指存在于细菌、真菌等微生物细胞中, 独立于染色体以外,能进行自我复制的遗传因 子。质粒的大小为1~1000 kb,常为环状的双 链DNA分子,也有线状DNA或RNA质粒。 有些质粒既能够整合到染色体上,又能以游离 状态存在,并能携带部分染色体基因进行转移, 它们被称为附加体。
(3)DNA的热变性

双链DNA在一定的高温下解链(变性)产生单链 DNA。双链DNA完全解链后,紫外吸收值A260可 以提高40%,当吸收值的提高达到中点时的温 度称为解链温度(Tm)。
1.4 1.2 1.0 70 100°C 80
Tm
90
(4)复性、退火或杂交

当温度缓慢降低时,序列互补的单链DNA能够 渐渐地重新配对,即复性。 不同来源的DNA之间碱基序列互补的区段进行 的碱基配对,称为退火或杂交,这被广泛应用 于DNA的扩增、定点诱变、基因鉴别。
质粒的特性
• 可转移性:可以细胞间的接合作用或其它途径从供 体细胞向受体细胞转移 • 可整合性:可以可逆性地整合到宿主细胞染色体上 • 可重组性:不同来源的质粒之间,质粒与宿主细胞 染色体间的基因可以发生重组 • 可消除性:某些理化因素如加热、加丫啶橙或丝裂 霉素、溴化乙锭等均可使质粒消除 • 此外,还有互不相容性、耐碱性等。
几种代表性质粒
5. Ti质粒(tumor inducing plasmid)
即诱癌质粒。存在于根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)
中,可引起许多双子叶植物的根癌
当细菌侵入植物细胞中后,在其细胞中溶解,把细菌的DNA释放到
植物细胞中。这时,含有复制基因的Ti质粒的小片段与植物细胞中 的核染色体发生整合,破坏控制细胞分裂的激素调节系统,从而使 它转变成癌细胞。


2、DNA的复制方式
复 制 原 点
模板 新生链
10~100 mm
复 制 叉
复制叉
细菌DNA的q-形复制
真核生物DNA的复制
DNA的滚环复制模式
模板 新生链
切 口
3’
5’
3’ 5’
3’
互补链合成
3、DNA的理化性质

(1)DNA的稳定性 (2)DNA的光学性质 (3)DNA的热变性 (4)复性、退火或杂交 (5)分子特征与微生物分类鉴定

(5)分子特征与微生物分类鉴定



DNA中的G+C含量通常通过Tm值来测定。同一 个属的细菌, G+C含量的变化一般小于10%。 DNA-DNA杂交技术用于研究亲缘关系近的微生 物。 如果两菌株在最适条件下杂交,DNA相关性 ≧70%,且Tm值差别<5%,它们就被认为同种。
三、基因组DNA和染色体
的一种质粒,分子量为200~300×106 Dalton,比一般质粒大几十倍到几百倍,故 称巨大质粒,其上有一系列固氮基因。
第二节 遗传物质的变异

突变:生物体表象在遗传物质基础上发生可遗 传的变化; 按原因可分为:自发突变和诱变,诱变又可分 为点突变和畸变;

点 突 变
碱基 臵换 移码 突变
转换:A
ColE1无接合作用,是多拷贝的;ColIb具有通过接合作 用转移的功能,只有1~2个拷贝。
凡带Col因子的菌株,由于质粒本身编码一种免疫蛋白,
从而对大肠杆菌素有免疫作用,不受其伤害。
几种代表性质粒
4. 降解性质粒
只在假单胞菌属中发现。 它们的降解性质粒可为一系列能降解复杂物质的酶编
码,从而能利用一般细菌所难以分解的物质做碳源。 这些质粒以其所分解的底物命名,例如有分解CAM(樟 脑)质粒,XYL(二甲苯)质粒,SAL(水杨酸)质 粒,MDL(扁桃酸)质粒,,NAP(奈)质粒和TOL(甲 苯)质粒等。
(1)DNA的稳定性

在溶液中,DNA具有一定的粘性,易受剪切力 的破坏;易被核酸酶降解; 在强酸中,DNA能被水解成碱基、糖和磷酸; 在特定的稀酸中(如pH3-4),不同碱基与核糖 之间的糖苷键会发生特异性的断裂,根据这种 特异性可测定DNA的碱基序列; 在稀碱如0.2当量NaOH中,双链DNA很快变性产 生单链DNA,继而单链DNA被进一步破坏。
(二)突变率


每一细胞在每一世代中发生某一性状突变的几 率,称突变率。 自发突变率一般为10-8-10-9
第一节

遗传的物质基础
一、证实遗传物质的三个经典实验


二、脱氧核糖核酸
三、基因组DNA和染色体 四、染色体以外的遗传因子
一、三个证明DNA是遗传物质的经典实验
1、经典转化实验
肺炎链球菌:
•S型(菌体具荚膜,菌落表面光滑,有致病能力)
•R型(菌体无荚膜,菌落表面粗糙,无致病能力)
1928年,F.Griffth作了3组实验:
G,T
C
颠换:A
G 缺失:ABC AB 添加:ABC A
T,A
C,G ABCA BCABC
C
T
诱 变
缺失:abc
ghijkl
突 变
畸 变
重复:abc abcdef 添加 插入:abc pqr def
易位:abc pqr ghi
自发突变
倒位:abc fed ghi
一、自发突变



1.定义:微生物在无人工参与情况下生物体自然发 生的突变 2.突变机制: (1)自然界中的短波辐射和射线 (2)微生物自身有害产物的诱变效应 如H2O2对脉胞菌有诱变作用 (3)碱基的互变异构 酮式至烯醇式的互变异构,烯醇式为突变型 (4)环出效应:环状突出效应 (5)紫外线对DNA的损伤及修复


非同源染色体:一对染色体与另一对形态结构不同的 染色体
三、基因突变

(一)突变类型
选择性 突变株 突 变 株 的 表 型 非选择性 突变株
营养缺陷性 抗性突变型 条件致死突变型
形态突变型 抗原突变型 产量突变型
(一)突变类型




选择性突变株:凡能用选择性培养基快速选择出 来的突变型; 非选择性突变株:凡用选择性培养基不能快速选 择出来的突变型; 营养缺陷型:由于突变的原因使某些菌株丧失合 成一种或几种生长因子的能力,因而无法在基础 培养基上正常生长繁殖的变异类型; 抗性突变型:由于基因突变而使原始菌株产生了 对某种化学药物或致死物理因子抗性的变异类型;
嘧啶碱基受紫外辐射后产生的衍生物
3.修复方法

光复活作用:把经紫外线照射后的微生物立即暴 露于可见光下,可明显降低其死亡率的现象。称 为光复活作用; 暗修复作用:是活细胞内一种用于修复被紫外线 等诱变剂(包括烷化剂,X射线、r射线等)损伤 后的DNA的机制,修复过程中有4种酶参与,内切 酶、外切酶、DNA聚合酶、连接酶;
Ti质粒长200kb,是一个大型质粒。当前,Ti质粒已成为植物遗传
工程研究中的重要载体。一些具有重要性状的外源基因可借DNA重 组技术设法插入到Ti质粒中,并进一步使之整合到植物染色体上, 以改变该植物的遗传性,达到培育植物优良品种的目的。
几种代表性质粒
6. 巨大质粒(mega质粒)
是近年来在Rhizobium(根瘤菌属)中发现
1944年,Avery精确重复了转化实验,确定了转化因子
实验证明,将R菌转化为S菌的转化因子是DNA
2、噬菌体感染实验
实验证明,进入 细菌细胞内部的 物质是DNA。 DNA包含有产生 完整噬菌体的全 部信息。
3、植物病毒重建实验
实验证明,遗传信息的流向与DNA的传递是一致的。
结 论

细胞生物的遗传物质是双链DNA
(一)突变类型




条件致死突变型:某菌株或病毒经基因突变后, 在某种条件下可正常地生长、繁殖并实现其表型, 而在另一种条件下却无法生长、繁殖的突变型; 形态突变型:由于突变而产生的个体或菌落形态 所发生的非选择性变异; 抗原突变型:由于细胞表面成分发生变化而引起 抗原结构发生突变的变异类型; 产量突变型:由于突变而使微生物产生代谢产物 产量大大高于原始菌株的突变型;


(2)DNA的光学性质


DNA中的碱基属于芳香簇化合物,能够吸收紫 外光(UV)。DNA吸收峰的光波波长为260nm;当 浓度为1mg/ml时, dsDNA : A260=20 ssDNA、RNA : A260≌25 人们根据A260测定DNA的浓度, 根据A260 / A280和估算DNA的纯度。
(2)移码突变:微小损伤

指诱变剂使DNA分子中的一个或少数几个核苷 酸的增添或丢失,从而使该部位后面的全部遗 传密码发生转录和转译错误的一类突变。 缺失:ABC A CA BCA



正常 ABC
添加:ABC
ABC
A B
ABC
CABC
(3)染色体畸变

某些理化因子,如x射线等的辐射及烷化剂、亚硝酸盐, 除了能引起点突变外,还会引起DNA的大损伤——染色 体畸变,它既包括染色体结构上的缺失、重复、插入、 易位和倒位,也包括染色体数目的变化; 染色体内畸变:增加、缺失、倒位、易位(在同一染色 体上); 染色体外畸变:非同源染色体间易位; 同源染色体:形态和结构相同的一对染色体
几种代表性质粒
1. F–因子(fertility factor)
又称致育因子或性因子,2×106 D,94.5kb,相当 于核染色体DNA2%的环状双链DNA,足以编码94 个中等大小多肽 其中1/3基因(tra区)与接合作用有关。 存在于肠细菌属、假单胞菌属、嗜血杆菌、奈瑟氏 球菌、链球菌等细菌中,决定性别。

病毒的遗传物质可以是单链的或双链的DNA或 RNA, 即:ssDNA,dsDNA,ssRNA或dsRNA。
二、脱氧核糖核酸



1.核酸的化学组成和结构 2.DNA的复制方式 3.DNA的理化性质
1、核酸的化学组成和结构

DNA分子是由两条相互平行、方向相反的多核 苷酸单链以右手螺旋方向相互缠绕而形成的 双螺旋。 脱氧核糖和磷酸构成的主链位于外围,通过 氢键相互交联的碱基处于双螺旋的内部。 A-T,G-C;两条单链互补;一条链的碱基序列 限定了另一条链的序列。
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